一种抗血栓的中药制剂及其的新用途
【专利摘要】本发明公开了一种抗血栓的中药制剂及其的新用途。该抗血栓的中药制剂采用益母草、红花、人参、白芍等中药组成。上述中药原料药通过煎煮、水蒸气蒸馏、醇沉等方法，使其有效成分充分发挥作用。本发明制剂具有显著的降低血液高凝状态、减少血栓形成及降低继发性纤溶的作用。
【专利说明】一种抗血栓的中药制剂及其的新用途
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种中药制剂及其新用途，特别是涉及一种中药组合物及其在制备抗血栓药物中的应用。
【背景技术】
[0002]有研究表明，恶性肿瘤并发静脉血栓的比率可达2.74%~12.1%,其中以胰腺癌、肺癌NSCLC和胃肠癌的发生率最高，不但影响患者的生活质量，而且延误抗肿瘤治疗。Donati (RicciS,Ant onuz zoA,Gall L，et al.Gemcitabine monotherapy in eld erlypatient s with advanced non small cell lung cancer:a maticen ter phase study.Lung Cancer, 2000，27(2):7580)研究显示:在肿瘤患者的死亡原因中，血栓及相关并发症仅次于肿瘤本身位居第二。静脉血栓栓塞、肺栓塞和轻度的DIC的发生是常见的表现(Rickies FR, Levine M, Edwards RL.Hemostatic alterations in cancer patients.Cancer Metastasis Rev.1992;11:237-248.Buller HR, van Doormaal FF, van SluisGL, Kamphuisen PW.Cancer and thrombosis: from molecular mechanisms to clinicalpresentations.J Thromb Haemost.2007; 5 (Suppll):246_254)。凝血紊乱是恶性肿瘤疾病常见的并发症，主要表现为血液高凝导致血栓形成。本发明口服液，在临床应用中具有治疗血栓的作用。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在 于提供一种抗血栓作用的中药制剂。
[0004]本发明的目的在于公开一种中药制剂在抗血栓作用中的新用途。
[0005]本发明的目的在于公开一种中药制剂在减少肺脏、肝脏及肠系膜组织血栓的应用。
[0006]本发明的目的是通过如下技术方案实现的:
[0007]本发明所述中药制剂采用如下原料药制成(按重量份计):
[0008]益母草100-180重量份红花10-40重量份花椒10_40重量份
[0009]水蛭10-40重量份当归20-60重量份苏木10_40重量份
[0010]三棱10-40重量份两头尖10-40重量份川芎10_40重量份
[0011]降香10-40重量份香附10-40重量份人参30_75重量份
[0012]高良姜10-40重量份姜黄8-25重量份没药10_40重量份
[0013]苦杏仁10-40重量份大黄40-90重量份紫苏子10_40重量份
[0014]小茴香10-40重量份桃仁10-40重量份五灵脂10_40重量份
[0015]蛇虫10-40重量份鳖甲100-180重量份丁香10_40重量份
[0016]延胡索10-40重量份白芍20-60重量份蒲黄10_40重量份
[0017]乳香10-40重量份干漆10-40重量份吴茱萸10_40重量份
[0018]阿魏10-40重量份肉桂10-40重量份艾叶10_40重量份[0019]熟地黄20-60重量份麝香10-40重量份。
[0020]本发明所述中药制剂采用如下原料药制成(按重量份计):
[0021]益母草130-150重量份红花15-20重量份花椒15_20重量份
[0022]水蛭15-20重量份当归30-40重量份苏木15_20重量份
[0023]三棱15-20重量份两头尖15-20重量份川芎15_20重量份
[0024]降香15-20重量份香附15-20重量份人参50_55重量份
[0025]高良姜15-20重量份姜黄8-15重量份没药15_20重量份
[0026]苦杏仁20-30重量份大黄60-80重量份紫苏子15_20重量份
[0027]小茴香20-30重量份桃仁20-30重量份五灵脂15_20重量份
[0028]虻虫15-20重量份鳖甲130-150重量份丁香15_25重量份
[0029]延胡索15-20重量份白芍30-40重量份蒲黄15_20重量份 [0030]乳香15-20重量份干漆15-20重量份吴茱萸15_20重量份
[0031]阿魏15-20重量份肉桂15-20重量份艾叶15_20重量份
[0032]熟地黄30-40重量份。
[0033]所述中药制剂的原料药优选为:
[0034]益母草140重量份红花17.5重量份花椒(炭)17.5重量份
[0035]水蛭(制)17.5重量份当归35重量份苏木17.5重量份
[0036]三棱(醋炙)17.5重量份两头尖17.5重量份川芎17.5重量份
[0037]降香17.5重量份香附(醋炙)17.5重量份人参52.5重量份
[0038]高良姜17.5重量份姜黄10.5重量份没药(醋炙)17.5重量份
[0039]苦杏仁(炒)26.25重量份大黄70重量份紫苏子17.5重量份
[0040]小茴香(盐炒)26.25重量份桃仁26.25重量五灵脂(醋炎)17.5重量份
[0041]虻虫17.5重量份鳖甲140重量份丁香21.25重量份
[0042]延胡索(醋炙)17.5重量份白芍35重量份蒲黄(炭)17.5重量份
[0043]乳香(醋炙)17.5重量份干漆(煅)17.5重量份
[0044]吴茱萸(甘草水炙)17.5重量份
[0045]阿魏17.5重量份肉桂17.5重量份艾叶(炙)17.5重量份
[0046]熟地黄35重量份。
[0047]以原料药量计算，相当于IOg原料药的所述组合物中大黄素、大黄酚的总量不少于 0.28mg。
[0048]上述中药原料可按常规工艺加入常规辅料制成片剂、胶囊、口服液、丸剂、颗粒剂等临床可接受的剂型。
[0049]以生药材(原料药)量计算，相当于IOg生药的所述组合物制剂中大黄素、大黄酚的总量不得少于0.28mg。
[0050]人参皂苷Rgl、Re总量计不低于100 μ g、人参皂苷Rb1不低于50 μ g ;水苏碱不低于50 μg ;吴茱萸碱、吴茱萸次碱总量计不低于100 μ g ;芍药苷50 μ g。
[0051]中药组合物的口服液制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤:
[0052]步骤1:鳖甲加水煎煮2-4次，每次2-4小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩为鳖甲煎液；[0053]步骤2:当归、川弯、姜黄、高良姜、肉桂、丁香、阿魏、降香水蒸气蒸馏提取5-7小时，收集挥发油与蒸馏液，
[0054]步骤3:步骤2水蒸气蒸懼提取剩余的药洛与其余原药材加水煎煮2-4次,每次1-3小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至清膏I,
[0055]步骤4:步骤3的清膏I加乙醇至含醇量达60-80%，调节pH值为7.5~8.0，静置，滤过,滤液回收乙醇,加水得清膏2，
[0056]步骤5:步骤4中的清膏2步骤I的鳖甲煎液，煮沸，放冷，加步骤2的挥发油与蒸馏液及口服液的常规辅料，加水搅拌使溶解，静置，滤过，滤液经常规工艺制成口服液；
[0057]所述步骤2和/或4的静置为:0~5°C静置；
[0058]所述步骤5中加入口服液的常规辅料为:1-5重量份聚山梨酯80、1_5重量份甜蜜素。
[0059]所述制备方法还包括步骤6:大黄素、大黄酚的总量的含量测定；和/或下述鉴别A、B、C任——种或几种。
[0060]本发明还提供该组合物口服液的制备方法，该方法包括如下步骤:
[0061]鳖甲加水煎煮2-4次，每次2-4小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量；当归、川芎、姜黄、高良姜、肉桂、丁香、阿魏、降香水蒸气蒸馏提取5-7小时，收集挥发油与蒸馏液适量，药渣及其余二十五味 加水煎煮2-4次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度约1.15 (50~60°C)的清膏，加乙醇使含醇量达60-80%，调节pH值为7.5~8.0，静置(O~5°C) 10-40小时，滤过，滤液回收乙醇，加水至相对密度约1.06 (50~60°C )的清膏，再加入鳖甲煎液，煮沸10-30分钟，放冷，加挥发油与蒸馏液及1-5重量分聚山梨酯80、1-5重量分甜蜜素,加水搅拌使溶解,静置(O~5°C) 24~48小时,滤过,滤液加水至1000体积份，灌封，灭菌，即得；所述体积份与重量份的关系为g/ml。
[0062]所述中药口服液的制备方法优选为:
[0063]以上三十四味，鳖甲加水煎煮3次，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量；当归、川芎、姜黄、高良姜、肉桂、丁香、阿魏、降香水蒸气蒸馏提取6小时，收集挥发油与蒸馏液适量，药渣及其余二十五味加水煎煮3次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度约1.15 (50~60°C)的清膏，加乙醇使含醇量达60-80%，调节pH值为7.5~8.0，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，加水至相对密度约1.06 (50~60°C)的清膏，再加入鳖甲煎液，煮沸20分钟，放冷，加挥发油与蒸馏液及2重量分聚山梨酯80、甜蜜素2重量分，加水搅拌使溶解，静置24~48小时，滤过，滤液加水至1000体积份，灌封，灭菌，即得。
[0064]本发明所述组合物口服液的制备方法，该方法包括如下步骤:
[0065]选取如下原料药:
[0066]益母草140g红花17.5g花椒(炭)17.5g
[0067]水蛭(制)17.5g当归35g苏木17.5g
[0068]三棱(醋炙)17.5g两头尖17.5g川芎17.5g
[0069]降香17.5g香附(醋炙)17.5g人参52.5g
[0070]高良姜17.5g姜黄10.5g没药(醋炙)17.5g
[0071]苦杏仁(炒)26.25g大黄70g紫苏子17.5g
[0072]小茴香(盐炒)26.25g桃仁26.25g五灵脂(醋炙)17.5g[0073]虻虫17.5g 鳖甲 140g 丁香 21.25g
[0074]延胡索(醋炙)17.5g白芍35g蒲黄(炭)17.5g
[0075]乳香(醋炙)17.5g干漆(煅)17.5g吴茱萸(甘草水炙)17.5g
[0076]阿魏17.5g 肉桂 17.5g 艾叶(炙)17.5g
[0077]熟地黄35g ；
[0078]鳖甲加加9倍水煎煮3次，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至160_200ml ;当归、川；、姜黄、高良姜、肉桂、丁香、阿魏、降香加12倍水，水蒸气蒸馏提取6小时，收集挥发油与蒸馏液40-60ml，药渣及其余二十五味加水煎煮三次，第一次加水12倍量煎煮2小时，第二、三次分别加水10倍、8倍，煎煮各1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至50~60°C相对密度为1.15的清膏，加乙醇使含醇量达70%，调节pH值为7.5~8.0，O~5°C静置20-30小时,滤过,滤液回收乙醇,加水至50~60°C相对密度为1.06的清膏，再加入鳖甲煎液，煮沸20分钟，放冷，加挥发油与蒸馏液及聚山梨酯80、甜蜜素，加水搅拌使溶解，O~5°C静置24~48小时,滤过,滤液加水,灌封，105°C灭菌60min。
[0079]本发明进一步提供上述的中药制剂在制备抗血栓药物中的应用。所述血栓为抑制静脉血栓或微血栓。
[0080]本发明进一步提供上述的中药制剂在制备降低血液高凝状态或降低微血栓形成后继发性纤溶亢进药物中的应用。
[0081 ] 本发明口服液在大鼠血栓模型中具有显著的降低血液高凝状态、减少血栓形成及降低继发性纤溶的作用。在高凝状态中会存在继发性纤溶亢进，从而表现为FDP和D- 二聚体水平的升高。本研究中，我们观察到两个治疗组的共30个数据中约83.3% (10/12)的数据与对照组相比有明显差异。通过组织病理学分析，在对照组及两个治疗组中均发现明显的血管微血栓形成。我们观察到给予本发明服液灌胃处理后两个治疗组大鼠中的肺脏、肝脏及肠系膜组织中微血栓的数量均明显减少。
【专利附图】
【附图说明】
[0082]图1:各组大鼠血小板检测值；
[0083]*P<0.05与空白组比较；ΛΡ〈0.05与对照组比较；ΑΡ〈0.05与治疗组A比较
[0084]图2-1:正常大鼠肺脏显微镜图；
[0085]图2-2:大鼠肺脏微血栓显微镜图；
[0086]图2-3:正常大鼠肝脏显微镜图；
[0087]图2-4:大鼠肝脏微血栓显微镜图；
[0088]图2-5:正常大鼠肠系膜显微镜图；
[0089]图2-6:大鼠肠系膜微血栓显微镜图
[0090]图3:大鼠肝、肺、肠系膜组织内高倍视野下微血栓数量
[0091]*Ρ<0.05与对照组比较
[0092]实验例 1:
[0093]I材料与方法
[0094]1.1 动物
[0095]使用体质量为180_220g的雄性SD大鼠，7~9周龄(由中国医学科学院实验动物中心提供)。在温度控制室内饲养(室温24±1°C，湿度不得低于40%)，保持12h的明/暗循环，所有大鼠均提供饮水及食物。空白组、对照组、治疗A组(造模后给予实施例1 口服液)和治疗B组(造模前3天及造模后均给予实施例1 口服液)各包括10只大鼠。
[0096]1.2实验仪器与试剂
[0097]角叉菜胶(SIGMAALDAICH，USA),电子天平(Sartorius，型号:BS423S)，显微镜，全自动血液分析仪(型号:LH750,美国Beckman公司)；全自动凝血分析仪(型号:Acl_Top,美国IL公司)。
[0098]1.3实验动物分组
[0099]将SD大鼠随机分为4组，即空白组、对照组、治疗A组和治疗B组，每组10只。
[0100]1.4制作大鼠血栓模型
[0101]取SD雄性大鼠，角叉菜胶用生理盐水配制成2% (20mg/mL)浓度,皮下注射(20mg/kg)，注射部位为后肢足跖部。注射后置于室温下，多数动物尾尖部出现暗红色血栓形成区，并逐渐向尾根部扩大。48~72h后局部从发绀变为黑色，随后尾部干细断落。评价:24h实验动物尾部小静脉和毛细血管内含有大量纤维素和少量白细胞及血小板，血管内皮细胞核浓缩呈骰子状，血管内壁中性粒细胞靠边。72h可见较大血管呈炎症改变，伴有混合性血栓形成。
[0102]1.5实验方案
[0103]4组大鼠均观察72小时。观察期间，治疗A组大鼠皮下注射角叉菜胶后72h内均给予实施例1 口服液灌胃处理(2mL/100g体质量，I次/8h)。治疗B组大鼠在注射角叉菜胶前72h即给予实施例1 口服液灌胃处理(2mL/100g体质量，I次/8h)，注射角叉菜胶后72h内亦给予实施例1 口服液灌胃处理(2mL/100g体质量，I次/8h)。分别在注射角叉菜胶后24h、48h、72h三个时间点取血标本行血常规、凝血(PT、APTT, INR、FIB、PTA), D- 二聚体含量、纤维蛋白原(fibrinogen, FIB)、纤维蛋白降解产物(fibrin degradation product,FDP)检查。在注射角叉菜胶后72h分离出大鼠的肺脏、肝脏及肠系膜组织使用10%的福尔马林固定。标本进行脱水后再用石蜡包埋。分别取大鼠左肺上叶、右半肝部及中段小肠系膜进行切片，制成切片后(4 μ m厚)用苏木精和伊红染色并进行组织病理学分析，10倍镜下寻找并选取微血栓数量最多的视野，在40倍镜下计数微血栓个数。由于标本或技术的原因，部分大鼠标本检测失败，我们均严格按照随机原则重复进行实验并补充缺失数据。
[0104]1.6统计分析
[0105]每组数据均用?士s表示。采用SAS9.1 (血液化验指标)及SPSS9.1 (微血栓个数)统计软件来比较组间差异的统计学意义。其中对各组血液化验指标进行正态性检验后分别采取welch检验、Kruskal-wallis检验、SNK检验来进行统计学分析。各组微血栓数量采用Bonferroni检验来进行统计学分析。P〈0.05为有统计学意义。
[0106]2 结果
[0107]2.1各组大鼠血凝指标变化
[0108]对照组大鼠三个时间点的PT、APTT值均比空白组明显缩短，PTA检测值则明显升高(表1，P〈0.05);空白组与对照组的INR值之间无统计学差异；对照组的48小时、72小时FIB值检测值与空白组相比明显升高(表1，P〈0.05)。以上结果表明对照组大鼠血液处于高凝状态。[0109]与空白组相比:两个治疗组24小时、48小时PT检测值与其无差异，而72小时PT检测值则明显缩短。治疗A组、治疗B组的三个时间点的PT结果均比对照组明显延长(表1，P〈0.05)，提示两个治疗组大鼠的血液高凝状态均比对照组明显改善。两个治疗组之间的PT结果均无差异。
[0110]与空白组相比:只有治疗B组的72小时的APTT检测值与之无统计学差异(表1，P>0.05)。治疗A组、治疗B组的48小时、72小时的APTT结果均比对照组明显延长(表1，P〈0.05)。两个治疗组之间相比，只有治疗A组的72小时APTT值比治疗B组明显延长。
[0111]两个治疗组的INR检测值中除治疗A组的24小时的INR值与对照组无统计学差异外，均比对照组明显增大(表1，P〈0.05)。与空白组相比除治疗A组的24小时检测值外均明显增大。两个治疗组之间的INR结果均无差异。
[0112]两个治疗组中，除治疗A组的72小时FIB值、治疗B组的24小时FIB值外，其余均比对照组明显降低(表1，P〈0.05)。与空白组相比均无统计学差异。两个治疗组中，只有治疗B组72小时FIB值比治疗A组明显降低。
[0113]两个治疗组中只有治疗A组的48小时PTA值与对照组相比明显升高，余均无统计学差异(表1，P>0.05)。两个治疗组与空白组相比均明显升高。两个治疗组之间只有治疗A组48小时PTA值比治疗B组明显升高。
[0114]以上结果表明两个治疗组大鼠的血液血凝指标绝大多数均比对照组明显改善。
[0115]表1各组大鼠血凝指标结果
[0116]
【权利要求】
1.一种抗血栓中药制剂，其特征在于该中药制剂是采用如下原料药制成:益母草100-180重量份红花10-40重量份花椒10-40重量份水蛭10-40重量份当归20-60重量份苏木10-40重量份三棱10-40重量份两头尖10-40重量份川芎10-40重量份降香10-40重量份香附10-40重量份人参30-75重量份高良姜10-40重量份姜黄8-25重量份没药10-40重量份苦杏仁10-40重量份大黄40-90重量份紫苏子10-40重量份小茴香10-40重量份桃仁10-40重量份五灵脂10-40重量份虻虫10-40重量份麝香10-40重量份鳖甲100-180重量份丁香10-40重量份延胡索10-40重量份白芍20-60重量份蒲黄10-40重量份乳香10-40重量份干漆10-40重量份吴茱萸10-40重量份阿魏10-40重量份肉桂10-40重量份艾叶10-40重量份熟地黄20-60重量份。
2.如权利要求1所述的中药制剂，其特征在于该中药制剂是采用如下原料药制成:益母草130-150重量份红花15-20重量份花椒15-20重量份水蛭15-20重量份当归30-40重量份苏木15-20重量份三棱15-20重量份两头尖15-20重量份川芎15-20重量份降香15-20重量份香附15-20重量份人参50-55重量份高良姜15-20重量份姜黄8-15重量份没药15-20重量份苦杏仁20-30重量份大黄60-80重量份紫苏子15-20重量份小茴香20-30重量份桃仁20-30重量份五灵脂15-20重量份虻虫15-20重量份鳖甲130-150重量份丁香15-25重量份延胡索15-20重量份白芍30-40重量份蒲黄15-20重量份乳香15-20重量份干漆15-20重量份吴茱萸15-20重量份阿魏15-20重量份肉桂15-20重量份艾叶15-20重量份熟地黄30-40重量份。
3.如权利要求1所述的中药制剂，其特征在于该中药制剂是采用如下原料药制成:益母草140重量份红花17.5重量份炭制花椒17.5重量份制水蛭17.5重量份当归35重量份苏木17.5重量份醋炙三棱17.5重量份两头尖17.5重量份川芎17.5重量份降香17.5重量份醋炙香附17.5重量份人参52.5重量份高良姜17.5重量份姜黄10.5重量份醋炙没药17.5重量份炒苦杏仁26.25重量份大黄70重量份紫苏子17.5重量份盐炒小茴香26.25重量份桃仁26.25重量份醋炙五灵脂17.5重量份虻虫17.5重量份鳖甲140重量份丁香21.25重量份醋炙延胡索17.5重量份白芍35重量份炭蒲黄17.5重量份醋炙乳香17.5重量份煅干漆17.5重量份甘草水炙吴茱萸17.5重量份阿魏17.5重量份肉桂17.5重量份炙艾叶17.5重量份 熟地黄35重量份； 以原料药量计算，相当于IOg原料药的所述组合物中大黄素、大黄酚的总量不少于.0.28mg0
4.如权利要求1-3任一所述的中药制剂，其特征在于该中药制剂可按常规工艺制成临床可接受的剂型。
5.如权利要求4所述的中药制剂，其特征在于所述的剂型为片剂、胶囊、口服液、丸剂或颗粒剂。
6.如权利要求1-4任一所述的中药制剂在制备抗血栓药物中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述血栓为抑制静脉血栓或微血栓。
8.如权利要求6所述的应用，其特征在于在制备抑制肺脏或肝脏血栓药物中的应用。
9.如权利要求6所述的应用，其特征在于在制备抑制肠系膜血栓药物中的应用。
10.如权利要求1-4任一所述的中药制剂在制备降低血液高凝状态或降低微血栓形成后继发性纤溶 亢进药物中的应用。
【文档编号】A61K35/24GK103961639SQ201310052149
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2013年2月18日 优先权日:2013年1月24日
【发明者】姚华, 王军, 杜军, 郭洁, 李芳
申请人:成都地奥集团天府药业股份有限公司