一种复方番石榴制剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种复方番石榴制剂及其制备方法，该制剂由以下番石榴叶，鬼箭羽，五指毛桃，桑叶，葛根，黄连，苍术，泽泻，山楂份和红曲制成。本发明复方番石榴制剂健脾化痰，降糖消脂，泄浊清热，不仅能显著降血糖，而且还能改善胰岛素抵抗，临床观察过程中，复方番石榴制剂组仅有3例患者有轻度的胃部不适感，未予特殊处理后自行缓解，其余患者均为发现不良反应。说明复方番石榴制剂是一种有效而安全的口服降糖药物。本发明配方简单，制备方法简单，服用方便，适于工业化生产及长期服用。
【专利说明】一种复方番石榴制剂及其制备方法 【技术领域】
[0001 ]本发明涉及一种复方番石榴制剂及其制备方法。 【【背景技术】】
[0002] 如今人们生活水平、劳动强度、饮食结构发生了根本变化，超重肥胖2型糖尿病随 之而不断增加。研究表明，超重肥胖2型糖尿病的胰岛素抵抗尤为明显。临床上口服的降糖 药物最常见的就是磺脲类及非磺脲类胰岛素促泌剂，其主要的药理作用是刺激胰岛辟田胞 分泌胰岛素。然而这些药物常见的副作用是低血糖和体重增加，长期使用此类药物患者体 重增加明显，使得胰岛素抵抗更加显著，久而久之胰岛细胞功能逐渐衰退，从而不得不依 赖胰岛素治疗。一直以来，人们都在寻找既可以增加胰岛素敏感又可以减少副作用的降糖 药物。
[0003] 番石榴属于桃金娘科番石榴属植物，为民间中草药，主要分布在云南、四川、贵州 和广西等地，繁殖能力极强，果实产量大。番石榴果实富含多糖类、黄酮类、多酚类物质，还 含有蛋白质和有机三价铬，具有降血糖、抗炎、抑菌、抗氧化等功效。研究证实，番石榴果实 的降糖功效与其所含的多糖类、有机三价铬有很大的关系，而其抗氧化功效与所含的黄酮 类、多酚类物质也有很大的关系。但目前人们对番石榴的应用，目前主要有两种方式:其一 为番石榴果产地的老百姓将其作为野果鲜食;其二为将番石榴果切片、晒干后，作为干果片 茶，通过开水冲泡，饮用茶水。但这两种方式对番石榴中活性成分的吸收并不明显。 【
【发明内容】
】
[0004] 本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种以番石榴叶为主的复方番石 榴制剂，与其他几种中药复配，显著降血糖，改善胰岛素抵抗，使用安全有效。
[0005] 本发明为解决上述技术问题，采用以下技术方案：
[0006] -种复方番石榴制剂，其特征在于由以下重量份组份制成： 番石榴叶 120~180份， 鬼箭羽50~丨00份， 五指毛桃：80~丨20份， 桑叶.50~100份，
[0007] 葛根 120~180份， 黄连 30~70份， 苍术 50~100汾， 泽泻 30~70份， 山楂 50~100份， 红曲 50~10:0份。
[0008] 优选地，本发明复方番石榴制剂，由以下重量份组份制成： 番石榴叶 120~160份， 鬼箭羽50~80份， 五指毛桃 80~100份， 桑叶 50~80份，
[0009] 葛根 120~160份， 黄连 30~50份， 苍术 50~80份， 泽泻 30~50份， 山楂 50~80份， 红曲 50~80份。
[0010] 优选地，本发明复方番石榴制剂，由以下重量份组份制成： 番石榴叶 140~180份， 鬼箭羽75~100份，
[0011] 五指毛桃 100~120份， 桑叶 75~100份， 葛根 140~180份， 黄连 50~70份， _2] 苍术 75~100份， 泽泻 50~70份， 山楂 75~100份， 红曲 75~100份。
[0013]进一步优选地，本发明复方番石榴制剂，由以下重量份组份制成： 番石榴叶 140~160份， 鬼箭羽75~85份， 五指毛桃 90~丨10份， 桑叶 75~85份，
[0014] 葛根 140~160份， 黄连 40~60份， 苍术 75~85份， 泽泻 40~60份, 山楂 75~85份， 红曲 75~85份。
[0015]优选地，本发明复方番石榴制剂，由以下重量份组份制成： 番石榴叶 150份， 鬼箭羽 75份， 五指毛桃 1K)份， 桑叶 75份，
[0016]葛根 150份， 黄连 50份， 苍术 75份， 泽泻 50份， 山楂 75份， 红曲 75份。
[0017]番石榴叶具有生津止泻，除烦，收敛止泻，消炎止血功效。在长期医疗实践和临床 观察基本上，番石榴叶单方制剂"消竭降糖胶囊"已收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》 第十五册，1998:182。中外民间医药多有采用番石榴叶治疗糖尿病及腹泻等疾病。现代药理 研究表明具有明显的降血糖，抗病毒及抗菌等活性。降糖作用主要与黄酮甙提高胰岛素敏 感性及番石榴含的维生素 C及微量元素对胰岛细胞保护、胰岛素释放的调节、糖代谢的调节 有关。
[0018] 鬼箭羽又叫卫矛、鬼箭，鬼箭羽为卫矛科植物卫矛的具翅状物的枝条或翅状附属 物，鬼箭羽有破血通经、解毒消肿、杀虫的功效，鬼箭羽有治疗癥瘕结块、心腹疼痛、闭经、痛 经的作用，鬼箭羽用药禁忌是妊娠不可服鬼箭羽。
[0019] 五指毛桃为岭南常用草药，以桑科榕属植物粗叶榕的根入药，其性平，味甘、辛，有 健脾补肺、利湿舒筋之功，用于脾虚浮肿、食少无力、肺痨咳嗽、盗汗、风湿痹痛、产后无乳等 症。五指毛桃能显著提高环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的碳粒廓清指数，胸腺、脾脏重量 指数及血清溶血素水平，提示五指毛桃对免疫功能具有调节作用，能提高机体的免疫功能。 此外，五指毛桃又是一食药同源的植物，在广东地区民间用来煲汤。近年来，五指毛桃这一 宝贵的植物资源引起了药学工作者的高度重视，对其化学成分、药理活性及其他方面的研 究不断深入，并证实补骨脂素为五指毛桃的主要活性成分之一，具有抗菌、抗病毒、抗凝血、 抑制肿瘤、免疫调节等作用。
[0020] 桑叶是一款具有较强抗氧化功效的袋茶饮。富含稀有元素有机硒、锗，是天然的强 抗氧化剂，可清除体内自由基，使蓄积在人体内的毒素和废物被氧化，增加血液中的含氧 量，促进新陈代谢和微循环。对于高血脂、高血糖、脂肪肝、冠心病、高血压，甲、乙型肝炎的 治疗以及癌症术后放化疗病人的康复有非常好的辅助作用。桑叶能疏散风热，解表清热，养 阴生津;桑椹能滋阴养血，补虚润燥;桑根白皮能泻肺平喘，利水消肿;桑枝能通经活络，除 痹止痛;而桑树烧成的灰叫桑柴灰，也能用于治疗目赤肿痛、青盲、身面水肿，坐卧不得、白 癜风、头风白肩、大麻风等病证。
[0021] 葛根为豆科植物野葛的干燥根。有解表退热，生津，透疹，升阳止泻的功效。用于外 感发热头痛、高血压颈项强痛、口渴、消渴、麻疹不透、热痢、泄泻。葛根黄酮具有防癌抗癌和 雌激素样作用，可促进女性丰胸、养颜，尤其对中年妇女和绝经期妇女养颜保健作用明显。 高血压、高血脂、高血糖及偏头痛等心脑血管病患者、更年期妇女、易上火人群(包括孕妇和 婴儿）、常期饮酒者(减少酒精对肝脏影响）、女性滋容养颜，中老年人日常饮食调理等。葛根 粉性凉味甘辛，有解表退热，生津、透疹、升阳止泻等多种功能，可治外感发热头痛、高血压 颈项强痛、口渴、消渴、麻疹不透、热疹、泄泻等多种疾病。一般的粉葛质韧，纤维性强。葛根 素有明显的降低血糖的作用，葛根所含的黄酮类化合物有降血脂作用，能降低血清胆固醇， 降低油三酯，用于治疗高血糖，高血脂病症，有显著疗效。
[0022] 黄连为毛茛科植物黄连、三角叶黄连或云连的干燥根茎。有清热燥湿，泻火解毒的 功效。用于湿热痞满，呕吐吞酸，泻痢，黄疸，高热神昏，心火亢盛，心烦不寐，血热吐衄，目 赤，牙痛，消渴，痈肿疔疮。
[0023] 苍术又叫山精、赤术、马蓟、青术、仙术、茅术、南苍术、穹窿术、和苍术、东苍术。有 燥湿健脾;祛风湿；明目的功效。主治湿盛困脾，倦怠嗜卧，脘痞腹胀，食欲不振，呕吐，泄泻， 痢疾，疟疾，痰饮，水肿，时气感冒，风寒湿痹，足痿，夜盲。
[0024] 泽泻味甘，淡，性寒，入肾、膀胱经，利水渗湿;泄热通淋。主小便不利;热淋涩痛;水 肿胀满;泄泻;痰饮眩晕;遗精。用于小便不利，水肿胀满，泄泻尿少，痰饮眩晕，热淋涩痛;高 血脂。
[0025] 山楂含有大量的维生素 C与微量元素，能够扩张血管，降低血压，降低血糖，能够改 善和促进胆固醇排泄而降低血脂，预防高血脂的发生，山楂能够开胃促进消化，山楂所含有 的脂肪酶也能够促进脂肪的消化。山楂所含有的黄酮类与维生素 C、胡萝卜素等物质能够阻 断并减少自由基的生成，可增强机体的免疫力，延缓衰老，防癌抗癌。山楂能够活血化瘀，帮 助消除瘀血状态，辅助治疗跌打损伤。山楂对子宫有收缩作用，在孕妇临产时有催生效果。
[0026]红曲性甘，温，入肝、脾、大肠经，活血化瘀;健脾消食。主饮食积滞;脘腹胀满;赤白 下痢;产后恶露不尽;跌打损伤。
[0027] 近年来药理学家发现，红曲入药，是一种出色的降血脂、降血压天然药物。在李时 珍主编的巨著《本草纲红曲霉菌目》一书中即收载有若干个含有红曲成分的治病良方。我国 中科院研究人员开发的以红曲为原料的降脂新药"乐脂平"，疗效可与美国公司开发的他汀 类降脂药物媲美，国外称之为"中国他汀"。此外，红曲霉衍生物还有很强抗氧化兼抗癌作 用。
[0028] 本发明中，番石榴叶性平，味干涩，入脾、胃、大肠、肝经，燥湿健脾，清热解毒，故为 君药;鬼箭羽味微苦涩，活血化瘀;五指毛桃益气健脾，祛痰化湿;桑叶性味甘寒，清热解毒， 《本草纲目》记载桑叶"汁煎代茗，能止消渴"；葛根、黄连，清热生津，燥湿泻浊;苍术燥湿健 脾;泽泻利水渗湿，泄热，使痰浊之邪有出路；山楂、红曲具有健脾消食、活血化瘀的功效。全 方共凑健脾化痰、降糖消脂、泄浊清热之功。
[0029] 本发明复方番石榴制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
[0030] 将各组份混合加原料8-10倍水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并两次煎 液，过滤，滤液浓缩至相对密度1.02以上(60°C)，加入防腐剂和甜味素，煮沸，冷却后于冰箱 冷藏24h，取上清液过滤后分装即可。
[0031] 当以克为单位时，冷藏后取上清液过滤后，制成1000ml，分装成100ml/瓶。
[0032] 本发明中的甜味素优选为甜菊素。
[0033] 本发明中防腐剂和甜味素的添加量为0.04~0.06%。
[0034]本发明与现有技术相比，有以下优点：
[0035]本发明复方番石榴制剂健脾化痰，降糖消脂，泄浊清热，不仅能显著降血糖，而且 还能改善胰岛素抵抗，临床观察过程中，复方番石榴制剂组仅有3例患者有轻度的胃部不适 感，未予特殊处理后自行缓解，其余患者均为发现不良反应。说明复方番石榴制剂是一种有 效而安全的口服降糖药物。
[0036]本发明配方简单，制备方法简单，服用方便，适于工业化生产及长期服用。 【【附图说明】】
[0037]图1是正常对照组大鼠胰腺组织切片HE染色（X400)图片；
[0038]图2是模型组大鼠胰腺组织切片HE染色（X400)图片；
[0039]图3是低剂量组大鼠胰腺组织切片HE染色（X400)图片；
[0040]图4是高剂量组大鼠胰腺组织切片HE染色（X400)图片；
[00411图5是阳性药物组大鼠胰腺组织切片HE染色（X 400)图片。 【【具体实施方式】】
[0042]下面结合具体实施例对本发明进行详细描述：
[0043] 实施例1:
[0044] 称重以下组份： 番石榴叶 120g, 鬼箭羽50 g， 五指毛桃 80g， ^nj· 50 g，
[0045] 葛根 120g， 黄连：3:0 g， 压术 50g， 30 g, 山楂 50g， 红曲 50 g，
[0046] 将上述组份混合加原料8-10倍水煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并两次煎 液，过滤，滤液浓缩至60°C相对密度不低于1.02，加入防腐剂和甜味素，煮沸，冷却后于冰箱 冷藏24h，取上清液过滤后制成1000ml，分装成100ml/瓶即可。
[0047] 实施例2:
[0048] 称重以下组份： 番石榴叶 18:0g，： 鬼箭羽100 g， 五指毛桃 120g, 燊丨丨|· 100 g,
[0049] 葛根 18:0g， 黄连 70:g， 伤术 100g， 汴江j 70 g,
[0050] 山楂 lOOg， 红曲顧g，
[0051 ]实施例2的制备方法同实施例1。
[0052] 实施例3:
[0053] 称重以下组份： 番石榴叶 160g， 鬼箭羽_g， 五指毛桃 8%， 桑叶 80: g，
[0054] 葛根 14〇g， 黄连 5:0名， 迮术 SOg ff·'? 50 g， 山楂 80g， 红曲 80 g
[0055] 实施例3的制备方法同实施例1。
[0056] 实施例4:
[0057] 称重以下组份： 番石榴叶 140g 鬼箭羽75 g， 五指毛桃 110g， 桑叶 75g，
[0058] 葛根 150g， 黄连 40名， 苍术 75g, 泽泻 40 g，: 山楂 75g， 红曲 7Sg,
[0059] 实施例4的制备方法同实施例1。
[0060] 实施例5:
[0061 ] 称重以下组份： 番石榴叶 150g:， 鬼箭羽75 g，
[0062] 五指毛桃 100g 桑叶 75 g, 葛根 150:g， 黄连 5Gg，
[0063]苍术 75g， 泽泻 50_.g.，. 山楂 15%, 红曲 75 g，
[0064]实施例5的制备方法同实施例1。
[0065] 一、本发明药理实验
[0066] 1 材料
[0067] 1.1动物SPF级雄性SD大鼠，4~5周龄，体重(70± 10)g，由广东省实验动物中心提 供，许可证号：SCXK (粵）2013-0002。
[0068] 1.2药品与试剂实施例5复方番石榴制剂。盐酸二甲双胍片:贵州圣济堂制药有限 公司产品，产品批号= 20140424; STZ: Sigma公司产品，由广州晶欣生物科技有限公司分装并 提供(批号:2022)，临用前以0.1mol/L、pH 4.3的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液新鲜配制。大鼠胰 岛素（INS)ELISA试剂盒，武汉华美生物工程有限公司产品（批号:B19010611、C 02019887、 C30012942)。
[0069] 1.3主要仪器全自动生化检测仪;拜安捷2血糖仪(型号：1455);血糖检测试碟(葡 萄糖氧化酶法），拜耳医药保健有限公司(产品批号：1A6591AA);高速冷冻离心机，上海安亭 科学仪器厂生产（型号:GL-20G_n );Thermo Multiskan FC酶标仪、Thermo洗板机，均为美 国Thermo公司生产。
[0070] 2 方法
[0071] 2.1模型建立选取检疫合格的SD大鼠84只，适应性饲养1周后，按体重随机分为正 常组（10只）和造模组(74只），其中正常组喂养常规饲料;造模组参照《人类疾病动物模型》 并加以改进，喂养尚糖尚脂伺料（由广东省医学实验动物中心生广并提供）。喂养至第8周时 造模组禁食(不禁水）16h后，一次性腹腔注射1%STZ溶液30mg/kg。正常组腹腔注射等剂量 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。72h后两组动物采血，检测空腹血糖(FPG)，以FBG彡11. lmmol/L， 并持续出现多饮、多尿、体重减轻症状者为造模成功。模型不达标者，3天后仍按上述方法补 注1 % STZ溶液，30mg/kg腹腔注射，检测FPG，仍未达标者淘汰出实验。
[0072] 2.2分组给药以正常组大鼠作为对照组，筛选造模组中模型成功大鼠按FPG随机 分为模型组、二甲双胍组(临用前配制成20mg/10mL的悬混液，按SOOmg/kg"1给药）、复方番石 榴制剂高、低剂量组（即生药含量为3.15、1.575g/ml，相当于人临床常用量的4、2倍剂量）， 正常组和模型组给予等体积蒸馏水，均按lmL/100g，l次/d给药，连续灌胃给药6周。期间除 正常组给予常规饲料外，模型组和各给药治疗组继续喂养高糖高脂饲料。除未达标的动物 外，在造模后、给药过程中以及取血操作中因麻醉意外等原因，各组动物均有死亡，最后纳 入统计的各组动物数均为10只。各组动物每周称重1次，根据体重调整给药量。
[0073] 2.3标本制作
[0074] 2.3.1血样标本制作：分别于高脂高热量饲料喂养8周后、腹腔注射1 % STZ 72h后 及药物治疗6周后，三次采血。禁食(不禁水）16h，前2次采血为后眼眶静脉丛取血，以真空采 血管储存血液，2ml/只?次，最后一次采取腹主动脉采血方式，血液标本静置一段时间，待 血清和血浆与血液有形成分分离后，4°C，3500r/min离心10分钟分离血清、血浆，并将血清 分装于的冻存管中，-70 °C冻存备用。
[0075] 2.3.2组织样本的制备：药物治疗6周后，采血后，迅速解剖大鼠，摘取新鲜胰腺组 织标本，立即浸泡于4 %中性甲醛固定液中固定。
[0076] 2.4观察指标及检测方法
[0077] 2.4.1动物生长情况观察:实验期间观察动物精神、活动、毛色、进食、饮水及尿量 变化，并每周记录体重变化1次。
[0078] 2.4.2空腹血糖浓度(FPG)测定:采用拜安捷2血糖仪进行检测。
[0079] 2.4.3空腹血胰岛素浓度(FINS)测定:严格按照试剂盒说明书操作ELISA法检测。
[0080] 2.4.4胰岛素敏感指数（ISI):采用李光伟计算方法，以空腹血糖与空腹胰岛素乘 积倒数的自然对数来表示，即ISI = Ln[ 1/(FPG X FINS)]。
[0081] 2.4.5胰岛HE染色病理观察：将浸泡于固定液中的胰腺组织经常规洗涤、脱水、石 蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察病理变化。
[0082] 2.5统计方法实验数据以i ±S表示，用IBM SPSSS 19.0Statistics软件分析。计 量资料组间比较用One-Way AN0VA方差分析。
[0083] 3结果
[0084] 3.1动物一般身体情况观察
[0085]正常组和造模组大鼠在饲养期间均精神状态良好，反应灵敏，行动自如，皮毛光泽 油亮，体重随饲养时间的增加呈持续稳定上升趋势。同时，造模组大鼠在高脂高热量饲料喂 养8周期间，大便较多，时有稀软便，尿量正常。造模组腹腔注射STZ 72h后，开始出现进食 量、饮水量均有明显增加，特别是尿量增加非常明显，尿骚味严重，身体持续进行性消瘦，并 出现皮毛干燥粗糙、竖毛、反应迟钝、精神萎靡、活动减少，易激惹等表现。
[0086] 3.2体重变化情况
[0087] 3.2.1实验性T2DM大鼠造模期间体重变化情况 [0088] 表1实验性T2MD大鼠造模期间体重变化（? 土 S )
[0089]
[0090] 如表1所示：造模期间，正常组大鼠普通饲料喂养8周期间，体重由103.70±9.32g 平稳增加至542.94 ± 51.68g。造模组大鼠经高脂高热量饲料喂养8周，体重由105.63 土 9.86g增加至551.53±52.638，期间体重均较正常组有所增加，但无统计学意义。造模7211 后，造模组大鼠体重下降至518.45±43.67g，显著低于同时期正常组以及造模前的体重(P <0.05)。表明腹腔注射STZ造成实验动物体重在短期内出现显著下降。
[0091 ] 3.2.3复方番石榴制剂对T2MD大鼠给药治疗期间体重变化的影响
[0092] 表2:实施例5对T2MD大鼠给药期间体重变化的影响（? 士§)
[0093]
[0094] 注:与同期正常组比较，*P〈0.05;与同期模型组比较，#P〈0.05。
[0095] 如表2所示：用药治疗6周期间，正常对照组大鼠体重由562.40±29.77g平稳增加 至639.20±23.518。模型组大鼠体重由379.80±21.318减重至339.00±28.518，明显低于 正常对照组。复方番石榴高剂量治疗组体重由401.50 ± 28.37g增至428.80 ± 18.64g;低剂 量组体重由380.10 ± 34.99g增至418.00 ± 44.89g;二甲双胍治疗组体重由391.80 ± 29.67g 增至432.70±44.68g，三个给药治疗组与模型组比较均有显著性差异(P<0.05)。表明药物 治疗对实验性T2MD大鼠体重均有一定的增加作用。
[0096] 治疗后的第1周，模型组、复方番石榴高、低剂量组以及二甲双胍组与正常组比较 体重均有显著性差异(p<0.05)，而此四组之间比较无显著性差异。治疗2周后，模型组、复 方番石榴高、低剂量组以及二甲双胍组与正常组比较体重有显著性差异(P<〇.05);同时， 二甲双胍组与模型组比较有显著性差异(P<〇.05)。治疗给药的第3~6周期间，模型组、复 方番石榴高、低剂量组以及二甲双胍组与正常组比较体重均有显著性差异(P<〇.05);三个 给药治疗组与模型组相比较，体重均有明显增加，差异有统计学意义(P<〇.05)，而各给药 组间比较体重无显著性差异。表明在给药的6周期间，二甲双胍对体重的增加起效较中药给 药组快，但随着时间的推移，各给药组对体重均有增重。
[0097] 3.3复方番石榴制剂对了201大鼠空腹血糖卬?6)的影响
[0098] 表3:实施例5对T2DM大鼠 FPG的影响:(i 土§)，(单位:mmol/L)
[0099]
[0101] 注：与同期正常组比较，*P〈〇. 05;与同期模型组比较，#P〈0.05;与本组治疗前比 较，λΡ〈0·05。
[0102] 如表3所示:造模前各组FPG比较无显著性差异，且与正常组比较均无显著性差异。 治疗前(造模后），与正常组比较，模型组、复方番石榴高、低剂量治疗组、二甲双胍组血糖明 显升高，差异均有统计学意义(P<〇.05)，而给药治疗组之间比较差异无显著性。治疗后，复 方番石榴高剂量组和二甲双胍之间比较差异无显著性，且两给药组分别与其治疗前比较差 异均有显著性(P<〇.05)，但复方番石榴低剂量组与其治疗前比较，空腹血糖差异无统计学 意义。四个给药组分别与模型组比较差异均有显著性(P<〇.05)。表明经药物治疗后，各组 均有一定程度的降低FPG疗效，复方番石榴制剂降低作用呈一定的量效关系，高剂量降低 FPG的作用与二甲双胍相当，但低剂量无明显的降糖作用，但能维持血糖在治疗前的水平， 与模型组比较有一定的降糖作用。
[0103] 3.4复方番石榴制剂对T2DM大鼠空腹血胰岛素(FINS)水平变化的影响
[0104] 表4:实施例5对T2DM大鼠 FINS的影响土S),(单位:nIU/ml)
[0105]
[0106] 注：与同期正常组比较，*P〈0.05;与同期模型组比较，#P〈0.05;与本组治疗前比 较， λΡ〈0·05。
[0107] 如表4所示:造模前，与正常组比较，各组间FINS差异无统计学意义。治疗前（造模 后），模型组、复方番石榴高、低剂量治疗组以及二甲双胍治疗组分别与造模前比较均有显 著性差异(P<〇.05)，且组间比较差异无显著性。治疗后，复方番石榴高剂量组和二甲双胍 组胰岛素水平均有所降低，分别与其治疗前比较差异均有显著性(P<〇.05)，模型组与其6 周后比较也有显著性差异(P<〇.05)，复方番石榴高剂量组和二甲双胍组之间比较差异无 显著性，三个给药治疗组分别与模型组比较差异均有显著性(P<〇.05)，但复方番石榴低剂 量组治疗前、后FINS差异无统计学意义，且复方番石榴高、低剂量组间差异有统计学意义(P <0.05)。表明造模后T2DM实验动物模型已经出现了高胰岛素血症，经治疗后，复方番石榴 制剂降低FINS作用存在一定的量效关系，且高剂量组与二甲双胍组疗效相当。
[0108] 3.5复方番石榴制剂对T2DM大鼠胰岛素敏感指数(ISI)的影响
[0109] 表5:复方番石榴制剂对T2DM大鼠 ISI的影响（? 土S)
[0110]
[0111] 注：与同期正常组比较，*Ρ〈〇 . 05 ;与同期模型组比较，#Ρ〈0.05 ;与本组治疗前比 较，λΡ〈0·05。
[0112]如表5所示:造模前各组ISI比较无显著性差异。治疗前(造模后），模型组、复方番 石榴高、低剂量组、二甲双胍组各组与正常组比较均有显著性差异(P<〇.05)，且组间比较 差异无显著性。治疗后，复方番石榴高剂量组和二甲双胍组分别与其治疗前比较差异均有 显著性(P<0.05)，且两组间比较差异无显著性，分别与模型组比较差异均有显著性(P< 0.05)。复方番石榴低剂量组治疗前后ISI差异无统计学意义，但复方番石榴高、低剂量组间 ISI差异有统计学意义。表明高热量饮食的基础上注射STZ复制T2DM动物模型可引起实验动 物IR的出现，经药物治疗后，对IR均有一定的改善作用，其中，复方番石榴制剂高剂量组以 及二甲双胍对改善IR作用均较低剂量组显著，表明复方番石榴制剂改善IR作用呈一定的量 效关系，此作用与改善FPG、FINS作用呈正相关。
[0113] 3.6复方番石榴制剂对T2DM胰岛素抵抗大鼠胰岛病理形态的影响
[0114] 将固定好的大鼠胰腺组织进行脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋、切片、HE染色处理，然 后在PM-10AD Olympus VAN0X光学显微照相镜下观察胰腺组织形态，并记录。正常对照组 (如图1所示）：胰岛密度正常，边缘光滑，胰岛内细胞排列整齐，胞浆饱满，细胞界限清楚。模 型组(如图2所示）：切片胰岛数目减少，胰岛萎缩，形态不规则，细胞排列紊乱，部分胰岛细 胞内脂质沉积，血管轻度增生。各治疗组较模型组均有不同程度的改观。低剂量组(如图3所 示）：胰岛数目较正常组减少，萎缩程度较其余各给药组明显，形状轻度不规则，部分胰岛A 细胞轻度增多，间质血管扩张及管壁增厚，并可见脂肪组织。高剂量组(如图4所示）：胰岛数 目约略少于正常组对照，较模型组增加，胰岛形状不规则，部分萎缩，胰岛周围体积较小的 细胞(A细胞)比例增加，中央淡染肥大的细胞(B细胞）比例减少。阳性药物组(如图5所示）： 胰岛数目仍少许正常，形状不规则，部分胰岛萎缩，脂质沉积不明显，间质血管扩张及管壁 增厚明显，血管周围较模型组及正常组更易见脂肪组织。
[0115] 二、本发明疗效实验
[0116] 1临床资料
[0117] 1.1 一般资料
[0118] 病例选取时间为2014年6月至2015年11月，从广州中医药大学附属中山医院选取 符合超重肥胖2型糖尿病标准的患者120例。
[0119] 1.2病例选择标准
[0120] 根据1999年WHO 2型糖尿病诊断标准及中国成人超重和肥胖症预防控制指南 (2006 )，入组病例符合条件如下：①经过2周的规范饮食控制及运动疗法后，7. Ommol/L〈空 腹血糖〈13.9mmol/L，且糖化血红蛋白兰7.0 % ;或餐后2h血糖> 11. lmmo 1/L且糖化血红蛋白 兰7.0%。②体重指数(BMI)彡24.0kg/m2;或腰围男性彡85cm、或女性彡80cm(参照中国肥胖 问题工作组建议的诊断标准）中任意一条;③入组前未经过规范的糖尿病西医治疗。④入组 前2周内，未使用任何药物治疗。⑤年龄30~70岁。⑥签署知情同意书。
[0121] 1.3治疗用药及观察指标
[0122] 治疗组给予实施例5,每日100ml，分3次口服，以及二甲双胍肠溶片(0.25g/片，贵 州圣济堂制药有限公司提供)〇.5g/次，每日3次;对照组患者给予二甲双胍肠溶片（0.25g/ 片，贵州圣济堂制药有限公司提供)〇.5g/次，每日3次。两组病例均服药12周为1个疗程，观 察前后均检测空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(P2BG)、糖化血红蛋白（HbAlc)、BMI、腰围、甘油 三酯(TG)、胆固醇(TC)、脂联素、游离脂肪酸(FFA)、空腹胰岛素等指标。患者在观察期间禁 服其他治疗糖尿病的中药或西药。
[0123] 2疗效分析
[0124] 2.1中医证候疗效判断标准:参照《中药新药临床研究指导原则》。（郑筱臾主编.中 药新药临床研究指导原则.北京：中国医药科技出版社，2002)
[0125] 证候疗效率以治疗前后的积分差与治疗前的积分相比的比值来评定疗效：
[0126]
[0127] 临床痊愈:临床症状、体征消失或基本消失，证候积分减少多90%;
[0128] 显效:临床症状、体征明显改善，证候积分减少多70% ;
[0129] 有效:临床症状、体征均有好转，证候积分多30% ;
[0130]无效:临床症状、体征均无明显改善，甚或加重，证候积分减少不足30%。
[0131] 治疗后两组中医证候总疗效比较见表6。
[0132] 表6:两组治疗后中医证候总疗效比较例（％ )
[0133]
[0134] 注:两组治疗后总有效率比较，P〈0.01。
[0135] 2.2治疗前后两组糖代谢情况比较见表7。
[0136] 表7:两组治疗前后血糖代谢情况比较(X士 S)
[0137]
[0138] 注：同组治疗前后的比较，，〈0.05，组间治疗后比较，#P〈0.05。
[0139] 如表7所示，在糖代谢方面，治疗组和对照组组内比较，治疗前后有显著性差异;组 间比较，空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白差异有显著性意义，表明治疗组优于对照组。 [0140] 2.3治疗前后两组血脂代谢情况比较见表8。
[0141]表8:两组治疗前后血脂代谢情况比较(X±S)(mm〇l/L)
[0142]
[0143] 注:与本组治疗前比较，*P〈0.05，组间治疗后比较，#P〈0.05。
[0144] 治疗组TG、TC、LDL_c治疗后较治疗前明显下降，差异具有统计学意义，治疗组与对 照组比较，其差异亦有统计学意义。结果表明，复方番石榴制剂能调节超重肥胖2型糖尿病 的血脂。
[0145] 2.4治疗前后两组BMI、WC比较见表9。
[0146] 表9:两组治疗前后WC、BMI比较(X 士 S)
[0147]
[0148] 注：同组治疗前后的比较，，〈0.05，组间治疗后比较，#P〈0.05。
[0149] 比较两组治疗前的BMI、WC，差异无统计学意义。治疗组治疗前后的BMI、WC显著下 降，比较两组治疗后的BMI、WC，差异也有统计学意义。
[0150] 2.5两组治疗前后的空腹胰岛素、胰岛素分泌指数变化情况比较见表10。
[0151] 表10:两组治疗前后空腹胰岛素、胰岛素分泌指数变化情况士
[0152]
[0153」注：同组治疗前后的比较，WP〈0.01，组间治疗后比较，ffffP〈0.01。
[0154] 如表10所示，治疗组治疗后空腹胰岛素水平、胰岛素分泌指数均有一定的上升，两 组组内比较，差异均有统计学意义;组间比较，治疗后两组空腹胰岛素水平、胰岛素分泌指 数差异有显著性意义，表明治疗组优于对照组。
[0155] 2.6两组治疗前后的游离脂肪酸、C-反应蛋白水平及脂联素变化情况比较见表11。
[0156] 表11:两组治疗前后游离脂肪酸、C-反应蛋白水平及脂联素变化情况(父±S>
[0157]
[0158] 注：同组治疗前后的比较广P〈0.01，组间治疗后比较，##P〈0.01。
[0159] 如表11所示，治疗组和对照组治疗后游离脂肪酸均有一定的下降，两组组内比较， 差异有统计学意义;组间比较，治疗后两组游离脂肪酸水平差异有显著性意义，表明复方番 石榴制剂可降低游离脂肪酸。治疗组与对照组的血清CRP均有下降，两组治疗前后比较，差 异有统计学意义，组间比较差异无明显统计学意义(P>〇.05);治疗组和对照组治疗后脂联 素均有一定的升高，两组组内比较，差异有统计学意义；组间比较，治疗后两组脂联素水平 差异有显著性意义。
[0160] 3 讨论
[0161] 本次观察疗效结果提示，复方番石榴制剂具有良好的降血糖作用，可明显降低空 腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白，其联合二甲双胍片肠溶片降低空腹血糖及糖化血红蛋 白的作用与单纯二甲双胍肠溶片比较有显著差异(P〈〇.05)。
[0162] 本次临床观察过程中，复方番石榴制剂组仅有3例患者有轻度的胃部不适感，未予 特殊处理后自行缓解，其余患者均为发现不良反应。说明复方番石榴制剂是一种有效而安 全的口服降糖药物。本发明制剂用法用量为：口服，一次50ml，一天2次。
【主权项】
1. 一种复方番石榴制剂，其特征在于由以下重量份组份制成： 番石榴叶 120~180份， 鬼箭羽50~100份， 五指毛桃 80~120份， 燊叶 50~丨00汾， 葛根 120~180份， 黄连 30~70份， 苍术 50~100份， 泽泻 30~70份， 山楂 50~100份:， 红曲 50~丨00份。2. 根据权利要求1所述的一种复方番石榴制剂，其特征在于由以下重量份组份制成： 番石榴叶 120~16:0份， 鬼箭羽50:~80份， 五指毛桃 80~100份， 桑叶 50~80份， 葛根 120~160份， 黄连 30~50份， 苍木 50~80份， 泽泻 30~50份， 山楂 50~80份， 红曲 50~80份。3. 根据权利要求1所述的一种复方番石榴制剂，其特征在于由以下重量份组份制成： 番石榴叶 140~180份， 鬼箭羽75~100份， 五指毛桃 100~120份， 爻叶 75~100份， 葛根 14:0~180份， 黄连 50~7:0份， 苍术 75~100份， 泽泻 50~7:0份， 山楂 75~100份， 红曲 75~100份。4. 根据权利要求1所述的一种复方番石榴制剂，其特征在于由以下重量份组份制成： 番石榴叶 14.0~160份， 鬼箭羽75~85份， 五指毛桃 90~110份， 桑叶 73~85份， 葛根 140~160份， 黄连 40~60份， 苍术 75~85份， 泽泻 40~60汾， 山楂 75~85份， 红曲 75~85份。5. 根据权利要求1所述的一种复方番石榴制剂，其特征在于由以下重量份组份制成： 番石榴叶 150份， 鬼箭羽 75份， 五指毛桃 110份， 桑叶 75份， 葛根 150份， 黄连 50份， 苍术 75份， 泽泻 50份， 山楂 75份， 红曲 75份。6. -种权利要求1-5中任一项所述复方番石榴制剂的制备方法，其特征在于包括以下 步骤： 将各组份混合加原料8-10倍水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并两次煎液， 过滤，滤液浓缩至相对密度1.02以上(60°C)，加入防腐剂和甜味素，煮沸，冷却后于冰箱冷 藏24h，取上清液过滤后分装即可。7. 根据权利要求6所述的一种复方番石榴制剂的制备方法，其特征在于所述的甜味素 为甜菊素。
【文档编号】A61P3/10GK106038869SQ201610629336
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年8月1日
【发明人】李乐愚, 梅全喜, 林泽宏, 曾聪彦
【申请人】中山市中医院