专利名称：五倍子用于制备抗真菌药物及抗真菌药物增效剂的用途的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种五倍子用于制备抗真菌药物及抗真菌药物增效剂的用途。
背景技术：
五倍子为同翅目蚜虫科的角倍蚜或倍蛋蚜雌虫寄生于漆树科植物“盐肤木”及其同属其他植物的嫩叶或叶柄，而生成的虫瘿，经烘倍干燥后所得。其味酸、涩，性寒。归肺、 大肠、肾经。具有敛肺、止汗、涩肠、固精、止血、解毒的功效。中医常将五倍子用于治疗肺虚久咳、自汗盗汗、久痢久泻、脱肛、遗精、白浊、各种出血、痈肿疮疖等症。现代药理研究显示， 五倍子具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗癌等药理作用。虽然亦有五倍子体外抗植物及鱼类真菌作用的报道，但未见五倍子作用于人的深部真菌，及与抗真菌药物联合使用治疗真菌病的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种五倍子用于制备抗真菌药物及抗真菌药物增效剂的用途。体外细胞实验表明，五倍子对各种临床真菌菌株如白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平念珠菌、新生隐球菌具有抑制活性。当抗真菌药物氟康唑和五倍子合用时，能明显降低抗真菌药物的用药剂量，并增强对耐药真菌的抑制作用，使抗真菌药物恢复对耐药真菌的作用。因此可将五倍子用作抗真菌治疗及抗真菌药物的增效剂。本发明提出一种五倍子用于制备抗真菌药物及抗真菌药物增效剂的用途。其中 所述五倍子的药材原料为同翅目蚜虫科的角倍蚜或倍蛋蚜雌虫寄生于漆树科植物“盐肤木”及其同属其他植物的嫩叶或叶柄，而生成的虫瘿。本发明中，所述五倍子是五倍子药材水提物或乙醇提取物的一种。本发明中，所述的乙醇提取是指用75%乙醇提取。本发明中，所述的抗真菌药物中的真菌包括1)敏感菌株敏感白色念珠菌 (SC5314)，近平滑念珠菌(22019)，新生隐球菌；2)耐药菌株耐药白色念珠菌(103)，耐药热带念珠菌，天然耐药克柔念珠菌(ATCC2340)，天然耐药光滑念珠菌(ATCC2^1 )。本发明中，所述的耐药菌株是对氟康唑耐受，敏感菌株是对氟康唑敏感。本发明中，所述的抗真菌药物包括1)多烯类药物如两性霉素B、甲帕霉素等；2) 唑类药物如氟康唑、咪康唑、酮康唑、伊曲康唑等；3)其他药物如5-氟胞嘧啶、卡泊芬净寸。本发明为五倍子开辟了新的用途，将其用于制备抗真菌药物及抗真菌药物的增效剂，不仅为真菌治疗提供了新的候选药物，而且提高了现有药物的抗真菌作用，在临床真菌耐药性日趋普遍、耐药程度日趋严重的情况下，使抗真菌药物恢复对耐药真菌的作用，降低了抗真菌药物的用药剂量，从而为患者节省了医疗费用，减少药物的毒副作用。
具体实施例方式以下所列实施例，仅为帮助本领域技术人员更全面理解本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例1.五倍子对不同临床真菌株的作用材料和方法
1.试药
五倍子药材购于上海雷允上北区药品零售有限公司。氟康唑sigma公司，批号 460M4707V。二甲亚砜上海世仪生物科技有限公司。各试药置于-20°C保存。实验前，将药物取出置于35°C温箱融化，充分混勻，分别进行药效学检验。2.菌株
临床株1)白念珠菌，分103、SC5314两株；2)热带念珠菌2718，1株；3)光滑念珠菌 ATCC1182，1株；4)克柔念珠菌ATCC2340,1株；5)近平念珠菌ATCC22019,1株；6)新生隐球菌，1株。光滑念珠菌和克柔念珠菌由安徽中医学院汪长中教授惠赠，其余均由上海长海医院真菌室提供，分别采自长海医院不同科室临床样本，并经形态学和生化学鉴定。所有实验用菌株均于沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)划板活化，白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平念珠菌、新生隐球菌等球状菌于30°C培养2周后，分别挑取单克隆再次划板活化，取第二次所得单克隆置SDA斜面，用上述方法培养后于4°C保存备用。3.培养液
1) RPMI 1640液体培养液
RPMI1640 (Gibco BRL)10 g,NaHCO3 2.0 g，吗啡啉丙磺酸(Sigma)34.5 g(0. 165 Μ), 加三蒸水900 ml溶解，1 N NaOH调pH至7. 0 (25°C )，三蒸水定容至1000 ml，0. 22Mm微孔滤膜过滤除菌，分装后于4°C保存备用。2)沙堡葡萄糖琼脂固体培养基(SDA)
蛋白胨10 g，葡萄糖40 g，琼脂18 g，加三蒸水900 ml溶解，加入2 mg/ml氯霉素水溶液50 ml，调整pH至7.0，以三蒸水定容至1000 ml，高压灭菌(121°C，15min)后于4°C保存备用。3 ) YEPD 培养液
酵母浸膏10 g，蛋白胨20 g，葡萄糖20 g，加三蒸水900 ml溶解，加入2 mg/ml氯霉素水溶液50 ml，三蒸水定容至1000 ml，高压灭菌(121°C，15min)后于4°C保存备用。4.仪器设备
Multiskan MK3型酶标检测仪(芬兰Labsystems产品) 隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂) THZ - 82A台式恒温振荡器(上海跃进医疗器械厂) Sff-CT-IF型超净化工作台(苏州安泰空气技术有限公司) 5.五倍子提取物的制备
将五倍子果实粉碎后，过60目筛，以1 :20比例，用75%乙醇，85°C回流提取2h，溶液纱布过滤后，50°C减压回收乙醇，再于50°C烘箱烘干，粉碎成粉末，用DMSO溶解，配成浓度 0. 5g/ml (按生药量计算)，分装后于-20°C保存备用。6.菌液制备
实验前，用接种圈从4°C保存的SDA培养基上分别挑取白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平念珠菌、新生隐球菌各球状菌少量，分别接种至1 ml YEPD培养液， 于30°C，200 rpm振荡培养，活化16 h，使真菌处于指数生长期后期。然后将各菌液分别加至1 mlYEPD培养液中，用上述方法再次活化，培养16 h，用血细胞计数板计数，以RPMI 1640培养液分别调整各菌液浓度至1 X IO3 5X 103CFU/ml。7.药敏板制备
各菌株分别取无菌96孔板一块，于每排1号孔加RPMI 1640液体培养基ΙΟΟμΙ作空白对照；3 12号孔各加上述新鲜配制的菌液ΙΟΟμΙ ；2号孔加菌液198μ1 ；12号孔不含药物， 只加菌液ΙΟΟμΙ作阳性生长对照。在每排的2号孔加母液浓度为0. 5g/ml的五倍子或氟康唑各2μ1。对2 11号孔进行10级倍比稀释，使各孔的最终五倍子药物浓度分别为5000、 2500、1250、625、312. 5,156. 25,78. 125,39. 06,19. 53,9. 76μδ/πι1,氟康唑的药物浓度分别为 64、32、16、8、4、2、1、0· 5、0· 25、0· 125Pg/ml。各孔中 DMSO 含量均低于 1%。将各药敏板于30°C恒温箱培养。8. MIC80 值判定
在30°C恒温箱中，念珠菌培养对h，新生隐球菌培养72h，用酶标分析仪于630 nm测各孔OD值。与阳性对照孔比，以OD值下降80%以上的最低浓度孔中的药物浓度为MIC8tl (真菌生长80%被抑制时的药物浓度)。当药物的MIC8tl值超过测定浓度范围时，按以下方法进行统计如以氟康唑为例，MIC8tl值高于最高浓度64Pg/ml时，计为“>64Pg/ml ” ； MIC8tl值为最低浓度或在最低浓度以下时，不作区别，均计为“彡0. 125Pg/ml”。上述实验均平行操作2到3次，当MIC8tl值能准确重复或只差一个浓度时才被接受，并以较高浓度作为MIC8tl值；当MIC8q值相差两个浓度以上时，则需重新实验，直到符合要求为止。实验结果见表1
表1五倍子对7株临床真菌的MIC8tl值(μ g/ml)
权利要求
1.一种五倍子用于制备抗真菌药物及抗真菌药物增效剂的用途，其特征在于，所述的五倍子的药材原料为同翅目蚜虫科的角倍蚜或倍蛋蚜雌虫寄生于漆树科植物“盐肤木”及其同属其他植物的嫩叶或叶柄，而生成的虫瘿。
2.根据权利要求1所述的五倍子用于制备抗真菌药物及抗真菌药物增效剂的用途，其特征在于，所述的五倍子是五倍子药材水提物或乙醇提取物的一种。
3.根据权利要求2所述的五倍子用于制备抗真菌药物及抗真菌药物增效剂的用途，其特征在于，所述的乙醇提取是指用75%乙醇提取。
4.根据权利要求1所述的五倍子用于制备抗真菌药物及抗真菌药物增效剂的用途，其特征在于，所述的抗真菌药物及抗真菌药物增效剂中涉及到的的真菌包括敏感菌株、耐药菌株。
5.根据权利要求4所述的五倍子用于制备抗真菌药物及抗真菌药物增效剂的用途，其特征在于，所述的耐药菌株是对氟康唑耐受，敏感菌株是对氟康唑敏感。
6.根据权利要求1所述的五倍子用于制备抗真菌药物及抗真菌药物增效剂的用途，其特征在于，所述的抗真菌药物包括多烯类药物、唑类药物、5-氟胞嘧啶或卡泊芬净。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种五倍子用于制备抗真菌药物及抗真菌药物增效剂的用途。体外实验表明，五倍子对真菌感染有较好的治疗效果，并能使抗真菌药物氟康唑恢复对耐药真菌的作用，因此五倍子可用作抗真菌治疗及抗真菌药物的增效剂。本发明为五倍子开辟了新的用途，将其用于抗真菌药物及抗真菌药物的增效剂，不仅为真菌治疗提供了新的候选药物，而且提高了现有药物的抗真菌作用，在临床真菌耐药性日趋普遍、耐药程度日趋严重的情况下，使抗真菌药物恢复对耐药真菌的作用，降低了抗真菌药物的用药剂量，从而为患者节省了医疗费用，减少药物的毒副作用。
文档编号A61P31/10GK102526117SQ20121002480
公开日2012年7月4日 申请日期2012年2月6日 优先权日2012年2月6日
发明者刘伟, 姜远英, 安毛毛, 张军东, 慎慧, 陈思敏 申请人:同济大学