专利名称：扯根菜提取物的制备方法
技术领域：
本发明涉及扯根菜提取物的制备方法。
背景技术：
扯根菜(Penthorum chinense Pursh),在民间又名赶黄草、水泽兰、水杨柳等，是虎耳草科(Saxifragaceae)扯根菜属(Penthorum Gronvexl)植物扯根菜(PenthorumGronvexl)的干燥地上部分。始载于明代《救荒本草》，在苗家民间有上千年的用药史，是治疗肝病的著名经验方，苗人世代沿用，流传至今。现收载于《中华人民共和国卫生部部颁标准中药成方制剂十三册》附录。其性温、味甘、无毒，具有清热、利尿、消肿、解毒、活血、平肝、健脾、醒酒、祛黄疸等功效，主治黄疸、脾虚、水肿、跌打损伤，以及各型肝炎、脂肪肝等。已知的扯根菜的化学成分主要有熊果酸、乔松素、东莨菪内酯、没食子酸， 槲皮素，熊果酸-28-木糖-(1-3)-葡萄糖苷、槲皮素-3-0-a-L-吡喃李糖苷，乔松素-7-0-β -D-卩比喃匍萄糖苷、乔松素-7-新澄皮糖苷、没食子酸匍萄糖苷、2，6- 二轻基苯乙酮4-0-β -D-吡喃葡萄糖苷、东莨菪苷，β -谷留醇以及两个具有二氢黄酮骨架的化合物和26个组分组成的挥发油，其中苷及苷元在制备防治肝炎、肝损伤、肝纤维化、肝硬化、酒精肝、肝癌和高血脂相关药物中应用，为已知具有抗乙肝病毒和保肝作用的成分。但目前尚未见对总黄酮进行精制的报导。因此，现在研究把总黄酮作为药用活性部位精制具有极大的临床应用价值和市场开发价值。
发明内容
本发明是要解决现有的扯根菜总黄酮提取物含量低、操作方法复杂、无法大规模生产等问题，而提供的扯根菜提取物的制备方法。本发明中扯根菜总黄酮提取物的制备方法是按下述步骤进行的一、将扯根菜用去离子水煎煮两次，合并两次煎煮液，过滤得滤液，将滤液在真空度为-O. 085MPa，温度为50 80°C下进行减压浓缩得到清膏；其中，所述煎煮中第一次煎煮去离子水的质量是扯根菜质量的10 16倍，第二次煎煮去离子水的质量是扯根菜质量的6 10倍，所述清膏相对密度为I. 10 I. 16 ;二、按质量比为I : (O. 5 2)将步骤一中获得的清膏与去离子水进行混合，调节PH值至6. O 7. O后静置，然后收集上清液，调节上清液pH值至2. O 3. O后静置，收集上层液体即得到提取液；三、将步骤二得到的提取液进行聚酰胺树脂层析纯化，再用去离子水洗脱，弃去水洗液后使用体积浓度为50% 90%的乙醇溶液洗脱树脂柱，然后收集乙醇洗脱液；四、对步骤三中收集的乙醇洗脱液在真空度为-O. 08MPa，温度为50 80°C下进行减压蒸馏回收乙醇洗脱液，调节乙醇洗脱液pH值至6. O 7. 0，减压浓缩，干燥，即得到扯根菜提取物。发明效果
本发明采用聚酰胺树脂处理之前，先采用酸处理提取液，使提取液中的黄酮及有机酸均已非成盐状态下进入树脂柱中，并且能够较完全的被树脂吸附，并且针对性较好。同时采用乙醇能够较完全的解吸黄酮与有机酸。该工艺除乙醇外，不使用其他有机溶剂，使得工艺流程简单，生产设备要求较低，制造成本降低，同时该方法的的提取物收率较高超过6.0%,该提取物总黄酮含量超过80 %，达到国家中药注射剂原料的技术要求，该提取物可作为中药注射剂原料或口服制剂的原料。本发明方法获得的扯根菜提取物中总黄酮含量以无水芦丁(C27H3tlO16)计，不少于80% ;单体成分槲皮素(C15HltlO7)含量不少于6.0%。还含有没食子酸、乔松素、乔松素-7-0-β -D-吡喃葡萄糖苷、乔松素-7-新橙皮糖苷、没食子酰葡萄糖苷、熊果酸-28-木糖-(1-3)-葡萄糖苷、没食子酸、熊果酸等。
具体实施例方式本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式
，还包括各具体实施方式
间的任意组合。
具体实施方式
一本实施方式中扯根菜提取物的制备方法是按下述步骤进行的一、将扯根菜用去离子水煎煮两次，合并两次煎煮液，过滤得滤液，将滤液在真空度为-O. 085MPa，温度为50 80°C下进行减压浓缩得到清膏；其中，所述煎煮中第一次煎煮去离子水的质量是扯根菜质量的10 16倍，第二次煎煮去离子水的质量是扯根菜质量的6 10倍，所述清膏相对密度为I. 10 I. 16 ;二、按质量比为I : (O. 5 2)将步骤一中获得的清膏与去离子水进行混合，调节PH值至6. O 7. O后静置，然后收集上清液，调节上清液pH值至2. O 3. O后静置，收集上层液体即得到提取液；三、将步骤二得到的提取液进行聚酰胺树脂层析纯化，再用去离子水洗脱，弃去水洗液后使用体积浓度为50% 90%的乙醇溶液洗脱树脂柱，然后收集乙醇洗脱液；四、对步骤三中收集的乙醇洗脱液在真空度为-O. 08MPa，温度为50 80°C下进行减压蒸馏回收乙醇洗脱液，调节乙醇洗脱液pH值至6. O 7. 0，减压浓缩，干燥，即得到扯根菜提取物。本实施方式效果本实施方式采用聚酰胺树脂处理之前，先采用酸处理提取液，使提取液中的黄酮及有机酸均已非成盐状态下进入树脂柱中，并且能够较完全的被树脂吸附，并且针对性较好。同时采用乙醇能够较完全的解吸黄酮与有机酸。该工艺除乙醇外，不使用其他有机溶齐U，使得工艺流程简单，生产设备要求较低，制造成本降低，同时该方法的的提取物收率较高超过6.0%，该提取物总黄酮含量超过80%，达到国家中药注射剂原料的技术要求，该提取物可作为中药注射剂原料或口服制剂的原料。本实施方式获得的扯根菜提取物中总黄酮含量以无水芦丁(C27H3tlO16)计，不少于80% ;单体成分槲皮素(C15HltlO7)含量不少于6.0%。还含有没食子酸、乔松素、乔松素-7-0-β -D-吡喃葡萄糖苷、乔松素-7-新橙皮糖苷、没食子酰葡萄糖苷、熊果酸-28-木糖-(1-3)-葡萄糖苷、没食子酸、熊果酸等。
具体实施方式
二 本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一中煎煮时间为每次I 3小时。其它步骤和参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一或二不同的是步骤二中静置时间为12 24小时。其它步骤和参数与具体实施方式
一或二相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一至三之一不同的是步骤三中聚酰胺树脂纯化中聚酰胺树脂质量与扯根菜的质量比为I : 3。其它步骤和参数与具体实施
方式一至三之一相同。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
一至四之一不同的是步骤三中去离子水洗脱时去离子水与树脂柱的体积比为6 10 I。其它步骤和参数与具体实施方式
一至四之一相同。
具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
一至五之一不同的是步骤三中洗脱树脂柱时体积浓度为50% 90%的乙醇溶液与树脂柱的体积比为5 I。其它步骤和参数与具体实施方式
一至五之一相同。
具体实施方式
七本实施方式与具体实施方式
一至六之一不同的是步骤三中的聚酰胺树脂纯化中提取液通过聚酰胺柱的流速是I 4BV/h。其它步骤和参数与具体实施方式
一至六之一相同。
具体实施方式
八本实施方式与具体实施方式
一至七之一不同的是步骤三中去离子水洗脱中去离子水用量为6 10BV，流速为I 4BV/h。其它步骤和参数与具体实施方式
一至七之一相同。
具体实施方式
九本实施方式与具体实施方式
一至八之一不同的是步骤三中体积浓度为50% 90%的乙醇溶液洗脱树脂柱时乙醇溶液用量为4 8BV，流速为I 4BV/h。其它步骤和参数与具体实施方式
一至八之一相同。
具体实施方式
十本实施方式与具体实施方式
一至九之一不同的是步骤四中干 燥为减压干燥、喷雾干燥和冷冻干燥。其它步骤和参数与具体实施方式
一至九之一相同。通过以下试验验证本发明有益效果试验I :一、取扯根菜粗粉100kg，将扯根菜用去离子水煎煮两次，煎煮时间分别为I. O小时，合并两次煎煮液，过滤得滤液，将滤液于60°C、-O. 085MPa进行减压浓缩得到清膏；其中，所述煎煮中第一次煎煮去离子水的质量是扯根菜中药材质量的12倍，第二次煎煮去离子水的用量是扯根菜中药材质量的10倍，所述清膏相对密度为I. 10 I. 16 ;二、按质量比为I : I将步骤一中获得的清膏与去离子水进行混合，调节pH值至6. 5 7. O后静置24小时，，然后收集上清液，沉淀弃去，调节上清液pH值至2. O后静置24小时，然后收集上层液体即得到提取液；三、将步骤二得到的提取液进行聚酰胺树脂层析纯化，再用去离子水洗脱，弃去水洗液后使用体积浓度为80%的乙醇溶液洗脱树脂柱，然后收集乙醇洗脱液；其中，所述聚酰胺树脂纯化中聚酰胺树脂质量与扯根菜的质量比为I : 3，去离子水洗脱时去离子水与树脂柱的体积比为7 1，洗脱树脂柱时体积浓度为80%的乙醇溶液与树脂柱的体积比为5 1，聚酰胺树脂纯化中提取液通过聚酰胺柱的流速是I. 5BV/h，去离子水洗脱中去离子水用量为7BV，流速为I. 5BV/h，体积浓度为80%的乙醇溶液洗脱树脂柱时乙醇溶液用量为5BV，流速为 I. 5BV/h ；
四、对步骤三中收集的乙醇洗脱液进行回收乙醇洗脱液，调节乙醇洗脱液pH值至6. 5 7. 0，于60°C、-O. 08MPa减压浓缩，减压干燥，即得到扯根菜提取物；本试验得到的扯根菜提取物收率> 6. 2% ；本试验中扯根菜提取物的主 要成分含量测定按以下步骤进行通过标准品定位，初步认为扯根菜提取物中包括总黄酮和有机酸，其中总黄酮中含有乔松素、乔松素苷、槲皮素，有机酸中含有没食子酸、没食子酰葡萄糖苷、熊果酸-28-木糖-(1-3)-葡萄糖苷、熊果酸七种成分；由本试验采用紫外分光光度法在350nm吸光度下测定总黄酮含量；本试验中总黄酮含量以无水芦丁(C27H3tlO16)计，无水芦丁(C27H3tlO16)化学对照品批号110080-200306，由中国药品生物制品检定所提供；采用高效液相法(中国药典2010年版一部附录VID)测定槲皮素含量，其中，高效液相法中十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水-磷酸系统为流动相，检测波长350nm，本试验中高效液相色谱仪采用安捷伦1100系列液相色谱仪，配有在线脱气机，四元梯度洗脱栗，柱温禮，色谱柱为Penomenex Luna C18 250 X 4. 6mm 5 urn，色谱纯(DIKMA)，其它试剂为市售分析纯，本试验中的槲皮素化学对照品为批号100081-200406，由中国药品生物制品检定所提供；以扯根菜批号110601、110201、110501与110701为测定材料重复试验I四次，然
后分别进行了四次总黄酮与槲皮素含量测定，取四次重复测定结果，结果如表I所示表I扯根菜提取物质量控制含量测定结果
权利要求
1.扯根菜提取物的制备方法，其特征在于扯根菜提取物的制备方法按以下步骤实现 一、将扯根菜用去离子水煎煮两次，合并两次煎煮液，过滤得滤液，将滤液在真空度为-O. 085MPa，温度为50 80°C下进行减压浓缩得到清膏；其中，所述煎煮中第一次煎煮去离子水的质量是扯根菜质量的10 16倍，第二次煎煮去离子水的质量是扯根菜质量的6 10倍，所述清膏相对密度为I. 10 I. 16 ; 二、按质量比为I: 0.5 2将步骤一中获得的清膏与去离子水进行混合，调节pH值至6. O 7. O后静置，然后收集上清液，调节上清液pH值至2. O 3. O后静置，收集上层液体即得到提取液； 三、将步骤二得到的提取液进行聚酰胺树脂层析纯化，再用去离子水洗脱，弃去水洗液后使用体积浓度为50% 90%的乙醇溶液洗脱树脂柱，然后收集乙醇洗脱液； 四、对步骤三中收集的乙醇洗脱液在真空度为-O.08MPa，温度为50 80°C下进行减压蒸馏回收乙醇洗脱液，调节乙醇洗脱液pH值至6. O 7. 0，减压浓缩，干燥，即得到扯根菜提取物。
2.根据权利要求I所述的扯根菜提取物的制备方法，其特征在于步骤一中煎煮时间为每次I 3小时。
3.根据权利要求I所述的扯根菜提取物的制备方法，其特征在于步骤二中静置时间为12 24小时。
4.根据权利要求I所述的扯根菜提取物的制备方法，其特征在于步骤三中聚酰胺树脂纯化中聚酰胺树脂质量与扯根菜的质量比为I : 3。
5.根据权利要求I所述的扯根菜提取物的制备方法，其特征在于步骤三中去离子水洗脱时去尚子水与树脂柱的体积比为6 10 : I。
6.根据权利要求I所述的扯根菜提取物的制备方法，其特征在于步骤三中洗脱树脂柱时体积浓度为50% 90%的乙醇溶液与树脂柱的体积比为5 I。
7.根据权利要求I所述的扯根菜提取物的制备方法，其特征在于步骤三中的聚酰胺树脂纯化中提取液通过聚酰胺柱的流速是I 4BV/h。
8.根据权利要求I所述的扯根菜提取物的制备方法，其特征在于步骤三中去离子水洗脱中去离子水用量为6 10BV，流速为I 4BV/h。
9.根据权利要求I所述的扯根菜提取物的制备方法，其特征在于步骤三中体积浓度为50 % 90%的乙醇溶液洗脱树脂柱时乙醇溶液用量为4 8BV，流速为I 4BV/h。
10.根据权利要求I所述的扯根菜提取物的制备方法，其特征在于步骤四中干燥为减压干燥、喷雾干燥和冷冻干燥。
全文摘要
本发明涉及扯根菜提取物的制备方法。本发明是要解决现有的扯根菜总黄酮提取物含量低、操作方法复杂、无法大规模生产等问题，而提供的扯根菜提取物的制备方法。方法一、将扯根菜用去离子水煎煮后减压浓缩得到清膏；二、将清膏与去离子水进行混合静置收集上层液体即得到提取液；三、将提取液进行聚酰胺树脂纯化收集乙醇洗脱液；四、乙醇洗脱液进行减压蒸馏回收乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得到扯根菜提取物。本发明应用于扯根菜提取物的制备领域。
文档编号A61P3/06GK102920755SQ201210490728
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月27日 优先权日2012年11月27日
发明者任瑞涛, 李云涛, 吴志军, 王丽娜, 单钰毓, 李殿明 申请人:哈药集团中药二厂