专利名称：一种保肝降酶的药物组合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种保肝降酶的药物组合物及其制备方法和用途。
背景技术：
近几年，不合理的膳食结构、嗜酒、多坐少动的生活方式、有肥胖家族史等因素导致我国脂肪肝的发病率逐年升高，已占到平均人口的10%，成人发病率可能达到20%至30%，在肥胖、嗜酒和糖尿病人群中可高达50%-60%，其中约25%的患者发生肝纤维化，I. 5-8. 0%的患者发展为肝硬化。当前，脂肪肝患者逐年上升，并呈现出低龄化发展趋势。因此，支持有效治疗脂肪肝的药物研发，对于我国目前脂肪肝的治疗显得十分迫切和必要。中医认为，脂肪肝其病位在肝、胆、脾、胃；因湿热、痰浊、淤血等淤阻肝之经络等多 种病因引起，饮食、肥胖、消渴与本病的发生有关，如《素问·奇病论》谓“此肥美之所发，此人必数食甘美而多肥也。肥者令人内热，甘者令人中满，故其气上溢，转为消渴。”《灵枢·卫气失常》曰“膏者，多气而皮纵缓，故能纵腹垂腴”，又说“脂者，其血清，气滑少，故不能大”。朱丹溪在《朱丹溪治法心要》中提出了“肥白人多痰湿”的观点，刘河间提出肥人“腠理多郁滞，气血难以通利。”《张氏医通》指出“嗜酒之人，病腹胀如斗，此得湿热伤脾。”《临证指南医案》指出“而但湿从内生者，必其人膏粱酒醴过度。”古人对此病的治疗提出了许多行之有效的方法。《临证指南医案》说“杂证胁痛，皆属厥阴肝经，以肝脉布于胁肋，故仲景旋覆花汤、河间金铃子散及先生(叶氏)辛温通络、肝缓理虚、温柔通补、辛泄宣密等法，皆治肝著胁痛之剂。”《景岳全书·积聚》指出“治积之要，在知攻补之宜，当于孰缓孰急中辨之。”当前中医将脂肪肝多分为肝郁气滞、脾肾气虚、湿浊内阻、气滞血瘀四种证形。治疗上分别采用疏肝健脾、健脾益肾、祛湿化浊、活血化瘀等方法，取得了一定的疗效。
发明内容
本发明的目的在于提供一种保肝降酶的药物组合物及其制备方法和用途。本发明提供了一种保肝降酶的药物组合物，它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂茵陈7-13份、熊胆粉O. 2-0. 4份、白术4. 2-7. 8份、泽泻6_12份、山楂7_13份、柴胡 4. 2-7. 8 份、甘草 4. 2-7. 8 份。进一步地，它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂茵陈10份、熊胆粉O. 3份、白术6份、泽泻9份、山楂10份、柴胡6份、甘草6份。其中，所述柴胡为北柴胡Bupleurum chinense DC·。其中，所述制剂是以各原料药的水或有机溶剂提取物为活性成分，加上药学上常用的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。进一步地，所述制剂为口服制剂、外用制剂或注射制剂。更进一步地，所述口服制剂为固体制剂。
进一步优选地，所述口服制剂为颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂或丸剂。
本发明还提供了上述药物组合物的制备方法，它包括如下操作步骤
(I)按照用量配比称取原料药；
(2)取茵陈、泽泻、白术、山楂、柴胡、甘草，先加水提取，提取液浓缩后再加乙醇至含醇量60-90%v/v，醇沉后，取上清液，回收乙醇，浓缩或干燥后，加入熊胆粉及药学上常用的辅料或辅助性成分制备成制剂；或
(3)a、取熊胆粉，用环糊精包合后，得熊胆粉包合物；
b、取泽泻、茵陈、甘草，加70-90%v/v乙醇提取，提取液浓缩后，上非极性或弱极性大孔吸附树脂，先用水洗除去杂质后，再以70-90%v/v乙醇为洗脱剂，收集乙醇部位，得洗脱液A ；
C、取柴胡、白术、山楂，加水提取，提取液浓缩后，上非极性或弱极性大孔吸附树脂，先用水洗除去杂质后，再以70-90%v/v乙醇为洗脱剂，收集乙醇部位，得洗脱液B ;
d、合并洗脱液A、B，回收乙醇后，浓缩或干燥，再加入熊胆粉包合物及药学上常用的辅料或辅助性成分制备成制剂。
其中，步骤(2)中含醇量为65_80%v/v ;步骤(3)的b项中，大孔吸附树脂为D101， 洗脱剂为70%v/v乙醇；步骤(3)的c项中，大孔吸附树脂为AB-8，洗脱剂为70%v/v乙醇；
其中，步骤(2)或(3)中所述干燥为喷雾干燥，干燥条件如下取待干燥物，先制备成密度lg/ml的液体，然后在进风温度142 150°C、出风温度76 80°C下进行喷雾干燥； 步骤(3)的a项中，熊胆粉与β -环糊精的用量比为I :70-90w/W，以水为溶剂进行包合。
本发明还提供了上述的药物组合物在制备治疗非酒精性脂肪肝的药物中的用途。
进一步地，所述药物是治疗原发性非酒精性脂肪肝的药物。
本发明还提供上述药物组合物在制备保肝降酶或改善血脂异常的药物中的用途。
本发明药物组合物中，茵陈苦、辛、微寒，归脾、胃、肝、胆经，利湿、退黄、解毒；且善渗泄而利小便，分消走泻中焦湿热，使湿去热孤，湿热自除；《医学衷中参西录》云“善衍肝胆之热，兼理肝胆之郁，热消郁开，胆汁入小肠之路毫无阻隔也”；现代药理研究表明，茵陈有利胆、保肝、降血脂作用。故为君药。熊胆，苦、寒，入肝、胆、心经，清肝利胆、清热解毒、息风止痉；《新修本草》云熊胆能“疗时气热盛变为黄疸”；《本草蒙签》“治男、妇时气热蒸， 变为黄疸”;现代药理研究表明熊胆有降低血中甘油三酯和胆固醇含量，可以有效防治高脂血症，山楂味酸、性甘、微温，归脾、胃、肝经，消食、化积、行气，且能活血化瘀，可治疗“湿热缠绵日久,必生气滞血瘀”,《本草纲目》“化饮食,消肉积,癥瘕,痰饮痞满吞酸,滞血痛胀”; 现代药理研究表明，山楂能有效降低血脂、助消化、抗氧化、增强人体免疫力，共为臣药。泽泻性寒，甘淡利水渗湿，泄热化浊，《名医别录》载“补虚损五劳，除五脏痞满，起阴气，止泻精，消渴，淋浙，逐膀胱、三焦之水”;现代药理研究表明，泽泻有降血脂、抗脂肪肝、抗动脉粥样硬化等作用。白术苦、甘，性温，归脾、胃经，补气健脾、燥湿利水，与泽泻相配构成金匮泽泻汤，治疗中焦脾胃气虚、痰湿内盛之证，且防他药过于苦寒、清热利湿而伤脾胃。现代药理研究表明，白术有保肝利胆、利尿、增强胃肠蠕动等作用。故为佐药。北柴胡味苦、性微寒， 疏肝解郁，使肝气条达，痰湿自除。《本草纲目》记载“劳有五劳，病在五脏。若劳在肝、胆、 心及包络有热，或少阳经热者，则柴胡乃手足厥阴、少阳必用之药……”。且引诸药入肝；现代药理研究表明柴胡能保肝利胆、稳定细胞膜，对蛋白质、血糖、脂质代谢有调节作用，故为使药。甘草甘平，益气化痰，调和诸药，亦为使药。全方配伍，寒温并用，利水而不伤阴，清热而不伐胃，使热清湿利，痰瘀得化，为治疗肝胆湿热型脂肪肝的效方。
本发明提供的药物组合物，能显著改善肝细胞脂肪变性及肝内脂类的聚集，降低血清TC、TG、LDL，升高HDL，具有良好的保肝降酶降脂活性，能够有效用于非酒精性脂肪肝治疗，为临床用药提供了新的选择。
图I :正常组HE染色肝组织(左叶)病理切片光镜视图，放大倍数为200X。
图2 :脂肪肝模型组HE染色肝组织(左叶)病理切片光镜视图，放大倍数为200 X。
图3 :东宝肝泰对照组HE染色肝组织(左叶)病理切片光镜视图，放大倍数为 200 X。
图4 :本发明药物组合物低剂量组HE染色肝组织(左叶)病理切片光镜视图，放大倍数为200。
图5 :本发明药物组合物中剂量组HE染色肝组织(左叶)病理切片光镜视图，放大倍数依次为200。
图6 :本发明药物组合物高剂量组HE染色肝组织(左叶)病理切片光镜视图，放大倍数依次为200。
具体实施方式
实施例I本发明药物组合物的制备
[处方]茵陈300g泽泻270g 白术180g 山楂300g
北柴胡180g甘草180g 熊胆粉9g
[制法]茵陈、泽泻、白术、山楂、北柴胡、甘草加水煎煮二次，每次I.5小时，滤过， 合并滤液，滤液浓缩至相对密度为I. 20 (50°C)的浸膏，放冷，加乙醇使含醇量为70%，搅拌均匀，静置24h，使沉淀完全，离心，吸取上清液，60°C减压回收乙醇至无醇味后，浓缩至稠浸膏放冷，加入糊精、熊胆粉9g (先于糊精配研均匀)制成颗粒1000g，干燥，即得。
实施例2本发明药物组合物的制备
取茵陈7g、白术7. 8g、泽泻12g、山楂13g、柴胡7. 8g、甘草7. 8g，加水煎煮，合并水煎液，浓缩至干，加入熊胆粉O. 4g，以及适量微晶纤维素，混匀，干燥，装胶囊，即得胶囊剂。
实施例3本发明药物组合物的制备
取茵陈13份、白术4. 2份、泽泻6份、山楂7份、柴胡4. 2份、甘草4. 2份，加水煎煮，合并水煎液，浓缩后，加入熊胆粉O. 2份，以及适量淀粉，制粒，干燥，即得颗粒剂。
实施例4本发明药物组合物的制备
[处方]茵陈300g泽泻270g 白术180g 山楂300g
北柴胡180g甘草180g 熊胆粉9g
[制法]茵陈、泽泻、白术、山楂、北柴胡、甘草加水煎煮二次，每次I.5小时，滤过， 合并滤液，滤液浓缩至相对密度为I. 20 (50°C)的浸膏，放冷，加乙醇使含醇量为70%，搅拌均匀，静置24h，使沉淀完全，离心，吸取上清液，60°C减压回收乙醇至无醇味后，提取液浓缩至密度为I. Og/ml,在进风温度142 150°C，出风温度76 80°C条件下进行喷雾干燥，即得干膏；
采用12倍量的水在温度80°C以上使720g β -环糊精溶解，边搅拌(搅拌速度为 400r · min—1)，边降温，在40°C时缓缓滴加加入浓度为O. 05g/ml的熊胆粉水溶液180ml，搅拌SOmin后，从恒温水浴锅中取出，放入4°C的冰箱内冷藏24h，过滤，残渣用乙醚洗涤，并于 50°C干燥，即得熊胆粉包合物；
取干膏，加入熊胆粉包合物及适量糊精，混匀后，制成颗粒lOOOg，干燥，即得。
实施例5本发明药物组合物的制备
[处方]茵陈300g泽泻270g 白术180g 山楂300g
北柴胡180g甘草180g 熊胆粉9g
(I)茵陈、泽泻、甘草的提取、纯化
取处方量茵陈、泽泻、甘草，置圆底烧瓶中，用8倍量80%乙醇回流提取2次，每次分别为2h，减压回收乙醇，浓缩置相对密度为lg/ml，备用。
树脂的预处理及装柱将树脂先用95%乙醇浸泡24h，充分溶胀，倾倒掉上层乙醇液，湿法装柱，以95%乙醇洗脱至流出液加水不呈白色浑浊为止，再用蒸馏水洗至无醇味，在树脂上面铺一层脱脂棉，用蒸馏水浸泡，备用。
大孔树脂纯化条件为树脂型号D101 ;上样液浓度0. 5g/ml (生药量);静置2h， 使吸附更完全；洗脱剂70%乙醇；水洗量2BV ;洗脱剂用量8BV ;流速3BV/h。
(2)柴胡、白术、山楂的提取、纯化
取处方量北柴胡、白术、山楂，置圆底烧瓶中，用8倍量水回流提取2次，每次分别为2h，减压回收，浓缩置相对密度为lg/ml，备用。
树脂的预处理及装柱将树脂先用95%乙醇浸泡24h，充分溶胀，倾倒掉上层乙醇液，湿法装柱，以95%乙醇洗脱至流出液加水不呈白色浑浊为止，再用蒸馏水洗至无醇味，在树脂上面铺一层脱脂棉，用蒸馏水浸泡，备用。
大孔树脂纯化条件为树脂型号AB-8 ;上样液浓度0. 5g/ml (生药量);静置2h， 使吸附更完全；洗脱剂70%乙醇；水洗量1BV ;洗脱剂用量8BV ;流速3BV/h。
(3)制剂的制备
取步骤(I)、(2)所得的洗脱液，合并，减压浓缩至密度为2. Og/ml，在60°C条件下进行烘箱干燥，即得复方提取液干燥粉末；再按实施例I方法制备熊胆粉包合物；将上述干燥粉末与熊胆粉包合物混合，加入适量糊精，制备颗粒剂。
实施例6本发明药物组合物的制备
[处方]茵陈300g泽泻270g 白术180g 山楂300g
北柴胡180g甘草180g 熊胆粉9g
[制法]按实施例I方法制备熊胆粉包合物；取茵陈、泽泻、白术、山楂、北柴胡、甘草加水煎煮二次，每次I. 5小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度为I. 20 (50°C)的浸膏，放冷，加乙醇使含醇量为70%，搅拌均匀，静置24h，使沉淀完全，离心，吸取上清液，600C 减压回收乙醇至无醇味后，提取液浓缩至密度为2. Og/ml的浸膏，放冷；加入糊精、熊胆粉包合物，制成颗粒，再加入适量硬脂酸镁，混匀后，压片，即得片剂。
实施例7本发明药物组合物的制备
[处方]茵陈300g泽泻270g 白术180g 山楂300g
北柴胡180g甘草180g 熊胆粉9g
[制法]按实施例I方法制备熊胆粉包合物；取茵陈、泽泻、白术、山楂、北柴胡、甘草加水煎煮二次，每次I. 5小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度为I. 20 (50°C)的浸膏，放冷，加乙醇使含醇量为70%，搅拌均匀，静置24h，使沉淀完全，离心，吸取上清液，600C 减压回收乙醇至无醇味后，提取液浓缩至密度为2. Og/ml，在功率5000W，压力O. 08MPa,物料温度45-49°C条件下进行微波干燥3h，即得浸膏固体，粉碎，过80目筛，备用，即得干膏粉。加入糊精、熊胆粉包合物，制成颗粒，干燥，装胶囊，即得胶囊剂。
以下通过试验例来说明本发明药物组合物的有益效果。
试验例I本发明药物治疗非酒精性脂肪肝动物药效实验
I)动物分组、造模与给药
60只SD大鼠随机分为6组，每组10只，每组均雌雄各半，即分为正常组、脂肪肝模型组、东宝肝泰对照组和本 发明药物组合物高、中、低剂量3个治疗组。另4只大鼠并入模型组，做为抽样检查造模效果用。
除正常组外，其余各组大鼠均以闻脂词料代替基础词料喂养12周。闻脂词料配比基础饲料87. 3%，猪油10%，胆固醇2%，猪胆盐O. 7%。于造模第10周随机取模型组雌、雄大鼠各2只，观察造模效果。
造模成功后第10周开始给药。在继续造模的同时(防止动物自愈)，正常组、脂肪肝模型组予以O. 9%氯化钠注射液，东宝肝泰对照组以给药O. 27g/kg ·(!，本发明药物组合物低、中、高给药分别为0. 5875g/kg · d、l. 175g/kg · d和2. 35g/kg · d (剂量是按生药剂量算)(由实施例I方法制备)。均以溶剂灌胃方式给药，给药量为2ml/250g。以上均于上午 9-11点执行，每日I次，连续30日。
2)观察指标及检测项目
大体观察
观察各组新鲜肝脏色泽、形态，称肝脏湿重，测算肝脏指数。
肝组织HE染色病理切片检查
(I)于肝左叶切取IcmX IcmX Icm组织块，10%甲醛溶液内保存固定24小时。
(2)取出肝组织块，进行梯度酒精脱水、透明、浸蜡和石蜡包埋。
(3)组织蜡片用轮转式切片机横断面连续切片，厚度为4μπι，捞片、烤箱烘干。
(4)组织切片以100% 二甲苯脱蜡10minX2次，无水乙醇，95%、80%梯度酒精依次浸泡5minXl次。
(5)组织切片依次分别经1%苏木素浸泡15min、水浸洗返蓝15min、5%盐酸分色 5sec及1%伊红染色30SeC，经水冲洗后烘干，树脂封片。
(6)脂肪肝病理分级参考范建高等的病理诊断标准。光镜下，以和 “+++”作为脂肪肝变性的四个等级，以分别对应临床上的“正常”、“轻度脂肪肝”、“中度脂肪肝”和“重度脂肪肝”。肝细胞结构正常或偶见脂肪空泡为级；肝小叶内1/3肝细胞脂肪变性，累及肝小叶数量〈50%为“ + ”级；肝小叶内2/3肝细胞脂肪变性，累及肝小叶数量 <50%,或肝小叶内1/3肝细胞脂肪变性，累及肝小叶数量>50%为“++”级；肝小叶内>2/3肝细胞脂肪变性，累及肝小叶数量>50%为“+++”级。
肝组织冰冻切片脂肪染色及图像定量分析
(I)肝组织切取大小约IcmX IcmX lcm，以10%甲醛固定，保存于_20°C冰箱以制作冰冻切片。
(2)_20°C下行冰冻切片，切片厚度为8μπι，以沾有火棉胶的玻片粘片。
(3)将切片放入70%乙醇洗lmin，后滴苏丹IV进行染色I 2min，再用70%乙醇稍洗，流水再洗，后以苏木素复染，流水冲洗至返蓝，中性甘油封片。
(4)形态定量的测试样本，从60例标本每组随机选出5例，在镜下任选2个肝小叶间视野拍5张，不重复，每组照片有肝小叶视野5X5X2=50个。每张均放大40倍。
(5)以麦克奥迪Motic Med. 6. O计算机软件测量阳性面积、灰度、平均光密度和积分光密度。
(6)采用SPSS16. O进行数据的统计计算。
血清ALT、AST、GGT及ALP含量测定
全自动生化分析仪检测ALT、AST、GGT及ALP含量
血清TG、TC、HDL-C 及 LDL-C 的测定
大鼠经乌拉坦麻醉成功后，腹主动脉采血，取全血约7ml，经低速1500rpm离心 IOmin后取上清液于_20°C保存，分别测定血清TG、TC、HDL-C及LDL-C。采用SPSS16. O进行数据的统计计算。
3)结果
见图1-6。
正常组肝表面颜色普遍暗红，色泽鲜亮，中等硬度，切面略有颗粒感，无油腻感。模型组多数肝脏表面颜色发黄，肝脏体积明显增大，包膜紧张，部分肝脏呈奶黄色，切面油腻有油滴，无颗粒感。其余各用给药组颜色、质地介于两者之间。
表I各组肝脏湿重及肝脏指数
权利要求
1.一种保肝降酶的药物组合物，其特征在于它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂 茵陈7-13份、熊胆粉O. 2-0. 4份、白术4. 2-7. 8份、泽泻6_12份、山楂7_13份、柴胡4. 2-7. 8 份、甘草 4. 2-7. 8 份。
2.根据权利要求I所述的药物组合物，其特征在于它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂 茵陈10份、熊胆粉O. 3份、白术6份、泽泻9份、山楂10份、柴胡6份、甘草6份。
3.根据权利要求I或2所述的药物组合物,其特征在于所述柴胡为北柴胡Bupleurumchinense DC.。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的药物组合物，其特征在于所述制剂为口服制剂。
5.权利要求1-4任意一项所述药物组合物的制备方法，其特征在于它包括如下操作步骤 (1)按照用量配比称取原料药； (2)取茵陈、泽泻、白术、山楂、柴胡、甘草，先加水提取，提取液浓缩后再加乙醇至含醇量60-90%v/v，醇沉后，取上清液，回收乙醇，浓缩或干燥后，加入熊胆粉及药学上常用的辅料或辅助性成分制备成制剂；或 (3)a、取熊胆粉，用β-环糊精包合后，得熊胆粉包合物； b、取泽泻、茵陈、甘草，加70-90%v/v乙醇提取，提取液浓缩后，上非极性或弱极性大孔吸附树脂，先用水洗除去杂质后，再以70-90%v/v乙醇为洗脱剂，收集乙醇部位，得洗脱液A ； C、取柴胡、白术、山楂，加水提取，提取液浓缩后，上非极性或弱极性大孔吸附树脂，先用水洗除去杂质后,再以70-90%v/v乙醇为洗脱剂，收集乙醇部位，得洗脱液B ; d、合并洗脱液A、B，回收乙醇后，浓缩或干燥，再加入熊胆粉包合物及药学上常用的辅料或辅助性成分制备成制剂。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤(2)中含醇量为65-80%v/v； 步骤(3)的b项中，大孔吸附树脂的型号为D101，洗脱剂为70%v/v乙醇；步骤(3)的c项中，大孔吸附树脂为AB-8，洗脱剂为70%v/v乙醇。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤(2)或(3)中所述干燥为喷雾干燥，干燥条件如下取待干燥物，先制备成密度lg/ml的液体，然后在进风温度142 150°C、出风温度76 80°C下进行喷雾干燥； 步骤(3)的a项中，熊胆粉与β -环糊精的用量比为I :70-90w/W，以水为溶剂进行包口 ο
8.权利要求1-4任意一项所述的药物组合物在制备治疗非酒精性脂肪肝的药物中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于所述药物是治疗原发性非酒精性脂肪肝的药物。
10.权利要求1-4任意一项所述的药物组合物在制备保肝降酶或改善血脂异常的药物中的用途。
全文摘要
本发明公开了一种保肝降酶的药物组合物，它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂茵陈7-13份、熊胆粉0.2-0.4份、白术4.2-7.8份、泽泻6-12份、山楂7-13份、柴胡4.2-7.8份、甘草4.2-7.8份。本发明还提供了该药物组合物的制备方法和用途。本发明提供的药物组合物，能显著改善肝细胞脂肪变性及肝内脂类的聚集，降低血清TC、TG、LDL，升高HDL，具有良好的保肝降酶降脂活性，能够有效用于非酒精性脂肪肝治疗，为临床用药提供了新的选择。
文档编号A61K36/884GK102935151SQ20121051694
公开日2013年2月20日 申请日期2012年12月5日 优先权日2012年12月5日
发明者陈志鸿, 陈丽玲, 洪振丰, 徐伟, 赵锦燕, 郑海音 申请人:福建归真堂药业股份有限公司