一种p53-mdm2相互作用的抑制剂及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开一种P53-MDM2相互作用的抑制剂及其应用，所述P53-MDM2相互作用的抑制剂为灵芝酸X、灵芝酸Me、灵芝酸Y、灵芝酸T或灵芝酸F；或灵芝酸X、灵芝酸Me、灵芝酸Y、灵芝酸T、灵芝酸F中之一与药理学上允许的添加成分组合而成的组合物。本发明的P53-MDM2相互作用的抑制剂在促肿瘤细胞凋亡中的应用，特别是在促表达P53蛋白的95-D肺癌细胞或不表达P53蛋白的H1299肺癌细胞凋亡中的应用，该P53-MDM2相互作用的抑制剂具有显著地抑制人恶性肺癌肿瘤细胞中MDM2活性，从而抑制P53蛋白的降解，进一步促进含有p53的肿瘤细胞的凋亡。
【专利说明】
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种P53-MDM2相互作用的抑制剂及其在由P53介导的诱导肿瘤细胞 凋亡中的应用。 -种P53-MDM2相互作用的抑制剂及其应用
【背景技术】
[0002] 随着生活方式、环境条件及人口老龄化等影响肿瘤发生发展因素的改变，自20 世纪7〇年代以来，我国肿瘤发生率呈明显上升趋势，现已成为城、乡居民的首要死因。肿 瘤的共同特性是由于正常细胞凋亡系统的缺陷导致细胞凋亡失调，具有无限增生的能力 (Carcinogenesis， 21:485, 2〇00)。因此，直接抑制癌细胞中的细胞凋亡方面起着中心作用 的靶向负调节剂代表了新抗癌药物设计的一种很有前景的治疗策略。
[0003] 灵芝（Ganoderma lucidum)是一种传统的药用真菌，《中华人民共和国药典》收录 了灵芝作为法定中药材，2001年灵芝被列入《可用于保健食品的真菌菌种名单》。灵芝具有 抗肿瘤、免疫调节等作用。三萜类化合物是灵芝类的主要化学成分之一，自1982年T Kubota (Helv. Chim. Acta, 65(2)，611-619，1982)等人首次分离得到该类化合物以后，迄今 为止已分离得到140多种同类化合物。自Toth 0(Tetrahedron Letter, 24: 1081-1084, 1983)等报道灵芝三萜类化合物的抗癌活性以来，多种灵芝酸被证实具有抑制肿瘤增殖和 转移功能。
[0004] 有关灵芝抗肿瘤的专利和文献，主要是灵芝子实体或孢子粉和其他药物配伍及灵 芝酸单体，用于抑制癌症的体内体外实验研究：专利CN1483423报道了一种治疗恶性肿瘤 的中药制剂及其制备方法，该中药制剂是以半枝莲、灵芝、鸡血藤、生地、枸杞子等为主要原 料，对各种肿瘤皆有很好的疗效。专利CN 1480208报道了一种用于放化疗减毒增效的药物 组合物及其制备方法，这种药物由黄芪、枸杞、灵芝按重量配比制成。专利CN 1421227报道 了包含灵芝的用于治疗与预防辐射线损伤的药物。专利CN 1286119报道了一种灵芝保健 品及其制备方法，灵芝酸纯度为15%，对肿瘤的抑制率达30%上。CN 1709264公开了灵芝 酸T和灵芝酸Me在肿瘤生长或增殖抑制剂中的应用。文献报道：灵芝酸T体外诱导肿瘤细 胞凋亡的途径是依赖于线粒体的内源性凋亡途径（Life sciences, (80) :205-211,2006)。
[0005] 近年来，关于蛋白-蛋白相互作用小分子抑制剂的研究已经成为药物化学家关注 的热点，P53-HDM2的相互作用已成为近年肿瘤药物研究的一个主要领域，抑制HDM2与Ρδ3 相互作用无疑为新药研究提供了一个很好的作用点。
[0006] 肿瘤抑制基因 Ρ53是一个转录激活因子，它可以调控细胞生长，当细胞中DNA受 到损伤时，Ρ53会上调有关基因进行DNA修复，使受损细胞处于细胞周期G1的停滞状态， 并诱导过度受损细胞进行凋亡，从而避免发生癌变。Ρ53的突变与很多癌症的发生有关， Ρ53肿瘤抑制基因在控制细胞周期进行和细胞凋亡中起着重要作用（Nature，408:307， 2000)，。p53的活性由蛋白MDM2来调控。通过两种不同机制起作用：（1)直接与p 53结合， 抑制其正常结合功能使之不能形成转录复合物；（2)通过蛋白酶体途径靶向P53,使其泛 素化并降解。MDM2是一种p53的关键负向调节剂。其通过结合至 P53的氨基终端转活化 区而形成一种负向自动调节回路，所以，在具有野生型p53的肿瘤中，活性p53的平衡浓度 可通过拮抗MDM2和p53间的相互作用而增加，将导致在这种肿瘤细胞中P53介导的凋亡。 MDM2除了抑制P53的外，还直接与pRb-调节的转录因子E2F1/DP1相互作用，因为MDM2与 P53和E2F1的相互作用均位于MDM2的相同结合部位，可预期MDM2/P 53拮抗剂将不仅活化 细胞的P53,而且也调整E2F1的活性，而E2F1的活性在肿瘤细胞中通常是不受调节的。因 此，MDM2和P53的相互作用的抑制提供一种以野生型p53治疗性干预肿瘤的方法，甚至在 缺乏功能性P53的肿瘤细胞中也显示抗增殖效果。
[0007] 关于MDM2和P53间相互作用的抑制剂的专利和文献：Weissman等在2005年通 过高通量筛选得到MDM2抑制剂（Cancer Cell，7 :547,2005. )，Hardcastle和Lunec等也在 2005年报道了异吲哚啉酮类小分子抑制剂（Mol. Cancer Then4 :1019, 2005.)，美国强生 公司Koblish等在2006年报道了一种利用Thermo Fluor微量量热法来发现P53HTOM2小分 子抑制剂的技术（Mol. Cancer Ther.,5:160，2006.)。柳 00/15357 提供了哌嗪-4-苯 基衍生物作为MDM2和P53间相互作用的抑制剂。EP 1137418提供了三环化合物，用于恢 复P53家族蛋白质的构形稳定性。W0 03/041715描述了取代的1，4_苯并二氮杂革及其作 为MDM2-P53相互作用抑制剂的用途。W0 03/51359提供了顺式_2,4,5_三苯基-咪唑酮， 其抑制MDM2蛋白质与类P53肽的相互作用且具有抗增殖活性。W0 04/05278公开了双芳基 磺酰胺化合物，其结合MDM2且可用于治疗癌症。CN101023074公开了 MDM2及P53间相互 作用的抑制剂的合成的小分子化合物。CN 101405285公开了作为MDM2和P53间相互作用 的抑制剂的环状-烷基胺衍生物。CN 102548963公开了新颖的作为MDM2-P53相互作用抑 制剂的N经取代的吡咯烷类化合物。CN 102627649公开了几种MDM2的小分子抑制剂以及 其应用。CN 101316823公开了用作抗癌剂的作为P53和MDM2蛋白之间相互作用的抑制剂 的2, 4, δ-三苯基咪唑啉衍生物。在鉴定有效的小分子抑制剂方面，虽然高效的筛选策略取 得了十分有限的成功，但还是十分有限的化合物被认为具有活性。因此，迫切需要筛选新的 可以抑制P53-MDM2相互作用的药物小分子。
[0008]虽然现有研究已经采用结构-活性模拟筛选模型找到了几类有限的有潜在应用 价值的小分子抑制剂，但毒副作用大，不稳定，尚未进行临床研究，同时，基于结构-活性模 拟筛选模型筛选出的小分子抑制剂主要是作用于MDM2和P53的结合结构域里，阻止二者结 合，没有其他的生物活性，对正常细胞和肿瘤细胞无选择性，单纯地抑制这种结合对正常细 胞是致命的。因此从安全性较高的中草药中筛选新的更安全的P53-MDM2相互作用抑制剂 具有重要的意义。长期的临床实践已经证明了灵芝及其成分的安全性，从灵芝中筛选P53-MDM2相互作用抑制剂还未见报道。
【发明内容】
[0009]本发明的目的是为了提供的一种P53-MDM2相互作用的抑制剂，该抑制剂是从灵 芝中筛选的。
[0010] 本发明的技术方案 一种P53_MDM2相互作用的抑制剂，为灵芝酸X (以下简称以^、灵芝酸恥（以下简 称GA-Me)、灵芝酸Y (以下简称GA-γ)、灵芝酸τ (以下简称GA_T)或灵芝酸1?(以下简称 GA-F)； 或GA-X、GA-Me、GA-Y、GA-T、GA-F之一与药理学上允许的添加成分组合而成的组合物； 所述的药理学上允许的添加成分为药物上可接受的盐类或酯类； 所述的GA-X、GA-Me、GA-Y、GA-T或GA-F从赤灵芝(G. Lucidum)子实体中提取纯化 (Biochemical Engineering Journal, 32 (3): 205,20〇6)而得，其纯度大于 99%。
[0011] 所述的一种P53-MDM2相互作用的抑制剂，其可以经脂溶剂(如乙醇)等溶剂用常规 法调制，因此其在剂型上无特殊限制。
[0012] 所述的一种P53-MDM2相互作用的抑制剂还能与药理学上允许的添加成分，如稀 释剂，着色剂，安定剂，界面活性剂，助溶剂，缓冲剂，矫味剂，香料，保存剂或糖衣剂等进行 组合。
[0013] 所述的一种P53-MDM2相互作用的抑制剂，其给药途径可以经口给药，也可非经口 给药。
[0014] 经口给药剂型是指片剂，丸剂，颗粒剂，散剂或胶囊。
[0015] 非经口剂型是指静脉注射剂，肌肉注射剂，皮下注射剂，浴剂，直肠，肛门或阴道给 药。
[0016] 所述的"相互作用的抑制剂"，是指避免或降低一种或多种分子、肽、蛋白质、酶或 受体的直接或间接结合；或避免或降低一种或多种分子、肽、蛋白质、酶或受体的正常活性。
[0017] "P53-MDM2相互作用的抑制剂"是指在药理分析过程中増加 P53表达的药剂。此 种增加可由下述的一种或多种下列作用机制所引起，但不限于此：
[1] 、抑制P53与MDM2间的相互作用；
[2] 、与MDM2或P53蛋白质的任一者直接结合；
[3] 、与上游或下游靶，例如激酶，或涉及泛蛋白化修饰的酶活性的相互作用；
[4] 、MDM2与P53在不同细胞区间的隔离或传输；
[5] 、与MDM2结合的蛋白质的调节，例如(但不限于）p73、p21 ;
[6] 、向下调节或干扰MDM2表达和/或MDM2活性，例如通过(但不限干）影响其细胞局 部化、后转译修饰、核输出或泛蛋白连接酶活性；
[7] 、P53蛋白质的直接或间接稳定化，例如通过保持其为其结构形式或通过避免错折 叠；
[8] 、促进p53表达或p53家族成员（例如p63及p73)的表达；
[9] 、増加 p53活性，例如通过(但不限干）增强其转录活性；
[10] 、增加 p53信号传输路径的基因及蛋白质的表达，例如(但不限于）p21wafl、cipl 及ATF-3。
[0018] "P53"是指因 p53基因的表达所获得的蛋白质，包含所有被P53基因编码的蛋白 质、其变异物、其选择性的切断蛋白质及其磷酸化蛋白质； "MDM2"是指因 MDM2基因的表达所获得的蛋白质。在此术语的意义中，MDM2包含所有 被MDM2编码的蛋白质、其变异物、其选择性的切断蛋白质及其磷酸化蛋白质。另外，当用于 发明时，术语"MDM2"包括MDM2类似物，例如MDMX(也称为MDM4)及MDM2同系物及其它动 物的类似物，例如人类同系物HDM2或人类类似物HDMX。
[0019] 上述的P53-MDM2相互作用的抑制剂在促肿瘤细胞凋亡中的应用。
[0020] 所述的肿瘤细胞是指医学上所属的各类恶性肿瘤：肺癌，甲状腺癌，恶性黑色素 瘤，恶性淋巴瘤，脑部肿瘤，消化器官的肿瘤，乳癌，卵巢癌，子宫癌，睾丸癌，前列腺癌，上颚 癌，咽喉癌，舌癌，口腔癌，各类肉瘤，骨肉瘤，白血病，神经系统肿瘤，膀胱肿瘤，皮肤癌，皮 肤附属器官癌和皮肤转移癌。
[0021] 上述的一种MDM2-P53相互作用抑制剂，在肿瘤细胞中小剂量使用能抑制MDM2活 性或MDM2-P53相互作用，导致P53的降解过程被抑制，具有对P53介导的肿瘤细胞的选择 性诱导凋亡作用。所述的小剂量是指每天、每公斤体重低于〇. l-5mg的剂量； 上述的一种MDM2-P53相互作用抑制剂，在肿瘤细胞中大剂量使用直接表现出无选择 性的细胞毒性。可将它们作为P53介导的肿瘤治疗药物。所说的大剂量是指每天、每公斤 体重高于5_50mg的剂量。
[0022] 本发明的一种P53-MDM2相互作用的抑制剂，在野生型p53和缺陷型p53肿瘤细胞 中均有抑制MDM2作用，从而具有促肿瘤细胞凋亡作用，特别是表达P53蛋白的95-D肺癌细 胞或p53缺陷型的H1299肺癌细胞，并且对表达P53蛋白的95-D肺癌细胞的促凋亡作用更 好。
[0023] 本发明的有益效果 本发明的一种P53- MDM2相互作用的抑制剂，来源于中国传统中药灵芝，能够通过多种 分子途径抑制P53- MDM2相互作用，具有显著地抑制人恶性肺癌肿瘤细胞中MDM2活性，抑 制P53蛋白降解的功能，可以用于抑制泛素化作用介导的蛋白降解，促进含有 p53的肿瘤细 胞凋亡。
[0024] 现有技术中的基于结构-活性模拟筛选模型筛选出的小分子抑制剂主要是作用 于MDM2和P53的结合结构域里，阻止二者结合，没有其他的生物活性，对正常细胞和肿瘤细 胞无选择性，单纯地抑制这种结合对正常细胞是致命的。而本发明的一种P53- MDM2相互 作用的抑制剂，其来源于灵芝，由于灵芝酸具有多种作用位点，即可以抑制MDM2表达也可 以刺激P53的表达，而且对正常细胞低毒，对肿瘤细胞表现出更高的活性，因此本发明的一 种P53- MDM2相互作用的抑制剂可以促进肿瘤细胞的凋亡，特别是对促进表达P53蛋白的 95-D肺癌细胞和不表达P53蛋白的H1299肺癌细胞的凋亡效果非常明显。
[0025]
【专利附图】
【附图说明】 图 1、浓度分别为 8· 5 μ g/ml、10 μ g/ml、25 μ g/ml、50 μ g/ml 的 GA-T对表达P53 蛋白的 95-D肺癌细胞和不表达P53蛋白的H1299肺癌细胞的细胞毒性情况； 图2、浓度16 μ g/ml、80 μ g/ml的GA-Me分别对表达P53蛋白的95-D肺癌细胞和不表 达P53蛋白的H1299肺癌细胞处理5min、13min、19min、25min、37min后，对两种肺癌细胞抑 制作用情况； 图3、GA-X、GA-Me、GA-Y、GA_T、GA-F对表达P53蛋白的95-D肺癌细胞和不表达P53蛋 白的H1299肺癌细胞凋亡的影响； 图4、GA-X、GA-Me、GA-Y、GA-T、GA-F对表达P53蛋白的％-D肺癌细胞中MDM2的活性 的影响。
【具体实施方式】
[0026] 下面通过实施例并结合附图对本
【发明内容】
作进一步阐述，但并不限制本发明的保 护范围。
[0027] 本发明的各实施例中所用的原料、试剂等如无特别说明均为市售。
[0028] 窀施例1 GA-T对表达P53蛋白的95-D肺癌细胞和不表达P53蛋白的H1299肺癌细胞的毒性作 用 取4份GA-T，纯度大于99%，用DMS0(二甲基亚砜，分析纯，上海国药集团化学试剂有限 公司）分别稀释成浓度为 8. 5μ g/ml、10u g/ml、25y g/ml、50u g/ml。
[0029] 采用噻唑蓝（以下简称MTT，分析纯，上海国药集团化学试剂有限公司）快速比色法 测定上述四种不同浓度的GA-T对2种表达P53蛋白的95-D肺癌细胞和不表达P53蛋白的 H1299肺癌细胞的毒性作用。
[0030] 分别将对数生长期细胞（106cell. ηιΓ)接种于96孔培养板，每孔0· 2ml，然后分别 加入上述四种不同浓度的GA-T处理，每浓度平行4孔，每孔中的DMS0最终浓度小于〇· 1%， 对照组加等量体积的RPMI1640细胞培养液(赛业苏州生物科技有限公司），置于37°C，5% C02及饱和湿度的培养箱中培养1-4天，实验终止前4h每孔加入10 μ 1浓度为5mg/ml的 MTT水溶液，培养结束后每孔加入150 μ 1浓度为〇· 04N的DMS0,振荡10 min，待MTT还原 产物完全溶解，用BioRad 550型酶标仪，以550nm为实验波长测定其吸收度，计算GA-T对 细胞的抑制率，然后以灵芝酸GA-T浓度为横坐标，细胞的抑制率为纵坐标作图，确定细胞 的半数抑制浓度（IC50)。实验结果如图1所示，从图1中可以看出GA-T具有抑制表达P53 蛋白的95-D肺癌细胞和不表达P53蛋白的H1299肺癌细胞增殖的作用，但表达Ρδ3蛋白的 95-D肺癌细胞对GA-T更敏感，比不表达Ρ53蛋白的Η1299肺癌细胞的毒性作用要高3. 3 倍。由此表明灵芝酸GA-T可以通过刺激Ρ53诱导增殖抑制。
[0031] 实施例2 不同浓度和时间的GA- Me处理对表达Ρ53蛋白的95-D肺癌细胞和不表达Ρ53蛋白的 H1299肺癌细胞的抑制作用 GA-Me纯度大于99%，用DMS0稀释成所需浓度。采用噻唑蓝（MTT)快速比色法测定 GA-Me对表达P53蛋白的95-D肺癌细胞和不表达P53蛋白的H1299肺癌细胞的毒性作用。
[0032] 将对数生长期的表达P53蛋白的95-D肺癌细胞和不表达P53蛋白的H1299肺癌 细胞（106cel 1. ml-1)接种于96孔培养板，每孔〇· 2ml，两种不同的细胞中分别加入终浓度 为16 μ g/ml、80 μ g/mlGA-Me，每个浓度平行4孔，每孔中的DMS0最终浓度小于0· 1%，对照 组加等量体积的RPMI1640细胞培养液(赛业苏州生物科技有限公司），置于3rC，5%C02及 饱和湿度的培养箱培养2天，实验终止前4h每孔加入1〇μ1浓度为 5mg/ml的MTT水溶液， 培养结束后每孔加入150μ1浓度为0.04N的DMS0,振荡10 min，待MTT还原产物完全溶 解，用BioRad 550型酶标仪，以550nm为实验波长测定其吸收度，计算灵芝酸GA-Me对细胞 的抑制率，并以灵芝酸GA-Me的不同浓度对表达P53蛋白的95-D肺癌细胞和不表达P53蛋 白的H1299肺癌细胞的抑制率作图，结果见图2所示，从图2中可以看出GA-Me对表达P53 蛋白的95-D肺癌细胞和不表达P53蛋白的H1299肺癌细胞两种肺癌细胞均具有增殖抑制 作用，但对表达P53蛋白的95-D肺癌细胞比不表达PM蛋白的Hl 299肺癌细胞的毒性作用 要强，且短时间内就可产生较大的抑制。由此表明GA_Me可以通过刺激 P53诱导增殖抑制。
[0033] 实施例3 GA-X、GA-Me、GA_Y、GA-T、GA-F诱导表达P53蛋白的％-D肺癌细胞和不表达Ρδ3蛋白 的H1299肺癌细胞的凋亡作用 对数生长期表达P53蛋白的95-D肺癌细胞和不表达P53蛋白的H1299肺癌细胞培养4h 后，经DMSO稀释而成50 μ g/mL的上述GA-X、GA_Me、GA_Y、GA-T、GA_F分别充分作用8h后， 经胰蛋白酶消化，分别离心收集表达P53蛋白的95-D肺癌细胞和不表达P53蛋白的H1299 肺癌细胞（1500 rpm X lOmin)，PBS (氯化钠（NaCl)，8g/L;氯化钾（KCl)，0.2g/L;磷酸 氢二钠（Na2HP04)，1. 44g/L;磷酸二氢钾（KH2P04)，0· 24g/L，调 pH 7· 4,高压蒸汽灭菌，室 温保存）洗涤两遍，以PBS调整表达Ρ53蛋白的95-D肺癌细胞和不表达Ρ53蛋白的Η1299 肺癌细胞浓度分别为106个/mL，分别加入RNase，终浓度为100U/mL，37°C保温30min，加 入八111^〗丨11￥和？1，终浓度为5(^〖/1^，在常温下暗反应 3〇1^11，然后200目滤膜过滤，经 流式细胞仪分析凋亡，每次记录1000 - 1500个细胞，结果见图3所示，从图3中可以看出 GA-X、GA-Me、GA-Y、GA-T、GA-F均可诱导表达P53蛋白的95-D肺癌细胞和不表达P53蛋白 的H1299肺癌细胞的凋亡，且对表达P53蛋白的95-D肺癌细胞凋亡的诱导效果更好。
[0034] 实施例4 GA-X、GA-Me、GA-Y、GA-T、GA-F抑制95-D肺癌细胞中MDM2的活性的影响 对数生长期95-D肺癌细胞培养4h后,经DMSO稀释而成0, 50 μ g/mL的上述各种灵芝 酸分别充分作用8h后，经胰蛋白酶消化，离心收集95-D肺癌细胞（1500rpm X lOmin)，使用 细胞裂解液裂解细胞，收集蛋白样品，使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(碧云天生物技术研究 所）测定每个蛋白样品的蛋白浓度，保证后续电泳的蛋白上样量一致。
[0035] 配制15%SDS-PAGE凝胶，在蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (北京奥博来科技有限责任公司），沸水浴加热3-5min，以充分变性蛋白，冷却到室温后，把 蛋白样品直接上样到SDS-PAGE凝胶加样孔内。电泳时在上层胶时使用80V低电压恒压电 泳，下层胶时使用120V高电压恒压电泳，时间为90-120min。电泳后切胶，转膜，选用PVDF 膜，转膜电流为300-400mA，转膜时间为30-60min。转膜完毕后洗涤去除膜上的转膜液，加 入封闭液，在摇床上缓慢摇动，室温封闭60min。
[0036] 参考鼠抗人MDM2 -抗的说明书(上海信裕生物科技有限公司），按照适当比例用一 抗稀释液稀释，立即加入稀释好的一抗，室温或4?在侧摆摇床上缓慢摇动孵育lh。回收一 抗。加入洗涤液，在侧摆摇床上缓慢摇动洗涤5-10min，吸尽洗涤液后，再加入洗涤液，洗涤 5-10min，共洗涤3次。
[0037] 参考二抗的说明书(上海信裕生物科技有限公司），按照适当比例用二抗稀释液稀 释辣根过氧化物酶（HRP)标记的二抗，立即加入稀释好的二抗，室温或4°C在侧摆摇床上缓 慢摇动孵育lh，回收二抗。加入洗绦液，在侧摆摇床上缓慢摇动洗涤5-10min。吸尽洗涤液 后，再加入洗涤液，洗涤5-10min，共洗涤3次。
[0038] 蛋白检测采用化学发光法，通过检测仪检测光密度，与阴性对照比，确定抑制率， 结果如图4所示，从图4中可以看出，GA-X、GA_Me、GA-Y、GA-T、GA-F抑制了 95-D肺癌细胞 中MDM2的表达，从而抑制了 P53蛋白的降解，进一步诱导95-D肺癌细胞的凋亡。
[0039] 综上所述，本发明的一种P53_MDM2相互作用的抑制剂，具有显著地抑制人恶性肺 癌肿瘤细胞中MDM2的表达，从而具有抑制P53蛋白降解的功能，因此P53-MDM2相互作用的 抑制剂可以促进含有P53的肿瘤细胞凋亡。
[0040] 以上所述仅是本发明的实施方式的举例，应当指出，对于本【技术领域】的普通技术 人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变 型也应视为本发明的保护范围。
【权利要求】
1. 一种P53-MDM2相互作用的抑制剂，其特征在于所述的P53-MDM2相互作用的抑制剂 为灵芝酸X、灵芝酸Me、灵芝酸Y、灵芝酸T或灵芝酸F ; 或灵芝酸X、灵芝酸Me、灵芝酸Y、灵芝酸T、灵芝酸F中之一与药理学上允许的添加成 分组合而成的组合物。
2. 如权利要求1所述的P53-MDM2相互作用的抑制剂，其特征在于所述的药理学上允许 的添加成分为药物上可接受的盐类或酯类。 3_如权利要求1或2所述的P53-MDM2相互作用的抑制剂在促肿瘤细胞凋亡中的应用。
4.如权利要求1或2所述的P53-MDM2相互作用的抑制剂在促肺癌肿瘤细胞调亡中的 应用。
5·如权利要求4所述的应用，其中所述的肺癌肿瘤细胞为表达P53蛋白的95-D肺癌细 胞或不表达P53蛋白的HI2"肺癌细胞。
【文档编号】A61P35/00GK104188976SQ201410420296
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年8月25日 优先权日:2014年8月25日
【发明者】唐文, 王雨蔷, 孙培龙, 欧阳晶晶 申请人:上海应用技术学院