专利名称：一种防治鸭呼肠孤病毒病的精制蛋黄抗体复合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及蛋黄抗体复合物及制备方法，具体是涉及一种含姬松茸多糖的防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物及其制备方法。
背景技术：
鸭呼肠孤病毒病是20世纪90年代在广东、福建、河南等地流行开来的一种新型高发病率、高死亡率的急性烈性鸭传染病，以腿软、喘气为主要症状，以肝脏不规则坏死有白色斑点、脾脏肿大呈黑紫色斑驳样、肾脏和脾脏出血等为主要病理变化。鸭呼肠孤病毒病主要感染7日龄 45日龄的雏番鸭，发病率为20% 100%，死亡率为10% 95%以上。目前该病呈世界性分布，涉及的发病鸭群广泛，给各养鸭户造成了重大的经济损失和严重的危害。 对病鸭进行剖检发现在发病初期表现肝脏肿大，肝脏表面有大量白色针尖大小坏死点，脾脏也有白色坏死点；中后期则出现心包炎。目前采用的防治方法是在发病初期治疗时主要以含有黄芪多糖、利巴韦林的抗病毒药物(如克抗清、鸭泰克等)和保肝护肾药为主；在中后期治疗上添加抗继发感染的药物(如力通、泰力特等)。抗生素治疗家禽疾病会产生药物残留，食用此类家禽后会对人体造成一定的危害，另外根据临床反映，鸭呼肠孤病毒病灭活疫苗、高免血清对该病有很好的改善作用，因此需要一种新的药物是需要解决的技术问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种鸭呼肠孤病毒病的精制蛋黄抗体复合物及其制备方法，以更快捷、安全、低廉的治疗鸭呼肠孤病毒病。为实现本发明的目的所采用的技术方案是一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物，其特征在于主要由鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体和姬松茸多糖所组成。所述蛋黄抗体与姬松茸多糖干物质的质量比是4:1。一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤( I)蜂胶佐剂灭活苗的制备a.灭活病毒悬液的制备用冷冻保存的鸭呼肠孤病毒解冻稀释后接种11日龄SPF番鸭鸭胚，24h死亡后采集鸭胚尿囊液，灭活，然后置低温下冰箱保存备用；b.蜂胶佐剂的制备将固体蜂胶I份磨碎溶解于4份乙醇中，置室温下浸溃24h，然后在低温下冷却，2500r/min离心lOmin，取上清液，即为纯化的蜂胶乙醇浸提液；根据蜂胶的纯度，计算出其中干物质的含量，制成蜂胶佐剂；c.蜂胶佐剂灭活苗的制备将步骤a制备的灭活病毒悬液与步骤b制备的蜂胶佐剂按1:1 (V/V)混合，搅拌均匀即可；(2)制备高免鸡蛋选择健康高产蛋鸡，将步骤(I)制备的蜂胶佐剂灭活苗免疫健康高产蛋鸡，收集免疫后高产蛋鸡的鸡蛋，即为鸭呼肠孤病毒高免鸡蛋；(3)制备精制蛋黄抗体复合物a.分离蛋清蛋黄
将上述步骤(2)制备的高免鸡蛋用清水洗净，再用乙醇擦洗，晾干，送入蛋清蛋黄分离机进行蛋黄分离；b.制备精制蛋黄抗体取I份步骤(3)_a所分离的蛋黄加2份醋酸缓冲液，用酸调pH至4. 8 ;按每毫升稀释腹水加IluL辛酸的比例在室温搅拌下逐滴加入辛酸，于30min内加完，低温下静置2h，然后以10000r/min的转速离心30min,弃沉淀；上清液经125 μ m尼龙筛过滤后,加入1/10体积的O. 01mol/l的PBS，用碱调pH至7. 2 ;将40%甲醛溶液与该上清液混合，使甲醛的终浓度达到O. 1% (V/V)，充分搅拌均匀；c.制备精制蛋黄抗体复合物在步骤b所制备的精制蛋黄抗体中加入姬松茸多糖干粉，加入保护剂，分装冻干，检验合格，包装入库即可。上述低温为4°C。上述步骤(I) -b中的蜂胶佐剂的浓度为30mg/mL。上述步骤(I) _b中的乙醇浓度为95%。上述步骤(3) -a中的乙醇浓度为75%。上述步骤(3) -b中的醋酸缓冲液为pH是5. O的O. 06mol/l醋酸缓冲液。本发明的原理为姬松茸多糖具有抗癌生物功能、增强机体免疫功能，同时对肝肾具有保护作用，可长期服用；将姬松茸多糖与精致蛋黄抗体配伍将大大提升畜禽免疫力，增强对疾病的抵抗力，利于对疾病的防治。 与现有技术相比，本发明的有益效果是(I)制备的鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物相比一般的精制蛋黄抗体，在纯度、安全性和稳定性上，二者类似，但是精制蛋黄抗体复合物较精制蛋黄抗体具有更强的保护效果和治疗效果。(2)所加入的姬松茸多糖不仅具有强大的提升免疫力的作用，还具有修复肝脏损伤，促进肝功能恢复的作用。(3)本发明所提供的制备方法安全、价格低廉，适于大规模生产。
具体实施例方式以下结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物，其特征在于主要由鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体和姬松茸多糖所组成。所述蛋黄抗体与姬松茸多糖干物质的质量比是4:1。一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤( I)蜂胶佐剂灭活苗的制备a.灭活病毒悬液的制备
用冷冻保存的鸭呼肠孤病毒解冻稀释后接种11日龄SPF番鸭鸭胚，24h死亡后采集鸭胚尿囊液，灭活，然后置低温下冰箱保存备用；b.蜂胶佐剂的制备将固体蜂胶I份磨碎溶解于4份乙醇中，置室温下浸溃24h，然后在低温下冷却，2500r/min离心lOmin，取上清液，即为纯化的蜂胶乙醇浸提液；根据蜂胶的纯度，计算出其中干物质的含量，制成蜂胶佐剂；c.蜂胶佐剂灭活苗的制备将步骤a制备的灭活病毒悬液与步骤b制备的蜂胶佐剂按I: I (V/V)混合，搅拌均匀即可；(2)制备高免鸡蛋选择健康高产蛋鸡，将步骤(I)制备的蜂胶佐剂灭活苗免疫健康高产蛋鸡，收集免疫后高产蛋鸡的鸡蛋，即为鸭呼肠孤病毒高免鸡蛋；(3)制备精制蛋黄抗体复合物a.分离蛋清蛋黄将上述步骤(2)制备的高免鸡蛋用清水洗净，再用乙醇擦洗，晾干，送入蛋清蛋黄分离机进行蛋黄分离；b.制备精制蛋黄抗体取I份步骤(3)_a所分离的蛋黄加2份醋酸缓冲液，用酸调pH至4. 8 ;按每毫升稀释腹水加IluL辛酸的比例在室温搅拌下逐滴加入辛酸，于30min内加完，低温下静置2h，然后以10000r/min的转速离心30min,弃沉淀；上清液经125 μ m尼龙筛过滤后,加入1/10体积的O. 01mol/l的PBS，用碱调pH至7. 2 ;将40%甲醛溶液与该上清液混合，使甲醛的终浓度达到O. 1% (V/V)，充分搅拌均匀；c.制备精制蛋黄抗体复合物在步骤b所制备的精制蛋黄抗体中加入姬松茸多糖干粉，加入保护剂，分装冻干，检验合格，包装入库即可。上述的低温为4°C。上述步骤(I) -b中的蜂胶佐剂的浓度为30mg/mL。上述步骤(I) _b中的乙醇浓度为95%。上述步骤(3) -a中的乙醇浓度为75%。上述步骤(3) -b中的醋酸缓冲液为pH是5. O的O. 06mol/l醋酸缓冲液。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰 也应视为本发明的保护范围。
权利要求
1.一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物，其特征在于它主要由鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体和姬松茸多糖组成。
2.根据权利要求I所述的一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物，其特征在于所述蛋黄抗体与姬松茸多糖干物质的质量比是4: I。
3.一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤 (1)蜂胶佐剂灭活苗的制备 a.灭活病毒悬液的制备 用冷冻保存的鸭呼肠孤病毒解冻稀释后接种11日龄SPF番鸭鸭胚，24h死亡后采集鸭胚尿囊液，灭活，然后置低温下冰箱保存备用； b.蜂胶佐剂的制备 将固体蜂胶I份磨碎溶解于4份乙醇中，置室温下浸溃24h，然后在低温下冷却，2500r/min离心lOmin，取上清液，即为纯化的蜂胶乙醇浸提液；根据蜂胶的纯度，计算出其中干物质的含量，制成蜂胶佐剂； c.蜂胶佐剂灭活苗的制备 将步骤a制备的灭活病毒悬液与步骤b制备的蜂胶佐剂按1:1 (V/V)混合，搅拌均匀即可； (2)制备高免鸡蛋 选择健康高产蛋鸡，将步骤(I)制备的蜂胶佐剂灭活苗免疫健康高产蛋鸡，收集免疫后高产蛋鸡的鸡蛋，即为鸭呼肠孤病毒高免鸡蛋； (3)制备精制蛋黄抗体复合物 a.分离蛋清蛋黄 将上述步骤(2)制备的高免鸡蛋用清水洗净，再用乙醇擦洗，晾干，送入蛋清蛋黄分离机进行蛋黄分离； b.制备精制蛋黄抗体 取I份步骤(3) -a所分离的蛋黄加2份醋酸缓冲液，用酸调pH至4. 8 ;按每毫升稀释腹水加IluL辛酸的比例，在室温搅拌下逐滴加入辛酸，于30min内加完，低温下静置2h，然后以10000r/min的转速离心30min,弃沉淀；上清液经125 μ m尼龙筛过滤后,加入1/10体积的O. 01mol/l的PBS，用碱调pH至7. 2 ;将40%甲醛溶液与该上清液混合，使甲醛的终浓度达到O. 1% (V/V)，充分搅拌均匀； c.制备精制蛋黄抗体复合物 在步骤b所制备的精制蛋黄抗体中加入姬松茸多糖干粉，加入保护剂，分装冻干，检验合格，包装入库即可。
4.根据权利要求3所述的一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物的制备方法，其特征在于所述低温为4°C。
5.根据权利要求3所述的一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物的制备方法，其特征在于所述步骤(I) -b中的蜂胶佐剂的浓度为30mg/mL。
6.根据权利要求3所述的一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物的制备方法，其特征在于所述步骤(I) -b中的乙醇浓度为95%。
7.根据权利要求3所述的一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物的制备方法，其特征在于所述步骤(3) -a中的乙醇浓度为75%。
8.根据权利要求3所述的一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物的制备方法，其特征在于所述步骤(3) -b中的醋酸缓冲液为pH是5. O的O. 06mol/l醋酸缓冲液。·
全文摘要
本发明公开了一种防治鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物及其制备方法，所述复合物主要由鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体和姬松茸多糖所组成；所述蛋黄抗体与姬松茸多糖干物质的质量比是4:1。与现有技术相比，本发明的有益效果是(1)制备的鸭呼肠孤病毒病精制蛋黄抗体复合物相比一般的精制蛋黄抗体，在纯度、安全性和稳定性上，二者类似，但是精制蛋黄抗体复合物较精制蛋黄抗体具有更强的保护效果和治疗效果。(2)所加入的姬松茸多糖不仅具有强大的提升免疫力的作用，还具有修复肝脏损伤，促进肝功能恢复的作用。
文档编号A61P31/14GK102872460SQ201210372350
公开日2013年1月16日 申请日期2012年9月29日 优先权日2012年9月29日
发明者胡思科, 王建, 王猛, 王勇 申请人:天津市中升挑战生物工程有限公司