含莼菜的复方皮肤外用制剂及制备方法和应用与流程

本发明属于皮肤外用制剂领域，具体涉及一种含莼菜的复方皮肤外用制剂原料、原液及其制备方法和应用。

背景技术：

在评价皮肤外用制剂（特别是化妆品制剂）是否优良时，除保湿型之外，诸如抗氧化性和清除自由基性能也是评价的重要指标。兼具多重优良功效的皮肤外用制剂，是研究人员的重要研究内容。

现有皮肤外用制剂一般都含有少量的有机溶剂（如乙醇），有机溶剂的使用虽然方便了制剂中有效成分(如抗氧化剂和抗自由基剂）的提取，但也造成了生产成本高企以及可能会对皮肤造成不利影响。

由于很多药食同源植物对皮肤伤害较小，将药食同源植物作为皮肤外用制剂一直受人关注。然而，由于（1）各种药食同源植物用于制备皮肤外用制剂的有效成分含量差异很大；（2）药食同源植物成分较多，提取难度较大；（3）药食同源植物容易腐败，其成分不易控制；因此，如何选择合适的药食同源植物、稳定其成分构成并高效的提取出其有效成分制成优良的皮肤外用制剂，成为亟待解决的问题。

中药材是中华民族的瑰宝，将其运用于皮肤外用制剂，特别是化妆品制剂，是本领域研究人员多年来的追求。然而，由于皮肤外用制品有着特殊要求，如保湿型、抗氧化性、不刺激性等，以及对中草药的相关开发尚未十分深入，造成中草药的应用受到了限制的不良现状。

因此，如何选择药食同源植物和中草药进行复配制成优良的皮肤外用制剂是一项极具挑战的研究。

技术实现要素：

针对现有技术的缺点和本领域亟需解决的问题，本发明的目的之一在于提供一种皮肤外用制剂原料组合物，该组合物按重量份计，包括：

莼菜粉 10-90份

甘草 10-50份

银耳 5-90份；

所述莼菜粉是新鲜莼菜经匀浆处理后喷雾干燥所得；

所述皮肤外用制剂包括面膜、精华液、乳液、乳膏、凝胶制剂。

优选的，该组合物按重量份计，包括：

莼菜粉 30-60份

甘草 10-30份

银耳 20-60份。

优选的，所述莼菜粉是将新鲜莼菜洗净后，加入体积不超过莼菜叶所占体积的纯水，利用匀浆机于4000rpm下处理30 min，再于60 ℃下进行喷雾干燥所得。

本发明的另一个目的在于提供一种皮肤外用制剂原液，该原液按重量份计，包括：

莼菜提取液 10-90份

甘草提取液 10-50份

银耳提取液 5-90份；

所述莼菜提取液中，多糖含量至少为0.6 mg/ml，莼菜总多酚至少为1.2×10^-4mg/ml 不含色素鞣制及有机溶剂；所述甘草提取液中甘草酸至少为2.08×10^-3mg/ml；所述银耳提取液中银耳多糖至少为2.5×10^-3mg/ml。

如本发明的实施例所示，本发明原液具有十分优秀的保湿型，比现有优秀的商用制品的保湿性能更为优秀且具备十分显著的抗氧化性和清除自由基的能力。

银耳多糖和莼菜多糖配合使用，多糖的协同作用增强其保湿润肤功效，同时提供更多营养，银耳的加入，使得制得的皮肤制剂品质更好，皮肤亲和力增强，粘度和透明度增加，保湿效果增加。甘草起到抗炎美白作用，与莼菜配伍使用，其抗炎抗氧化活性增强，兼具温和的美白护肤作用。甘草与银耳皆为温性，味甘无毒，莼菜性寒味甘无毒，三者配伍后投料量减少，而护肤作用得到加强，避免提取物浓度高影响产品的品质，同时达到预期效果。

优选的，该原液按重量份计，包括：

莼菜提取液 30-60份

甘草提取液 10-30份

银耳提取液 20-60份。

本发明的另一个目的在于提供制备上述原液的方法，该方法包括如下步骤：

（1）莼菜粉制备：将新鲜莼菜进行匀浆再进行喷雾干燥，得到莼菜粉，贮存；

（2）用水对甘草粉、银耳粉、步骤（1）所得莼菜粉分别进行提取，分别获得甘草提取液、银耳提取液、莼菜提取液；控制莼菜提取液中，多糖含量至少为0.6 mg/ml，莼菜总多酚至少为1.2×10^-4mg/ml 不含色素鞣制及有机溶剂；控制甘草提取液中甘草酸至少为2.08×10^-3mg/ml；控制银耳提取液中银耳多糖至少为2.5×10^-3mg/ml；按重量份计，将莼菜提取液10-90份、甘草提取液10-50份、银耳提取液5-90份混合；

或者，按重量份计，将5-90份甘草粉、10-50份银耳粉、10-90份步骤（1）所得的莼菜粉作为原料加入水中，水的体积加入量至少为原料干重所占体积的40倍，于60 ℃下保温1-2小时，再于至少为60℃温度下提取0.5-2小时；

（3）将步骤（2）所得物于至少6000 rpm下，离心10-30 min，取上清液；

（4）用步骤（2）和步骤（3）所述方法对步骤（3）所得沉淀物进行提取和分离，取上清液，并与步骤（3）所得上清液合并；

（5）将步骤（4）所得物过聚酰胺柱，用去离心水洗脱；

（6）将步骤（5）流出液过滤，浓缩至原料干重所占体积的20倍，即得。

国内对莼菜的研究主要集中在对莼菜多糖粗制品提取工艺，而提取方法较为复杂，且易于提取出色素鞣质等杂质，而多糖粘度大，难以纯化，从而影响产品质量。莼菜附着的胶质采摘一段时间后容易脱落，由于含有水分较多，极易变质，传统的烘干方法耗时长且致使莼菜叶变色严重，冷冻干燥效率低且成本高。新鲜嫩叶胶质质量最好，又以夏季莼菜产量最高，如何将夏季大量优质的莼菜保存且不破坏其胶质是亟待解决的问题。

本发明的对莼菜多糖的提取率至少可以达到0.6 mg/ml，而且不使用有机溶剂，也不含有色素鞣制等杂物，不仅生产成本低，更重要的是特别适合作为制备皮肤外用制剂的原料。

优选的，步骤（1）中，所述莼菜粉是将新鲜莼菜洗净后，加入体积不超过莼菜叶所占体积的纯水，利用匀浆机于4000rpm下处理30 min，再于60 ℃下进行喷雾干燥所得；步骤（5）中，聚酰胺柱的填料体积为提取液3-4倍，流速为1.0 ml/min，1倍柱体积的去离子水洗柱，收集流出液；步骤（6）中过滤方法为依次用200目纱布、滤纸、5μm滤膜过滤；浓缩方法包括旋转蒸发、超滤、透析。

步骤1中，新鲜莼菜含有大量水分（约97%），体外胶质丰富（965g体积为1000ml），加入少量纯水即可，加入量大于一倍体积时，不利于均浆和喷干。均浆4000rpm，30min即可将叶片破碎，粉碎度适中。60℃干燥不会破坏其成分，而干燥效率液较为理想。

步骤2中，莼菜和银耳比例略多，甘草比例控制在30%以下，甘草过多，影响提取液色泽。由于莼菜和银耳吸水量大，多糖吸水溶胀形成粘稠溶液，故40倍体积及以上提取，低于该体积提取液粘稠，不利于有效成分溶出和后续处理。提取前用温水浸泡，使得干粉吸水溶胀，尤其是莼菜粉和银耳粉，有利于多糖的溶出，再均浆提取。

离心参数，提取液粘度高，6000rpm才能将叶片与清液分离，需6000rpm及以上，10min可达到理想分离效果。

聚酰胺可吸附其中鞣质，并吸附效果优于大孔树脂和阴阳离子树脂，通过吸附量考察，填料量：上样体积为3:1时，达到较好的吸附效果，流速1.0 ml/min，此流速下，可充分吸附，高于此流速，脱鞣质不充分，鞣质检测为阳性，且样液粘度高，很难达到高流速。

流出液浓缩至20倍体积，粘度和有效成分浓度适中。

优选的，步骤（2）中，按重量份计，甘草粉为10-30份，银耳粉为20-60份，莼菜粉为30-60份。

本发明的另一个目的在于提供利用本发明原液在制备皮肤外用制剂上的应用。皮肤外用制剂包括面膜、精华液、乳液、乳膏、凝胶制剂。

应当理解的是，由于本发明具有十分优秀的功能，本发明适用于一切需要保湿或抗氧化功能或清除自由基的皮肤外用制剂，并不局限本发明所列举的。

所述面膜按质量百分数计包括20-50%原液、0.05-5%透明质酸、0.5-5%霍霍巴油；所述乳液按质量百分数计包括20-50%原液、0.05-5%透明质酸、0.5-5%霍霍巴油、1-10%卵磷脂；所述精华液按质量百分数计包括20-50%原液、0.05-5%透明质酸。

本发明的有益效果：

1、原料易得、价格低廉；

2、具有十分优秀的保湿性能、抗氧化性能和清除自由基性能；

3、制备工艺简单、无需昂贵设备，生产成本低廉；

4、不含有有机溶剂、色素鞣制，对人体健康不构成任何伤害。

附图说明

图1为莼菜提取液的红外光谱图；

图2为本发明的保湿性能效果图；

图3为本发明的抗氧化性能效果图。

具体实施方式

以下通过实施例的具体实施方式对本发明的上述内容作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。

实施例1

1. 莼菜粉的制备：选取新鲜莼菜1000g，清水洗净，体积为1000ml，均浆机4000rpm，30min，60℃喷雾干燥，得到莼菜粉，备用。

2 原液提取方法：

a 莼菜粉10g、甘草粉10g、银耳粉10g加入纯水1200ml，60℃保温溶胀1小时，均浆提取2小时。

b离心（6000rpm，10min），收集上清液，沉淀再次提取，合并上清液。

c上清液过聚酰胺柱，去离子水洗脱。

d 流出液过滤，使用200目纱布过滤，再滤纸、5微米滤膜过滤，超滤浓缩至20倍干样重量体积600ml，即得。制得的原液为透明粘稠溶液，略带乳光，粘度高。

实施例2

1. 莼菜粉的制备：选取新鲜莼菜1000g，清水洗净，体积为1000ml，均浆机4000rpm，30min，60℃喷雾干燥，得到莼菜粉，备用。

2 原液提取方法：

a 莼菜粉15g、甘草粉5g、银耳粉10g加入纯水1200ml，60℃保温溶胀1小时，均浆提取2小时。

b离心（6000rpm，10min），收集上清液，沉淀再次提取，合并上清液。

c上清液过聚酰胺柱，去离子水洗脱。

d 流出液过滤，使用200目纱布过滤，再滤纸、5微米滤膜过滤，超滤浓缩至20倍干样重量体积600ml，即得。制得的原液为透明粘稠溶液，略带乳光，粘度高。

实施例3

1. 莼菜粉的制备：选取新鲜莼菜1000g，清水洗净，体积为1000ml，均浆机4000rpm，30min，60℃喷雾干燥，得到莼菜粉，备用。

2 原液提取方法：

a 莼菜粉20g、甘草粉10g、银耳粉10g加入纯水1600ml，60℃保温溶胀1小时，均浆提取2小时。

b离心（6000rpm，10min），收集上清液，沉淀再次提取，合并上清液。

c上清液过聚酰胺柱，去离子水洗脱。

d 流出液过滤，使用200目纱布过滤，再滤纸、5微米滤膜过滤，超滤浓缩至20倍干样重量体积800ml，即得。制得的原液为透明粘稠溶液，略带乳光，粘度高。

实施例5

除所用莼菜粉为90g、甘草粉为50g以及银耳粉为90g之外，其余与实施例一致。

实施例6

除所用莼菜粉为10g、甘草粉为10g以及银耳粉为5 g之外，其余与实施例一致。

实施例7

保湿精华液制作。

配方如表1。

表1

实施例8

保湿乳液制作。

配方如表2。

表2

实施例9

凝胶型面膜制作。

配方如表3。

表3

实施例10

莼菜粉加入纯水，20倍干重体积，加热提取2小时；离心（6000rpm及以上，10min），收集上清液，沉淀再次提取，合并上清液；上清液过滤，浓缩至20倍干样重量体积，即得莼菜凝胶提取液。

甘草粉加入纯水，20倍干重体积，加热提取2小时；离心（6000rpm及以上，10min），收集上清液，沉淀再次提取，合并上清液；上清液过滤，浓缩至20倍干样重量体积，即得莼菜凝胶提取液。

银耳粉加入纯水，20倍干重体积，加热提取2小时；离心（6000rpm及以上，10min），收集上清液，沉淀再次提取，合并上清液；上清液过滤，浓缩至20倍干样重量体积，即得莼菜凝胶提取液。

将莼菜提取液90份、甘草提取液50份、银耳提取液90份混合。

实施例11

莼菜粉加入纯水，20倍干重体积，加热提取0.5小时；离心（6000rpm及以上，10min），收集上清液，沉淀再次提取，合并上清液；上清液过滤，浓缩至20倍干样重量体积，即得莼菜凝胶提取液。

甘草粉加入纯水，20倍干重体积，加热提取0.5小时；离心（6000rpm及以上，10min），收集上清液，沉淀再次提取，合并上清液；上清液过滤，浓缩至20倍干样重量体积，即得莼菜凝胶提取液。

银耳粉加入纯水，20倍干重体积，加热提取0.5小时；离心（6000rpm及以上，10min），收集上清液，沉淀再次提取，合并上清液；上清液过滤，浓缩至20倍干样重量体积，即得莼菜凝胶提取液。

将莼菜提取液10份、甘草提取液10份、银耳提取液5份混合。

实施例12

莼菜粉加入纯水，20倍干重体积，加热提取1小时；离心（6000rpm及以上，10min），收集上清液，沉淀再次提取，合并上清液；上清液过滤，浓缩至20倍干样重量体积，即得莼菜凝胶提取液。

甘草粉加入纯水，20倍干重体积，加热提取1小时；离心（6000rpm及以上，10min），收集上清液，沉淀再次提取，合并上清液；上清液过滤，浓缩至20倍干样重量体积，即得莼菜凝胶提取液。

银耳粉加入纯水，20倍干重体积，加热提取1小时；离心（6000rpm及以上，10min），收集上清液，沉淀再次提取，合并上清液；上清液过滤，浓缩至20倍干样重量体积，即得莼菜凝胶提取液。

将莼菜提取液50份、甘草提取液40份、银耳提取液20份混合。

实验例1

莼菜提取液成分分析（红外分析）

将实施例10-12所得莼菜提取液进一步处理后500-4000cm-1红外扫描分析，结果显示主要成分为多糖：3432cm-1（O-H），2919cm-1（C-H），1627cm-1（-C=O),1423cm-1(-C—O),1045cm-1(C-OH),如说明书附图1所示。

实验例2

对实施例1-3所得原液进行保湿型测定。本发明原液保湿效果最好。透明质酸0.1%有一定粘度，故持水性较粘度最低的精华水好，然而24小时后兰蔻精华水保湿率为12%。

保湿率计算，RH60％恒定湿度下，为了更好的模拟皮肤的实际情况，选用适当大小的玻璃板贴上3M微孔透气胶带(1×2cm)，样品用量大约0.05g/cm2。将水溶液涂敷在贴有3M胶带上，放进恒湿干燥器一定时间后称重，计算保湿率。

计算：保湿率％=(1-(M1-M2)/m)×100

M2一放置后水分重量

M1一放置前水分重量

m一涂布量

实验例3

对实施例1-3所得原液进行抗氧化性测试。邻苯三酚在碱性条件下自动氧化，不断释放出O^2-，O^2-又可进一步促进自氧化，在邻苯三酚自氧化30s后，中间物积累浓度与时间呈线性关系，一般线性时间可维持4min，可求得氧化速率来表征O^2-清楚能力。清除率=（式中:A0为未加药溶液的空白吸光度;Ai为加药后溶液的吸光度;Aj为样品溶液自身的吸光度，9min时邻苯三酚氧化体系有色产物累计达到稳定，故自由基清除效果以9min时吸光值计算。）

表4位抗氧化实验分组加样表（n=3）

表4

将邻苯三酚0.5ml加入反应体系中，立即振摇倒入比色皿，同时秒表计时。全波长扫描30s，60s，90s，120s，180s的紫外吸收图，320nm出吸光度随时间增加而增加。选择320nm出测定吸光度。

组1测定体系自氧化速率为0.0036（y=0.0036x+0.2587；R²=0.9910)；组2测定加样后氧化速率0.0013(y=0.0013x+0.2318；R²=0.9832)；组3为空白对照；组4测定样品自身吸光度。测定结果如图3，本发明原液（即复方液）加入后，氧化速率明显下降，具有较强的清除自由基能力，自由基清除率为49.01%。

实验例4

不同提取方法所得提取液抗氧化活性评价

碱提取液的抗氧化活性略低于水提液，主要是碱提液中含有较多杂质，影响了其抗氧化活性，且颜色为褐色，无法用于化妆品；乙醇提取液同样具有较好抗氧化活性，但是色素等较多，颜色较深，且无保湿性作用。水提液的氧化速率为0.0013（y=0.0013x+0.2183，R²=0.9915），碱提液的氧化速率为0.0018（y=0.0018x+0.2703，R²=0.9816），醇提液氧化速率为0.0011（y=0.0011x+0.2874，R²=0.9682）。

实验例5

有机自由基清除能力检测。DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其醇溶液呈紫色，且需低温避光储藏，具有单一电子，故能接受一个电子或氢离子，在波长为517nm下具有最大吸收。有自由基清除剂存在时，DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅，在最大光吸收波长处的吸光值下降，且下降程度呈线性关系，吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加，从而以评价试验样品的抗氧化能力。此抗氧化能力用抑制率来表示，抑制率越大，抗氧化性越强。

实验材料：DPPH试剂，提取液样品。

实验方法：

DPPH试剂配制：DPPH （0.2mM）0.0079g，50%乙醇SDS 1.5%溶解，定容至100ml，现配现用。实验组：DPPH 2ml，提取液1ml，稀释溶剂2ml，空白组：DPPH 2ml，水1ml，稀释溶剂2ml，样品组：提取液1ml，稀释溶剂4ml.

实验组测定加入本发明原液后自由基清除效果，空白组测定同等条件下DPPH自身吸光度，样品组测定样品自身吸光度。测定溶液随时间变化的吸光度A，每60s取值1次，待吸光度基本不变时，提取液与自由基反应完全，记录稳定时吸光度。实验表明反应1小时后，基本稳定。

清除率=（式中：A0为未加药DPPH溶液的空白吸光度;Ai为加药后，DPPH溶液的吸光度;Aj为样品溶液自身的吸光度。）

表5 有机自由基清除率（n=3）

莼菜提取液：20g，40倍体积提取，纯化后浓缩至20倍，测定。

甘草提取液：20g，同样方法处理得到。

复方提取液：莼菜10g，甘草10g，同样方法处理得到。