一种苦杏仁多糖及低聚糖的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种苦杏仁多糖及低聚糖的制备方法，可有效解决苦杏仁多糖及低聚糖的制备及杏仁多糖在制备增强免疫力的药物和保健品中的应用和苦杏仁低聚糖在制备抗氧化的药物、保健品、食品添加剂及化妆品中的应用的问题，制备的苦杏仁多糖在制备增强免疫力的药物和保健品中的应用，制备的苦杏仁低聚糖在制备抗氧化的药物、保健品、食品添加剂及化妆品中的应用，本发明制备方法简单，易操作，方法简单，原料丰富，产品应用面广，以苦杏仁为原料同时制备苦杏仁多糖及低聚糖，开发了苦杏仁药材的应用范围，开拓了苦杏仁多糖及低聚糖的应用价值，具有很好的社会效益和经济效益，是中药上的巨大创新。
【专利说明】一种苦杏仁多糖及低聚糖的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药领域，特别是涉及一种苦杏仁多糖及低聚糖的制备方法及应用。【背景技术】
[0002]苦杏仁，别名:杏仁，为蔷薇科植物山杏Prunus armeniaca L.var.ansu Maxim.、西伯利亚杏 Prunus sibirica L.、东北杏 Prunus mandshurica(Maxim.)Koehne 或杏 Prunusarmeniaca L.的干燥成熟种子。具有降气止咳平喘、润肠通便、抗炎镇痛、抗肿瘤、降血糖、降血脂等作用。临床主要用于咳嗽气喘，胸满痰多，肠燥便秘。现在对其有效成分的研究主要涉及苦杏仁苷、蛋白、酶、黄酮、脂肪油等成分，对其中多糖的研究较少，对苦杏仁低聚糖的研究尚未见报道，并且如何解决一体化制备苦杏仁多糖及低聚糖也未见有公开报导。
【发明内容】
[0003]针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明的目的就是提供一种苦杏仁多糖及低聚糖的制备方法，可有效解决苦杏仁多糖及低聚糖的制备及杏仁多糖在制备增强免疫力的药物和保健品中的应用和苦杏仁低聚糖在制备抗氧化的药物、保健品、食品添加剂及化妆品中的应用的问题。
[0004]本发明解决的技术方案是，一种苦杏仁多糖及低聚糖的制备方法，包括以下步骤:
[0005](1)取去皮的苦杏仁，加苦杏仁重量5-10倍的石油醚，置于闪式提取器中提取l-3min,过滤，得苦杏仁药渣A，将苦杏仁药渣A挥发去石油醚，晾干，加苦杏仁重量6_15倍的体积浓度为78% -82%的乙醇，浸泡30min，50°C _65°C回流提取0.5h_3h，过滤，得提取液和苦杏仁药渣B，苦杏仁药渣B备用，提取液40°C -50°C减压挥尽乙醇，4000r/min离心15min，得上清液即为苦杏仁低聚糖部位浸膏，将苦杏仁低聚糖部位浸膏依次经过大孔吸附树脂柱、活性炭柱、阳离子交换树脂柱、阴离子交换树脂柱，得洗脱液，最后将所得洗脱液减压浓缩，冷冻干燥即得苦杏仁低聚糖；
[0006](2)在步骤(1)中的苦杏仁药渣B中加苦杏仁药渣B重量6-10倍的水，浸泡30min，置于闪式提取器中提取l_3min，过滤，得第一次滤液和苦杏仁药渣C ;在苦杏仁药渣C中加入苦杏仁药渣C重量6-10倍的水浸泡5-10min，过滤，得第二次滤液，合并两次滤液，真空浓缩至苦杏仁重量的5-8倍，离心，得上清液，即为苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照2:1-4:1的重量比混合，用pH5.0-7.0的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液溶解，制成浓度为0.5% -1.2%的混合蛋白酶溶液；将苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按体积比1:0.5-0.8混合，35°C -60°C水浴5_10h，得酶解液，将酶解液灭酶后放至室温，sevage法脱蛋白，得苦杏仁多糖溶液，苦杏仁多糖溶液减压回收溶剂至苦杏仁重量的1.2-2.0倍，4000r/m离心15min，取上清液即得苦杏仁多糖浓缩液，将苦杏仁多糖浓缩液在搅拌下加入体积浓度为95%的乙醇，使浓缩液中含醇量为75% -80%，静置12h，滤去上部液体，得底部沉淀物，用无水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，20-50°C下减压干燥，即得苦杏仁多糖；实现以苦杏仁为原料制备苦杏仁多糖及低聚糖，并有效用于制备增强免疫力的药物和保健品，实现苦杏仁多糖及低聚糖在制备增强免疫力的药物和保健品中的应用，苦杏仁低聚糖在制备抗氧化的药物、保健品、食品添加剂及化妆品中的应用。
[0007]所述的大孔吸附树脂为D-101型大孔吸附树脂或AB-8型大孔吸附树脂，阳离子交换树脂为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂，阴离子交换树脂为强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂。
[0008]本发明制备方法简单，易操作，方法简单，原料丰富，产品应用面广，以苦杏仁为原料同时制备苦杏仁多糖及低聚糖，开发了苦杏仁药材的应用范围，苦杏仁多糖可用于制备增强免疫力的药物和保健品，苦杏仁低聚糖可用于制备抗氧化的药物、保健品、食品添加剂及化妆品，开拓了苦杏仁多糖及低聚糖的应用价值，具有很好的社会效益和经济效益，是中药上的巨大创新。
【具体实施方式】
[0009]以下结合实施例对本发明的具体情况作详细说明。 [0010]本发明在具体实施中，可由以下实施例给出:
[0011]实施例1
[0012]本发明在具体实施中，包括以下步骤:
[0013](I)取去皮的苦杏仁，加苦杏仁重量5倍的石油醚，置于闪式提取器中提取lmin，过滤，得苦杏仁药渣A，将苦杏仁药渣A挥发去石油醚，晾干，加苦杏仁重量6倍的体积浓度为78 %的乙醇，浸泡30min，50°C回流提取0.5h，过滤，得提取液和苦杏仁药渣B，苦杏仁药渣B备用，提取液40°C减压挥尽乙醇，4000r/min离心15min，得上清液即为苦杏仁低聚糖部位浸膏，将苦杏仁低聚糖部位浸膏依次经过AB-8型大孔吸附树脂柱、活性炭柱、强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂柱、强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂柱，得洗脱液，最后将所得洗脱液减压浓缩，冷冻干燥即得苦杏仁低聚糖；
[0014](2)在步骤(1)中的苦杏仁药渣B中加苦杏仁药渣B重量6倍的水，浸泡30min，置于闪式提取器中提取lmin，过滤，得第一次滤液和苦杏仁药渣C ;在苦杏仁药渣C中加入苦杏仁药渣C重量6倍的水浸泡5min，过滤，得第二次滤液，合并两次滤液，真空浓缩至苦杏仁重量的5倍，离心，得上清液，即为苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照2:1的重量比混合，用PH5.0的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液溶解，制成浓度为0.5%的混合蛋白酶溶液；将苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按体积比1:0.5混合，35°C水浴5h，得酶解液，将酶解液90°C °C下灭酶1min后放至室温，sevage法脱蛋白，得苦杏仁多糖溶液，将苦杏仁多糖溶液减压回收溶剂至苦杏仁重量的1.2倍，4000r/m离心15min，取上清液即得苦杏仁多糖浓缩液，苦杏仁多糖浓缩液在搅拌下加入体积浓度为95%的乙醇，使浓缩液中含醇量为75 %，静置12h，滤去上部液体,得底部沉淀物,用无水乙醇洗去沉淀物中的水分,再用丙酮洗去沉淀物中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，20°C下减压干燥，即得苦杏仁多糖。
[0015]实施例2
[0016]本发明在具体实施中，包括以下步骤:[0017](I)取去皮的苦杏仁，加苦杏仁重量7倍的石油醚，置于闪式提取器中提取2.7min，过滤，得苦杏仁药渣A，将苦杏仁药渣A挥发去石油醚，晾干，加苦杏仁重量8.5倍的体积浓度为79%的乙醇，浸泡30min，55°C回流提取2h，过滤，得提取液和苦杏仁药渣B，苦杏仁药渣B备用，提取液45°C减压挥尽乙醇，4000r/min离心15min，得上清液即为苦杏仁低聚糖部位浸膏，将苦杏仁低聚糖部位浸膏依次经过D-101型大孔吸附树脂柱、活性炭柱、强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂柱、强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂柱，得洗脱液，最后将所得洗脱液减压浓缩，冷冻干燥即得苦杏仁低聚糖；
[0018](2)在步骤(1)中的苦杏仁药渣B中加苦杏仁药渣B重量8倍的水，浸泡30min，置于闪式提取器中提取2min，过滤，得第一次滤液和苦杏仁药渣C ;在苦杏仁药渣C中加入苦杏仁药渣C重量8倍的水浸泡7.5min，过滤，得第二次滤液，合并两次滤液，真空浓缩至苦杏仁重量的6.5倍，离心，得上清液，即为苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照3.5:1的重量比混合，用pH6.5的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液溶解，制成浓度为0.7%的混合蛋白酶溶液；将苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按体积比1:0.6混合，50°C水浴8h，得酶解液，将酶解液95°C下灭酶20min后放至室温，sevage法脱蛋白，得苦杏仁多糖溶液，苦杏仁多糖溶液减压回收溶剂至苦杏仁重 量的1.5倍，4000r/m离心15min，取上清液即得苦杏仁多糖浓缩液，将苦杏仁多糖浓缩液在搅拌下加入体积浓度为95%的乙醇，使浓缩液中含醇量为77%，静置12h，滤去上部液体，得底部沉淀物，用无水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，35°C下减压干燥，SP得苦杏仁多糖。
[0019]实施例3
[0020]本发明在具体实施中，包括以下步骤:
[0021](I)取去皮的苦杏仁，加苦杏仁重量10倍的石油醚，置于闪式提取器中提取3min，过滤，得苦杏仁药渣A，将苦杏仁药渣A挥发去石油醚，晾干，加苦杏仁重量15倍的体积浓度为82%的乙醇，浸泡30min，65°C回流提取3h，过滤，得提取液和苦杏仁药渣B，苦杏仁药渣B备用，提取液50°C减压挥尽乙醇，4000r/min离心15min，得上清液即为苦杏仁低聚糖部位浸膏，将苦杏仁低聚糖部位浸膏依次经过AB-8型大孔吸附树脂柱、活性炭柱、强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂柱、强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂柱，得洗脱液，最后将所得洗脱液减压浓缩，冷冻干燥即得苦杏仁低聚糖；
[0022](2)在步骤(1)中的苦杏仁药渣B中加苦杏仁药渣B重量10倍的水，浸泡30min，置于闪式提取器中提取3min，过滤，得第一次滤液和苦杏仁药渣C ;在苦杏仁药渣C中加入苦杏仁药渣C重量10倍的水浸泡lOmin，过滤，得第二次滤液，合并两次滤液，真空浓缩至苦杏仁重量的8倍，离心，得上清液，即为苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照4:1的重量比混合，用pH7.0的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液溶解，制成浓度为1.2%的混合蛋白酶溶液；将苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按体积比1:0.8混合，60°C水浴10h，得酶解液，将酶解液100°C下灭酶30min后放至室温，sevage法脱蛋白，得苦杏仁多糖溶液，苦杏仁多糖溶液减压回收溶剂至苦杏仁重量的2.0倍，4000r/m离心15min，取上清液即得苦杏仁多糖浓缩液，将苦杏仁多糖浓缩液在搅拌下加入体积浓度为95%的乙醇，使浓缩液中含醇量为80%，静置12h，滤去上部液体，得底部沉淀物，用无水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，50°C下减压干燥，SP得苦杏仁多糖。
[0023]实施例4
[0024]本发明在具体实施中，包括以下步骤:
[0025](I)取去皮的苦杏仁10kg，加石油醚80kg，置于闪式提取器中提取l_3min，过滤，得苦杏仁药渣A，将苦杏仁药渣A挥发去石油醚，晾干，加10kg的体积浓度为81 %的乙醇，浸泡30min，56°C回流提取1.3h，过滤，得提取液和苦杏仁药渣B，苦杏仁药渣B备用，提取液40°C减压挥尽乙醇，4000r/min离心15min，得上清液即为苦杏仁低聚糖部位浸膏，将苦杏仁低聚糖部位浸膏依次经过大孔吸附树脂柱、活性炭柱、阳离子交换树脂柱、阴离子交换树脂柱，得洗脱液，最后将所得洗脱液减压浓缩，冷冻干燥即得苦杏仁低聚糖；
[0026](2)在步骤(1)中的苦杏仁药渣B中加水80kg，浸泡30min，置于闪式提取器中提取2.8min，过滤，得第一次滤液和苦杏仁药渣C ;在苦杏仁药渣C中加水60kg浸泡8min，过滤，得第二次滤液，合并两次滤液，真空浓缩至58kg，离心，得上清液，即为苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照2:1的重量比混合，用pH5.0-7.0的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液溶解，制成浓度为I %的混合蛋白酶溶液；将苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按体积比1:0.8混合，60°C水浴1h,得酶解液,将酶解液100°C下灭酶20min后放至室温，sevage法脱蛋白，得苦杏 仁多糖溶液，苦杏仁多糖溶液减压回收溶剂至20kg，4000r/m离心15min，取上清液即得苦杏仁多糖浓缩液，将苦杏仁多糖浓缩液在搅拌下加入体积浓度为95%的乙醇，使浓缩液中含醇量为80%，静置12h，滤去上部液体，得底部沉淀物，用无水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，20-50°C下减压干燥，即得苦杏仁多糖。
[0027]上述制备的2种活性成分经苯酚-硫酸法(常规测定方法，是公知技术)测定，其糖含量均不低于80 %。经HPGPC法(公知技术)测定，苦杏仁低聚糖的分子量均在300-2000之间。
[0028]上述仅是给出的几个实施例，在研制中，发明人经反复多次实验，均取得了相同或相近似的结果，方法科学有效，原料丰富，产品应用面广，具有实际的应用价值，并对苦杏仁多糖及低聚糖进行反复的试验均取得了满意的技术效果，有关试验资料如下:
[0029]苦杏仁多糖的免疫活性实验
[0030]一.试验材料
[0031]1.试验动物:18.5~23g昆明种清洁剂小鼠，雌雄各半。由郑州大学实验动物中心提供。
[0032]2.实验试药:本发明方法制备的苦杏仁多糖(含量为84.33% )，瑞士染液，香菇多糖(湖北广仁药业有限公司)，环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司)，枸橼酸钠，氯化钙，氯化钠，酒石酸钾钠，氯化钾，葡萄糖，磷酸氢二钾，磷酸二氢钾，酚红。
[0033]二.试验方法
[0034]1.苦杏仁多糖对正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
[0035]取小鼠50只，体重18.5~23g，雌雄各半，随机均匀分为5组。分别灌服小、中、大剂量的苦杏仁多糖水溶液(10mg/ml,20mg/ml,40mg/ml ；0.2ml/10g),香燕多糖混悬液(5mg/ml ；0.2ml/10g)及同体积的生理盐水(0.2ml/10g)。每天给药I次,连续给药7天。于7天早上各组小鼠均腹腔注射5%鸡红细胞生理盐水混悬液0.5ml。于第7天灌胃给药后2h，注射5%鸡红细胞4h后，脱颈椎处死小鼠，腹腔注入汉氏液2.5ml，轻揉小鼠腹部；然后剪开小鼠腹部皮肤，在腹膜上剪一小孔，用吸管吸取腹腔液2ml置于试管中，混匀；吸取少许腹腔液滴于载玻片上，液点大小约为1.5CmX2Cm。将载玻片放在铺有湿纱布的糖瓷盘中，37°C孵育30min，生理盐水冲去附着的细胞，瑞氏染液染色，自来水冲洗晾干；显微镜下
观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬情况，并计算吞噬百分率和吞噬指数。
[0036]
【权利要求】
1.一种苦杏仁多糖及低聚糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)取去皮的苦杏仁，加苦杏仁重量5-10倍的石油醚，置于闪式提取器中提取l-3min，过滤，得苦杏仁药渣A，将苦杏仁药渣A挥发去石油醚，晾干，加苦杏仁重量6-15倍的体积浓度为78% -82%的乙醇，浸泡30min，50°C _65°C回流提取0.5h_3h，过滤，得提取液和苦杏仁药渣B，苦杏仁药渣B备用，提取液40°C -50°C减压挥尽乙醇，4000r/min离心15min，得上清液即为苦杏仁低聚糖部位浸膏，将苦杏仁低聚糖部位浸膏依次经过大孔吸附树脂柱、活性炭柱、阳离子交换树脂柱、阴离子交换树脂柱，得洗脱液，最后将所得洗脱液减压浓缩，冷冻干燥即得苦杏仁低聚糖； (2)在步骤(1)中的苦杏仁药渣B中加苦杏仁药渣B重量6-10倍的水，浸泡30min，置于闪式提取器中提取l_3min，过滤，得第一次滤液和苦杏仁药渣C ;在苦杏仁药渣C中加入苦杏仁药渣C重量6-10倍的水浸泡5-10min，过滤，得第二次滤液，合并两次滤液，真空浓缩至苦杏仁重量的5-8倍，离心，得上清液，即为苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照2:1-4:1的重量比混合，用pH5.0-7.0的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液溶解，制成浓度为0.5% -1.2%的混合蛋白酶溶液；将苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按体积比1:.0.5-0.8混合，35°C -60°C水浴5_10h，得酶解液，将酶解液灭酶后放至室温，sevage法脱蛋白，得苦杏仁多糖溶液，苦杏仁多糖溶液减压回收溶剂至苦杏仁重量的1.2-2.0倍，40001./m离心15min，取上清液即得苦杏仁多糖浓缩液，将苦杏仁多糖浓缩液在搅拌下加入体积浓度为95%的乙醇，使浓缩液中含醇量为75% -80%，静置12h，滤去上部液体，得底部沉淀物，用无水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，20-50°C下减压干燥，即得苦杏仁多糖；所述的大孔吸附树脂为D-101型大孔吸附树脂或AB-8型大孔吸附树脂，阳离子交换树脂为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂，阴离子交换树脂为强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂。
2.根据权利要求1所述的苦杏仁多糖及低聚糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)取去皮的苦杏仁，加苦杏仁重量5倍的石油醚，置于闪式提取器中提取lmin，过滤，得苦杏仁药渣A，将苦杏仁药渣A挥发去石油醚，晾干，加苦杏仁重量6倍的体积浓度为.78 %的乙醇，浸泡30min，50°C回流提取0.5h，过滤，得提取液和苦杏仁药渣B，苦杏仁药渣B备用，提取液40°C减压挥尽乙醇，4000r/min离心15min，得上清液即为苦杏仁低聚糖部位浸膏，将苦杏仁低聚糖部位浸膏依次经过AB-8型大孔吸附树脂柱、活性炭柱、强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂柱、强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂柱，得洗脱液，最后将所得洗脱液减压浓缩，冷冻干燥即得苦杏仁低聚糖； ( 2)在步骤(1)中的苦杏仁药渣B中加苦杏仁药渣B重量6倍的水，浸泡30min，置于闪式提取器中提取lmin，过滤，得第一次滤液和苦杏仁药渣C ;在苦杏仁药渣C中加入苦杏仁药渣C重量6倍的水浸泡5min，过滤，得第二次滤液，合并两次滤液，真空浓缩至苦杏仁重量的5倍，离心，得上清液，即为苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照2:1的重量比混合，用PH5.0的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液溶解，制成浓度为0.5%的混合蛋白酶溶液；将苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按体积比1:0.5混合，35°C水浴5h，得酶解液，将酶解液.900C °C下灭酶1min后放至室温，sevage法脱蛋白，得苦杏仁多糖溶液，将苦杏仁多糖溶液减压回收溶剂至苦杏仁重量的1.2倍，4000r/m离心15min，取上清液即得苦杏仁多糖浓缩液，苦杏仁多糖浓缩液在搅拌下加入体积浓度为95%的乙醇，使浓缩液中含醇量为75%，静置12h，滤去上部液体，得底部沉淀物，用无水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，20°C下减压干燥，即得苦杏仁多糖。
3.根据权利要求1所述的苦杏仁多糖及低聚糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)取去皮的苦杏仁，加苦杏仁重量7倍的石油醚，置于闪式提取器中提取2.7min,过滤，得苦杏仁药渣A，将苦杏仁药渣A挥发去石油醚，晾干，加苦杏仁重量8.5倍的体积浓度为79%的乙醇，浸泡30min，55°C回流提取2h，过滤，得提取液和苦杏仁药渣B，苦杏仁药渣B备用，提取液45°C减压挥尽乙醇，4000r/min离心15min，得上清液即为苦杏仁低聚糖部位浸膏，将苦杏仁低聚糖部位浸膏依次经过D-1Ol型大孔吸附树脂柱、活性炭柱、强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂柱、强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂柱，得洗脱液，最后将所得洗脱液减压浓缩，冷冻干燥即得苦杏仁低聚糖； (2)在步骤(1)中的苦杏仁药渣B中加苦杏仁药渣B重量8倍的水，浸泡30min，置于闪式提取器中提取 2min，过滤，得第一次滤液和苦杏仁药渣C ;在苦杏仁药渣C中加入苦杏仁药渣C重量8倍的水浸泡7.5min，过滤，得第二次滤液，合并两次滤液，真空浓缩至苦杏仁重量的6.5倍，离心，得上清液，即为苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照3.5:1的重量比混合，用PH6.5的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液溶解，制成浓度为0.7%的混合蛋白酶溶液；将苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按体积比1:0.6混合，50°C水浴8h，得酶解液，将酶解液95°C下灭酶20min后放至室温，sevage法脱蛋白，得苦杏仁多糖溶液，苦杏仁多糖溶液减压回收溶剂至苦杏仁重量的1.5倍，4000r/m离心15min，取上清液即得苦杏仁多糖浓缩液，将苦杏仁多糖浓缩液在搅拌下加入体积浓度为95%的乙醇，使浓缩液中含醇量为77%，静置12h，滤去上部液体，得底部沉淀物，用无水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，35°C下减压干燥，即得苦杏仁多糖。
4.根据权利要求1所述的苦杏仁多糖及低聚糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)取去皮的苦杏仁，加苦杏仁重量10倍的石油醚，置于闪式提取器中提取3min，过滤，得苦杏仁药渣A，将苦杏仁药渣A挥发去石油醚，晾干，加苦杏仁重量15倍的体积浓度为82%的乙醇，浸泡30min，65°C回流提取3h，过滤，得提取液和苦杏仁药渣B，苦杏仁药渣B备用，提取液50°C减压挥尽乙醇，4000r/min离心15min，得上清液即为苦杏仁低聚糖部位浸膏，将苦杏仁低聚糖部位浸膏依次经过AB-8型大孔吸附树脂柱、活性炭柱、强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂柱、强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂柱，得洗脱液，最后将所得洗脱液减压浓缩，冷冻干燥即得苦杏仁低聚糖； (2)在步骤(1)中的苦杏仁药渣B中加苦杏仁药渣B重量10倍的水，浸泡30min，置于闪式提取器中提取3min，过滤，得第一次滤液和苦杏仁药渣C ;在苦杏仁药渣C中加入苦杏仁药渣C重量10倍的水浸泡lOmin，过滤，得第二次滤液，合并两次滤液，真空浓缩至苦杏仁重量的8倍，离心，得上清液，即为苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照4:1的重量比混合，用PH7.0的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液溶解，制成浓度为1.2%的混合蛋白酶溶液；将苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按体积比1:0.8混合，60°C水浴10h，得酶解液，将酶解液100°c下灭酶30min后放至室温，sevage法脱蛋白，得苦杏仁多糖溶液，苦杏仁多糖溶液减压回收溶剂至苦杏仁重量的2.0倍，4000r/m离心15min，取上清液即得苦杏仁多糖浓缩液，将苦杏仁多糖浓缩液在搅拌下加入体积浓度为95%的乙醇，使浓缩液中含醇量为80%，静置12h，滤去上部液体，得底部沉淀物，用无水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，50°C下减压干燥，即得苦杏仁多糖。
5.根据权利要求1所述的苦杏仁多糖及低聚糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)取去皮的苦杏仁10kg，加石油醚80kg，置于闪式提取器中提取l_3min，过滤，得苦杏仁药渣A，将苦杏仁药渣A挥发去石油醚，晾干，加10kg的体积浓度为81 %的乙醇，浸泡30min，56°C回流提取1.3h，过滤，得提取液和苦杏仁药渣B，苦杏仁药渣B备用，提取液40°C减压挥尽乙醇，4000r/min离心15min，得上清液即为苦杏仁低聚糖部位浸膏，将苦杏仁低聚糖部位浸膏依次经过大孔吸附树脂柱、活性炭柱、阳离子交换树脂柱、阴离子交换树脂柱，得洗脱液，最后将所得洗脱液减压浓缩，冷冻干燥即得苦杏仁低聚糖； (2)在步骤(1)中的苦杏仁药渣B中加水80kg，浸泡30min，置于闪式提取器中提取2.8min，过滤，得第一次滤液和苦杏仁药渣C ;在苦杏仁药渣C中加水60kg浸泡8min，过滤，得第二次滤液，合并两次滤液，真空浓缩至58kg，离心，得上清液，即为苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照2:1的重量比混合，用pH5.0-7.0的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液溶解，制成浓度为I %的混合蛋白酶溶液；将苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按体积比1:0.8混合，60°C水浴1h,得酶解液,将酶解液100°C下灭酶20min后放至室温，sevage法脱蛋白，得苦杏仁多糖溶液，苦杏仁多糖溶液减压回收溶剂至20kg，4000r/m离心15min，取上清液即得苦杏仁多糖浓缩液，将苦杏仁多糖浓缩液在搅拌下加入体积浓度为95%的乙醇，使浓缩液中含醇量为80%，静置12h，滤去上部液体，得底部沉淀物，用无水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的无水乙醇，最后用无水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，20-50°C下减压干燥，即得苦杏仁多糖。
6.权利要求1或2-5中任意一项所述方法制备的苦杏仁多糖在制备增强免疫力的药物和保健品中的应用。
7.权利要求1或2-5中任意一项所述方法制备的苦杏仁低聚糖在制备抗氧化的药物、保健品、食品添加剂及化妆品中的应用。
【文档编号】A61P37/04GK104031169SQ201410315741
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年7月2日 优先权日:2014年7月2日
【发明者】刘富岗, 冯素香, 吴兆宇, 王蒙蒙, 李晓玉, 郝蕊 申请人:河南中医学院