芪板青颗粒的制备方法
【专利摘要】本发明涉及兽用中药【技术领域】，尤其是芪板青颗粒的制备方法及芪板青颗粒用于抗应激中的药物的用途。所述方法，包括如下步骤：A)以5:5:5:10:5:3的比例称量黄芪、板蓝根、金银花、蒲公英、大青叶和甘草六位中药后进行回流提取，得到溶液I；B)第一次浓缩所述溶液I得到溶液II，并对其进行沉淀处理，然后分离所述溶液II中的沉淀物和上清液，将所述上清液第二次浓缩得到浸膏a；C)将所述浸膏a进行过柱处理，得到溶液III，然后经第三次浓缩得到浸膏b；D)制粒。本发明还提供了芪板青颗粒在制造用于抗应激中的药物的用途。
【专利说明】芪板青颗粒的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及兽用中药【技术领域】，尤其是芪板青颗粒的制备方法及芪板青颗粒用于 抗应激中的药物的用途。
【背景技术】
[0002] 理想的中药提取技术是生产"安全、高效、稳定、可控"的现代中药产品的关键。目 前应关注的问题是，提取新技术的研发多限于单味药，应加强复方中药提取适应性和药效 等研究；提取机制认识方面，定性解释或推测较多，需要充分必要的证据支持；多数技术的 成熟度还不高，缺乏足够的中试和工业数据支持，需要进一步加强这方面的研发；各种提取 方法都有其优缺点，尚缺乏一种理想的中药提取方法；多是单个提取技术的研发，不同提取 技术的集成和比较研究不够，缺乏与其他诸如分离技术等的集成研究，应引起重视。另外， 中药提取技术有很多种，选择时应从药效、药理、工艺、工程、经济、环保、循环再利用等角度 综合考虑为好。理想的中药提取技术应具有提取效率1?、有效成分损失小、提取物临床疗效 好且质量稳定、工艺简便且操作连续自动、安全以及提取时间短，且经济、绿色和环保。
[0003] 芪板青颗粒组方为兽药国家标准汇编中兽药地方标准上升国家标准第二册中的 药物。为现有地标升国标药物，芪板青颗粒有黄芪、板蓝根、金银花、蒲公英、大青叶和甘草 六味中药组成。目前，文献和专利报道的芪板青颗粒的提取方法比较简单，一般为水煮法， 有效成分的提取率较低。因此，亟需开发出一种能够提高其提取率的方法。
[0004] 此外，应激学说由加拿大学者Selye(1936年）首次提出并定义为：应激是指机体 对外界或内部的各种非常刺激所产生的非特异性应答反应的总和，这些非常刺激可指温度 变化、电离辐射、精神刺激、过度疲劳、感染以及中毒等。
[0005] 热应激是鸡对于其生理不利的热环境产生的非特异性应答反应的总和，常伴随有 鸡生理与行为上的变化，如生长速度、饲料转化率、成活率和免疫反应等，甚至引起鸡的死 亡。鸡是恒温动物，当环境温度超过其舒适区上限时发生热应激。以鸡为例来说，其等热范 围为16-26°C，但肉鸡和蛋鸡不尽相同。一般认为肉鸡的等热范围为10_27°C，蛋鸡的等热 范围为13-25°C。
[0006]目前国内外还未有文献报道芪板青颗粒具有抗应激的作用，因此有必要明确芪板 青颗粒在抗应激中的应用。
【发明内容】
[0007] 本发明开发出了一种开发出一种能够提高芪板青的提取率的制备方法，所述方 法，包括如下步骤:A)以5:5:5:10:5:3的比例称量黄芪、板蓝根、金银花、蒲公英、大青叶和 甘草六位中药后进行回流提取，得到溶液I;B)第一次浓缩所述溶液I得到溶液II，并对其 进行沉淀处理，然后分离所述溶液II中的沉淀物和上清液，将所述上清液第二次浓缩得到 浸膏a;C)将所述浸膏a进行过柱处理，得到溶液III，然后经第三次浓缩得到浸膏b;D)制 粒。
[0008] 在一个【具体实施方式】中，在所述步骤A)中，将所述中药粉碎后，按照所述六位中 药与10%的乙醇以1:10比例混匀，浸泡0.5-2小时，100-120°C进行回流提取2次，每次提 取2-3小时。
[0009] 在一个【具体实施方式】中，在所述步骤B)中的所述溶液II的浓度为1-1. 65g/mL， 所述沉淀处理为醇沉，所述分离为在2-8°C放置10-16小时后离心分离，所述浓缩为蒸发 浓缩。优选所述沉淀使用终浓度为75-85%的乙醇进行，所述分离为在3-6°C放置14-16 小时后离心分离。其中所述醇沉是指在所述溶液II中加入乙醇，直至所述乙醇的浓度为 70-90 %时进行沉淀。
[0010] 在一个【具体实施方式】中，在所述步骤C)中，所述过柱处理选用的柱料为D101、 HPD100和HPD450树脂中的一种，优选DlOl树脂。
[0011] 在一个【具体实施方式】中，在所述步骤C)中，所述浸膏a的pH值为3-5，所述浸膏a 的浓度为〇. 25-1. 00g/mL，所述浸膏a的吸附速度为I. 0-2.OBV/h;优选所述浸膏a的pH值 为4-5,所述浸膏a的浓度为0. 50-1. 00g/mL，所述浸膏a的吸附速度为1. 0-1. 5BV/h。
[0012] 在一个【具体实施方式】中，在所述步骤C)中，吸附在所述柱料上的所述浸膏a选用 30%、50 %和70%的乙醇依次洗脱。
[0013] 在一个【具体实施方式】中，在所述步骤C)之后和所述步骤D)之前还包括步骤I)，将 所述步骤C)中的所述浸膏b和所述步骤B)中的沉淀物混合并进行制粒。
[0014] 本发明还提供了根据如上所述的方法制备的芪板青颗粒在制造用于抗应激中的 药物的用途。
[0015] 在一个【具体实施方式】中，所述芪板青颗粒在制造用于抗热应激中的药物的用途； 优选所述芪板青颗粒在制造用于家禽的抗热应激中的药物的用途；特别优选所述芪板青颗 粒在制造用于鸡的抗热应激中的药物的用途。
[0016] 由于热应激对鸡生产性能的影响是多方面的，因此在炎热来临时，应预先采取措 施，避免热应激，缓解热应激带来的不良影响。芪板青颗粒对高温造成的鸡群热应激有很好 的缓解作用，因而具有对抗热应激对鸡群造成的不良影响的作用。并且本发明的制备方法 得到的芪板青颗粒优于传统的水煎煮提取法制备得到的芪板青颗粒。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例对本发明做以下详细说明。
[0018] 实施例1
[0019] 按照黄苗250g、板蓝根250g、金银花250g、蒲公英500g、大青叶250g、甘草150g 称量此6味药材，用粉碎机粉碎2-5分钟（min)，取粉碎后的复方药材粉末1650g，在复方药 材粉末中加入10%的乙醇，所述药材粉末与10%的乙醇的比例为1:10,浸泡〇. 5小时（h)， l〇〇°C进行回流提取2次，每次提取2h，得到溶液I(提取液）。溶液I经浓缩得到溶液II， 溶液II的浓度为I. 65g/mL，然后向溶液II中缓慢加入乙醇，直至乙醇的终浓度为85%，醇 沉，4°C放置12h。3500rpm/min离心10min，取沉淀4°C保存备用。醇沉后取上清液用旋转 蒸发仪蒸发得到浸膏a，其浓度为0. 25-1. 00g/mL。浸膏a备用。
[0020] 大孔吸附树脂型号选择根据提取物理化性质和大孔吸附树脂的吸附性能，选用 D101、HPD100和HPD450等3种型号的大孔吸附树脂进行试验。临用前，选用不能过65目 筛的大孔吸附树脂，按说明书方法预处理，即应该用95%乙醇浸泡10-24h，再用95%乙醇 洗至洗脱液加入水中不显浑浊即可，然后用水洗至无醇，即可上样备用。
[0021] 比吸附量考察：取浸膏a200mL，加入大孔吸附树脂10g，25°C振荡24h(频率60次 /分钟）滤过，过滤后的滤液为溶液IV。分别测定溶液IV中绿原酸和咖啡酸的质量浓度。 并重复5次。质量浓度参考2010版兽药典的方法，用HPLC进行检测，计算比吸附量，其中， 浸膏a浓度为每毫升溶液中所含有的生药量，单位为g/mL，比吸附量=(浸膏a的质量浓 度一溶液IV的质量浓度）X200/树脂量。
[0022] 检测方法：按照2010版中华人民共和国兽药典二部蒲公英中咖啡酸的测定方法 进行测定。
[0023] 含量测定：利用高效液相色谱法测定绿原酸的含量：按照《中国药典》2010年版一 部金银花项下力方法操作。色谱条件色谱柱为PhenomenexIunaC18 (4. 6X250mm，5μm); 柱温25°C;流动相乙睛-0. 4%磷酸（13:87);检测波长327nm;流速I.OmL/min，理论塔板数 按绿原酸峰计算应不低于1000。
[0024] 结果，D101、HPDlOO和HPD450大孔吸附树脂对绿原酸的比吸附量分别为5. 13、 4. 84和4. 61mg/g，以DlOl大孔吸附树脂的吸附力量最大。
[0025] 静态解吸法：利用DlOl树脂吸附浸膏a溶液，然后取充分吸附浸膏a的DlOl树 月旨，依次加入30^^50^^70%的乙醇，解吸平衡后，测定滤液中吸附成分的浓度，计算解吸 率。解吸率=解吸液浓度X解吸液体积/吸附在树脂上的含量。咖啡酸和绿原酸的解吸 附量分别为94. 5%和92. 1%。
[0026] 考察pH值、浸膏a浓度（上柱药液）和吸附速度分别对提取物中的咖啡酸和绿原 酸的影响：按照L9(34)正交试验设计表的条件进行试验，以咖啡酸或绿原酸保留率为评价 指标，A代表pH值，B代表浸膏a浓度（mg/mL)，C代表吸附速度（BV/h)，因素水平设计见表 1。正交试验设计结果见表2,并分别以绿原酸保留率和咖啡酸保留率为指标进行方差分析 (见表3和表4)。其中，
[0027] 绿原酸保留率=(醇洗脱液绿原酸质量浓度/上柱前样品溶液绿原酸质量浓 度）X体积X100 %
[0028] 咖啡酸保留率=(醇洗脱液咖啡酸质量浓度/上柱前样品溶液咖啡酸质量浓 度）X体积X100 %
[0029]表1
[0030]
【权利要求】
1. 芪板青颗粒的制备方法，包括如下步骤： A) 以5:5:5:10:5:3的比例称量黄芪、板蓝根、金银花、蒲公英、大青叶和甘草六位中药 后进行回流提取，得到溶液I ; B) 第一次浓缩所述溶液I得到溶液II，并对其进行沉淀处理，然后分离所述溶液II中 的沉淀物和上清液，将所述上清液第二次浓缩得到浸膏a ; C) 将所述浸膏a进行过柱处理，得到溶液III，然后经第三次浓缩得到浸膏b ; D) 制粒。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤A)中，将所述中药粉碎后，按 照所述六位中药与10%的乙醇以1:10比例混匀，浸泡〇. 5-2小时，100-120°C进行回流提取 2次，每次提取2-3小时。
3. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在所述步骤B)中的所述溶液II的浓 度为1-1. 65g/mL，所述沉淀处理为醇沉，所述分离为在2-8°C放置10-16小时后离心分离， 所述浓缩为蒸发浓缩。
4. 根据权利要求1至3任意一项所述的方法，其特征在于，在所述步骤C)中，所述过柱 处理选用的柱料为D101、HPD100和HPD450树脂中的一种，优选选用D101树脂。
5. 根据权利要求1至4任意一项所述的方法，其特征在于，在所述步骤C)中，所述 浸膏a的pH值为3-5,所述浸膏a的浓度为0. 25-1. 00g/mL，所述浸膏a的吸附速度为 1. 0-2. OBV/h ;优选所述浸膏a的pH值为4-5,所述浸膏a的浓度为0? 50-1. 00g/mL，所述浸 膏a的吸附速度为1. 0-1. 5BV/h。
6. 根据权利要求1至5任意一项所述的方法，其特征在于，在所述步骤C)中，吸附在所 述柱料上的所述浸膏a选用30 %、50 %和70 %的乙醇依次洗脱。
7. 根据权利要求1至6任意一项所述的方法，其特征在于，在所述步骤C)之后和所述 步骤D)之前还包括步骤I)，将所述步骤C)中的所述浸膏b和所述步骤B)中的沉淀物混合 并进行制粒。
8. 根据权利要求1至7所述的方法制备的芪板青颗粒在制造用于抗应激中的药物的用 途。
9. 根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述芪板青颗粒在制造用于抗热应激中 的药物的用途；优选所述芪板青颗粒在制造用于家禽的抗热应激中的药物的用途；特别优 选所述芪板青颗粒在制造用于鸡的抗热应激中的药物的用途。
【文档编号】A61P39/00GK104398565SQ201410689735
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月25日 优先权日:2014年11月25日
【发明者】张许科, 刘兴金, 潘贵珍 申请人:洛阳惠德生物工程有限公司