一种封装有纳米胰岛素的plga纳米颗粒的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种封装有纳米胰岛素的聚乳酸共聚羟基乙酸(PLGA)纳米颗粒的制备方法。L6骨骼肌细胞中，本发明产品在治疗砷引起的葡萄糖吸收功能损坏、抗胰岛素性和线粒体功能紊乱领域具有良好的功效，不同的生物标记物，如丙酮酸盐激酶、葡萄糖激酶、ATP/ADP比例、线粒体膜、线粒体细胞色素的胞质释放、细胞膜势和钙离子水平，都表明线粒体的功能有所提高。本发明产品在砷引发的糖尿病治疗中有非常大的临床应用前景。
【专利说明】—种封装有纳米胰岛素的PLGA纳米颗粒的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及聚乳酸共聚羟基乙酸(PLGA)纳米颗粒的制备方法，尤其涉及一种用于调整砷中毒的L6细胞中的某些重要的生物标志物的封装有纳米胰岛素的PLGA纳米颗粒的制备方法。
【背景技术】
[0002]污染水引起的砷接触被认为是引发很多可怕疾病的重要因素。在砷含量比较高的地区，如台湾和孟加拉国，逐渐增加的糖尿病以及并发症等危机正在严重威胁人类的健康。慢性砷接触和糖尿病之间的可能的关系在很大程度上会涉及到人类的健康，所以其在保证深入的研究中有非常重要的指导作用。
[0003]一般来说，胰岛腺β细胞的功能紊乱导致葡萄糖耐量的损伤是糖尿病的主要原因，糖尿病会引起非常严重的症状，一般需要立即进行药物治疗。糖尿病引起的最初的变化是胰岛素产量下降或者抗胰岛素性，糖尿病和抗胰岛素性发生的几率通常会随着年龄的增加而增加，线粒体功能紊乱也会随着年龄的增加而增加。
[0004]骨骼肌可以反映很多与糖尿病的发生有关联的信号，因此广泛用作研究糖尿病的一种模型。骨骼肌是葡萄糖和脂肪酸代谢的主要发生地，在保持人体的体内平衡的过程中发挥着关键性的作用，骨骼肌能够表达葡萄糖传输的机理，骨骼肌中的抗胰岛素性也已经被确定是糖尿病的开始阶段的衡量指标。但是肌肉线粒体功能紊乱和抗胰岛素性之间的潜在因果关系的研究还比较缺乏。
[0005]涉及到砷引发的糖尿病的生物分子主要包括磷的取代物，这类取代物与巯基有很强的作用力，能够与胰岛素/胰岛素受体和葡萄糖传输体中的二硫键通过共价键作用结合，从而增强氧化压力并干扰基因的表达。砷能够改变与葡萄糖稳态有关的基因表达，改变三磷酸腺苷/ 二磷酸腺苷(ATP/ADP)的平衡比例，从而导致线粒体膜极性的紊乱。因此，特殊细胞或组织的葡萄糖吸收能力可以确定糖尿病的发病率。
[0006]在纳米技术的应用中，集中在增强生物利用率的同时纳米颗粒应该对靶向器官或有机系统没有毒性，但是现在很多纳米材料是做不到的。
【发明内容】
[0007]本发明涉及调整砷中毒的L6细胞中的某些重要的生物标志物的胰岛素和封装有纳米胰岛素的聚乳酸共聚羟基乙酸(PLGA)的制备，其制备步骤如下:
[0008]空白对比和药物负载纳米颗粒的制备:封装有纳米胰岛素颗粒的PLGA纳米颗粒用溶剂取代技术制备，PLGA和干燥的牛胰岛素(质量比9:1)溶解到丙酮中，配成2wt%的配制成有机相溶液，将含有稳定剂(0.5~2%的聚乙氧基-聚丙氧基)的水溶液(与有相溶液体积比为6:1)以0.2~lmL/min的速度逐滴加入到上述配制的有机相溶液中，得到的混合物在室温下搅拌直至有机溶剂完全挥发；20°C下以1000~1500rpm的转速离心15~30min去除掉稳定剂后，将得到的颗粒重新分散到去离子水中洗涤三次，得到的负载悬浮物的纳米颗粒储存在20°C下备用。同样的方法制备空白的PLGA纳米颗粒，只不过过程中不加入胰岛素。
[0009]本发明制备了封装有纳米胰岛素的PLGA纳米颗粒，通过和纯的胰岛素在调整砷中毒的骨骼肌L6细胞中的某些重要的生物标志物中的相对功效的比较表明，L6骨骼肌细胞中，本发明产品在治疗砷引起的葡萄糖吸收功能损坏、抗胰岛素性和线粒体功能紊乱领域具有良好的功效，不同的生物标记物，如丙酮酸盐激酶、葡萄糖激酶、ATP/ADP比例、线粒体膜、线粒体细胞色素的胞质释放、细胞膜势和钙离子水平，都表明线粒体的功能有所提高。所涉及的产品在砷引发的糖尿病治疗中有非常大的潜在应用价值。
【具体实施方式】
[0010]为了加深对本发明的理解，下面结合具体实例对本发明做进一步的详述:
[0011]空白对比和药物负载纳米颗粒的制备:封装有纳米胰岛素颗粒的PLGA纳米颗粒用溶剂取代技术制备，90mgPLGA和IOmg干燥的牛胰岛素溶解到5mL丙酮中，将30mL含有稳定剂(I%的聚乙氧基-聚丙氧基)的水溶液以lmL/min的速度逐滴加入到上述配制的有机相溶液中，得到的混合物在室温下搅拌直至有机溶剂完全挥发完；20°C下以1000rpm的转速离心20min去除掉稳定剂后，将得到的颗粒重新分散到去离子水中洗涤三次，得到的负载悬浮物的纳米颗粒储存在20°C下备用。同样的方法制备空白的PLGA纳米颗粒，只不过过程中不加入胰岛素。
【权利要求】
1.一种封装有纳米胰岛素的PLGA纳米颗粒的制备方法，其步骤如下: 封装有纳米胰岛素颗粒的聚乳酸共聚羟基乙酸(PLGA)纳米颗粒用溶剂取代技术制备，PLGA和干燥的牛胰岛素溶解到丙酮中，配成2wt%的配制成有机相溶液，将含有稳定剂的水溶液与有相溶液以6:1的体积比，以0.2~lmL/min的速度逐滴加入到上述配制的有机相溶液中，得到的混合物在室温下搅拌直至有机溶剂完全挥发；20°C下以1000~1500rpm的转速离心15~30min去除掉稳定剂后，将得到的颗粒重新分散到去离子水中洗涤三次，得到的负载悬浮物的纳米颗粒储存在20°C下备用。
2.如权利要求1所述的PLGA纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述PLGA和干燥的牛胰岛素的质量比9:1。
3.如权利要求1所述的PLGA纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述稳定剂为0.5~2%的聚乙氧基-聚丙氧基`。
【文档编号】A61K38/28GK103599072SQ201310585878
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年11月15日 优先权日:2013年11月15日
【发明者】韩志超, 许杉杉, 佴刚 申请人:无锡中科光远生物材料有限公司