工程化嵌合聚乙二醇化ADI和使用方法与流程

文档序号:12505238阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种重组嵌合精氨酸脱亚胺酶(ADI),其包含源自第一微生物的ADI蛋白催化结构域和源自第二微生物的ADI蛋白α-螺旋结构域。

2.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物选自支原体属、梭菌属、芽孢杆菌属、疏螺旋体属、肠球菌属、链球菌属、乳杆菌属和贾第虫属。

3.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物选自由以下组成的组:肺炎支原体、人型支原体、精氨酸支原体、关节炎支原体、酿脓链球菌、肺炎链球菌、布氏疏螺旋体、阿氏疏螺旋体、肠贾第虫、产气荚膜梭菌、地衣芽孢杆菌和粪肠球菌。

4.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物选自由以下组成的组:精氨酸支原体、关节炎支原体、人型支原体、肺炎支原体、海豹脑支原体、口腔支原体、猫支原体、海豹支原体、鸽支原体、衣阿华支原体、鳄鱼支原体、发酵支原体、穿透支原体、鸡败血支原体、短吻鳄支原体、运动支原体和山羊支原体。

5.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第二微生物任选地不同于所述第一微生物并且选自支原体属、梭菌属、芽孢杆菌属、疏螺旋体属、肠球菌属、链球菌属、乳杆菌属和贾第虫属。

6.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第二微生物任选地不同于所述第一微生物并且选自由以下组成的组:肺炎支原体、人型支原体、精氨酸支原体、关节炎支原体、酿脓链球菌、肺炎链球菌、布氏疏螺旋体、阿氏疏螺旋体、肠贾第虫、产气荚膜梭菌、地衣芽孢杆菌和粪肠球菌。

7.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第二微生物任选地不同于所述第一微生物并且选自由以下组成的组:精氨酸支原体、关节炎支原体、人型支原体、肺炎支原体、海豹脑支原体、口腔支原体、猫支原体、海豹支原体、鸽支原体、衣阿华支原体、鳄鱼支原体、发酵支原体、穿透支原体、鸡败血支原体、短吻鳄支原体、运动支原体和山羊支原体。

8.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物选自由鸡支原体、不活跃支原体和鸽支原体组成的组并且其中所述第二微生物任选地不同于所述第一微生物并且选自由鸡支原体、不活跃支原体和鸽支原体组成的组。

9.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为精氨酸支原体并且所述第二微生物为关节炎支原体。

10.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为精氨酸支原体并且所述第二微生物为人型支原体。

11.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为关节炎支原体并且所述第二微生物为精氨酸支原体。

12.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为猫支原体并且所述第二微生物为关节炎支原体。

13.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为猫支原体并且所述第二微生物为鸽支原体。

14.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为猫支原体并且所述第二微生物为海豹脑支原体。

15.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为猫支原体并且所述第二微生物为海豹支原体。

16.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为海豹脑支原体并且所述第二微生物为短吻鳄支原体。

17.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为海豹脑支原体并且所述第二微生物为猫支原体。

18.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为海豹脑支原体并且所述第二微生物为海豹支原体。

19.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为海豹支原体并且所述第二微生物为短吻鳄支原体。

20.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为海豹支原体并且所述第二微生物为关节炎支原体。

21.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为海豹支原体并且所述第二微生物为鸽支原体。

22.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为海豹支原体并且所述第二微生物为猫支原体。

23.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为海豹支原体并且所述第二微生物为海豹脑支原体。

24.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为鸡支原体并且所述第二微生物为关节炎支原体。

25.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为鸡支原体并且所述第二微生物为不活跃支原体。

26.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为不活跃支原体并且所述第二微生物为鸽支原体。

27.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述第一微生物为不活跃支原体并且所述第二微生物为鸡支原体。

28.根据权利要求1所述的重组嵌合ADI,其中所述重组嵌合ADI包含SEQ ID NO:4-13或22-59中任一个所列的氨基酸序列或与SEQ ID NO:4-13或22-59中任一个具有至少90%同一性的变体。

29.根据前述权利要求中任一项所述的重组嵌合ADI,其中所述重组嵌合ADI已经被修饰以去除至少一个聚二乙醇化位点。

30.根据前述权利要求中任一项所述的重组嵌合ADI,其中至少一个赖氨酸残基已经通过氨基酸取代修饰。

31.根据权利要求30所述的重组嵌合ADI,其中至少5个赖氨酸残基已经通过氨基酸取代修饰。

32.根据权利要求30所述的重组嵌合ADI,其中至少10个赖氨酸残基已经通过氨基酸取代修饰。

33.根据权利要求30所述的重组嵌合ADI,其中至少15个赖氨酸残基已经通过氨基酸取代修饰。

34.根据权利要求30所述的重组嵌合ADI,其中至少20个赖氨酸残基已经通过氨基酸取代修饰。

35.根据权利要求30所述的重组嵌合ADI,其中所述重组嵌合ADI包含SEQ ID NO:10-13中任一个所列的氨基酸序列。

36.根据前述权利要求中任一项所述的重组嵌合ADI,其经由生物相容性接头与聚乙二醇共价键合。

37.根据权利要求30所述的重组嵌合ADI,其中所述精氨酸脱亚胺酶与一个以上的聚二乙醇分子共价键合。

38.根据权利要求30所述的重组嵌合ADI,其中所述精氨酸脱亚胺酶与约1至约10个聚二乙醇分子共价键合。

39.根据权利要求30所述的重组嵌合ADI,其中所述精氨酸脱亚胺酶与5±3个PEG分子共价键合。

40.根据权利要求30所述的重组嵌合ADI,其中所述PEG分子为直链或支链PEG分子。

41.根据权利要求30所述的重组嵌合ADI,其中所述聚乙二醇的总重均分子量为约1,000至约40,000。

42.根据权利要求30所述的重组嵌合ADI,其中所述聚乙二醇的总重均分子量为约10,000至约30,000。

43.根据权利要求30所述的重组嵌合ADI,其中所述生物相容性接头包含琥珀酰基、酰胺基、酰亚胺基、氨基甲酸基、酯基、环氧基、羧基、羟基、碳水化合物、酪氨酸基团、半胱氨酸基团、组氨酸基团、亚甲基或其组合。

44.根据权利要求30所述的重组嵌合ADI,其中所述琥珀酰基的来源是琥珀酰亚胺琥珀酸酯。

45.一种多核苷酸,其编码根据前述权利要求中任一项所述的重组嵌合ADI。

46.一种载体,其包含根据权利要求45所述的多核苷酸。

47.一种分离的宿主细胞,其包含根据权利要求46所述的载体。

48.一种组合物,其包含根据前述权利要求中任一项所述的重组嵌合ADI和生理上可接受的载体。

49.根据权利要求48所述的组合物,其还包含自噬调节剂。

50.根据权利要求49所述的组合物,其中所述自噬调节剂选自由以下组成的组:氯喹、3-甲基腺嘌呤、羟氯喹、巴佛洛霉素A1、5-氨基-4-咪唑甲酰胺核苷(AICAR)、冈田酸、N6-巯基嘌呤核苷、长春碱、渥曼青霉素、雷帕霉素、依维莫司、二甲双胍、哌立福辛、白藜芦醇和他莫昔芬。

51.根据权利要求48所述的组合物,其还包含化疗剂。

52.根据权利要求51所述的组合物,其中所述化疗剂选自由以下组成的组:多西他赛、卡铂、环磷酰胺、吉西他滨、顺铂、索拉非尼、舒尼替尼和依维莫司。

53.一种治疗癌症、改善其症状或抑制其进展的方法,其包括向有需要的患者施用治疗有效量的根据权利要求48所述的组合物,从而治疗所述癌症、改善其症状或抑制其进展。

54.根据权利要求53所述的方法,其中所述癌症选自由以下组成的组:黑素瘤、胰腺癌、前列腺癌、小细胞肺癌、间皮瘤、淋巴细胞性白血病、慢性骨髓细胞性白血病、淋巴瘤、肝细胞瘤、肉瘤、白血病、急性髓性白血病、复发急性髓性白血病、乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胃癌、神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾癌、膀胱癌、子宫癌、食道癌、脑癌、头颈癌、宫颈癌、睾丸癌和胃部癌。

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