冬青素a在制备抗肿瘤药物中的用途
【专利摘要】本发明公开了从植物海南冬青中获得的单体成分冬青素A(IlexgeninA)在制备抗肿瘤药物方面的医药新用途。同时，公开了以IlexgeninA为原料制备成片剂、胶囊剂、滴丸剂、注射剂等药物剂型。体外实验表明，在一定浓度范围内，多种肿瘤细胞株具有很强的抑制作用。整体荷瘤实验表明，冬青素A30mg/kg剂量下抑瘤率达到51.13%。因此，可以用于制备成抗肿瘤药物以及防治肿瘤的药物。
【专利说明】冬青素A在制备抗肿瘤药物中的用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药【技术领域】，尤其涉及冬青素A (IlexgeninA)的抗肿瘤活性以及IlexgeninA在制备抗肿瘤药物中的新用途。
【背景技术】
[0002]IlexgeninA为乌苏烧型三職衍生物，最早在毛冬青(Ilexpubescens Hook,et.Am)中发现,在冬青属植物中含量较高,是山绿茶的主要特征成分(Johji Yamahara等.Photochemistry, 1987，26(7): 2023-2027)。我们前期报道其对大鼠非酒精性脂肪肝具有较好的改善作用(We1-xi Cui, Jing-Jing Li等.Drug DevelopmentResearch, 2013，74(4):227 - 236);另外我们研究发现IlexgeninA具有一定的抑菌作用(Xiao-Qing Chen等.Food Chemistry, 2011, 126 (3): 1454 - 1459)。另有报道称 IlexgeninA具有抑制较好的心血管活性，其可抑制血栓形成(L1-Ping Lin等.Chinese ChemicalLetters, 2013, 24(8):723 - 726)。
[0003]我们的研究发现IlexgeninA具有良好的抗肿瘤作用，特别是对人皮肤癌、肺癌及胃癌等，在一定浓度范围内，对肿瘤细胞具有杀伤作用，且整体荷瘤动物实验，对皮肤癌呈现较强的抑制作用。此外，尚未见文献报道将IlexgeninA制备成抗肿瘤药物。
【发明内容】
[0004]本发明目的之一提供了 IlexgeninA在制备抗肿瘤药物中的用途；本发明目的之二提供了 IlexgeninA的药物剂型。
[0005]本发明所指的抗肿瘤药物为抗皮肤癌、肺癌、胃癌等多种肿瘤的药物。IlexgeninA可剂量依赖性地抑制皮肤癌、肺癌、胃癌细胞活，因此IlexgeninA具有高效抗肿瘤作用。
[0006]本发明的药物制剂含有1%~99%的IlexgeninA和99%~1%的药用赋形剂(包括其他可组方的药物)，优选含30%~80%的IlexgeninA和70%~20%的药用赋形剂(包括其他可组方的药物)，最好含有60%~70%的IlexgeninA和40%~30%的药用赋形剂(包括其他可组方的药物)。
[0007]依照药剂学方法,拟将本发明的IlexgeninA制备成多个临床药物剂型用于抗肿瘤，包括口服制剂和非肠道给药的剂型。所指的口服制剂选自于片剂、胶囊剂、滴丸剂、口服液体制剂中的任意一种，所指的非肠道给药剂型为注射剂。
[0008]本发明的抗肿瘤药物中的辅料是指常规的赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂等。本发明抗肿瘤药物中的其他配伍用的药物，指的是有效剂量的I IexgeninA为一定的药物原料,再配伍其他已允许合用的中药或化学药品。
【专利附图】
【附图说明】
[0009]图1是冬青素A(IlexgeninA)的化学结构式
[0010]图2是11exgeninA对人肺癌A549、胃癌细胞株SGC7901、黑色素瘤B16细胞株细胞株O~72h的抑制率图。A.1lexgeninA对:人肺癌细胞株A549、B:胃癌细胞株SGC7901、C:黑色素癌B16活力的影响。
[0011]图3是IlexgeninA对荷瘤小鼠的抑瘤率。
【具体实施方式】
[0012]下面通过具体实施例来对本发明作进一步的说明，但这些实施例只是为了说明，而不是对本发明的限制。
[0013]冬青素A(IlexgeninA)的分子式C3tlH46O6,化学结构如图1。
[0014]冬青素A购自四川标准物质中心，含量≥98%。
[0015]本试验所用的细胞株为国际公用的肿瘤细胞株-肺癌细胞A549、胃癌细胞
[0016]SGC7901、黑色素皮肤癌细胞B16，购买自中国科学院上海细胞所。
[0017]实施例一:采用MTT比色法检测IlexgeninA对人肺癌细胞株A549活力的影响:取对数生长期的肺癌细胞株A549，0.25%胰蛋白酶消化，收集消化后的细胞计数，用DMEM培养基稀释成IO3-1O4个/100 μ I浓度的单细胞悬液，每孔100 μ 1，接种到96孔板上，置37°C、5%C02、饱和湿度的细胞培养箱中，培养12h后。空白对照组加入缓冲液PBS，阴性对照组用等体积DMEM培养液，阳性对照组加入不同浓度的顺钼溶液，实验组加入不同浓度的IlexgeninA (0、5、10、20、40 μ g/ml),每个浓度设 6 个复孔，每孔 20 μ I。96 孔板置 37。。、5%C02、饱和湿度的细胞培养箱中，培养4h后，加入5mg/ml MTT，每孔10 μ 1，培养4h，每孔加Λ 150 μ I DMSO,摇床振荡IOmin,酶标仪570nm吸收波长测定吸光度(A值)，分别测出24、48、72h的OD值。按下列公式计算相对抑制率，抑制率(%) = (1-A实验组/A对照组)X 100%。结果见图2A。
[0018]结论: 如图2A所示，IlexgeninA与A549细胞作用后，随IlexgeninA浓度增加抑制率增高，在20 μ g/ml浓度下即对A549细胞增殖有明显的抑制作用，与阴性对照组比较差异有显著性(P〈0.05)，并呈剂量依赖关系；同时，随着时间推移，IlexgeninA对A549细胞抑制率逐步升闻，呈时间依赖关系。
[0019]实施例二，采用MTT比色法检测IlexgeninA对人胃癌细胞株SGC7901活力的影响:方法学部分参照实施例一，结果见图2B。
[0020]结论:如图2A所示，IlexgeninA与SGC7901细胞作用后，随着IlexgeninA的增加抑制率上升，在10.0 μ g/ml,20.0 μ g/ml,40.0 μ g/ml浓度时对SGC7901细胞增殖抑制作用增强，与阴性对照组比较差异有显著性(P〈0.01，P〈0.001)，且呈剂量依赖性；同时，随时间推移，IlexgeninA对SGC7901细胞抑制率亦逐步增加，呈时间依赖关系。
[0021]实施例三，采用MTT比色法检测IlexgeninA对黑色素癌细胞株B16的活力影响:方法学部分参照实施例一，结果见图2C。
[0022]结论:如图2C所示，IlexgeninA与黑色素癌B16细胞作用后，随着IlexgeninA的增加，抑制率上升，在5 μ g/ml、10 μ g/ml、20 μ g/ml和40 μ g/ml浓度时对B16细胞增殖有明显的抑制作用，与阴性对照组比较有显著性差异(P〈0.05)，呈剂量依赖关系；同时，随着时间推移，IlexgeninA对黑色素癌B16细胞抑制率逐步增加，呈时间依赖关系。
[0023]实施例四，IlexgeninA对黑色素瘤小鼠瘤重的影响
[0024]将BALB/c nu/nu 裸鼠随机分为模型组、IlexgeninA15mg/kg、30mg/kg 剂量组。将小鼠B16恶性黑色素瘤细胞于背部皮下接种，细胞密度为1\106，每只0.2!^。待成瘤后(2周)连续给药17天进行干预。第18天处死小鼠并剥离肿瘤称重，计算抑瘤率。
[0025]结论:冬青素A15mg/kg、30mg/kg剂量组的抑瘤率分别达到36.45%和51.13%实施例五.胶囊的制备IlexgeninA250g,淀粉2500g,将干燥好的淀粉与IlexgeninA充分混合，过120目筛，充分混匀后制备胶囊1000粒，每粒含IlexgeninA250mg。
[0026]实施例六.滴丸的制备600g聚乙二醇水浴溶化,加入IlexgeninA1200g,充分搅拌后置于保温管中，后采用液体石蜡包裹，吸干石蜡油后加入少量滑石粉混匀，制备滴丸1000丸
[0027]实施例七.片剂的制备IlexgeninAlOOg,淀粉1000g,糖粉200g,适量乙醇制粒后，
经整粒机处理后，压片分装。
[0028]实施例八.注射剂的制备IlexgeninAlOg,丙二醇20ml,聚乙二醇40ml,注射用水200ml，混合后水浴加热0.5h， 注射用水加至500ml，超声处理lOmin，水浴加热0.5h，调节ρΗ5.5~6.5，过滤，灌封灭菌即得。
【权利要求】
1. 冬青素A在制备抗肿瘤药物中的用途。
2.根据权利要求1所述用途，其特征在于所述抗肿瘤药物为抗皮肤癌、肺癌及胃癌的药物。
3.一种药物制剂，其特征在于含有有效治疗剂量的冬青素A和一种或多种药学上可接受的药用赋形剂，或可与冬青素A组方的其他药物。
4.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征在于含有1%~99%的冬青素A和99%~1%的药用赋形剂或其他可组方的药物。
5.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于含有30%~80%的冬青素A和70%~20%的药用赋形剂或其他可组方的药物。
6.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于含有60%~70%的冬青素A和40%~30%的药用赋形剂或其他可组方的药物。
7.根据权利3所述的药物制剂，其特征在于该药物剂型选自于胶囊剂、片剂、滴丸剂、口服液体制剂、注射剂当中的任何一种。
【文档编号】A61P35/00GK103893188SQ201410146662
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2014年4月11日 优先权日:2014年4月11日
【发明者】孙云, 王强 申请人:扬州大学