新缬草属提取物及其用途
【专利摘要】本发明涉及一种用于治疗和预防GABA相关病症、优选GABAA相关病症（更优选地选自焦虑、抑郁症、坐立不安和失眠症）的缬草属提取物，其中所述提取物中缬草烯酸(VA)与乙酰氧基缬草烯酸(AVA)的比率为至少2:1。本发明也教导了包含这样的提取物的药物组合物以及用于制备这些提取物的方法。
【专利说明】新缬草属提取物及其用途
[0001] 本发明涉及一种用于治疗和预防GABA相关病症、优选GABAa相关病症(更优选地 选自焦虑、抑郁症、坐立不安和失眠症）的缬草属提取物，其中所述提取物中缬草烯酸（VA) 与乙酰氧基缬草烯酸（AVA)的比率为至少2:1。本发明也教导了包含这样的提取物的药物 组合物以及用于制备这些提取物的方法。
【背景技术】
[0002] 缬草属是最常用的用于治疗失眠症和焦虑的草药之一。缬草烯酸（VA)是缬草属 中的许多活性化合物之一。已经通过体外实验在Y-氨基丁酸型A受体（GABAa)上以及通 过体内实验在小鼠和大鼠中验证了VA的抗焦虑潜力。如证实抗焦虑活性的体内实验所证 实的，VA在体外对GABAa受体的作用优先由β3亚基介导，因为β3亚基中的点突变会消除 对VA的抗焦虑应答，但是不会消除对地西泮的抗焦虑应答。
[0003] GABA是脑中的主要抑制性神经递质。它是神经元兴奋与抑制的总体平衡所必需 的，且因而对于正常脑功能而言是重要的。失衡可能造成GABA相关病症如焦虑、抑郁症、坐 立不安、镇静和失眠症。GABAa受体是多种药理学上重要的药剂(诸如苯并二氮杂罩类、巴比 妥类、剌激神经的类固醇、麻醉药和抗惊厥药）的作用部位。
[0004] 已经证实，缬草属提取物（VE)会变构地调节GABAa受体，并且该作用与VA有关。 据推测，含有β2或β3亚基的GABAa受体负责该作用。VA的衍生物即乙酰氧基缬草烯酸 (AVA)或羟基缬草烯酸（HVA)不会变构地调节GABAa受体。但是，较高浓度的AVA可以阻断 开放的GABAa通道如HVA，并且此外，已经证实HVA会从脑膜结合位点置换3H缬草烯酸，因 而指示，两种VA衍生物可以作用于相同结合位点，尽管它们确实在变构调节上失败。
[0005]目前，VA及其衍生物是用于定性和定量分析缬草属根、根茎以及VE的常用标志 物。经常将缬草属产品标准化为VA的百分比，其被定义为VA和AVA的量，且有时也包括 HVA。尽管VA在提取物中是稳定的，但是AVA随着时间(且取决于贮存条件)被转化成HVA。 大多数目前可用于医学治疗的缬草属提取物的特征在于约1:3至1:1的VA与AVA之比。
[0006] 本发明的目的是，提供改进的缬草属提取物和基于这些缬草属提取物的药物组合 物。进一步优选的目的是，提供用于治疗和预防GABA相关病症、尤其是GABAa相关病症、优 选焦虑、抑郁症、坐立不安和失眠症的改进的药物。
[0007] 用于治疗和预防GABA相关病症的缬草属提取物解决了以上目的，其中所述提取 物中缬草烯酸（VA)与乙酰氧基缬草烯酸（AVA)的比率为至少2:1。
[0008] 令人惊讶地发现，以至少2:1的VA与AVA之比为特征的缬草属提取物比本领域常 用的提取物(其通常以1:3至1:1的比率为特征）更有效地靶向和影响GABA受体。本发明 的提取物的比率还具有以下优点：可以显著降低缬草烯酸和缬草烯酸衍生物的总含量，由 此避免伴随中毒出现的典型副作用。
[0009] 在一个更优选的实施方案中，本发明的提取物是这样的提取物，其中所述提取物 中缬草烯酸（VA)与乙酰氧基缬草烯酸（AVA)的比率为至少3:1，优选至少4:1，更优选至少 10:1，最可能至少约12:1。
[0010] 本文中使用的术语"缬草属提取物"被定义为缬草属根和根茎的任意提取产品，其 至少包含缬草属倍半萜（至少VA和AVA)以及可检测量的至少一种、优选多种类黄酮、三 萜、木酚素、生物碱和氨基酸，优选缬草属倍半萜和可检测量的类黄酮、三萜、木酚素、生物 碱和氨基酸。
[0011] 优选地，所述缬草属提取物是用以下溶剂提取缬草属根和/或根茎的结果：亲脂 溶剂，优选至少部分地亲脂的溶剂，更优选选自石油醚、乙酸乙酯和/或含水醇(所谓的水 醇）的溶剂，所述含水醇优选为含水甲醇或乙醇，更优选含水乙醇。本文中使用的术语亲脂 提取物表示用适合于溶解缬草烯酸的亲脂溶剂或至少部分地亲脂的溶剂(例如上面提及的 溶剂）生产的缬草属提取物。用于实践本发明的亲脂的或部分地亲脂的溶剂不包括纯水， 但是包括基本上溶解和提取缬草烯酸的任意溶剂和溶剂混合物。所述溶剂可以是更亲脂的 (例如石油醚)或亲脂度较低的(例如水醇)。例如，约70%含水乙醇或约50%含水甲醇溶剂就 提取缬草烯酸而言是优选的。但是，更极性的（即更亲水的）溶剂，例如30%水醇，不可能提 取足够的缬草烯酸以产生用于实践本发明的缬草属提取物。在本领域中，例如在European PharmacopoeiaSupplement(欧洲药典增干丨J)5. 7.Valeriandryhydroalcoholicextract (1898)中，已经大量公开了含有缬草烯酸的缬草属提取物的制备。目前，经常通过用具有40 -80%之间的醇含量的水醇提取来制备用于医学用途的缬草属提取物。技术人员可以容易 地选择合适的溶剂来制备用在本发明中的缬草属提取物。
[0012] 发明人已经进行了缬草属植物的广泛筛选，到目前为止已经鉴别出一种缬草属植 物，其天然地产生的缬草烯酸的含量远远高于它的衍生物。将该单一植物繁殖以实现提取 量的VE的生产，这允许在体内实验验证它的药物实用性和优点。
[0013] 可替换地，可以如下制备用在本发明中的缬草属提取物：通过降低AVA的含量，例 如通过分级分离标准提取物，或通过人工地增加缬草烯酸含量，例如通过用合成的、分离的 和/或浓缩的VA掺入标准提取物中。
[0014] 本发明的提取物特别适合于调节GABAa受体，更优选含有β2或β3亚基的GABAa 受体。在一个优选的实施方案中，本发明涉及用于治疗和预防GABAa相关病症、优选与含有 β2或β3亚基的GABAa受:体有关的病症的本发明的纟颜草属提取物。
[0015] 在一个优选的实施方案中，本发明涉及选自焦虑、抑郁症、坐立不安和失眠症的 GABAa相关病症的治疗和预防。
[0016] 在另一个方面，本发明涉及以上缬草属提取物用于制备药物的用途，所述药物用 于治疗和预防GABAa相关病症，优选地选自焦虑、抑郁症、坐立不安和失眠症。
[0017] 本发明的另一个方面涉及一种药物组合物，其包含本发明的缬草属提取物。本发 明的药物组合物通常包含治疗或预防有效量的根据本发明的缬草属提取物和任选的辅助 物质诸如药学上可接受的赋形剂(一种或多种）和/或载体(一种或多种)。并且，所述药物 组合物可以包含其它提取物组分和/或医学活性剂。
[0018] 更优选地，所述药物组合物还包含至少一种提取物，所述提取物选自从芳香油 [蜜蜂花属]、蛇麻草和西番莲花生产的提取物。在一个优选的实施方案中，所述药物组合 物进一步包含从芳香油[蜜蜂花属]、蛇麻草和西番莲花生产的提取物(一种或多种)。
[0019] 本发明的另一个方面是，一种用于制备缬草属提取物的方法，所述方法包括下述 步骤： a) 选择缬草属根和/或根茎，其中所述缬草烯酸（VA)与乙酰氧基缬草烯酸（AVA)的 比率是至少2:1或至少3:1，优选至少4:1，更优选至少10:1，最可能至少约12:1。 b) 使用合适的溶剂，从所述根和/或根茎中提取缬草烯酸（VA)和乙酰氧基缬草烯酸 (AVA)， c) 任选地进一步加工所述粗提取物，以使它适合于人施用。
[0020] 优选地，所述合适的溶剂是亲脂的，更优选至少部分地亲脂的，最优选上面提及的 溶剂。技术人员可以常规地选择具有所需的VA与AVA之比的缬草属根和/或根茎。这样 的缬草属植物的例子如上面和在以下实施例中所述。并且，技术人员知晓适合用于缬草属 提取的溶剂，例如石油醚、乙酸乙酯和水醇。
[0021] 可以且最经常地对所述亲脂提取物进一步加工，用于使它适合于人施用，即将它 定量，例如针对VA、AVA和其它缬草属组分标准化，并针对治疗或预防有效剂量、针对贮存 稳定性和特定施用途径(优选口服施用）配制它。
[0022] -种进一步优选的用于制备本发明的缬草属提取物的方法包括以下步骤： a) 提供缬草属根和/或根茎， b) 使用合适的溶剂从所述根和/或根茎中提取缬草烯酸（VA)和乙酰氧基缬草烯酸 (AVA)， c) 调节所述提取物中的缬草烯酸（VA)和乙酰氧基缬草烯酸（AVA)的含量，使得缬草 烯酸（VA)与乙酰氧基缬草烯酸（AVA)的比率为至少2:1或至少3:1，优选至少4:1，更优选 至少10:1，最可能至少约12:1，和 d) 任选地进一步加工所述提取物，以使它适合于人施用。
[0023] 优选地，所述合适的溶剂是亲脂的，更优选至少部分地亲脂的，最优选如上所述的 溶剂。例如，通过添加VA和/或减少AVA，可以将所述提取物中VA和AVA的含量调节至期 望的比率。例如，可以将合成的、分离的和/或浓缩的VA加入所述提取物中，直到达到本发 明的期望的A与VA之比。优选的施用模式是口服。优选地，所述缬草属根和/或根茎得自 場M^Valeriana officinalisL.)〇
[0024] 在最后一个方面，本发明涉及一种用于治疗和预防GABAa相关病症的方法，所述方 法包括下述步骤：给有此需要的患者施用缬草属提取物，其中所述提取物中缬草烯酸（VA) 与乙酰氧基缬草烯酸（AVA)的比率为至少2:1或至少3:1，优选至少4:1，更优选至少10:1， 最可能至少约12:1。
[0025] 就治疗或预防用途而言，可以以任意常规剂型以任意常规方式施用本发明的提取 物。施用途径包括、但不限于静脉内地、腹膜内地、肌肉内地、皮下地、通过输注、舌下地、透 皮地、口服地、直肠地和局部地。优选的施用模式是口服，优选固体或液体剂型。
[0026] 可以单独地或与辅剂(包括其它活性成分）组合地施用所述提取物，所述辅剂增强 提取的组分的稳定性、促进含有它们的药物组合物的施用、提供增加的溶出度或分散、支持 生物利用度、提供辅助治疗等。有利地，这样的联合治疗利用更低剂量的常规治疗剂，从而 避免当将那些试剂用作单一疗法时可能发生的毒性和不利的副作用。
[0027]如上所述，本文所述化合物的剂型包括本领域普通技术人员已知的药学上可接受 的载体和辅剂。这些载体和辅剂包括，例如，离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋 白、缓冲物质、水、盐或电解质和基于纤维素的物质。并且，可以使用麦芽糊精来生产自由流 动的干燥提取物，其特别适合用于进一步加工成片剂和胶囊剂。优选的剂型包括片剂、胶囊 齐?、小胶囊、液体、溶液、混悬液、乳剂、锭剂、糖浆剂、可复溶的粉末、颗粒剂、栓剂和透皮贴 齐U。也预见到含有或不含有立即释放部分的控释剂型。用于制备这样的剂型的方法是已 知的（参见，例如，Η.C.Ansel和Ν.G.Popovish,Pharmaceuticaldosage/7OZms 价叹第5版，Lea和Febiger(1990))。剂量水平和要求是本领域公 知的，且可以由本领域普通技术人员从适合于特定患者的可利用的方法和技术中选择。在 优选的实施方案中，施用的缬草属提取物量含有0.2 - 0.5mg/kg体重的VA，而AVA含量应 当保持尽可能小。尽管每天1剂可能足够，可以施用最多达每天5剂。对于口服剂量而言， 可能需要最多达200mg/天。本领域技术人员会明白，根据特定因素，可能需要更低或更高 的剂量。例如，特定剂量和治疗方案将取决于诸如以下因素：患者的一般健康情况、患者的 病症的严重程度和进程或对其的处置、以及治疗医师的判断(包括与其它需要的药物的相 互作用可能性)。
[0028] 例如，可以以与其它缬草属提取物及其药物组合物相同的方式施用本发明的提取 物。优选地，口服地施用它们，更优选地作为固体或液体剂型。
[0029] 在下面，通过实施例解释了本发明，所述实施例涉及本发明的优选实施方案，且不 应解释为限制在权利要求中描述的发明。
【专利附图】
【附图说明】
[0030] 图la、b和c的柱图显示了参比物（图la，上图）和两种缬草属提取物（VE1，图 lb，中图；和VE2,图lc，下图）的高架十字迷宫实验的结果。在y-坐标上描绘了动物在开 放臂上花费的时间（以百分比计)。图Ia显示了参比物地西泮（DZP)和丙米嗪（IMI)相对 于作为对照的NaCl(0.9盐水）的百分比值。图Ib呈现了关于VE1得到的百分比结果， 图Ic呈现了关于VE2得到的百分比结果。在图Ib和Ic中关于VE1和2指示的数字值 分别表示每千克体重施用的缬草烯酸VA和AVA的总和。
[0031] 图2a、b和c的柱图显示了参比物（图2a，上图）和两种缬草属提取物（VE1，图 2b，中图；和VE2,图2c，下图）的尾巴悬吊试验的结果。在y-坐标上描绘了不动的时间。 图2a显示了参比物地西泮（DZP)和丙米嗪（MI)相对于作为对照的NaCl的时间值。图2b 呈现了关于VE1得到的结果，图2c显示了VE2的数据。关于VE1和2指示的数字值分 别表示每千克体重施用的缬草烯酸VA和AVA的总和。
[0032] 图3a、b和c的柱图显示了参比物（图2a，上图）和两种缬草属提取物（VE1，图 3b，中图；和VE2,图3c，下图）的核心体温测量的结果。在y-坐标上描绘了核心体温。图 3a呈现了参比物地西泮（DZP)和丙米嗪（MI)相对于作为对照的NaCl的温度值。图3b呈 现了关于VE1得到的结果，图3c显示了VE2的数据。关于VE1和2指示的数字值分别 表示每千克体重施用的缬草烯酸VA和AVA的总和。
[0033] 图4a、b、c和d的柱图显示了缬草属提取物I(VE1)在实施例5的高架十字迷宫 验证试验中的结果。在y-坐标上描绘了动物在开放臂上花费的时间（以百分比计）（在左 侧的上图和下图，4a，4c)以及在7分钟观察期中臂变化的数目（在右侧的上图和下图，4b， 4d)。指示了给VE-I添加的乙酰氧基缬草烯酸的量（mgAVA)，n等于使用的动物的数目。
[0034] 图5a和b的柱图显示了在不同缬草属提取物的EPM验证实验5中，动物的身体核 心温度。指示了给VE-I添加的乙酰氧基缬草烯酸的量（mgAVA)，η等于使用的动物的数 目。
[0035] 在附图中，*指示以下内容中ρ〈 0.05的显著偏离。 实施例
[0036] 动物 对于行为实验，将雄性CD-I小鼠（CharlesRiver,Sulzfeld,德国）保持在受控实 验室条件下：光照/黑暗周期为12:12 (在上午6点开灯），温度为20±2°C，空气湿度在 55-60% 之间。动物自由接近市售的团粒（ssniffR/M-H,ssniffSpezialdijitenGmbH, Soest,德国）和自来水。将动物以每组10只圈养在MacrolonIII笼子中。抵达后，给动 物2周的时段进行习惯化。在实验开始时，小鼠为8周龄。每组的动物的数目是在12-18 之间。
[0037] 对于结合实验，使用雄性RjHan:WI大鼠（Janvier,LeGenest-Saint-Isle,法 国）。将大鼠保持在如上所述的受控实验室条件下。将动物以每组5只圈养在MacrolonIV 笼子中。
[0038] 根据EC条例和NationalActontheUseofExperimentalAnimals(国家实验 动物使用法案）（德国)，进行这里报道的工作。所述方案得到了Saxony-AnhaltCommittee onAnimalCare的批准。
[0039] 实施例I-缬草属提取物（VE)的制各和分析 为了试验不同比例的VA:AVA对GABAa相关的体内模型的影响，如下制备了 2种不同的 缬草属提取物（VE1和VE2)。
[0040] 使用得自选定株的缬草属根和根茎以及得自波兰的标准参比材料（欧洲药典， 增刊 5. 7.Valeriandryhydroalcoholicextract(1898))。通过VA:AVA比率的常规 分析，从田野中天然存在的株中选择所述选定株。发现以超过2:1的VA:AVA比率为特征 的天然存在的缬草属株比最初预期的更丰富。为了公开目的，还将选定的物种保藏在德国 InstituteforBiologyoftheMartin-Luther-UniversityinHalle的植物标本室（草 药保藏中心）（保藏编号HAL115562)。随后的繁殖会提供必要量的起始原料。将起始原料 与水醇即含水乙醇（70%V/V) -起以1:5的比率在45°C搅拌3?天，然后通过用2巴压力过 滤进行分离。借助于旋转蒸发器，浓缩得到的酊剂。通过超高效液相色谱法（UPLC)(方法 基于PhEur-MonographyValeriandryhydroalcoholicextract[6. 8./1898])，分析两 种提取物的探针。VA和AVA的提取含量、VA和AVA的总和以及VA:AVA的比率列出在下表 中。
【权利要求】
1. 用于治疗和预防GABAa相关病症的缬草属提取物，其中所述提取物中缬草烯酸（VA) 与乙酰氧基缬草烯酸（AVA)的比率为至少2:1。
2. 权利要求1所述的提取物，其中所述提取物中缬草烯酸（VA)与乙酰氧基缬草烯酸 (AVA)的比率为至少3:1，优选至少4:1，更优选至少10:1，最可能至少约12:1。
3. 权利要求1或2所述的提取物，其中用于生产提取物的溶剂选自石油醚、乙酸乙酯 和/或含水醇（水醇），优选具有40 - 80%的醇含量的水醇，更优选含水甲醇或乙醇，最优 选含水乙醇。
4. 权利要求1-3中的任一项所述的提取物，其中所述GABAa相关病症选自焦虑、抑郁 症、坐立不安和失眠症。
5. 缬草属提取物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和预防GABAd@关病症，其中 所述提取物中缬草烯酸（VA)与乙酰氧基缬草烯酸（AVA)的比率为至少2:1。
6. 根据权利要求5所述的用途，其中所述提取物中缬草烯酸（VA)与乙酰氧基缬草烯酸 (AVA)的比率为至少3:1，优选至少4:1，更优选至少10:1，最可能至少约12:1。
7. 权利要求5或6所述的用途，其中用于生产提取物的溶剂选自石油醚、乙酸乙酯和/ 或含水醇（水醇），优选具有40 - 80%的醇含量的水醇，更优选含水甲醇或乙醇，最优选含 水乙醇。
8. 权利要求5-7中的任一项所述的用途，其中所述GABAa相关病症选自焦虑、抑郁症、 坐立不安和失眠症。
9. 包含缬草属提取物的药物组合物，其中所述提取物中缬草烯酸（VA)与乙酰氧基缬 草烯酸（AVA)的比率为至少2:1。
10. 根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述提取物中缬草烯酸（VA)与乙酰氧基 缬草烯酸（AVA)的比率为至少3:1，优选至少4:1，更优选至少10:1，最可能至少约12:1。
11. 权利要求9或10所述的药物组合物，其中用于生产提取物的溶剂选自石油醚、乙酸 乙酯和/或含水醇（水醇），优选具有40 - 80%的醇含量的水醇，更优选含水甲醇或乙醇， 最优选含水乙醇。
12. 根据权利要求9-11中的任一项所述的药物组合物，所述药物组合物还包含至少一 种提取物，所述提取物选自从芳香油[蜜蜂花属]、蛇麻草和西番莲花生产的提取物，优选 地还包含从芳香油[蜜蜂花属]、蛇麻草和西番莲花生产的一种或多种提取物。
13. 用于制备缬草属提取物的方法，所述方法包括下述步骤： a) 选择缬草属根和/或根茎，其中所述缬草烯酸（VA)与乙酰氧基缬草烯酸（AVA)的 比率为至少2:1， b) 使用合适的溶剂，从所述根和/或根茎中提取缬草烯酸（VA)和乙酰氧基缬草烯酸 (AVA)， c) 任选地进一步加工所述粗提取物，以使它适合于人施用。
14. 用于制备缬草属提取物的方法，所述方法包括下述步骤： a) 提供缬草属根和/或根茎， b) 使用合适的溶剂，从所述根和/或根茎中提取缬草烯酸（VA)和乙酰氧基缬草烯酸 (AVA)， c) 调节所述提取物中的缬草烯酸（VA)和乙酰氧基缬草烯酸（AVA)的含量，使得缬草 烯酸（VA)与乙酰氧基缬草烯酸（AVA)的比率为至少2:1， d)任选地进一步加工所述提取物，以使它适合于人施用。
15. 权利要求14或15所述的方法，其中调节所述提取物中的缬草烯酸（VA)和乙酰氧 基缬草烯酸（AVA)的含量，使得缬草烯酸（VA)与乙酰氧基缬草烯酸（AVA)的比率为至少 3:1，优选至少4:1，更优选至少10:1，最可能至少约12:1。
16. 权利要求14-15中的任一项所述的方法，其中用于生产提取物的溶剂选自石油醚、 乙酸乙酯和/或含水醇（水醇），优选具有40 - 80%的醇含量的水醇，更优选含水甲醇或乙 醇，最优选含水乙醇。
17. 用于治疗和预防关病症的方法，所述方法包括下述步骤：给有此需要的患 者施用缬草属提取物，其中所述提取物中缬草烯酸（VA)与乙酰氧基缬草烯酸（AVA)的比率 为至少2:1。
18. 根据权利要求14所述的方法，其中所述提取物中缬草烯酸（VA)与乙酰氧基缬草烯 酸（AVA)的比率为至少3:1，优选至少4:1，更优选至少10:1，最可能至少约12:1。
19. 权利要求17或18所述的方法，其中用于生产提取物的溶剂选自石油醚、乙酸乙酯 和/或含水醇（水醇），优选具有40 - 80%的醇含量的水醇，更优选含水甲醇或乙醇，最优 选含水乙醇。
【文档编号】A61P25/24GK104302303SQ201380017732
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2013年3月13日 优先权日:2012年3月30日
【发明者】阿克塞尔·布拉特施特伦 申请人:阿克塞尔·布拉特施特伦