专利名称：新型无油佐剂制备方法及用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新型疫苗佐剂及其应用，属于生物学领域，特别是兽用生物制品领域。
背景技术：
目前，兽用疫苗生产中广泛使用矿物油佐剂，即分别在矿物油佐剂和疫苗抗原中分别加入乳化剂，在高剪切力的作用下制成油包水或水包油包水型乳剂疫苗。该类疫苗在免疫应答和免疫持续期方面具有独特的优势，受到广泛认可。但是该疫苗黏度大、不易注射、不易吸收、疫苗副反应大、可不同程度地导致局部产生肉芽肿、无菌性脓肿和炎症反应，甚至有致癌作用，对动物胴体的损伤和动物源性食品安全影响较大，诸多问题一直未得到有效解决。铝胶佐剂也是目前常用的一种疫苗佐剂，是目前唯一通过FDA批准的能用于人的佐剂，已经广泛用于人兽疫苗生产。铝胶佐剂作用机制是其与抗原形成复合物，注射后在局部形成抗原贮存库，使抗原缓慢释放，从而诱导机体持续的免疫反应。但是铝胶佐剂也存在许多不足之处，铝佐剂主要促进体液免疫应答而不能很好地诱导细胞介导的免疫。注射后局部反应较大，容易形成局部坏死或肉芽肿，影响动物源性食品品质，而且容易诱导机体的过敏反应。除了油佐剂和铝胶佐剂，目前报道的疫苗佐剂还有脂质体、免疫刺激复合物佐剂、CpG序列、细胞因子、蜂胶、植物皂甙等。上述的佐剂免疫增强效果也确实存在，但它们也有一些不可避免的缺点，如效果较弱、免疫持续期短、免疫机制不明确或者产品成本高、效果不稳定、难以应用于产业化生产。
发明内容
本发明￠05无油佐剂)目的在于针对目前传统的矿物油佐剂所存在的一系列问题，提供一种可以完全替代矿物油佐剂的新型无油佐剂，该佐剂可以降低疫苗的黏稠度，提高疫苗稳定性，降低疫苗副反应,并可以使动物机体快速产生免疫保护作用，同时也提高了动物源性肉食品的安全性。本发明的另外一个目的在于提供一种上述佐剂的制备方法，该方法制备简单，成本低廉，适于规模化生产。本发明可应用于畜禽疫苗产品的生产和使用过程中，即可用于病毒或细菌类灭活疫苗作为疫苗佐剂，也可用于病毒或细菌类活疫苗作为疫苗稀释保护剂。本发明佐剂的原料及其配比为:磷酸氢二钠2 5g、磷酸二氢钾0.2 lg、氯化钠3 10g、海藻糖2 10g、黄芪多糖2 10g、谷氨酸钠I 5g、明胶5 20g、聚乙二醇30003 IOg,葡聚糖I 5g, 1000ml注射用水。优选磷酸氢二钠2 4g、磷酸二氢钾0.2 lg、氯化钠6 10g、海藻糖4 8g、黄芪多糖4 8g、谷氨酸钠2 4g、明胶9 16g、聚乙二醇30005 8g，葡聚糖2 4g，IOOOml注射用水。进一步优选磷酸氢二钠3 4g、磷酸二氢钾0.5 0.Sg、氯化钠7 9g、海藻糖6 8g、黄苗多糖6 8g、谷氨酸钠3 4g、明胶12 15g、聚乙二醇30006 8g,葡聚糖2 3g。最优选磷酸氢二钠3.5g、磷酸二氢钾0.6g、氯化钠7g、海藻糖7g、黄芪多糖7g、谷氨酸钠3g、明胶13g、聚乙二醇30007g，葡聚糖3g，1000ml注射用水本发明佐剂的制备方法为按照配比称取上述原料，充分溶解后，经高温高压灭菌后备用。进一步优选，采用超声波处理充分溶解后，经121°C，高压灭菌20min后备用。本发明方法简单易行，用于疫苗生产中即可提高疫苗产品质量，又可降低疫苗生产成本。用于冻干活疫苗稀释保护剂可提升疫苗免疫效果，降低免疫失败机率。
具体实施例方式结合实施对本发明做进一步描述和论证，但并不对本发明做任何限定。实施例1本发明佐剂(605无油佐剂)的配制方法佐剂I组:磷酸氢二钠3.5g、磷酸二氢钾0.6g、氯化钠7g、海藻糖7g、黄芪多糖7g、谷氨酸钠3g、明胶13g、聚乙 二醇30007g，葡聚糖3g，1000ml注射用水，采用超声波处理后，经121 C，闻压灭圃20min后备用。佐剂2组:称取磷酸氢二钠5g、磷酸二氢钾0.2g、氯化钠10g、海藻糖2g、黄芪多糖log、谷氨酸钠lg、明胶20g、聚乙二醇30003g，葡聚糖5g，1000ml注射用水，采用超声波处理后，经121°C，高压灭菌20min后备用。佐剂3组:磷酸氢二钠2g、磷酸二氢钾lg、氯化钠3g、海藻糖10g、黄芪多糖2g、谷氨酸钠5g、明胶5g、聚乙二醇300010g，葡聚糖lg，1000ml注射用水，采用超声波处理后，经121 C，闻压灭囷20min后备用。佐剂4组:磷酸氢二钠4g、磷酸二氢钾lg、氯化钠5g、海藻糖9g、黄芪多糖Sg、谷氨酸钠2g、明胶16g、聚乙二醇30005g，葡聚糖3g，1000ml注射用水，采用超声波处理后，经121 C，闻压灭囷20min后备用。佐剂5组:磷酸氢二钠2g、磷酸二氢钾0.4g、氯化钠Sg、海藻糖4g、黄芪多糖Sg、谷氨酸钠4g、明胶6g、聚乙二醇30007g，葡聚糖4g，1000ml注射用水，采用超声波处理后，经121 C，闻压灭囷20min后备用。实施例2佐剂用于禽流感灭活疫苗的研究将检验合格的禽流感病毒灭活液与本发明佐剂按照4: 6比例进行混合，500 IOOOrpm搅拌30分钟。然后按照现行《中华人民共和国兽药典》三部规定的方法分别进行无菌检验、物理性状、稳定性、黏度、安全性和效力检验，试验同时设立注射用白油佐剂疫苗和商品疫苗对照。结果表明采用本发明佐剂与传统的油佐剂制成的灭活疫苗比较，在稳定性、黏稠度、安全性、疫苗配制工艺方面，均具有显著的优势。结果见表I。表1各批次新城疫灭活疫苗检验结果
权利要求
1.一种不含有矿物油和/或氢氧化铝的佐剂复合物。
2.一种佐剂复合物，其特征在于原料及其配比为:磷酸氢二钠2 5g、磷酸二氢钾0.2 lg、氯化钠3 10g、海藻糖2 10g、黄苗多糖2 10g、谷氨酸钠I 5g、明胶5 20g、聚乙二醇30003 IOg,葡聚糖I 5g,注射用水1000ml。
优选磷酸氢二钠2 4g、磷酸二氢钾0.2 lg、氯化钠6 10g、海藻糖4 8g、黄芪多糖4 8g、谷氨酸钠2 4g、明胶9 16g、聚乙二醇30005 8g,葡聚糖2 4g, 1000ml注射用水。
进一步优选磷酸氢二钠3 4g、磷酸二氢钾0.5 0.8g、氯化钠7 9g、海藻糖6 8g、黄苗多糖6 8g、谷氨酸钠3 4g、明胶12 15g、聚乙二醇30006 8g,葡聚糖2 3g。
最优选磷酸氢二钠3.5g、磷酸二氢钾0.6g、氯化钠7g、海藻糖7g、黄芪多糖7g、谷氨酸钠3g、明胶13g、聚乙二醇30007g，葡聚糖3g，1000ml注射用水。
3.根据权利要求1或2所述佐剂复合物的制备方法，其特征在于，按照配比称取原料后，直接经高压灭菌后使用。
4.根据权利要求1或2所述佐剂 复合物的应用，其特征在于将其与疫苗灭活抗原按照4:1 1:4的比例直接进行混合搅拌均匀即制成灭活疫苗。
5.根据权利要求4所述的应用，其中所述疫苗包括但不限于新城疫灭活疫苗、禽流感灭活疫苗、传染性支气管炎灭活疫苗、传染性法氏囊灭活疫苗、口蹄疫灭活疫苗、猪支原体肺炎灭活疫苗、鸡传染性鼻炎灭活疫苗等病毒或细菌灭活疫苗。
6.根据权利要求1或2所述佐剂复合物的应用，其特征在于将其进行5 10倍稀释后可用作冻干活疫苗的稀释液和抗原保护剂。
7.根据权利要求6所述的应用，其中所述疫苗包括但不限于新城疫活疫苗、传染性支气管炎活疫苗、传染性喉气管炎活疫苗、传染性法氏囊活疫苗、猪痕活疫苗、伪狂犬病活疫苗等病毒或细菌活疫苗。
全文摘要
本发明涉及一种新型无油佐剂(605佐剂)复合物制备方法及其在兽用疫苗中的应用。本发明制备的佐剂用于灭活疫苗生产可完全代替矿物油佐剂和铝胶佐剂，能被机体在短期内完全吸收，无残留，副反应小，可提高疫苗的安全性，同时简化疫苗生产工艺，降低疫苗生产成本。本发明制备的佐剂也可作为活疫苗稀释保护液，具有保护疫苗抗原生物活性，增强疫苗免疫效果，延长疫苗抗体持续期等特点。
文档编号A61P31/14GK103083659SQ201310018498
公开日2013年5月8日 申请日期2013年1月18日 优先权日2013年1月18日
发明者赵 卓, 王力, 江厚生 申请人:北京华夏兴洋生物科技有限公司