一种主动靶向阿霉素-两亲性硫酸软骨素胶束的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种含有叶酸靶向基团的、由硫酸软骨素的亲水集团作为亲水链段、长链脂肪酸作为疏水链段的两亲性多糖—叶酸-脂肪酰-硫酸软骨素的制备方法，及其在阿霉素类抗肿瘤药物制剂方面的应用。叶酸-脂肪酰-硫酸软骨素的平均分子量（ M w）为3,100~53, 000Da，通式如下：其中x为碳原子的个数，是10~22的整数；y为双键的个数，为0~6的整数；n为8~150的整数； O -烷基取代度为5％~50％；叶酸取代度为0.5-2%。
【专利说明】-种主动靶向阿霉素-两亲性硫酸软骨素胶束的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种载有阿霉素的叶酸受体靶向两亲性硫酸软骨素纳米胶束的制备 方法。
【背景技术】
[0002] 阿霉素又称多柔比星（doxorubicin)，属于蒽环类抗肿瘤抗生素，在临床上已有 四十余年的应用历史。其结构式如下：
【权利要求】
1. 一种阿霉素-叶酸受体靶向两亲性硫酸软骨素纳米胶束，其特征在于，叶酸受体靶 向两亲性硫酸软骨素平均分子量0/W)为3, ΚΚΓ53, OOODa，其化学结构式如下：
其中X为碳原子的个数，是ΚΓ22的整数；y为双键的个数，为(Γ6的整数；η为8~150 的整数烷基取代度为5%?50 % ;叶酸取代度为0. 1-5% ; 优选的，x=16, y=3 烷基取代度为5%?20% ;叶酸取代度为0. 5-2% ; 上述的阿霉素-叶酸受体靶向两亲性硫酸软骨素纳米胶束，其制备方法如下： 根据权利要求1所述的两亲性硫酸软骨素衍生物，其特征在于，x=16,y=3 烷基取代 度为5%?20 % ;叶酸取代度为0. 5-2%。
2. 权利要求1或2所述的一种阿霉素-叶酸受体靶向两亲性硫酸软骨素纳米胶束的制 备方法，其特征在于，步骤如下： (1)将分子量为3, 00(T40, OOODa的硫酸软骨素溶于甲酰胺中，加入二甲基氨基吡啶 (DMP)溶解后，搅拌下滴加脂肪酰氯，2(T70°C搅拌l~8h，透析去除未反应的试剂及溶剂，真 空干燥即得微黄色的脂肪酰-硫酸软骨素固体粉末；其中，硫酸软骨素、脂肪酰氯、DMAP、甲 酰胺的质量比为1:2.5?0.07:1?0.1 :20?10; (2) 叶酸加入DMSO中，滴加3-5滴三乙胺后搅拌使其完全溶解，待用；脂肪酰-硫酸软 骨素溶于甲酰胺中，加入N，N'_二环己基碳二亚胺（DCC)、DMAP溶解后，避光搅拌反应lh，将 硫酸软骨素的羧基活化，滴加叶酸DMSO溶液，20-50°C下避光反应24h ;反应结束后，离心除 去1，3_二环己基脲（D⑶）沉淀，得粘稠橙红色上清液；取上清乙醇沉淀，离心收集沉淀，无 水乙醇反复洗涤沉淀至上清液不在显黄色为止；透析去除未反应的试剂及溶剂，〇. lmol/L 的Na2CO3-NaHCO3 (pH 10)缓冲溶液中避光透析去除未反应的叶酸，去离子水中避光透析除 去缓冲溶液，95%乙醇溶液中继续透析48h，得沉淀，真空干燥后即得叶酸-脂肪酰-硫酸软 骨素；其中，脂肪酰-硫酸软骨素、DMAP、DCC、甲酰胺、叶酸、DMSO的质量比为1:1?0. 1:0. 5? 0. 1:20^10:0. Γ〇. 01:10^10 ； (3) 称取阿霉素溶于DMSO中，叶酸-脂肪酰-硫酸软骨素溶于甲酰胺后，将阿霉素 DMSO 溶液滴入叶酸-脂肪酰-硫酸软骨素甲酰胺溶液中搅拌均匀，去离子水避光透析，冷冻干 燥，即得阿霉素叶酸-脂肪酰-硫酸软骨素纳米胶束。
3. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1)中，长链脂肪酰氯为、棕 榈酰氯、棕榈一烯酰氯、十七烷酰氯、十七碳一烯酰氯、硬脂酰氯、油酰氯、亚油酰氯、花生酰 氯、花生一烯酰氯、花生二烯酰氯中的一种或几种。
4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1)中，硫酸软骨素为猪硫 酸软骨素、牛硫酸软骨素、鲨鱼硫酸软骨素、鸡硫酸软骨素、鸭硫酸软骨素中的一种或几种。
5. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2)中，后处理的具体方法 是： 离心转速为5000-10000转/分钟，时间为20-40min ; 透析的具体方法是：〇. lmol/L的Na2CO3-NaHCO3 (pH 10)缓冲溶液中避光透析48h去除 未反应的叶酸，去离子水中避光透析48h除去缓冲溶液，95%乙醇透析得沉淀，95%乙醇、甲 醇或丙酮洗涤2次，45°C下真空干燥l(T20h。
6. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1)中，脂肪酰氯与硫酸软 骨素的质量比为2. 7、. 07 :1，硫酸软骨素的分子量为3, 000-40, OOODa。
7. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2)中，叶酸与硫酸软骨素 的质量比为〇. 1?〇. 01 :1。
8. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1) (2) (3)中，所述透析 袋的截留分子量为l〇〇(Tl〇〇〇〇,透析是指利用该透析袋对去离子水透析48h。
9. 权利要求1或2所述的一种叶酸受体靶向两亲性硫酸软骨素衍生物作为药物载体的 应用。
10. 权利要求1或2所述的一种阿霉素两亲性硫酸软骨素纳米胶束在肿瘤疾病治疗物 中的应用。
【文档编号】A61K47/36GK104368005SQ201410584680
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年10月28日 优先权日:2014年10月28日
【发明者】肖玉良, 武夏明, 韩俊芬 申请人:泰山医学院