一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法与应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法，通过将鳄嘴花药材用热水回流提取，再经醇沉和离心分离，得鳄嘴花多糖；离心后的上清液用大孔吸附树脂，用80%～95%（v/v）乙醇洗脱得到水溶性部位。此外，将鳄嘴花药材用50%～80%（v/v）乙醇回流提取，将乙醇提取物的含水悬浮液依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分级萃取，得到乙酸乙酯活性部位，将剩余水相提取液用正丁醇萃取，蒸除溶剂后得正丁醇部位。本发明的鳄嘴花抗癌活性部位为鳄嘴花多糖、水溶性部位、乙酸乙酯部位以及正丁醇部位中的至少一种，可以用于制备抗肿瘤药物，并且具有生命延长率高，毒副作用小的特点。
【专利说明】一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法与应用
【技术领域】
[0001]本发明属于抗癌活性部位提取领域，尤其涉及一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法与应用。
【背景技术】
[0002]鳄嘴花(Clinacanthusnutans (Burm.f.) Lindau),俗称优(忧)遁草、竹枝黄、扭序花等，属于爵床科鳄嘴花属，是东南亚传统药物中广泛应用的药用植物，分布在中南半岛、马来半岛以及中国大陆的广西、广东、云南、海南等地(中华本草(7)，上海科学技术出版社，1999,456-457)。在马来西亚，泰国等地，鳄嘴花作为一种传统的药材用于治疗精神紧张、糖尿病、类风湿性关节炎、蛇叮咬、肝炎以及抗病毒等(Wanikiat P, et al.，J.Ethnopharmacol., 2008, 116(2): 234-244; Yoosook, C.et al., J.Ethnopharmacol.,1999，67(2):179-187;)，其中，鳄嘴花叶子的提取物可以作为消炎药治疗蚊虫叮咬，作为补救措施治疗皮肤疱疹和病毒病变的水痘带状疱疹。此外，鳄嘴花中的叶绿素a和叶绿素b衍生物有抗疱疫病毒的活性(Sakdarat S，et al., Bioorg.Med.Chem., 2009,17(5):1857-1860)。
[0003]随着现代医学的发展，研究者发现鳄嘴花还具有抗肿瘤作用并因此倍受医药研究人员的重视(Yong YK, et al., Evid-Based Compl.Alt., 2013，ID 462751)，但是，目前鳄嘴花抗癌成分及作用机理尚不明确，鳄嘴花的抗癌研究有待深入进行。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法与应用，旨在解决鳄嘴花抗癌活性部位不明确导致抗癌效果不甚理想的问题。
[0005]本发明中涉及的一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法，包括以下步骤:
(1)取鳄嘴花药材粉末I回流提取后，将水提取物减压浓缩，再加无水乙醇，过夜沉淀，且经离心后得到沉淀和上清液两部分，冷冻干燥沉淀部分得鳄嘴花多糖；上清液浓缩后过大孔吸附树脂，先水洗至无色，再用乙醇以洗脱，收集洗脱液，浓缩、冷冻干燥得水溶性部位；
(2)取鳄嘴花药材粉末2加入乙醇回流提取，将乙醇提取物的含水悬浮液，再依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分级萃取，减压浓缩回收溶剂，得到乙酸乙酯部位；剩余水相提取液经正丁醇萃取，浓缩得正丁醇部位。
[0006]将所述 鳄嘴花多糖、水溶性部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位中任意一个部位或任意几个部位按实际生药提取量合并混匀，即为鳄嘴花抗癌活性部位。
[0007]其中，步骤(I冲所述回流提取为在100°C下用水回流提取两次，每次3小时；所述乙醇洗脱为80%~95%乙醇以5~20 mL/min流速洗脱；所述鳄嘴花药材粉末1、水1、无水乙醇和洗脱所用乙醇的质量体积比为60~80g:480~800mL:600~1000mL:2~10 BV ；所述上清液浓缩至原体积的1/30~1/5。[0008]其中，步骤(2)中所述回流提取所用乙醇浓度为50%~80% ;所述鳄嘴花药材粉末2和乙醇的质量体积比为70~90g:560~1080mL。
[0009]优选地，在步骤(1)中，洗脱所用乙醇的量优选2~6 BV ;所述上清液浓缩至原体积的1/20~1/5 ;所述洗脱流速为5~10 mL/min。
[0010]优选地，在步骤(2)中，所述鳄嘴花药材粉末2和乙醇的质量体积比为Ig:8~10
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[0011 ] 优选地，所述大孔吸附树脂为HP-20大孔吸附树脂或XAD16N大孔吸附树脂。
[0012]本发明进一步提供了上述鳄嘴花抗癌活性部位的应用，用于制备抗肿瘤药物。
[0013]优选地，所述的鳄嘴花抗癌活性部位的应用，用于制备抗肿瘤的片剂、胶囊、口服液、注射液、颗粒剂等常见剂型。
[0014]优选地，所述肿瘤包括肝、前列腺、肺、胃、淋巴瘤等癌症。[0015]有益效果:本发明克服现有技术的不足，提供一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法，通过将鳄嘴花药材粉末用热水回流提出再用无水乙醇分层离心后，得到的沉淀部分为鳄嘴花多糖活性部位，将得到的上清液用大孔吸附树脂吸附并通过80%~95% (v/v)乙醇洗脱得到水溶性部位，此外，还通过将鳄嘴花药材粉用50%~80% (v/v)乙醇回流提取，将乙醇提取物用水分散，再依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分级萃取，得到乙酸乙酯活性部位，将溶剂中的水相提取液经正丁醇萃取，得到正丁醇部位。本发明的鳄嘴花抗癌活性部位为多糖部位、水溶性部位、乙酸乙酯部位以及正丁醇部位中的至少一种，可以用于制备抗肿瘤药物，并且具有生命延长率高，毒副作用小的特点。
[0016]【专利附图】
【附图说明】:
图1为鳄嘴花正丁醇部位(CN-N)对H印S小鼠肿瘤生长的抑制作用结果；其中图1A为CN-N对肿瘤增长的抑制图；图1B为CN-N对小鼠体重增长抑制图；图1C为Ifeps肿瘤细胞凋亡电镜观察图。
[0017]图2为鳄嘴花水溶性部位(CN-H)对PC-3小鼠肿瘤生长的抑制作用结果；其中图2A为CN-H对肿瘤增长的抑制图；图2B为CN-H对小鼠体重增长抑制图；图2C为PC-3肿瘤细胞凋亡电镜观察图。
【具体实施方式】
[0018]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0019]实施例1:
一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法，包括以下步骤:
(1)取20目60g鳄嘴花药材粉末在100°C下用480 mL水回流提取两次，每次3小时，将提取液减压浓缩后加600 mL无水乙醇，过夜沉淀，且经3000 r/min离心20 min,冷冻干燥(<-50°C，0.7 mbar, 14 h)沉淀部分得鳄嘴花多糖(CNPS);上清液浓缩至原体积的1/30后过HP-20大孔吸附树脂，水洗至无色，再用2 BV 95% (v/v)乙醇以20 mL/min流速洗脱，收集洗脱液，浓缩、冷冻干燥得水溶性部位(CN-H)；
(2)取20目90g鳄嘴花药材粉末加入1080 mL 80% (v/v)乙醇回流提取，蒸除溶剂。将鳄嘴花乙醇提取物用水分散，再依次用80 mLX 2石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分级萃取，减压浓缩回收溶剂，得到乙酸乙酯部位(CNAE);剩余水相提取液用80 mLX 2，正丁醇萃取，蒸除正丁醇，得正丁醇部位(CN-N)；
(3)将鳄嘴花多糖(CNPS)、水溶性部位(CN-H)、乙酸乙酯部位(CNAE)以及正丁醇部位(CN-N)中至少一种按实际生药提取量合并混匀，即为鳄嘴花抗癌活性部位。更具体的，将鳄嘴花多糖(CNPS)、水溶性部位(CN-H)、乙酸乙酯部位(CNAE)以及水溶性部位(CN-N)中至少一种配比后得到各鳄嘴花抗癌活性部位如下表1所示:
【权利要求】
1.一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)取鳄嘴花药材粉末I回流提取后，将水提取物减压浓缩，再加无水乙醇，过夜沉淀，且经离心后得到沉淀和上清液两部分，冷冻干燥沉淀部分得鳄嘴花多糖；上清液浓缩后过大孔吸附树脂，先水洗至无色，再用乙醇以洗脱，收集洗脱液，浓缩、冷冻干燥得水溶性部位； (2)取鳄嘴花药材粉末2加入乙醇回流提取，将乙醇提取物的含水悬浮液，再依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分级萃取，减压浓缩回收溶剂，得到乙酸乙酯部位；剩余水相提取液经正丁醇萃取，浓缩得正丁醇部位。
2.根据权利要求1所述的一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，将所得鳄嘴花多糖、水溶性部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位中任意一个部位或任意几个部位按实际生药提取量合并混匀，即为鳄嘴花抗癌活性部位。
3.根据权利要求1所述的一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，步骤(I)中所述回流提取为在100°c下用水回流提取两次，每次3小时；所述乙醇洗脱为用80%~95%乙醇以5~20 mL/min流速洗脱；所述鳄嘴花药材粉末1、水1、无水乙醇和洗脱所用乙醇的质量体积比为60~80g:480~800mL:600~1000mL:2~10 BV ;所述上清液浓缩至原体积的1/30~1/5。
4.根据权利要求1所述的一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述回流提取所用乙醇浓度为50%~80% ;所述鳄嘴花药材粉末2和乙醇的质量体积比为 70 ~90g:560 ~1080mL。
5.根据权利要求3所述的一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，洗脱所用乙醇的量为2~6BV ;所述上清液浓缩至原体积的1/20~1/5 ;所述洗脱流速为5~10 mL/min。`
6.根据权利要求4所述的一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，步骤(2)中，所述鳄嘴花药材粉末2和乙醇的质量体积比为Ig:8~10 mL。
7.根据权利要求1所述的一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂为HP-20大孔吸附树脂或XAD16N大孔吸附树脂。
8.根据权利要求2所述的一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，所述鳄嘴花抗癌活性部位用于制备抗肿瘤药物。
9.根据权利要求8所述的一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，所述的鳄嘴花抗癌活性部位用于制备抗肿瘤的片剂、胶囊、口服液、注射液、颗粒剂常见剂型。
10.根据权利要求8所述的一种鳄嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，所述肿瘤包括肝、前列腺、肺、胃、淋巴瘤癌症。
【文档编号】A61K36/19GK103877133SQ201410100939
【公开日】2014年6月25日 申请日期:2014年3月19日 优先权日:2014年3月19日
【发明者】黄丹民, 陈钧, 刘旭, 高静, 汤建 申请人:江苏大学