专利名称：作为质子泵抑制剂用于治疗溃疡的稠合的吡咯化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及稠合的吡咯化合物，特别是ML3000，及其盐或衍生物作为质子泵抑制剂的应用。
背景技术：
消化性溃疡是工业化国家中最常见的疾病之一。
酸分泌抑制剂是处方量最大的药物之一，其反映了一句生理学的格言“无酸不成溃疡”。用于防止HCl弥散的胃粘膜屏障出现药理学或病理生理学裂隙可导致胃上皮单层细胞快速侵蚀，从而使粘膜形成溃疡。通过对胃壁细胞组胺H2受体的对抗作用(西咪替丁)或通过直接共价衍生胃质子泵并使其失活(奥美拉唑、兰索拉唑和雷贝拉唑)来抑制酸分泌是改善和促进胃溃疡愈合的常规手段。胃质子泵也已知为H+/K+-ATP酶。其位于胃壁细胞膜，对质子从血液转运到胃腔起重要作用，从而使胃内容物的pH降低。
奥美拉唑本身实际上是一种可在酸性条件下转化为活性药物、即其相应的亚磺酰胺的前药。人们对奥美拉唑的作用机理进行了详细研究，已知其涉及H+/K+-ATP酶的一个(或两个)巯基对化学活性亚磺酰胺中硫原子的亲核攻击。可观察到由此产生的酶巯基的化学修饰(在H+/K+-ATP酶的硫和苯并咪唑吡啶盐的硫之间形成二硫键)对质子泵的抑制作用。然而应当强调的是，前药向活性酶抑制剂的转化仅仅在酸性介质中完成，而酸性介质也使得活性亚磺酰胺大量降解。总而言之，奥美拉唑在酸性环境中的不稳定是该药物的一个主要缺点，而酸性环境是其激活成为质子泵抑制剂的先决条件。
除了酸分泌，白细胞介素-8分泌也表现出其它的胃粘膜功能，该功能在胃溃疡形成中起重要作用。
导致溃疡形成的菌幽门螺旋杆菌已经表现出可增加IL-8在体外和体内分泌的速度和幅度，并且可上调IL-8的基因表达。相似的IL-8促分泌效应可看作是IL-1b刺激胃上皮细胞的结果。
非甾体抗炎药(NSAID)广泛用于临床，例如乙酰水杨酸(ASA)、双氯芬酸、吲哚美辛、布洛芬和萘普生。从药理学的观点来看，它们作为环氧合酶(COX)抑制剂起作用。
NSAID的抗炎作用与它们可抑制前列腺素的合成有关。然而，对胃前列腺素的抑制降低了胃粘膜的血流量，其伴随有粘膜对因各种刺激引起的局部损伤的敏感性。由NSAID引起的胃溃疡明显限制了这些药物的应用。
药理学作用相似的吡咯嗪化合物在众多出版物中是已知的。例如在Arch.Pharm.319，65-69(1986)；319，231-234(1986)；318，661-663(1985)；318，663-664(1985)；319，500-505(1986)；319，749-755(1986)；327，509-514(1994)；330，307-312(1997)以及在J.Med.Chem.1987，30，820-823和1994，37，1894-1897中描述了具有抗炎活性的吡咯嗪化合物。
其它吡咯嗪化合物可选自US 5,260,451(对应于EP 0397175)、WO95/32970、WO 95/32971和WO 95/32972。这些化合物以下述结构式表示 它们均有一个稠合的二芳基吡咯部分和第三个酸性残基R3。这些化合物的特点在于其在中性范围内具有较高的亲脂性、较好的生物利用度和半衰期。Drugs of the Future，1995，20(10)1007-1009。
其它具有相似结构的吡咯嗪化合物在DE 19845446.6和WO 01/05792中有描述。此外，根据US4,232,038，烷基亚磺酰苯甲酰基和烷基磺酰苯甲酰基取代的吡咯嗪化合物据说还具有抗炎、止痛和解热的性质。根据DE19624290.8和DE 19624289.4，该类型的某些化合物还具有降脂活性。
式(Ia)的ML-3000([2，2-二甲基-6-(4-氯苯基)-7-苯基-2，3-二氢-1H-吡咯嗪-5-基]-乙酸)
为非抗氧剂平衡的COX和5-脂肪氧合酶(5-LO)双重抑制剂(1)。该药物为COX的非选择性抑制剂，可抑制COX-1和COX-2两者。该药物具有止痛、解热和抗炎活性，并且已经在多种动物模型中证明其具有强有效的抗炎作用，所述动物模型包括角叉菜胶引起的大鼠爪水肿和大鼠佐剂关节炎(2)。另外，已经报道ML3000表现出极好的胃肠耐受性(12，13)。然而还没有观察到胃保护性质(11)。
令人惊奇的是，已经发现某些稠合的吡咯化合物，例如ML-3000，具有显著的胃保护效应。这种现象不仅与胃质子泵的显著抑制有关，而且与胃上皮细胞中IL-8分泌的抑制有关。
发明简述因此，本发明涉及通式(I)表示的稠合的吡咯化合物及其光学异构体、生理可接受的盐和衍生物在抑制胃质子泵中的应用， 其中，X表示CR8R9、S、O、NR12或C(O)；A表示CR10R11或X与载有基团R6和R7的原子之间的键；基团R1、R2和R3中的第一个基团表示芳基，其是未取代的或被一个或多个彼此独立地选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、芳氧基、卤代烷氧基、烷硫基、羟基、硝基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、氨磺酰基、N-烷基氨磺酰基、N，N-二烷基氨磺酰基、烷基磺酰氨基和烷基磺酰-N-烷基氨基的取代基取代；或者芳香或非芳香的、单环或双环的、任选与苯环稠合的、含1、2或3个彼此独立地选自N、O和S的杂原子杂环基团，所述杂环基团是未取代的或被一个或多个彼此独立地选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、芳氧基、卤代烷氧基、烷硫基、羟基、硝基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、氨磺酰基、N-烷基氨磺酰基、N，N-二烷基氨磺酰基、烷基磺酰氨基和烷基磺酰-N-烷基氨基的取代基取代；基团R1、R2和R3中的第二个基团表示烷基，其是未取代的或被一个或多个彼此独立地选自卤素、环烷基、烷氧基、三氟甲氧基、羟基和三氟甲基的取代基取代；环烷基，其是未取代的或被一个或多个彼此独立地选自卤素、烷基、卤代烷基、环烷基、烷氧基、卤代烷氧基和羟基的取代基取代；芳基，其是未取代的或被一个或多个彼此独立地选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、芳氧基、卤代烷氧基、烷硫基、羟基、硝基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、氨磺酰基、N-烷基氨磺酰基、N，N-二烷基氨磺酰基、烷基磺酰氨基和烷基磺酰-N-烷基氨基的取代基取代；或者芳香或非芳香的、单环或双环的、任选与苯环稠合的、含1、2或3个彼此独立地选自N、O和S的杂原子杂环基团，所述杂环基团是未取代的或被一个或多个彼此独立地选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、芳氧基、卤代烷氧基、烷硫基、羟基、硝基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、氨磺酰基、N-烷基氨磺酰基、N，N-二烷基氨磺酰基、烷基磺酰氨基和烷基磺酰-N-烷基氨基的取代基取代；
基团R1、R2和R3中的第三个基团表示H、烷基、卤代烷基、羟基烷基、-CHO、-COOH、卤素、氰基、烷基磺酰基、氨磺酰基或B-Y；其中，B表示亚烷基或亚烯基，其是未取代的或被羟基或烷氧基取代；Y表示-COOH、SO3H、OPO(OH)2、OP(OH)2、-CHO或四唑基；或者基团R1、R2和R3中的第二和第三个基团与它们连接的原子一起表示饱和或不饱和的环烷基；R4-R11可以相同或不同，表示氢、烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、羟基、COOH或酰氧基，其中，邻位基团也可表示化学键，或者偕基团也可与它们连接的C原子一起表示羰基或环烷基；R12表示氢、烷基或苯基。
术语“烷基、烷氧基等”包括直链或支链烷基基团，例如CH3、C2H5、正丙基、CH(CH3)2、正丁基、CH(CH3)-C2H5、异丁基、C(CH3)3、正戊基或正己基，特别是CH3、C2H5或CH(CH3)2，除非特别指出，所述基团优选含1至8个、特别是1至6个碳原子，更优选含1至4个碳原子；作为基团R1至R12的取代基，“烷基、烷氧基等”优选含1至4个碳原子。
取代的“烷基、烷氧基等”具体包括卤代烷基，即部分或全部被氟、氯、溴和/或碘取代的烷基，例如CH2F、CHF2、CF3、CH2Cl、2-氟乙基、2-氯乙基或2，2，2-三氟乙基；作为基团R1至R12的取代基，卤代烷基优选指CHF2，特别是指CF3；卤代烷氧基，即部分或全部被氟、氯、溴和/或碘取代的烷氧基，例如与前述卤代烷基残基相应的卤代烷氧基残基；作为基团R1至R12的取代基，卤代烷氧基优选指OCHF2，特别是指OCF3；烷氧基烷基，即被烷氧基取代的烷基，例如-CH2-OCH3或2-甲氧基乙基；
羟基烷基，即被羟基取代的烷基——优选为单取代，例如羟甲基或2-羟乙基；三氟甲基烷基，即被三氟甲基取代的烷基——优选为单取代，例如以上关于羟基烷基所描述的残基，只是被三氟甲基而不是羟基取代；三氟甲氧基烷基，即被三氟甲氧基取代的烷基——优选为单取代，例如以上关于羟基烷基所描述的残基，只是被三氟甲氧基而不是羟基取代；环烷基烷基，即被环烷基取代的烷基——优选为单取代，例如以上关于羟基烷基所描述的残基，只是被环丙基、环丁基、环戊基或环己基而不是羟基取代。
术语“环烷基”包括单环或双环的烷基基团，例如环丙基、环丁基、环戊基和环己基等，除非特别指出，所述环烷基优选含3至9个碳原子，特别是含3至7个碳原子，更优选含5或6个碳原子。
术语“亚烷基”包括直链或支链亚烷基，例如亚甲基和亚乙基，除非特别指出，所述亚烷基优选含1至8个碳原子，特别是含1至6个碳原子，更优选含1至4个碳原子。如果亚烷基被羟基或烷氧基取代，优选为单取代。
术语“亚烯基”包括直链或支链的、单或多不饱和亚烷基，例如亚乙烯基，除非特别指出，所述亚烯基优选含2至8个碳原子，特别是含2至6个碳原子，更优选含2至4个碳原子。如果亚烯基被羟基或烷氧基取代，优选为单取代。
酰氧基指-OCOR，其中R表示烷基或芳基。优选的实例为乙酰氧基和苯酰氧基。
-COO-烷基指烷氧羰基，例如CO-OCH3、CO-OC2H5、CO-OCH2-C2H5、CO-OCH(CH3)2、正丁氧羰基、CO-OCH(CH3)-C2H5、CO-OCH2-CH(CH3)2、CO-OC(CH3)3，特别是指CO-OCH3、CO-OC2H5、CO-OCH(CH3)2或CO-OCH2-CH(CH3)2。
-COO-烷基苯基指在烷基部分被苯基取代的烷氧羰基，例如苄氧羰基。
烷硫基指-S-烷基，并且也可称为烷基硫基或烷基巯基，例如SCH3、SC2H5、SCH2-C2H5、SCH(CH3)2、正丁硫基、1-甲基丙硫基、2-甲基丙硫基、SC(CH3)3。优选为甲硫基。
烷基亚磺酰基指-S(O)-烷基，并且也可指烷基亚砜，例如SO-CH3、SO-C2H5、正丙基亚磺酰基、1-甲基乙基亚磺酰基、正丁基亚磺酰基、1-甲基丙基亚磺酰基、2-甲基丙基亚磺酰基、1，1-二甲基乙基亚磺酰基。优选为甲基亚磺酰基。
烷基磺酰基指-S(O)2-烷基，并且也可指烷基砜，例如SO2-CH3、SO2-C2H5、正丙基磺酰基、SO2-CH(CH3)2、正丁基磺酰基、1-甲基丙基磺酰基、2-甲基丙基磺酰基、SO2-C(CH3)3。优选为甲基磺酰基。
氨磺酰基指-S(O)2NH2，并且也可指氨基磺酰基或磺酸胺。
N-烷基氨磺酰基指单取代的氨磺酰基-S(O)2NH-烷基，例如-S(O)2NH-CH3。
N，N-二烷基氨磺酰基指二取代的氨磺酰基-S(O)2N-(烷基)2，其中N-连接的烷基残基可以相同或不同，例如-S(O)2N(CH3)2。
烷基磺酰氨基指-NHS(O)2-烷基，例如NHSO2-CH3、NHSO2-C2H5、正丙基磺酰氨基、NHSO2-CH(CH3)2、正丁基磺酰氨基、1-甲基丙基磺酰氨基、2-甲基丙基磺酰氨基、NHSO2-C(CH3)3。优选为甲基磺酰氨基。
烷基磺酰-N-烷基氨基指-N(烷基)S(O)2-烷基，其中N-和S-连接的烷基残基可以相同或不同，例如N(CH3)SO2-CH3。
羰基、CHO、-COOH、-SO3H分别指＞C＝O、甲酰基、羧基、羧基羰基和磺基。
“芳基”优选指萘基，特别是指苯基。
术语“卤素”包括氟、氯、溴或碘原子。通常优选为氟和氯，某些情况下也可优选溴。
“杂环残基”具体包括五元或六元杂环残基，所述杂环残基可以是芳香或非芳香的、单环或双环和/或苯并环化的杂环残基。其实例为含氮的杂环残基，例如吡咯基、咪唑基、吡唑基、哒嗪基、吡嗪基、吲哚基、喹啉基，特别是吡啶基、嘧啶基和异喹啉基。芳香残基也可包括含氧或硫原子的杂环残基，例如噻吩基、苯并噻吩基和呋喃基，特别是苯并呋喃基。还可包括含2个或多于2个不同杂原子的杂环残基，例如噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、异噁唑基和噁唑基。优选的芳香杂环残基为噻吩基、吡啶基和噻唑基。非芳香残基包括含氮的杂环残基，例如吡咯烷基、哌啶基和哌嗪基。还可包括含2个或多于2个不同杂原子的杂环残基，例如吗啉基。
取代的残基，特别是烷基、环烷基、芳基和杂芳基，优选为单-、二-或三取代的。
-环系可以是6元或特别是5元环的杂环或特别是脂肪环，如果是脂肪环，则是不饱和或特别是饱和的、和/或是取代或未取代的环。
具有式I的[a]-稠合的吡咯化合物具体包括具有下述取代基定义的化合物X表示CR8R9并且A表示X与载有基团R6和R7的原子之间的键的化合物(吡咯嗪)；X表示CR8R9并且A表示CR10R11的化合物(吲嗪)；X表示NR12并且A表示X与载有基团R6和R7的原子之间的键的化合物(吡咯并[1，2-a]咪唑)；X表示S并且A表示X与载有基团R6和R7的原子之间的键的化合物(吡咯并[2，1-b]噻唑)；X表示S并且A表示CR10R11的化合物(吡咯并[2，1-b]1，3-噻嗪)；X表示O并且A表示CR10R11的化合物(吡咯[2，1-b]1，3-噁嗪)；X表示O并且A表示X与载有基团R6和R7的原子之间的键的化合物(吡咯并[2，1-b]噁唑)；未提及的残基具有上述给出的定义。
如果[a]-环系为5元不饱和残基，R4和R6可特别表示化学键，例如在吡咯嗪、吡咯并[2，1-b]咪唑和吡咯并[2，1-b]噻唑中。如果[a]-环系为6元不饱和残基，R4和R6可特别表示化学键，例如在吡咯并[2，1-b]1，3-噻嗪、吡咯并[2，1-b]1，3噁嗪或5，6-二氢吲嗪中，R8和R10也可表示化学键，例如在吲嗪中。
未限制于具体的[a]-环系，根据本发明的具体实施方案，可以相同或不同的基团R4-R11表示氢或烷基。根据本发明的另一具体实施方案，基团R4、R5、R6和R7中至少有一个表示羟基烷基、特别是羟甲基，其它基团彼此独立地表示H或烷基。根据该实施方案，优选R4为羟基烷基、特别是羟甲基，R5为H或烷基，R6和R7彼此独立地为H或烷基。根据本发明的另一具体实施方案，基团R8和R9之一表示H、烷基、羟基烷基或烷氧基烷基，另一个表示羟基、烷氧基、羧基或酰氧基，或者R8和R9以及它们连接的C原子一起表示羰基基团。
6，7-二氢-5H-吡咯嗪是特别有用的化合物，该化合物即具有下述取代基定义的式(I)化合物其中X表示CR8R9，A表示X与载有基团R6和R7的原子之间的键，可以相同或不同的基团R4、R5、R6、R7、R8和R9具有如上给出的定义，优选表示氢或烷基。特别优选具有下述取代基定义的6，7-二氢-5H-吡咯嗪其中R4至R9为氢，或者基团R4至R9中的至少一个或两个(例如R6和/或R7)表示烷基，特别是甲基。
根据本发明的一个重要方面，特别有用的化合物是具有如下取代基定义的式(I)化合物其中基团R1、R2和R3中的第一和第二个基团、优选R1和R2、彼此独立地表示选自芳基和芳香杂环残基的富π-电子体系，特别是苯基，并且是未取代的或被一个或多个取代基取代，所述取代基特别是彼此独立地选自卤素、烷基和卤代烷基、特别是CF3的取代基，R1优选为未取代的苯基，R2优选为4-位取代的苯基。
根据本发明的另一重要方面，特别有用的化合物是具有如下取代基定义的式(I)化合物其中基团R1、R2和R3中的第三个基团、优选R3、表示酸性残基，例如COOH或其中Y为COOH且B优选表示亚烷基的B-Y，或者表示酸性残基的前体，例如其中Y为四唑基的B-Y。
特别优选以式(Ia)表示的[6-(4-氯苯基)-2，2-二甲基-7-苯基-2，3-二氢-1H-吡咯嗪-5-基]-乙酸(ML3000)、其生理可接受的盐和衍生物、例如生理可水解酯的用途。
生理可接受的盐包括酸或碱加成的盐。
酸加成盐例如是式(I)化合物与无机酸或有机酸的盐，所述的无机酸例如是盐酸、硫酸、硝酸或磷酸，所述的有机酸特别是羧酸，例如乙酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、苹果酸、杏仁酸、抗坏血酸、马来酸、富马酸、葡糖酸或磺酸如亚甲基磺酸、苯磺酸和甲苯磺酸等。
碱加成盐例如是式(I)化合物与无机碱或有机碱的盐，所述的无机碱例如是氢氧化钠或氢氧化钾，所述的有机碱例如是乙醇胺、二乙醇胺或三乙醇胺等。
生理可接受的衍生物具体包括式(I)化合物的前药，其可在体内转化为式(I)化合物或其活性形式(代谢产物)。所述衍生物的实例为其中基团R1、R2和R3中的第三个基团表示酸性残基的式(I)化合物的可水解酯，例如其烷基酯(基团R1、R2和R3中的第三个基团含官能团COO-烷基)、芳烷基酯(基团R1、R2和R3中的第三个基团含官能团COO-烷基芳基，例如COO-烷基苯基)、新戊酰氧基甲基酯、乙酰氧基甲基酯、苯并呋喃酮基酯、茚满基酯和甲氧甲基酯。
如此处所用的术语“质子泵抑制剂”可理解为指那些可抑制胃H+，K+-ATP酶活性的化合物。该活性可通过众所周知的测定法测定，例如测定无机磷酸盐从底物ATP中释放的方法(Hongo T.等人，J.J.Pharmacol.52295(1990))。优选的化合物为半数最大抑制浓度(IC50)为50μM或更少的化合物。使用IC50为5μM或更少的化合物可能更具有本发明的优点。特别有效的式(I)质子泵抑制剂的IC50为0.5μM或更少。根据其它方面，优选那些能可逆抑制质子泵的式(I)化合物。根据其它方面，还优选那些质子泵抑制活性在pH约3至8范围内基本不受pH影响的式(I)化合物。
可通过众所周知的筛选法如高效筛选法(HTS)从式(I)化合物中鉴别出这些化合物。典型的方法包括测试众多待测式(I)化合物中的每种化合物对胃H+，K+-ATP酶的抑制，并确定那些具有预期活性的化合物。可以理解的是，该质子泵抑制活性化合物也可具有抗炎活性。
因此，根据一个具体方面，本发明涉及选自式(I)化合物的质子泵抑制剂的应用。这些式(I)化合物可有效用作胃酸分泌抑制剂。
更通常意义的说，该化合物可用于预防和治疗哺乳动物、特别是人中的胃酸相关性病症，例如胃炎、十二指肠炎、溃疡、特别是胃溃疡和十二指肠溃疡、反流性食管炎和佐-埃二氏综合征。胃炎可以是糜烂性或非糜烂性的急性或慢性胃炎。具体地，该化合物可用作抗溃疡药。
另外，该化合物可用于治疗其它期望胃酸分泌抑制效应的紊乱、特别是胃肠紊乱，所述紊乱例如是在NSAID疗法的患者、非溃疡消化不良患者、综合胃食管返流疾病患者和胃泌素瘤患者中的紊乱。本发明的化合物也可在术前和术后用于重症监护患者或急性上胃肠道出血患者、以防止胃酸抽吸和预防及治疗应激性溃疡。此外，本发明的化合物还可用于治疗牛皮癣、螺旋杆菌属感染和与前述疾病有关的疾病。本发明的化合物也可用于治疗哺乳动物、包括人的炎症疾病。
根据一个具体方面，本发明涉及胃保护性式(I)化合物的应用。此处所用的术语“胃保护性”可理解为指那些具体能降低胃肠粘膜、特别是胃粘膜对局部损伤的敏感性的化合物。所述局部损伤可由刺激物引起。根据本发明的一个具体方面，所述刺激物可选自NSAID和COX-抑制剂。
溃疡形成中最初出现的肉眼可见的病理学现象是胃上皮细胞单层的侵蚀。随着所述侵蚀的发展，胃粘膜整体变薄，胃肠粘膜片段穿透肌粘膜。
由某些因素如NSAID和幽门螺旋杆菌引起的正常粘膜防御和修复的变化在消化性溃疡的病理学中也起着重要作用。
根据本发明的一个方面，式(I)化合物的应用指治疗或预防由酸介导的粘膜损伤以及续发的溃疡。所述应用具体指治疗或预防随其出现的病理学变化。
本发明提供了可特别用于患有或将来可能患有胃肠粘膜伤害、损伤或损害的哺乳动物的治疗方法、可用于此的药物组合物和适宜包装。
使用式(I)化合物比使用其它NSAID具有特别的优点，所述的NSAID尤其指那些更确定投入使用的、确实可加剧粘膜损伤的发展、特别是胃溃疡发展的NSAID，尤其是当长期应用时。令人惊奇的是，式(I)化合物可用于治疗或预防该粘膜损害、特别是胃溃疡。
式(I)化合物可防止和逆转最终导致粘膜破坏的疾病过程的能力意味着其可广泛用于对哺乳动物安全和有效的治疗，特别是那些需要长期抗炎治疗的哺乳动物。
如此处所用的术语“哺乳动物”指大量不同种类的任何哺乳动物，优选指人、猫、狗或马。
根据本发明，对需要该治疗的哺乳动物治疗或预防胃酸相关性病症包括，给予所述哺乳动物用于治疗或预防所述疾病的、治疗有效量的一种或多种的式(I)化合物。
所述治疗或预防特别包括改善、减轻、积极治疗、逆转或预防任何胃酸相关性病症，例如胃肠道粘膜、特别是胃粘膜的伤害、损伤或损害。此处所用的关于给予本发明的胃保护性化合物的表达“治疗或预防”意欲指所述给药的治疗目的和由所述给药实际获得的治疗结果。如上述所讨论的，通过给予所述化合物获得的治疗程度可以从显著减轻疾病过程的改善开始，直到超出对疾病的积极治疗，包括逆转疾病过程。
除了给予一种或多种式(I)化合物，治疗或预防胃酸相关性病症还可包括还可给予一种或多种基本上选自抗菌活性药物、其它胃保护性药物如其它质子泵抑制剂和H2受体拮抗剂、抗酸剂、藻酸盐和胃肠蠕动促进剂的药物。
与抗菌活性药物的联合对治疗幽门螺旋杆菌阳性(抗幽门螺旋杆菌疗法)的个体特别有用。将抗菌活性药物如克拉霉素与甲硝唑或阿莫西林的加合与质子泵抑制剂联合可较快地根治幽门螺旋杆菌感染。其它可提及的适宜抗菌活性药物为β-内酰胺类抗生素，例如青霉素类(如苄青霉素、苯氧甲基青霉素、丙匹西林、阿度西林、双氯西林(dicioxacillin)、氟氯西林、苯唑西林、阿莫西林、巴氨西林、氨苄西林、美洛西林、哌拉西林或阿洛西林)、头孢菌素类(如头孢羟氨苄、头孢克洛、头孢氨苄、cefalexim、头孢呋辛(cefuroxim)、头孢他美、头孢羟氨苄、头孢布烯、头孢泊肟(cefpodoxim)、头孢替坦、头孢唑林、头孢哌酮(cefoperazon)、头孢唑肟、ceftaxim、头孢他啶(ceftazidim)、头孢孟多(cefamandol)、头孢吡肟(cefepim)、头孢西丁、头孢地嗪(cefodizim)、头孢磺啶、头孢曲松(ceftriaxon)、头孢替安或头孢甲肟(cefmenoxim)或其它β-内酰胺类抗生素(例如氨曲南、氯碳头孢或美罗培南)；酶抑制剂如舒巴坦，四环素类如四环素、土霉素、米诺环素或多西环素，氨基糖甙类如妥布霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素、阿米卡星、奈替米星、巴龙霉素或大观霉素；酰胺醇类(ampherlcols)，例如氯霉素或甲砜霉素；林可霉素和大环内酯类抗生素，例如克林霉素、林可霉素、红霉素、克拉霉素、螺旋霉素、罗红霉素或阿奇霉素；多肽类抗生素，例如collstin、多粘菌素(polymixin)B、替考拉宁(teioplanin)或万古霉素，旋转酶抑制剂，例如诺氟沙星、西诺沙星、环丙沙星、吡哌酸、依诺沙星、萘啶酸(nalidixie acid)、培氟沙星、氟罗沙星(fieroxacin)或氧氟沙星；硝基咪唑类，例如甲硝唑；或其它抗生素，例如磷霉素或夫西地酸(fucidic acid)，其中这些抗菌活性物质可单独给药或与另一抗菌活性药物联合交替给药。
下述化合物可首先作为其它质子泵抑制剂提及奥美拉唑、兰索拉唑、雷贝拉唑、来明拉唑、奈帕拉唑和泮托拉唑。
本发明的式(I)化合物也可与其它治疗活性成分联合，所述的其它治疗活性成分对本领域技术人员来说是显而易见的，并且通常能根据给予本发明的治疗药物的情形而确定。所述其它治疗活性成分的实例包括但不限制于上述药物。
所述其它治疗活性成分的实例包括抗炎剂，特别是NSAID和其它类的抗炎剂，其实例包括例如H1-受体拮抗剂；激肽-B1和B2受体拮抗剂；前列腺素抑制剂如PGD-、PGF-PGl2-和PGE-受体拮抗剂；促凝血素A2(TXA2-)抑制剂；PAF-受体拮抗剂；加有多个亲水基的金硫基形式的金；免疫抑制剂，例如环孢霉素A、硫唑嘌呤和甲氨蝶呤；抗炎糖皮质激素，例如地塞米松；广谱杀虫抗生素，例如阿凡曼菌素和米尔倍霉素；青霉胺；羟氯喹；抗痛风药如秋水仙碱，黄嘌呤氧化酶抑制剂如别嘌呤醇，以及排尿酸剂如丙磺舒、磺吡酮和苯溴马隆。
根据本发明的一个具体方面，一种或多种式(I)化合物可与引起溃疡的抗炎剂联用。如果抗炎剂可抑制环氧合酶、特别是环氧合酶1，从而可抑制某些前列腺素、特别是前列腺素E2的生成，则该抗炎剂可引起溃疡。NSAID类可引起溃疡的抗炎剂优选与一种或多种式(I)化合物联合。所提及的可引起溃疡的具体抗炎剂为乙酰水杨酸(ASA)、水杨酸钠、扑热息痛、非那西丁、布洛芬、酮洛芬、吲哚美辛、氟比洛芬、双氯芬酸、萘普生、吡罗昔康、特丁非隆、依托度酸、萘丁美酮、替尼达普、阿氯芬酸(alcofenac)、安替比林、氨基比林(amimopyrine)、安乃近、animopyrone、保泰松、氯非宗、羟布宗、prexazone、阿扎丙宗、苄达明、布可隆、辛可芬、氯尼辛、ditrazol、依匹唑、非诺洛芬、floctafeninl、氟芬那酸、甘氨苯喹、吲哚洛芬、甲氯芬那酸、甲灭酸、尼氟酸、salidifamides、舒林酸、舒洛芬、托美丁、萘丁美酮、噻拉米特、普罗喹宗、丁苯羟酸、氟咪唑、替诺立定、替美加定、氨苯砜、二氟尼柳、贝诺酯、磷酸柳酯、芬氯酸、依托度酸、芬替酸、噻氯咪索、卡洛芬、芬布芬、奥沙普秦、噻洛芬酸、吡洛芬、非普拉宗、吡罗昔康、舒多昔康、伊索昔康、celecoxib、替诺昔康。根据一个具体实施方案，乙酰水杨酸可与一种或多种式(I)化合物联合。
相应地，该类型药物治疗提供了一种可有效治疗炎症疾病而同时不伤胃的方法。这在引起溃疡的抗炎剂的给药涉及胃肠道如口服给药或者涉及胃肠炎症疾病时特别具有优点。
根据本发明所采用的治疗方案，可以考虑将式(I)化合物与其它常规给药方案中所用的药物联合给药。同样可以想象，联合给药可以表现为多种不同的形式，并且仍然包括在本发明的范围内。例如，式(I)化合物可仅仅与一种或多种其它欲联合配制的治疗药物一起配制成含所有形成联合形式的药物的适宜剂型，例如口服片。
改变不同药物的半衰期可由制剂制备领域的技术人员通过将所述药物制成具有不同释放时间、以便能得到相对恒定剂量的控释制剂来调节。可作为剂型使用的含药餐也可根据制剂领域众所周知的原则来制备，其中联合所用的药物仅仅共同存在于食物组分的混合物中。本发明也可考虑共同给药，其中可通过同时给予联合中欲给予的药物来进行联合给药。该共同给药甚至可通过不同的剂型和给药途径来完成。本发明还考虑了与剂量不同但规律和持续的方案一致的联合的应用，其中所涉及的预期血药浓度在被治疗哺乳动物中可维持不变，即使组成联合的个体药物不是同时对所述哺乳动物给药。所有这些联合均在设计和给药领域的技术范围内。
当式(I)化合物用作本发明的方法和组合物中的活性成分时，可将其制成标准的药物剂型。因此，本发明还涉及含可药用载体和如上定义的抑制质子泵治疗有效量的式(I)化合物的药物组合物。例如，它们可用于全身或局部给药、口服或非胃肠道应用，并且为此目的可与常规的药物辅料、稀释剂和辅剂联合，所述的药物辅料、稀释剂和辅剂例如是有机和无机惰性载体物质，如水、明胶、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、滑石粉、植物油、胶和聚亚烷基二醇等。这些药物制剂可以采用固态形式，例如片剂、胶囊和特别是与适于哺乳动物的可口饮食联合或与之混合的形式；或者它们可以以液态形式给药，所述的液态形式例如是溶液和酏剂。可加入的药物辅料和辅剂包括防腐剂、抗氧剂、抗微生物剂和其它稳定剂；润湿剂、乳化剂和悬浮剂，以及抗结块剂；芳香剂和着色剂；改善可压性或使活性成分延迟释放、缓释或控释的组合物；改变药物制剂的渗透压或用作缓冲剂的各种盐。可成功使用的具体剂型包括ML3000用于静脉注射的5％混合微胶粒溶液、3％的可口糊剂和口服片。
如上定义的治疗有效量的式(I)化合物可对所述哺乳动物全身给药，其中所述全身给药包括(1)对适宜的身体组织或腔注射或输注含所述化合物的适宜液态形式的药物组合物，所述液态形式例如是用于动脉内、皮内或经皮(包括皮下)、或者椎管内、特别是鞘内转运的含水溶液、乳剂或悬浮液，更常规的是其肌内或静脉内注射；(2)对适宜的身体组织或腔滴注含所述化合物的适宜固态形式的药物组合物，所述药物组合物例如含生物可相容和生物可蚀解物质的基质，基质中分散有胃保护性式(I)化合物的固体颗粒，或者如果可能，可包有胃保护性式(I)化合物的小球或隔离小室，用作延迟释放、缓释和/或控释固体植入剂；或(3)摄入或给予含化合物的适于透皮转运的固态或液态形式的药物组合物，例如用于口服给药的透皮贴剂或皮下植入剂。
可制备此处所描述的大量剂型，以便使活性成分从所述剂型中控释、缓释和/或延迟释放。
根据本发明，ML3000一种有用的控释剂型为在单剂量口服给予5mk/kg药物后第二天的大部分时间内维持ML3000血浆浓度高于100ng/mL的剂型。根据本发明，优选的ML3000口服控释剂型为当给予同一剂量的所述速释剂型和控释剂型后，可维持ML3000血浆浓度高于100ng/mL的时间比ML3000速释剂型维持相应血浆浓度的时间长的剂型。
含ML3000剂量为2.5和5mk/kg的速释剂型可分别维持ML3000血浆浓度高于100和200ng/mL达8小时。
优选用于全身给药的口服剂型为固态和液态，所述的固态剂型例如是可口的口服组合物如可口的速溶华夫饼、片剂、胶囊和胶囊形片剂等，所述的液态剂型例如是溶液、悬浮液和乳剂等。可使用适于对哺乳动物口服给药的特定类型的药物组合物，其包括但不局限于转运可至所治疗哺乳动物舌下的口服糊剂、可通过掺入哺乳动物的食物中转运的颗粒形式、以及活性成分随咀嚼而吸收的咀嚼形式或在所治疗哺乳动物的咀嚼活动中通过从不被吸收的咀嚼物体中释放而转运活性成分的咀嚼形式。
如上定义的所述治疗有效量的式(I)化合物也可对所述哺乳动物局部给药，其中所述的局部给药包括(1)对胃酸相关性病症的局部部位注射或输注含所述式(1)化合物的适于转运的液态形式的药物组合物，所述药物组合物含有可使所述化合物延迟释放、控释和/或缓释到所述局部部位的成分；或者作为其中所述组合物可储存所述化合物、之后可延迟释放、缓释和/或控释所述化合物的药物储库使用；或者(2)滴注含所述化合物的适于转运的作为固体植入剂使用的固体形式的药物组合物，所述组合物可选能使所述化合物延迟释放、缓释和/或控释至所述局部部位。
注射剂也可由含胃保护性式(I)化合物的药物组合物制成，其中药物组合物为延迟释放、控释和/或缓释的形式。这些认可的组合物的制剂可以是使用可溶蚀基质或系列包衣使式(I)化合物以预期速率、或者如果希望也可以以可变速率来持续释放的固态、半固态、凝胶或其它液态/固态联合形式。术语“延长释放”和“长效”等可用于描述这些制剂。所有这些可使用生物可降解聚合物如各种纤维质聚合物、天然物质如玉米淀粉以及硬脂酸镁的各种联合，以使得基质中所含的式(I)化合物缓慢和/或均一地分散。
治疗或预防胃酸相关性病症有效量的式(I)化合物对所治疗哺乳动物以毫克每千克所述哺乳动物体重每天、即mg/kg/天表达的剂量给药。此处所用的用语“每天”不应当解释为任何具体剂型必须每天对所治疗哺乳动物给药。用语“每天”仅仅指作为全部单元的一部分来确定所给予的胃保护性化合物剂量的方便但随意的最小时间段。剂量、即式(I)化合物用于治疗或预防胃酸相关性病症的治疗有效量通常为约0.1mg/kg/天至约20.0mg/kg/天，优选为约0.1mg/kg/天至约12.0mg/kg/天，更优选为约0.5mg/kg/天至约10.0mg/kg/天，最优选为约0.5mg/kg/天至约8.0mg/kg/天。ML3000的典型剂型和用量包括以2.5-5.0mg/kg体重/天的剂量速率口服给予ML3000。佐-埃二氏综合征患者需要有专门的要求，例如需要高于普通患者的剂量。
对熟练技术人员来说必要的是，不仅要确定优选的给药途径、相应的剂型和用量，而且所述技术人员还必须确定剂量方案、即剂量频率。一般而言，最有可能选择每天一次(s.i.d.)和每天两次(b.i.d.)的剂量，前者可提供更快和更深远的治疗，而后者可提供较浅但更长时间的治疗。然而，这种概括没有考虑所涉及的胃酸相关性病症的特定类型、所用的特定治疗药物及其药物动力学、以及所涉及特定患者(哺乳动物)的重大变化。对于市场上认可的产品，已经通过为获得这种许可而进行的临床研究的结果提供了大量这种信息。在其它情形下，这些信息可参考技术人员的知识和技能、根据本说明书中的教导和指导直接获得。所得结果也可与对认可产品以同样测定法进行相应评价获得的数据相关。
也可预期，根据本发明还可提供一种适于商业用于对需要该治疗的哺乳动物治疗或预防胃酸相关性病症的包装，所述包装含有适宜的外部纸盒和放于其中的内部容器；所述容器中装有如上文所述的式(I)化合物的适宜剂型；并且在所述纸盒或容器上印刷有指导和信息材料，其可贴在所述纸盒或放于纸盒中的容器上，或者作为所述纸盒或容器整体的一部分显示，所述的指导和信息材料以可向读者传达指导和信息材料的语言说明，当对处于胃酸相关性病症状态下的哺乳动物给予所述活性成分时，其可改善、减轻、积极治疗、逆转或预防任何胃肠道粘膜的伤害、损伤或损害。在一个优选的实施方案中，含如上所述的纸盒和容器的所述包装符合与用于治疗动物的药物的销售和使用有关的所有常规要求，特别包括所述的指导和信息材料。
也可预期，根据本发明还可提供上文所描述类型的包装，所述包装包括所述的适宜容器；所述容器中装有式(I)化合物的口服剂型；并且所述容器上印刷有如上所述的指导和信息材料。
本发明的方法还可定义为包括下述两个基本步骤(1)确定候选哺乳动物处于目前和将要患有胃酸相关性病症的状态，由此证实所述哺乳动物需要该治疗；于是(II)对所述哺乳动物给予用于治疗或预防所述胃酸相关性病症的治疗有效量的胃保护性式(I)化合物，以治疗和预防所述疾病。步骤(II)的不同方面已经在上文中详细讨论过。相应地，现在将详细讨论步骤(I)的各个方面。
就诊断而言，最好确定接受本发明治疗的候选哺乳动物的状态，所述候选哺乳动物根据该哺乳动物目前或将来是否处于胃酸相关性病症的情形而选出。此处所用的用语“目前或将来”意欲指，根据下述讨论的作出该决定的方法，可能确定候选哺乳动物目前需要该治疗，或者是非常可能或预期在不久的将来需要该治疗。预期需要治疗可通过测定阳性因素而确定，所述阳性因素根据技术人员经验可直接导致胃酸相关性病症状态。例如，技术人员可根据对哺乳动物的临床检查确定其患有胃酸相关性病症，并且可根据其它证据进一步证实该结论，其中通过所述的其它证据和根据已经建立的测定方法，可以确定哺乳动物将在短期内患有胃酸相关性病症。
目前或将来患有所述胃酸相关性病症、因而需要该治疗的哺乳动物的状态可具体通过对候选哺乳动物临床检查和胃肠道评价的阳性结果来确定，例如通过非侵袭性方法来确定，所述的非侵袭性方法包括纤维光导内窥镜检查、磁性共振成像(MRI)和放射成像法如钡双重对比x-射线法。其它临床诊断和体症包括对哺乳动物胃粘膜直接检查获得的诊断和体症，例如通过活组织检查法。
附图简述
图1ML3000对猪微粒体H，K-ATP酶活性的影响；图2奥美拉唑对猪微粒体H，K-ATP酶活性的影响；图3pH对ML3000抑制胃H，K-ATP酶的影响；图4ML3000的稀释对胃H，K-ATP酶抑制的影响；图5花生四烯酸对猪微粒体H，K-ATP酶活性的影响；图6PGE2对猪微粒体H，K-ATP酶活性的影响；图7TEDBC对猪微粒体H，K-ATP酶活性的影响；图8ZD-2138对猪微粒体H，K-ATP酶活性的影响；图9乙酰水杨酸对猪微粒体H，K-ATP酶活性的影响；图10NS398对猪微粒体H，K-ATP酶活性的影响；图11萘普生对猪微粒体H，K-ATP酶活性的影响；图12吲哚美辛对猪微粒体H，K-ATP酶活性的影响；图13白三烯B4对猪微粒体H，K-ATP酶活性的影响；图14白三烯D4对胃H，K-ATP酶的影响；图15ML3000对家兔胃腺中组胺刺激的酸化作用的影响；图16ML3000对家兔胃腺中福斯高林刺激的酸化作用的影响；图17ML3000对人胃上皮细胞IL-8分泌基线的影响；图18ML3000对IL-1-β刺激的人胃上皮细胞IL-8分泌基线的影响；图19ZD2138对人胃上皮细胞IL-8分泌基线的影响；图20ZD2138对IL-1-β刺激的人胃上皮细胞IL-8分泌基线的影响；
优选实施例的说明为了进一步说明本发明的方法和组合物，在下述段落中给出了典型方法的具体描述性实施例，所述的典型方法可用于实现所述方法。然而，所述实施例仅仅意欲解释本发明，而不应当以任何方式限制本发明，为此目的，附加了目前的权利要求。
实施例1ML3000对胃微粒体K+-刺激的、SCH28080-敏感性H，K-ATP酶活性的影响。
方法从猪胃粘膜匀浆中差速离心制备得微粒体胃H，K-ATP酶。简而言之，在屠宰场于猪死后1小时内取得其胃部，用冰冷的0.25M蔗糖冲洗，将胃底部与贲门和胃窦分开。以下所有操作均在4℃下进行。粘膜用饱和NaCl冲洗，表面的粘液和表皮细胞用纸巾擦掉。从下层结缔组织刮取粘膜，并悬浮(10％w/v)于隔离缓冲液(0.25M蔗糖、20mM HEPES，pH7.4，1mM EDTA，1mM苯甲磺酰氟)中，在Tissumizer(Tekmar，Cincinnati，OH)中以最大功率以2×10秒的脉冲搅动。匀浆于20,000g离心30分钟，上清液于105g离心1小时。将所得微粒体的沉淀物在隔离缓冲液中重新混悬，加入不连续梯度的7％w/v菲柯尔(Ficoll)和34％蔗糖溶液中(均在隔离缓冲液中)。于32,500rpm(Sorvall AH 629旋转器)离心3小时后，将从7％w/v菲柯尔(Ficoll)界面回收的微粒体块(G1)再次混悬于15mM的PIPES-Tris，pH6.8中，浓度为10mg/ml，用60％冷蔗糖溶液稀释至1∶1，分成0.5ml的等份冷冻干燥，于-70℃下保存。G1微粒体的直径为约0.1微米，富集有H.K.-ATP酶活性，经SDS-PAGE检测，在94kDa条带的蛋白质含量超过80％。微粒体ATP水解活性以从底物ATP中释放的无机磷酸盐来定量，在ML3000和一系列大量其它化合物的梯度浓度(10-9M至10-4M)下测定。用于测定猪胃微粒体膜中K+-刺激的ATP酶活性的反应混合物含有5μg膜蛋白质、100mM Tris-乙酸盐，pH7.0、1mMMgCl2、1mM NaNa、0.1mM EGTA、5μM ATP(γ-32P-ATP，10Ci/mmol，NEN，波士顿，MA)、0-10mM KCl和0-100μM SCH28080。于37℃孵育20分钟后，加入10％w/v活性炭(Sigma)和5.5％w/v三氯乙酸并剧烈涡旋振荡来阻断反应，在4℃时于14,000g离心10分钟。闪烁计数法测定上清液中无机磷酸盐(γ-32P)的含量。当微粒体ATP酶在有和无特异性胃H，K-ATP酶抑制剂SCH28080的情形下存在差异时，计算特异性H，K-ATP酶的活性，以mmol Pi/mg蛋白质/hr表示；将数据绘图显示了H，K-ATP酶活性的抑制百分率作为式(I)化合物浓度的函数。有标准差柱的图表给出了三次独立分析法的批间分析数据变异，在所述的三次独立分析法中，每次均测定了ATP酶在三个独立但等同的反应条件下的活性。无标准差柱的图表显示了H，K-ATP酶在至少三个独立分析法之一中的三次独立但等同的反应条件下的平均活性；给出了这些情形下的典型数据。
结果ML3000呈剂量依赖性地抑制胃H，K-ATP酶活性，半数最大抑制浓度(IC50)为15μM(图1)。将ML3000的抑制活性与经典的质子泵抑制剂(PPI)取代的苯并咪唑奥美拉唑的抑制活性进行比较。图2显示了在与图1等同的测定条件下奥美拉唑对H，K-ATP酶活性的影响；预计奥美拉唑的IC50为1μM。这些数据表明，ML3000和奥美拉唑在胃H，K-ATP酶活性方面表现出相同的IC50，至少在特定条件下特别用于体外分析的装置中如此。奥美拉唑在胃质子泵活性方面已公布的IC50根据测定的条件为470nM至36μM(3、4、5)。至于其它PPI，吡考拉唑的IC50为2μM(6)，雷贝拉唑的IC50为72μM(3)，兰索拉唑的IC50为2.1μM(7)。
已公布的PPI对微粒体H，K-ATP酶较宽范围的IC50反映了化合物酸化、以允许形成巯基活性的亚砜中间体的机理必要性，所述的亚砜中间体接着能不可逆地将H，K-ATP酶亚单元半胱氨酸残基衍生化，导致酶抑制。奥美拉唑在中性或较高pH时对胃H，K-ATP酶没有抑制作用。微粒体囊泡标本的离子强度可广泛变化，而离子强度反过来可影响胞内pH被H，K-ATP酶降低的程度，并且因此而影响进入囊泡的奥美拉唑被酸化和激活的程度。可选择地，将奥美拉唑事先在体外酸化可确保其产生抑制活性，并且在使用离子可渗透微粒体H，K-ATP酶标本进行的分析法中是必要的。出于这个原因，图2中给出的奥美拉唑抑制作用的数据是通过将奥美拉唑酸化至pH为6.1、并且在相同pH下与酶孵育30分钟而得到的(8)。
为了确定ML3000是否具有相同的酸活化性质，将半数最大抑制浓度的ML3000滴定至不同pH，并且测定其对H，K-ATP酶活性的影响。如图3所示，ML3000酸化对其抑制H，K-ATP酶的性质没有显著影响。这些数据表明，虽然ML3000和奥美拉唑对H，K-ATP酶而言具有相同的IC50，但ML3000与奥美拉唑不同，不需要酸化来产生抑制活性。
假定PPI是H，K-ATP酶活性的不可逆抑制剂，可共价结合催化α-亚基，那么可以确定ML3000对H，K-ATP酶的抑制是可逆还是不可逆的。用最大抑制浓度的ML3000处理富含胃H，K-ATP酶的微粒体，接着用大量过量的缓冲液将ML3000的浓度由100μM稀释至3.3μM。图4中显示的结果表明，ML3000的稀释可使H，K-ATP酶的活性恢复，这与ML3000可逆性抑制H，K-ATP酶的活性相一致，即ML3000在体外没有共价衍生胃H，K-ATP酶的任何亚单元。
花生四烯酸和前列腺素E2(PGE2)也可呈剂量依赖性地抑制H，K-ATP酶的活性，其IC50分别为30μM和45μM(图5和6)。PGE2数据与以前发现PGE2对猪胃H，K-ATP酶没有抑制作用的研究(9)相矛盾。在该研究中所用的具体ATP酶测定法的差异可能能解释该偏差。既然ML3000和花生四烯酸均为阴离子型两亲化合物，那么它们的抑制作用可产生于其与H，K-ATP酶亚单元结合位点之间的特异性相互作用，或者产生于H，K-ATP酶相关性微粒体膜脂之间的较低特异性的疏水性相互作用，或者是两种因素的结合。
既然ML3000也表现出5-脂肪氧合酶抑制作用，研究了两种脂肪氧合酶抑制剂对微粒体H，K-ATP酶活性的影响。图7表明，2-(1-噻吩基)乙基3，4-二羟亚苄基氰基乙酸酯(TEDBC)(一种强有效的5-、12-和15-脂肪氧合酶抑制剂)可抑制微粒体H，K-ATP酶活性，其IC50为3.3μM。相反的，5-脂肪氧合酶特异性抑制剂6-((3-氟-5-(甲氧基-3，4，5，6-四氢-2H-吡喃-4-基)苯氧基)甲基)喹啉(ZD-2138)对H，K-ATP酶活性的影响最小(于10-5M时约20％抑制)(图8)。这些数据与胃微粒体12-和15-脂肪氧合酶在H，K-ATP酶活化中起作用相一致，或者与TEDBC和可改变酶构型、从而改变酶活性的H，K-ATP酶亚单元之间的直接相互作用一致。
为了比较ML3000和其它NSAID对H，K-ATP酶的抑制作用，测定了乙酰水杨酸、萘普生、吲哚美辛和选择性COX-2抑制剂NS398对质子泵活性的影响。所有这四种NSAID在浓度达10-4M时对微粒体H，K-ATP酶活性均没有抑制作用(乙酰水杨酸时为10-3M)(图9、10、11和12)。以前已经报道了吲哚美辛在较高浓度时可抑制胃H，K-ATP酶(Ki＝0.67×10-3M)(10)。该数据将ML3000与其它NSAID在对胃H，K-ATP酶活性的抑制作用方面清楚地区分开。
为了确定ML3000对胃H，K-ATP酶的抑制是否能反映化合物对猪胃微粒体中认可的功能性白三烯代谢途径的影响，研究了白三烯B4和D4对H，K-ATP酶活性的影响。由于溶解度问题没有研究LTB4或LTD4浓度高于1μM时的情形。如图13和14所示，白三烯在生理学浓度(10-9-10-8μM)没有表现出对H，K-ATP酶的任何抑制活性；仅仅在高于10-7μM的非生理学浓度时可显著减小H，K-ATP酶的活性。
实施例2ML3000和其它化合物对胃壁细胞组胺-刺激的酸聚集的影响。
方法通过基底粘膜的链霉蛋白酶/胶原酶消化、接着以本身已知的方式在不连续Nycodenz梯度中富集细胞，从纽西兰白兔中分离出胃壁细胞。在96孔滴定板中用Durapore膜评价胃壁细胞中氨基比林的聚集。简而言之，将细胞用[14C]-氨基比林预先孵育，接着在将100,000细胞/200μl每孔于有或无100μM组胺的情形下孵育30分钟之前，将其于有或无测试化合物的情形下孵育15分钟。所有测定重复进行四次。以当存在KSCN(反映非特异同位素捕获)时氨基比林在细胞中的聚集减去氨基比林在未处理细胞中的聚集作为基底氨基比林聚集。将数据绘图显示了组胺刺激的细胞酸聚集的抑制百分率作为化合物浓度的函数。
结果ML3000呈剂量依赖性地抑制组胺刺激的家兔胃壁细胞酸聚集，其半数最大抑制浓度(IC50)为40μM(图15)。ML3000也呈剂量依赖性地抑制福斯高林刺激的家兔胃壁细胞酸聚集，其半数最大抑制浓度(IC50)约为45μM(图16)。这些数据表明，ML3000可影响由组胺H2受体活化引起的cAMP活动的胃壁细胞酸分泌机理的下游。这些数据与ML3000对胃壁细胞酸分泌的抑制相一致，所述抑制由于ML3000与胃H，K-ATP酶之间的直接相互作用而产生。然而，ML3000在微粒体囊泡(15μM)和单独胃壁细胞(40-45μM)中IC50的差异表明，质膜的渗透限制可减慢ML3000进入胃壁细胞胞内H，K-ATP酶隔室的速率。
同样，如通过微粒体H，K-ATP酶所发现的，其它NSAID如乙酰水杨酸、萘普生和NS398(至浓度为10-4M)对由单独家兔胃壁细胞产生的酸聚集没有影响。
实施例3ML3000对人胃腺癌(AGS)细胞中IL-1β引起的和幽门螺旋杆菌引起的IL-8分泌的影响。
方法将AGS细胞与测试化合物一起孵育，用IL-1β激发，接着通过酶联免疫吸附法测定进入培养介质的IL-8分泌；将数据绘图显示了未刺激或刺激的IL-8分泌的抑制百分率作为化合物浓度的函数。
结果没有用IL-1β刺激，并且没有ML3000或ZD2138时，AGS细胞(5×104个细胞每μl培养介质)可分泌IL-8长达6小时，浓度为～225pg/ml(图17和19)。当用IL-1β(20ng/ml)刺激时，AGS细胞在6小时内IL-8分泌增加至～27倍，达浓度为6000pg/ml(图18和20)。ML3000可抑制IL-8分泌基线(图17)和IL-1β刺激的IL-8分泌(图18)，其IC50分别为0.75μM和30μM。
对微粒体H+，K+-ATP酶活性没有影响的5-脂肪氧合酶特异性抑制剂(ZD-2138)呈剂量依赖性地抑制由AGS细胞产生的IL-8分泌基线(图19)，其IC50为～0.4μM。相反，ZD-2138对IL-1β刺激的AGS细胞IL-8分泌没有影响(如20)。由于AGS细胞不表达H+，K+-ATP酶，因此以上所证实的ML3000对H+，K+-ATP酶的抑制并不是该模型中对IL-1β分泌抑制的基础。
由于IL-8是胃粘膜中很强的炎症介质，因此，发现ML3000可有效抑制胃上皮细胞中IL-8分泌基线和IL-1β刺激的IL-8分泌表明该抑制作用不会被ML3000的5-脂肪氧合酶抑制活性影响。
参考文献1.Laufer S，Tries S，Augustin J，Dannhardt G.可抑制环氧合酶和5-脂肪氧合酶的新的吡咯嗪衍生物的药理学性质。Arzneimittelforschung 1994；44629-36。
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权利要求
1.具有式(I)的一种或多种化合物及其光学异构体、生理可接受的盐和衍生物在制备用于抑制胃质子泵的药物组合物中的应用， 其中，X表示CR8R9、S、O、NR12或C(O)；A表示CR10R11或X与载有基团R6和R7的原子之间的键；基团R1、R2和R3中的第一个基团表示芳基，其是未取代的或被一个或多个彼此独立地选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、芳氧基、卤代烷氧基、烷硫基、羟基、硝基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、氨磺酰基、N-烷基氨磺酰基、N，N-二烷基氨磺酰基、烷基磺酰氨基和烷基磺酰-N-烷基氨基的取代基取代；或者芳香或非芳香的、单环或双环的、任选与苯环稠合的、含1、2或3个彼此独立地选自N、O和S的杂原子杂环基团，所述杂环基团是未取代的或被一个或多个彼此独立地选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、芳氧基、卤代烷氧基、烷硫基、羟基、硝基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、氨磺酰基、N-烷基氨磺酰基、N，N-二烷基氨磺酰基、烷基磺酰氨基和烷基磺酰-N-烷基氨基的取代基取代；基团R1、R2和R3中的第二个基团表示烷基，其是未取代的或被一个或多个彼此独立地选自卤素、环烷基、烷氧基、三氟甲氧基、羟基和三氟甲基的取代基取代；环烷基，其是未取代的或被一个或多个彼此独立地选自卤素、烷基、卤代烷基、环烷基、烷氧基、卤代烷氧基和羟基的取代基取代；芳基，其是未取代的或被一个或多个彼此独立地选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、芳氧基、卤代烷氧基、烷硫基、羟基、硝基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、氨磺酰基、N-烷基氨磺酰基、N，N-二烷基氨磺酰基、烷基磺酰氨基和烷基磺酰-N-烷基氨基的取代基取代；或者芳香或非芳香的、单环或双环的、任选与苯环稠合的、含1、2或3个彼此独立地选自N、O和S的杂原子杂环基团，所述杂环基团是未取代的或被一个或多个彼此独立地选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、芳氧基、卤代烷氧基、烷硫基、羟基、硝基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、氨磺酰基、N-烷基氨磺酰基、N，N-二烷基氨磺酰基、烷基磺酰氨基和烷基磺酰-N-烷基氨基的取代基取代；基团R1、R2和R3中的第三个基团表示H、烷基、卤代烷基、羟基烷基、-CHO、-COOH、卤素、氰基、烷基磺酰基、氨磺酰基或B-Y；其中，B表示亚烷基或亚烯基，其是未取代的或被羟基或烷氧基取代；Y表示-COOH、SO3H、OPO(OH)2、OP(OH)2、-CHO或四唑基；或者基团R1、R2和R3中的第二和第三个基团与它们连接的原子一起表示饱和或不饱和的环烷基；R4-R11可以相同或不同，表示氢、烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、羟基、COOH或酰氧基，其中，邻位基团也可表示化学键，或者偕基团也可与它们连接的C原子一起表示羰基或环烷基；R12表示氢、烷基或苯基。
2.根据权利要求1所述的应用，其中基团R1、R2和R3中的第一和第二个基团彼此独立地表示取代或未取代的芳基或芳香杂环残基。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其中基团R1、R2和R3中的第三个基团表示COOH或B-Y，其中Y为COOH，B表示亚烷基。
4.根据权利要求1所述的应用，其中所述的式(I)化合物为式(Ia)的[6-(4-氯苯基)-2，2-二甲基-7-苯基-2，3-二氢-1H-吡咯嗪-5-基]-乙酸、其生理可接受的盐或生理可水解的酯
5.根据权利要求1所述的应用，其中胃质子泵为H+/K+-ATP酶。
6.根据权利要求1所述的应用，用于抑制胃酸分泌。
7.如权利要求1至4中任一项所定义的一种或多种式(I)化合物在制备用于在需要该治疗的哺乳动物中降低胃粘膜对局部损伤的敏感性的药物组合物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其中的局部损伤由刺激物引起。
9.根据权利要求8所述的应用，其中的刺激物选自NSAID和COX-抑制剂。
10.如权利要求1至4中任一项所定义的一种或多种式(I)化合物在制备用于治疗或预防胃酸相关性病症的药物组合物中的应用。
11.根据权利要求10所述的应用，用于治疗或预防胃粘膜损伤。
12.根据权利要求10所述的应用，用于治疗或预防糜烂性胃炎。
13.根据权利要求10所述的应用，用于治疗或预防非糜烂性胃炎。
14.根据权利要求10所述的应用，用于治疗或预防胃溃疡。
15.根据权利要求10所述的应用，用于治疗或预防十二指肠溃疡或胃溃疡。
16.根据前述权利要求中任一项所述的应用，其中，除了一种或多种式(I)化合物外，还包括一种或多种选自抗菌活性药物、其它胃保护性药物如其它质子泵抑制剂和H2受体拮抗剂、抗酸剂、藻酸盐和胃肠蠕动促进剂的药物。
17.(i)如权利要求1至4中任一项所定义的一种或多种式(I)化合物，和(ii)用于治疗的一种或多种可导致形成溃疡的抗炎剂的组合。
18.权利要求17所述的组合，其中可导致形成溃疡的抗炎剂选自乙酰水杨酸(ASA)、水杨酸钠、扑热息痛、非那西丁、布洛芬、酮洛芬、吲哚美辛、氟比洛芬、双氯芬酸、萘普生、吡罗昔康、特丁非隆、依托度酸、萘丁美酮、替尼达普、阿氯芬酸、安替比林、氨基比林、安乃近、animopyrone、保泰松、氯非宗、羟布宗、prexazone、阿扎丙宗、苄达明、布可隆、辛可芬、氯尼辛、ditrazol、依匹唑、非诺洛芬、floctafeninl、氟芬那酸、甘氨苯喹、吲哚洛芬、甲氯芬那酸、甲灭酸、尼氟酸、salidifamides、舒林酸、舒洛芬、托美丁、萘丁美酮、噻拉米特、普罗喹宗、丁苯羟酸、氟咪唑、替诺立定、替美加定、氨苯砜、二氟尼柳、贝诺酯、磷酸柳酯、芬氯酸、依托度酸、芬替酸、噻氯咪索、卡洛芬、芬布芬、奥沙普秦、噻洛芬酸、吡洛芬、非普拉宗、吡罗昔康、舒多昔康、伊索昔康、celecoxib、替诺昔康。
19.药物组合物，含有(i)如权利要求1至4中任一项所定义的一种或多种式(I)化合物和(ii)用于治疗的一种或多种可导致形成溃疡的抗炎剂，并可任选地含有(iii)可药用载体。
20.权利要求19的组合物，其中可导致形成溃疡的抗炎剂选自乙酰水杨酸(ASA)、水杨酸钠、扑热息痛、非那西丁、布洛芬、酮洛芬、吲哚美辛、氟比洛芬、双氯芬酸、萘普生、吡罗昔康、特丁非隆、依托度酸、萘丁美酮、替尼达普、阿氯芬酸、安替比林、氨基比林、安乃近、animopyrone、保泰松、氯非宗、羟布宗、prexazone、阿扎丙宗、苄达明、布可隆、辛可芬、氯尼辛、ditrazol、依匹唑、非诺洛芬、floctafeninl、氟芬那酸、甘氨苯喹、吲哚洛芬、甲氯芬那酸、甲灭酸、尼氟酸、salidifamides、舒林酸、舒洛芬、托美丁、萘丁美酮、噻拉米特、普罗喹宗、丁苯羟酸、氟咪唑、替诺立定、替美加定、氨苯砜、二氟尼柳、贝诺酯、磷酸柳酯、芬氯酸、依托度酸、芬替酸、噻氯咪索、卡洛芬、芬布芬、奥沙普秦、噻洛芬酸、吡洛芬、非普拉宗、吡罗昔康、舒多昔康、伊索昔康、celecoxib、替诺昔康。
全文摘要
通过使用式(I)化合物来进行对哺乳动物胃质子泵的抑制，其中各变量具有本说明书中给出的含义。在该治疗中优选的式(2)化合物可改善、减轻、积极治疗、逆转或预防任何胃粘膜的伤害、损伤或损害，例如胃粘膜损伤和胃溃疡。
文档编号C07DGK1652771SQ03811246
公开日2005年8月10日 申请日期2003年5月16日 优先权日2002年5月17日
发明者A·J·斯莫尔卡, C·E·哈蒙德, S·古普塔 申请人:默克勒有限公司