细胞外基质组合物的制作方法

1.技术领域

本文提供了细胞外基质(ECM)组合物及其制备方法。本文还提供了本文所提供的ECM组合物的用途。

2.

背景技术：

细胞外基质(ECM)包含形成身体中的许多结构(包括支持皮肤和内部器官的肌腱、韧带和鞘(sheets))的蛋白质。本领域中仍然需要新的和改进的ECM组合物及制备这种ECM组合物的方法。

3.

技术实现要素：

在一个方面中，本文提供了使用胎盘组织(例如，人胎盘组织)制备的细胞外基质(ECM)组合物。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物包含约30％-约60％的胶原蛋白和约10％-约35％的弹性蛋白。另外，这类ECM组合物包含(i)非常低量的纤连蛋白(例如，少于0.1％的纤连蛋白)，例如，如通过ELISA测量的；(ii)没有或不可检测量的层粘连蛋白，例如，如通过ELISA测量的；和/或没有或不可检测量的糖胺聚糖，例如，如通过ELISA测量的。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物包含约30％-约72％的胶原蛋白和约10％-约35％的弹性蛋白。另外，这类ECM组合物可包含(i)纤连蛋白(例如，少于0.1％的纤连蛋白)，例如，如通过ELISA测量的；(ii)层粘连蛋白(例如，少于0.1％的层粘连蛋白)，例如，如通过ELISA测量的；糖胺聚糖(例如，少于0.1％的糖胺聚糖)，例如，如通过ELISA测量的；(iii)没有或不可检测量的细胞因子；(iv)没有或不可检测量的生长因子；和/或(v)没有或不可检测量的脱氧胆酸。

本文提供的ECM组合物具有使得它们非常适合于治疗/医学用途的特征。具体地，本文描述的ECM组合物是无菌的、无细胞的(例如，≥99％无细胞的)和/或不含细胞碎片的(例如，≥99％无细胞碎片的)。在特定实施方式中，本文提供的ECM组合物不包含细胞因子或包含不可检测量的细胞因子，如通过，例如，ELISA测量的。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物进一步缺乏试剂残留，即，最终ECM组合物包含不可检测量的用于制造该组合物的试剂。此外，在特定实施方式中，本文提供的ECM组合物包含最少量的核酸(例如，～41-171ng/mg干产物)和内毒素(例如，<0.25EU)。

本文提供的ECM组合物的另一有利特征是其吸收水的能力。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物吸收150％-225％的其重量的水。这种特征在本文提供的ECM组合物的例如伤口愈合应用中是有利的。

在具体的实施方式中，本文提供了包含约35-55％的胶原蛋白和约10-30％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述组合物包含34-53％的胶原蛋白和13-29％的弹性蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；且不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。

在具体的实施方式中，本文提供了包含约35-72％的胶原蛋白和约15-25％的弹性蛋白的ECM组合物。在另一具体实施方式中，本文提供了包含约40-70％的胶原蛋白和约15-25％的弹性蛋白的ECM组合物。在另一具体实施方式中，所述组合物包含40-70％的胶原蛋白和15-22％的弹性蛋白。在再另一具体实施方式中，所述组合物包含43-68％的胶原蛋白和18-21％的弹性蛋白。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白、少于0.001％的纤连蛋白、0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白、少于0.001％的层粘连蛋白、0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖、少于0.001％的糖胺聚糖、0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的细胞因子、生长因子和/或脱氧胆酸。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白、少于0.001％的纤连蛋白、0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白；层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白、少于0.001％的层粘连蛋白、0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白；糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖、少于0.001％的糖胺聚糖、0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖，和任选地不包含或包含不可检测量的细胞因子、生长因子和/或脱氧胆酸。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜(例如胎盘的绒毛膜板)获得，例如，来自人胎盘的绒毛膜(例如，绒毛膜板)。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约50-60％的胶原蛋白和约10-20％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，来自人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约45-55％的胶原蛋白和约15-25％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，来自人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约40-50％的胶原蛋白和约20-30％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，来自人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约30-40％的胶原蛋白和约25-35％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，来自人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约34-43％的胶原蛋白和约16-24％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，来自人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约37-42％的胶原蛋白和约16-24％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，来自人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约30-70％、30-60％、30-50％、30-40％、30-35％、34-43％、35-72％、35-40％、37-42％、40-70％、40-60％、40-50％、40-45％、40-65％、43-68％、45-50％、50-55％或55-60％的胶原蛋白和约10-30％、10-20％、10-15％、15-25％、15-22％、15-20％、16-24％、17-24％、18-21％、18-20％、20-24％、20-30％、20-25％、25-30％或约30-35％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜(例如，绒毛膜板)获得，例如，来自人胎盘的绒毛膜(例如，绒毛膜板)。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白或少于0.001％的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含层粘连蛋白，例如，0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖或少于0.001％的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含糖胺聚糖，例如，0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白、少于0.001％的纤连蛋白、0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白；层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白、少于0.001％的层粘连蛋白、0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白；糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖、少于0.001％的糖胺聚糖、0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖；和另外地不包含或包含不可检测量的细胞因子、生长因子和/或脱氧胆酸。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％或约72％的胶原蛋白和约10％、约15％、约18％、约20％、约25％、约30％或约35％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜(例如，绒毛膜板)获得，例如，来自人胎盘的绒毛膜(例如，绒毛膜板)。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白或少于0.001％的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含层粘连蛋白，例如，0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖或少于0.001％的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含糖胺聚糖，例如，0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白、少于0.001％的纤连蛋白、0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白；层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白、少于0.001％的层粘连蛋白、0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白；糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖、少于0.001％的糖胺聚糖、0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖；和另外地不包含或包含不可检测量的细胞因子、生长因子和/或脱氧胆酸。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约31％、约32％、约33％、约34％、约35％、约36％、约37％、约38％、约39％、约40％、约41％、约42％、约43％、约44％、约45％、约46％、约47％、约48％、约49％、约50％、约51％、约52％、约53％、约54％、约55％、约56％、约57％、约58％、约59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％或约72％的胶原蛋白和约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％、约25％、约26％、约27％、约28％、约29％、约30％、约31％、约32％、约33％、约34％或35％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜(例如，绒毛膜板)获得，例如，来自人胎盘的绒毛膜(例如，绒毛膜板)。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白或少于0.001％的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含层粘连蛋白；例如，0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖或少于0.001％的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含糖胺聚糖，例如，0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白、少于0.001％的纤连蛋白、0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白；层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白、少于0.001％的层粘连蛋白、0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白；糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖、少于0.001％的糖胺聚糖、0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖；和另外地不包含或包含不可检测量的细胞因子、生长因子和/或脱氧胆酸。

本文提供的ECM组合物可以以多种方式配制，且制剂的类型可以基于，例如，ECM组合物的预期用途来选择。本文提供的ECM组合物的示例性制剂详述于4.1.1节中。在具体的实施方式中，本文提供的ECM组合物配制为可流动基质，例如，为可以使用注射器施用的形式。在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物配制为颗粒物，例如，为粉末的形式。在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物配制为薄片。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物配制为包含作为非-ECM组分的一种或多种组分。参见4.1.1.1节。

在某些实施方式中，本文提供了包含至少一个本文提供的ECM薄片的叠层。在具体的实施方式中，本文提供了包含两个ECM薄片的叠层。在另一具体实施方式中，本文提供了包含至少一个本文提供的ECM薄片和至少一个其它平面去细胞组织(例如，去细胞/脱水羊膜，其完全去细胞或被去细胞以便保留成纤维细胞层)，或者具有平面人造组织替代物的叠层。在某些实施方式中，叠层可以通过在粘合剂，例如，胶水(例如，天然胶，例如，纤连蛋白、纤维蛋白或合成胶)的存在下将ECM薄片彼此接触或者一个或多个ECM薄片和另一平面去细胞组织彼此接触来产生。在某些实施方式中，叠层可以通过将两个或更多个ECM薄片或者一个或多个ECM薄片和一个或多个平面去细胞组织一起热干燥来产生。

本文提供的ECM组合物可以用于接种一种或多种类型的细胞和/或包含一种或多种类型的细胞，即，细胞可以用本文描述的ECM组合物培养或在其上生长，或者细胞可以分散在本文描述的ECM组合物中(例如，添加到ECM可流动基质组合物中)。本领域技术人员应理解，本领域中已知的任何细胞类型可以用本文提供的ECM组合物接种和/或培养，包括干细胞和非干细胞两者。可以在本文提供的ECM组合物上接种的细胞类型的非限制列表提供在4.1.2节中。

在另一方面中，本文提供了制备本文描述的ECM组合物的方法。参见4.2节。在某些实施方式中，本文提供的从胎盘(例如，人胎盘)制备ECM组合物的方法顺序地包括以下步骤：(i)从胎盘(例如，从获自刚生产后的母亲的胎盘或从存储的胎盘)除去羊膜、绒毛膜和脐带；(ii)使胎盘组织经受引起与胎盘组织相关的细胞渗透破坏的溶液；(iii)使胎盘与包含清洁剂的溶液接触；和(iv)使胎盘与包含碱的溶液接触。在某些实施方式中，从胎盘制备ECM组合物的方法使用胎盘(例如，人胎盘)的绒毛膜，其中所述方法顺序地包括以下步骤：(i)从胎盘(例如，从获自刚生产后的母亲的胎盘或从存储的胎盘)获得绒毛膜；(ii)使绒毛膜经受引起与绒毛膜相关的细胞渗透破坏的溶液；(iii)使绒毛膜与包含清洁剂的溶液接触；和(iv)使绒毛膜与包含碱的溶液接触。在某些实施方式中，从胎盘制备ECM组合物的方法使用胎盘(例如，人胎盘)的绒毛膜，其中所述方法顺序地包括以下步骤：(i)从胎盘(例如，从获自刚生产后的母亲的胎盘或从存储的胎盘)获得绒毛膜；(ii)刮擦和清洁绒毛膜；(iii)使绒毛膜经受引起与绒毛膜相关的细胞渗透破坏的溶液；(iv)使绒毛膜与包含清洁剂的溶液接触；和(v)研磨和冻干。在某些其它实施方式中，从胎盘制备ECM组合物的方法使用胎盘(例如，人胎盘)的绒毛膜，其中所述方法顺序地包括以下步骤：(i)从胎盘(例如，从获自刚生产后的母亲的胎盘或从存储的胎盘)获得绒毛膜；(ii)刮擦和清洁绒毛膜；(iii)使绒毛膜经受引起与绒毛膜相关的细胞渗透破坏的溶液；(iv)使绒毛膜与包含的第一清洁剂溶液接触，然后与第二清洁剂溶液接触，所述溶液包含清洁剂和螯合剂，例如，EDTA；和(v)冻干。本文描述的制备ECM组合物的方法使用例如，碱、清洁剂、螯合剂的组分，其量导致产生具有本文描述的那些的特定特征的ECM组合物。

制备本文描述的ECM组合物的方法使用例如，碱、清洁剂的组分，其量导致产生具有本文描述的那些的特定特征的ECM组合物。

在具体的实施方式中，本文提供了制备ECM组合物的方法，所述方法包括(i)从胎盘(例如，从获自刚生产后的母亲的胎盘或从存储的胎盘)除去羊膜、绒毛膜和脐带；(ii)将剩余胎盘组织置于引起与胎盘组织相关的细胞渗透破坏的溶液(例如，氯化钠(NaCl，例如，1M NaCl))中并使胎盘组织均质化；(iii)使胎盘组织与包含清洁剂，例如，脱氧胆酸钠(例如，2％的脱氧胆酸钠)的溶液接触；(iv)用例如水洗涤胎盘组织；(v)使胎盘组织与包含碱，例如，氢氧化钠(NaOH，例如，1M NaOH)的溶液接触；(vi)向包含胎盘组织的溶液添加酸溶液，例如，盐酸(HCl)，以使其达到或接近中性pH(例如，pH 6.0-8.0)；和(vii)将胎盘组织与溶液的液体部分分离(例如，通过离心)并收集胎盘组织，由此制备ECM组合物。根据该方法产生的ECM组合物一般是糊的形式(ECM糊)，其可以在收集后冷冻和存储用于随后使用，或者其可以在收集后直接用于制备本文描述的ECM制剂，例如，ECM薄片的制剂、ECM颗粒物制剂或ECM可流动基质。

在另一具体实施方式中，本文提供了制备ECM组合物的方法，所述方法包括(i)从胎盘(例如，从获自刚生产后的母亲的胎盘或从存储的胎盘)获得绒毛膜；(ii)将绒毛膜组织置于引起与绒毛膜组织相关的细胞渗透破坏的溶液(例如，氯化钠(NaCl，例如，1M NaCl))中并使绒毛膜组织均质化；(iii)使绒毛膜组织与包含清洁剂，例如，脱氧胆酸钠(例如，2％的脱氧胆酸钠)的溶液接触；(iv)用例如水洗涤绒毛膜组织；(v)使绒毛膜组织与包含碱，例如，氢氧化钠(NaOH，例如，1M NaOH)的溶液接触；(vi)向包含绒毛膜组织的溶液添加酸溶液，例如，盐酸(HCl)，以使其达到或接近中性pH(例如，pH 6.0-8.0)；和(vii)将绒毛膜组织与溶液的液体部分分离(例如，通过离心)并收集绒毛膜组织，由此制备ECM组合物。根据该方法产生的ECM组合物一般是糊的形式(ECM糊)，其可以在收集后冷冻和存储用于随后使用，或者其可以在收集后直接用于制备本文描述的ECM制剂，例如，ECM薄片的制剂、ECM颗粒物制剂或ECM可流动基质。

在另一具体实施方式中，本文提供了制备ECM组合物的方法，所述方法包括(i)从胎盘(例如，从获自刚生产后的母亲的胎盘或从存储的胎盘)获得绒毛膜，例如，绒毛膜板；(ii)刮擦和清洁绒毛膜；(iii)将绒毛膜组织置于引起与绒毛膜组织相关的细胞渗透破坏的溶液(例如，氯化钠(NaCl，例如，0.5M NaCl))中；(iv)使绒毛膜组织与包含清洁剂，例如，脱氧胆酸或脱氧胆酸钠(例如，2％的脱氧胆酸或脱氧胆酸钠)的溶液接触并清洗，例如，通过水清洗；和(v)研磨和冻干。ECM组合物(一般为糊(ECM糊))可以配制，例如，碾磨和配制，成各种形状和形式，例如，ECM薄片、ECM颗粒物制剂或ECM可流动基质。

在再另一具体实施方式中，本文提供了制备ECM组合物的方法，所述方法包括(i)从胎盘(例如，从获自刚生产后的母亲的胎盘或从存储的胎盘)获得绒毛膜，例如，绒毛膜板；(ii)刮擦和清洁绒毛膜；(iii)将绒毛膜组织置于引起与绒毛膜组织相关的细胞渗透破坏的溶液(例如，氯化钠(NaCl，例如，1.0M NaCl))中；(iv)使绒毛膜组织与包含清洁剂，例如，脱氧胆酸或脱氧胆酸钠(例如，0.05％-0.2％或0.3％-0.6％的脱氧胆酸或脱氧胆酸钠)，和EDTA(例如，1-5mM EDTA或5-10mM EDTA)的第一清洁剂溶液接触；(v)使绒毛膜组织与包含清洁剂，例如，脱氧胆酸或脱氧胆酸钠(例如，0.05％-0.2％或0.3％-0.6％的脱氧胆酸或脱氧胆酸钠)，和EDTA(例如，1-5mM EDTA或5-10mM EDTA)的第二清洁剂溶液接触，并例如，通过水清洗；(vi)冻干以产生去细胞的冻干的全绒毛膜，其可以配制，例如，碾磨和重悬浮在溶液(例如，水或磷酸盐缓冲盐水)中以形成去细胞的ECM糊，并配制成各种形状和形式，例如，ECM薄片、ECM颗粒物制剂或ECM可流动基质。

在具体的实施方式中，本文提供了产生ECM薄片的方法，所述方法包括(i)根据本文描述的方法制备ECM糊；(ii)悬浮ECM糊在，例如，水中，并添加悬浮的ECM溶液到合适的基质用于形成薄片，例如，添加ECM到模具；(iii)冷冻ECM；(iv)冻干冷冻的ECM；(v)从基质移除冻干的ECM并将其浸没于水中；和(vi)干燥ECM，例如，使用真空干燥器。

在具体的实施方式中，本文提供了产生ECM颗粒物的方法，所述方法包括(i)根据本文描述的方法制备ECM糊；(ii)悬浮ECM糊在，例如，水中；(iii)冷冻ECM；(iv)冻干冷冻的ECM；和(v)碾磨冻干的ECM。

在具体的实施方式中，本文提供了产生ECM可流动基质的方法，所述方法包括(i)根据本文描述的方法制备ECM糊；(ii)悬浮ECM糊在，例如，水中；(iii)冷冻ECM；(iv)冻干冷冻的ECM；和(v)使冻干的ECM微粉化。在微粉化的ECM悬浮在，例如，盐水中时，产生ECM可流动基质。

在另一方面中，本文提供了本文提供的ECM组合物的用途。参见4.3节。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物用于治疗/医学目的。参见4.3.1节。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物用于美容目的。参见4.3.2节。

在具体的实施方式中，本文提供的ECM组合物用于伤口治疗和/或处理。参见4.3.1节。在具体的实施方式中，本文提供的ECM组合物用于填充伤口，即，作为伤口填充料。在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物用于包扎(即，覆盖)伤口，例如，由烧伤引起的伤口。

在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物用于治疗和/或处理牙科病症，例如，修复牙体缺损。参见4.3.2节。

在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物用于治疗和/或处理口腔病变，参见4.3.3节。

在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物用于密封、填充和/或以其它方式处理受试者身体内的空隙。参见4.3.4节。

在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物用于受试者中的组织增量(tissue bulking)。参见4.3.5节。

在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物用于治疗受试者的尿失禁。参见4.3.6节。

在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物用于治疗受试者的膀胱输尿管反流。参见4.3.7节。

在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物用于治疗受试者的胃食管反流病。参见4.3.8节。

在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物用于治疗受试者中影响声带和/或喉之一或两者的疾病、障碍或其它异常。参见4.3.9节。

在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物用于处理或治疗受试者中的声门闭合不全(glottic incompetence)。参见4.3.10节。

在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物用于组织或器官的生物工程。参见4.3.11节。

在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物用于美容目的，例如，为美容目的增强(augment)受试者的皮肤(例如，使受试者看起来更年轻)。参见4.3.12节。

在另一方面中，本文提供了包含本文提供的ECM组合物的试剂盒。本文提供的试剂盒通常在便于分配给具有本领域技能的实施者的包装中包含本文描述的ECM组合物。参见第5节。

3.1附图说明

图1A-1F：在植入白化新西兰白兔后，根据本文描述的方法制备的ECM薄片的组织反应性与猪膀胱基质组织的反应性相比较。在植入后第1周，邻近膀胱基质(UBM)薄片的组织显示肉芽形成和炎症反应的明显迹象(图1A)，而ECM薄片显示散布着粒细胞的轻度浸润的肌肉组织(图1B)。在第2和第4周，肉芽形成邻近UBM薄片仍然是明显的(图1C和1E)，而邻近ECM薄片的组织事实上没有显示肉芽形成且看起来是正常的(图1D和1F)。

图2A-2F：在植入白化新西兰白兔后，根据本文描述的方法制备的ECM颗粒物的组织反应性与MATRISTEM的组织反应性相比较。在植入后第1周，ECM颗粒物显示出表明炎症的一些肉芽形成(图2B)，但显著少于UBM颗粒物(图2A)，而在第2和第4周，ECM颗粒物与UBM颗粒物相比显示肉芽形成的显著减少(分别图2D和2F)，UBM颗粒物在第2和第4周时仍然显示出大量的炎症(分别图2C和2E)。

图3A-3F：在植入白化新西兰白兔后，根据本文描述的方法制备的ECM可流动基质的组织反应性与牛来源的伤口基质产品(INTEGRA^TM Flowable)的组织反应性相比较。牛来源的伤口基质产品(INTEGRA^TM Flowable)在第1周时显示肉芽形成(图3A)，在第2和第4周时显示瘢痕形成(图3C和3E中的较亮区域)，而ECM可流动基质仅在第1周中显示实质的炎性反应(图3B)，接着在第2和第4周时接近完全痊愈(分别图3D和3F)。

4.具体实施方式

本文提供了细胞外基质(ECM)组合物(参见4.1节)及其制备方法(参见4.2节)。本文还提供了本文提供的ECM组合物的用途(参见4.3节)和包含本文提供的ECM组合物的试剂盒(参见第5节)。

4.1细胞外基质组合物

在一个方面中，本文提供了使用胎盘组织，例如，人胎盘组织制备的细胞外基质(ECM)组合物。本文描述的ECM组合物包含ECM组分，例如，胶原蛋白和弹性蛋白，其量与本领域中已知的ECM组合物中的量不同。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物包含约30％-约60％的胶原蛋白和约10％-约35％的弹性蛋白。如本文中使用的，术语“约”是指所指的数值加或减10％的量。另外，本文提供的这类ECM组合物包含(i)非常低量的纤连蛋白(例如，少于0.1％的纤连蛋白)，例如，如通过ELISA测量的；(ii)没有或不可检测量的层粘连蛋白，例如，如通过ELISA测量的；和/或没有或不可检测量的糖胺聚糖，例如，如通过ELISA测量的。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物包含约30％-约72％的胶原蛋白和约10％-约35％的弹性蛋白。另外，这类ECM组合物可以包含(i)纤连蛋白(例如，少于0.1％的纤连蛋白)，例如，如通过ELISA测量的；(ii)层粘连蛋白(例如，少于0.1％的层粘连蛋白)，例如，如通过ELISA测量的；糖胺聚糖(例如，少于0.1％的糖胺聚糖)，例如，如通过ELISA测量的；(iii)没有或不可检测量的细胞因子；(iv)没有或不可检测量的生长因子；和/或(v)没有或不可检测量的脱氧胆酸。

本文提供的ECM组合物具有使得它们非常适合于治疗/医学用途的特征。具体地，本文描述的ECM组合物是无菌的、无细胞的(例如，≥99％无细胞)和/或不含细胞碎片的(例如，≥99％不含细胞碎片)。在特定实施方式中，本文提供的ECM组合物不包含细胞因子或包含不可检测量的细胞因子，如通过例如ELISA测量的。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物还缺乏试剂残留物，即，最终ECM组合物包含不可检测量的用于制备组合物的试剂。此外，在特定实施方式中，本文提供的ECM组合物包含最少量的核酸(～41-171ng/mg干产物)和内毒素(<0.25EU)。

本文提供的ECM组合物的另一有利特征是其吸水的能力。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物吸收150％-225％的其重量的水。

在具体的实施方式中，本文提供了包含34-53％的胶原蛋白和13-29％的弹性蛋白的ECM组合物。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，来自人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约35-55％的胶原蛋白和约10-30％的弹性蛋白的ECM组合物。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，来自人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。

在具体的实施方式中，本文提供了包含约35-72％的胶原蛋白和约15-25％的弹性蛋白的ECM组合物。在另一具体实施方式中，本文提供了包含约40-70％的胶原蛋白和约15-25％的弹性蛋白的ECM组合物。在另一具体实施方式中，所述组合物包含40-70％的胶原蛋白和15-22％的弹性蛋白。在再另一具体实施方式中，所述组合物包含43-68％的胶原蛋白和18-21％的弹性蛋白。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白、少于0.001％的纤连蛋白、0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白、少于0.001％的层粘连蛋白、0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖、少于0.001％的糖胺聚糖、0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的细胞因子、生长因子和/或脱氧胆酸。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白、少于0.001％的纤连蛋白、0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白；层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白、少于0.001％的层粘连蛋白、0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白；糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖、少于0.001％的糖胺聚糖、0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖，且另外地不包含或包含不可检测量的细胞因子、生长因子和/或脱氧胆酸。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜(例如胎盘的绒毛膜板)获得，例如，来自人胎盘的绒毛膜(例如绒毛膜板)。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约50-60％的胶原蛋白和约10-20％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，来自人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约45-55％的胶原蛋白和约15-25％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，来自人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。

在另一具体实施方式中，本文提供包含约40-50％的胶原蛋白和约20-30％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，来自人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约30-40％的胶原蛋白和约25-35％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，来自人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约34-43％的胶原蛋白和约16-24％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，来自人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约37-42％的胶原蛋白和约16-24％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜，例如，来自人胎盘的绒毛膜获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约30-70％、30-60％、30-50％、30-40％、30-35％、34-43％、35-72％、35-40％、37-42％、40-70％、40-60％、40-50％、40-45％、40-65％、43-68％、45-50％、50-55％或55-60％的胶原蛋白和约10-30％、10-20％、10-15％、15-25％、15-22％、15-20％、16-24％、17-24％、18-21％、18-20％、20-24％、20-30％、20-25％、25-30％或约30-35％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜(例如绒毛膜板)获得，例如，来自人胎盘的绒毛膜(例如，绒毛膜板)。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白或少于0.001％的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含层粘连蛋白，例如，0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖或少于0.001％的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含糖胺聚糖，例如，0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白、少于0.001％的纤连蛋白、0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白；层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白、少于0.001％的层粘连蛋白、0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白；糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖、少于0.001％的糖胺聚糖、0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖，且另外地不包含或包含不可检测量的细胞因子、生长因子和/或脱氧胆酸。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％或约72％的胶原蛋白和约10％、约15％、约18％、约20％、约25％、约30％,或约35％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜(例如，绒毛膜板)获得，例如，来自人胎盘的绒毛膜(例如，绒毛膜板)。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白或少于0.001％的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含层粘连蛋白，例如，0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖或少于0.001％的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含糖胺聚糖，例如，0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白、少于0.001％的纤连蛋白、0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白；层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白、少于0.001％的层粘连蛋白、0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白；糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖、少于0.001％的糖胺聚糖、0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖，和另外地不包含或包含不可检测量的细胞因子、生长因子和/或脱氧胆酸。

在另一具体实施方式中，本文提供了包含约31％、约32％、约33％、约34％、约35％、约36％、约37％、约38％、约39％、约40％、约41％、约42％、约43％、约44％、约45％、约46％、约47％、约48％、约49％、约50％、约51％、约52％、约53％、约54％、约55％、约56％、约57％、约58％、约59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％或约72％的胶原蛋白和约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％、约25％、约26％、约27％、约28％、约29％、约30％、约31％、约32％、约33％、约34％,或35％的弹性蛋白的ECM组合物。在具体的实施方式中，所述ECM组合物从胎盘组织，例如，人胎盘组织获得。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物从胎盘的绒毛膜(例如，绒毛膜板)获得，例如，来自人胎盘的绒毛膜(例如，绒毛膜板)。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白或少于0.001％的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含层粘连蛋白，例如，0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖或少于0.001％的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含糖胺聚糖，例如，0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖。在另一具体实施方式中，所述ECM组合物包含非常低量的纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白或少于0.001％的纤连蛋白；不包含或包含不可检测量的层粘连蛋白；和不包含或包含不可检测量的糖胺聚糖。在某些实施方式中，所述ECM组合物包含纤连蛋白，例如，少于0.1％的纤连蛋白、少于0.05％的纤连蛋白、少于0.01％的纤连蛋白、少于0.001％的纤连蛋白、0.001-0.1％的纤连蛋白、0.001-0.05％的纤连蛋白、0.001-0.01％的纤连蛋白、0.01-0.1％的纤连蛋白或0.01-0.05％的纤连蛋白；层粘连蛋白，例如，少于0.1％的层粘连蛋白、少于0.05％的层粘连蛋白、少于0.01％的层粘连蛋白、少于0.001％的层粘连蛋白、0.001-0.1％的层粘连蛋白、0.001-0.05％的层粘连蛋白、0.001-0.01％的层粘连蛋白、0.01-0.1％的层粘连蛋白或0.01-0.05％的层粘连蛋白；糖胺聚糖，例如，少于0.1％的糖胺聚糖、少于0.05％的糖胺聚糖、少于0.01％的糖胺聚糖、少于0.001％的糖胺聚糖、0.001-0.1％的糖胺聚糖、0.001-0.05％的糖胺聚糖、0.001-0.01％的糖胺聚糖、0.01-0.1％的糖胺聚糖或0.01-0.05％的糖胺聚糖，和另外地不包含或包含不可检测量的细胞因子、生长因子和/或脱氧胆酸。

在某些实施方式中，本文描述的ECM组合物中的胶原蛋白包含端肽胶原蛋白或由其组成。在某些实施方式中，本文描述的ECM组合物中的胶原蛋白包含非端肽胶原蛋白(atelopeptide collagen)或由其组成。在某些实施方式中，由端肽胶原蛋白和无端肽胶原蛋白组成。

本文提供的ECM组合物中胶原蛋白的主要类型是I型胶原蛋白。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白包含按干重计至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％或大于80％的I型胶原蛋白。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白包含按干重计50％和70％之间的I型胶原蛋白、60％和80％之间的I型胶原蛋白或70％和90％之间的I型胶原蛋白。在具体的实施方式中，本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白包含60％和80％之间的I型胶原蛋白。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白包含胶原蛋白类型的混合物，例如，包含I型胶原蛋白以及III型胶原蛋白和/或IV型胶原蛋白。

在具体的实施方式中，本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白包含大量的I型胶原蛋白(例如，60％-80％的I型胶原蛋白)，同时也包含III型胶原蛋白。例如，除I型胶原蛋白外，本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白可以包含按干重计1％和5％之间的III型胶原蛋白、5％和10％之间的III型胶原蛋白或1％和10％之间的III型胶原蛋白；或者本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白可以包含按干重计约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％的III型胶原蛋白。

在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白包含大量的I型胶原蛋白(例如，60％-80％的I型胶原蛋白)，同时也包含IV型胶原蛋白。例如，除I型胶原蛋白外，本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白可以包含按干重计1％和5％之间的IV型胶原蛋白、5％和10％之间的IV型胶原蛋白或1％和10％之间的IV型胶原蛋白；或者本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白可以包含按干重计约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％的IV型胶原蛋白。

在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白包含大量的I型胶原蛋白(例如，60％-80％的I型胶原蛋白)，同时也包含III型胶原蛋白和IV型胶原蛋白。例如，除I型胶原蛋白外，本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白可以包含按干重计(i)1％和5％之间的III型胶原蛋白、5％和10％之间的III型胶原蛋白或1％和10％之间的III型胶原蛋白；或者本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白可以包含按干重计约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％的III型胶原蛋白；和(ii)按干重计1％和5％之间的IV型胶原蛋白、5％和10％之间的IV型胶原蛋白或1％和10％之间的IV型胶原蛋白；或者本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白可以包含按干重计约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％的IV型胶原蛋白。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白是交联的，例如，用交联剂交联。示例性的交联剂包括戊二醛(参见，例如，U.S.专利No.4,852,640,5,428,022,5,660,692和5,008,116，其内容通过引入整体并入本文)、1,4-丁二醇二缩水甘油醚和京尼平(参见，例如，U.S.专利申请公开No.2003/0049301，其内容通过引入整体并入本文)。其它的示例性交联剂和交联胶原蛋白的方法描述于U.S.专利No.5,880,242和6,117,979中及Zeeman等,2000,J Biomed Mater Res.51(4):541-8,van Wachem等,2000,J Biomed Mater Res.53(1):18-27,van Wachem等,1999,J Biomed Mater Res.47(2):270-7,Zeeman等,1999,J Biomed Mater Res.46(3):424-33,Zeeman等,1999,Biomaterials 20(10):921-31中，其内容通过引入整体并入本文。

4.1.1制剂

本文提供的ECM组合物可以以多种方式配制，且制剂类型可以基于，例如，ECM组合物的预想用途来选择。

在具体的实施方式中，本文提供的ECM组合物配制为可流动基质，例如，可以使用注射器施用的形式。因此，本文提供了包含本文描述的ECM组合物的注射器。在某些实施方式中，本文提供的可流动基质ECM组合物可以在水或磷酸盐缓冲盐水中配制为，例如，溶液或悬浮液，例如，嗽口水。当在溶液中时(即，作为可流动基质)，本文提供的ECM组合物可以以本领域技术人员可用的任何浓度存在。在某些实施方式中，本文提供的可流动基质ECM组合物包含200-300mg/ml、100-200mg/ml、150-250mg/ml、0.1-100mg/ml、1-100mg/ml、1-75mg/ml、1-50mg/ml、1-40mg/ml、10-40mg/ml或20-40mg/ml的ECM。在某些实施方式中，本文提供的可流动基质ECM组合物包含约5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、40mg/ml、45mg/ml、50mg/ml ECM、75mg/ml、100mg/ml、125mg/ml、150mg/ml、175mg/ml、200mg/ml、225mg/ml、250mg/ml、275mg/ml或300mg/ml的ECM。在具体的实施方式中，本文提供了包含约200mg/ml的ECM的可流动基质ECM组合物。在某些实施方式中，本文提供的可流动基质ECM组合物通过本领域技术人员使用利用本文描述的方法制备的冻干的、微粉化的ECM制备，例如，所述冻干的、微粉化的ECM以试剂盒的形式提供，伴随适宜的悬浮溶液，例如，盐水，且本领域技术人员可以通过将冻干的、微粉化的ECM悬浮在悬浮溶液中容易地产生可流动基质ECM组合物。

在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物配制为颗粒物，例如，为粉末形式。当作为颗粒物存在时，本文提供的ECM组合物可以提供在适合储存颗粒物的任何容器中，例如，小瓶(例如，玻璃小瓶)。当作为颗粒物存在时，本文提供的ECM组合物可以以本领域技术人员可用的任何浓度提供在容器中。在某些实施方式中，本文提供的颗粒物ECM组合物包含200-300mg、100-200mg、150-250mg、50-100mg、25-50mg、10-25mg、5-10mg或1-5mg的ECM。在某些实施方式中，本文提供的可流动基质ECM组合物包含约5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40m、45mg、50m ECM、75mg、100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、225mg、250mg、275mg或300mg的ECM。在具体的实施方式中，本文提供了包含约200mg ECM的颗粒物ECM组合物。在另一具体实施方式中，本文提供了包含约100mg ECM的颗粒物ECM组合物。

在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物配制为薄片，即，平面的固体ECM层。当作为薄片存在时，本文提供的ECM组合物可以成形为适合其预期用途的任何厚度和尺寸的薄片。在某些实施方式中，本文提供的ECM薄片以标准尺寸提供，例如，5x 5cm或8x 8cm尺寸，且可以在使用前由本领域技术人员操作(例如，切割)，例如，切割以使得它们具有适合其预期用途(例如，作为伤口敷料)的尺寸。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物配制为具有约0.1-0.15mm、0.15-0.2mm、0.1-0.2mm、0.2-0.25mm、0.25-0.3mm或0.2-0.3mm的厚度的薄片。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物配制为具有约0.1mm、0.15mm、0.2mm、0.25mm或0.3mm的厚度的薄片。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物配制为2x 2cm薄片、3x 3cm薄片、4x 4cm薄片、5x 5cm薄片、6x 6cm薄片、7x 7cm薄片、8x 8cm薄片或9x 9cm薄片，其中所述薄片具有约0.1-0.15mm、0.15-0.2mm、0.1-0.2mm、0.2-0.25mm、0.25-0.3mm或0.2-0.3mm的厚度。

在某些实施方式中，本文提供了包含至少一个本文提供的ECM薄片的叠层。在具体的实施方式中，本文提供了包含两个ECM薄片的叠层。在另一具体实施方式中，本文提供了包含至少一个本文提供的ECM薄片和至少一个另外的平面去细胞组织(例如，去细胞/脱水的羊膜，其完全去细胞或被去细胞以保留成纤维细胞层)，或者具有平面人造组织替代物的叠层。在某些实施方式中，叠层可以通过在粘合剂，例如，胶水(例如，天然胶，例如，纤连蛋白、纤维蛋白，或合成胶)的存在下将ECM薄片或者将一个或多个ECM薄片和另一平面去细胞组织彼此接触来产生。在某些实施方式中，叠层可以通过将两个或更多个ECM薄片或者一个或多个ECM薄片和一个或多个平面去细胞组织一起热干燥来产生。

4.1.1.1非-ECM组分

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物配制为包含正常情况下不与ECM相关的一种或多种组分。

在一个实施方式中，本文提供的ECM组合物与药学上或美容上可接受的载体组合，以使得ECM组合物适合施用于受试者，例如，需要这种施用的人类受试者。施用的形式包括，但不限于注射剂、溶液、乳膏、凝胶、植入物、泵、油膏、乳液、悬浮液、微球、颗粒、微粒、纳米颗粒、脂质体、糊剂、贴片、片剂、透皮递送装置、喷雾剂、气雾剂和本领域技术人员已知的其它方式。这样的药学上或美容上可接受的载体是本领域技术人员通常已知的。术语“药学上或美容上可接受的载体”或“药学上或美容上可接受的媒介”在本文中用于指(但不限于)任何液体、固体或半固体，包括但不限于，水或盐水、凝胶、乳膏、药膏、溶剂、稀释剂、流体软膏基质、油膏、糊料、植入物、脂质体、胶束、巨胶束等等，其适合用于与活的动物或人体组织接触而不引起不良的生理或美容反应，且其不以有害的方式与组合物(例如，ECM)的其它组分相互作用。

在一个实施方式中，本文提供的ECM组合物构造为使得其能够释放活性成分，例如，除ECM组合物之外的活性成分。例如，本文提供的ECM组合物可以在生产过程中或之后用生物分子浸渍。示例性的生物分子包括，但不限于抗生素(如克林霉素、米诺环素、强力霉素、庆大霉素)、激素、生长因子、抗肿瘤剂、抗真菌剂、抗病毒剂、止痛药、抗组胺剂、抗炎剂、抗感染药、元素银、抗生素、杀菌酶(如溶酶体(lysozome))、伤口愈合剂(如细胞因子，包括但不限于，PDGF、TGF、胸腺素)、透明质酸、伤口密封剂(如具有或不具有凝血酶的纤维蛋白)及细胞引诱剂和支架试剂。在具体的实例中，本文提供的ECM组合物用至少一种生长因子浸渍，例如，成纤维细胞生长因子或表皮生长因子。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物可以用小有机分子浸渍，如特定生物化学过程的特异性抑制剂，例如，膜受体抑制剂、激酶抑制剂、生长抑制剂和抗癌药物。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物与水凝胶组合。可以使用本领域技术人员已知的任何水凝胶，例如，Graham,1998,Med.Device Technol.9(1)：18-22；Peppas等,2000,Eur.J.Pharm.Biopharm.50(1)：27-46；Nguyen等,2002,Biomaterials,23(22)：4307-14；Henincl等,2002,Adv.Drug Deliv.Rev 54(1)：13-36；Skelhorne等,2002,Med.Device.Technol.13(9):19-23或Schmedlen等,2002,Biomaterials 23：4325-32中公开的任何水凝胶组合物。在具体的实施方式中，水凝胶施用到ECM组合物上，即，在ECM组合物的表面上放出。例如，水凝胶可以喷射到ECM组合物上、在ECM组合物的表面上饱和、用ECM组合物浸没、用ECM组合物浸浴或涂布到ECM组合物的表面上。可用于本文提供的方法和组合物中的水凝胶可以从本领域中已知的任何水相互作用的或水溶性的聚合物制备，包括但不限于，聚乙烯醇(PVA)、聚羟乙基甲基丙烯酸酯、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、透明质酸、葡聚糖及其衍生物和类似物。

4.1.2细胞

本文提供的ECM组合物可以包含一种或多种类型的细胞、接种有一种或多种类型的细胞或培养一种或多种类型的细胞。例如，细胞可以用本文描述的ECM组合物培养和在其上生长或者分散在本文描述的ECM组合物上或其内(例如，添加到ECM可流动基质组合物)。本领域技术人员将理解，本领域中已知的任何细胞类型可以用本文提供的ECM组合物接种和/或培养，包括干细胞和非-干细胞。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物接种有和/或包含干细胞。干细胞可以是适合于给定目的的任何干细胞，且可以是全能或多能干细胞，或者可以是祖细胞。在具体的实施方式中，本文提供的ECM组合物接种有和/或包含胎盘干细胞，如U.S.专利No.7,045,148；7,468,276；8,057,788和8,202,703中描述的那些，其公开内容通过引用全文并入本文。在另一具体实施方式中，本文提供的ECM组合物接种有和/或包含胚胎干细胞、胚胎生殖细胞、间充质干细胞、骨髓源干细胞、造血祖细胞(例如，来自外周血、胎儿血、胎盘血、脐带血、胎盘灌流液等的造血干细胞)、成体干细胞、神经干细胞、肝脏干细胞、胰腺干细胞、内皮干细胞、心肌干细胞、肌肉干细胞、脂肪干细胞等等。在具体的实施方式中，干细胞是人干细胞。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物接种有和/或包含一种或多种类型的非-干细胞。如本文中使用的，“非-干细胞”是指终末分化的细胞。例如，在一个实施方式中，本文提供的ECM组合物包含多个成纤维细胞。可以与本文提供的ECM组合物组合的非-干细胞包括，但不限于成纤维细胞或成纤维细胞样细胞、真皮细胞、内皮细胞、上皮细胞、肌细胞、心肌细胞和胰腺细胞。在某些其它实施方式中，本文提供的ECM组合物接种有和/或包含至少两种类型的非-干细胞。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物培养细胞足以使多种所述细胞附着于ECM组合物的时间。根据这样的实施方式，ECM组合物可以在ECM组合物与细胞接触之前成形为可用的构型，例如，成形为薄片、栓、管或其它构型。

ECM组合物可以培养至少1X 10⁶、3X 10⁶、1X 10⁷、3X 10⁷、1X 10⁸、3X 10⁸、1X 10⁹、3X 10⁹、1X 10¹⁰、3X 10¹⁰、1X 10¹¹、3X 10¹¹或1X 10¹²个细胞；或可以不超过1X 10⁶、3X 10⁶、1X 10⁷、3X 10⁷、1X 10⁸、3X 10⁸、1X 10⁹、3X 10⁹、1X 10¹⁰、3X 10¹⁰、1X10¹¹、3X 10¹¹或1X 10¹²个细胞。

4.1.1表征

本领域中已知的基于生物化学的分析可以用于确认使用本文描述的方法产生的ECM组合物的生物化学组成。蛋白质含量可以使用，例如，吸光度分析测定，如Layne,E,Spectrophotometric and Turbidimetric Methods for Measuring Proteins,Methods in Enzymology 3：447-455,(1957)；Stoscheck,C M,Quantitation of Protein,Methods in Enzymology 182：50-69,(1990)),Scopes,R K,Analytical Biochemistry 59：277,(1974)和Stoscheck,C M.Quantitation of Protein,Methods in Enzymology 182：50-69,(1990))中描述的那些。或者，基于比色的分析可以用于测量特定蛋白质的含量，包括改良的劳里测定法、缩二脲测定法、Bradford测定法和二喹啉甲酸(Smith)测定法(参见，例如，Stoscheck,C M,Quantitation of Protein,Methods in Enzymology 182：50-69(1990))。

本文提供的ECM组合物的总胶原蛋白含量可使用，例如，羟脯氨酸或定量的染料基测定试剂盒测定，例如，通过Biocolor Ltd,UK生产的SIRCOL^TM试剂盒。本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白类型可以使用本领域中已知的标准方法测定，例如，ELISA测定法。

本文提供的ECM组合物的总弹性蛋白含量可使用，例如，定量的染料基测定法测定，例如，通过Biocolor Ltd,UK生产的基于染料的测定试剂盒(FASTIN)。

本文提供的ECM组合物的总糖胺聚糖(GAG)含量可使用，例如，由Biocolor Ltd,UK生产的定量的基于染料的测定试剂盒(BLYSCAN)测定。GAG含量也可以使用本领域中已知的方法通过ELISA测量。

本文提供的ECM组合物的总层粘连蛋白和纤连蛋白含量可使用，例如，ELISA测定法测定，例如，夹心ELISA分析，例如，作为来自Takara Bio Inc.,Shiga,日本的试剂盒提供的对于层粘连蛋白或纤连蛋白特异性的ELISA分析。

本文描述的ECM组合物是非-免疫原性的且与受试者(例如，人类受试者)的组织生物相容。如本文使用的“生物相容性”是指按照不产生毒性的、有害的或免疫的反应或者在活体组织中不产生排斥而言是生物相容的性质。可以进行生物相容性分析以确认本文提供的ECM组合物的生物相容性。这样的分析是本领域技术人员已知的且包括，但不限于细胞毒性分析(例如，ISO MEM Elution测试)、兔眼刺激测试、溶血检验和产热原性分析(pyrogencity assay)。

本文提供的ECM组合物可以配制为无菌的，且因此不含微生物污染物。微生物的存在可以使用本领域已知的方法测定，例如，ECM组合物直接接种到细菌生长培养基中/之上，例如，大豆酪蛋白培养基或巯基醋酸盐培养基。

本文提供的ECM组合物可以配制为几乎不包含、不包含或包含不可检测水平的内毒素。本文提供的ECM组合物中内毒素的存在可以使用，例如，Limulus Amebocyte Lysate(LAL)测试(细菌内毒素测试)，一种本领域中公知的体外测试，来测定。在具体的实施方式中，本文提供的ECM组合物包含每制剂少于20的内毒素单位(EU)(例如，本文提供的ECM的薄片包含少于20EU)。

4.2制备细胞外基质组合物的方法

在一个方面中，本文提供了产生胎盘细胞外基质(ECM)组合物的方法。在某些实施方式中，本文提供的从胎盘(例如，人胎盘)制备ECM组合物的方法顺序地包括以下步骤：(i)从胎盘(例如，从获自刚生产的母亲的胎盘或从存储的胎盘)除去羊膜、绒毛膜和脐带；(ii)胎盘组织用引起与胎盘组织相关的细胞的渗透破坏的溶液处理；(iii)使胎盘与包含清洁剂的溶液接触；和(iv)使胎盘与包含碱的溶液接触。在某些实施方式中，从胎盘制备ECM组合物的方法使用胎盘(例如，人胎盘)的绒毛膜，其中所述方法顺序地包括以下步骤：(i)从胎盘(例如，从获自刚生产的母亲的胎盘或从存储的胎盘)获得绒毛膜；(ii)绒毛膜用引起与绒毛膜相关的细胞的渗透破坏的溶液处理；(iii)使绒毛膜与包含清洁剂的溶液接触；和(iv)使绒毛膜与包含碱的溶液接触。在某些实施方式中，从胎盘制备ECM组合物的方法使用胎盘(例如，人胎盘)的绒毛膜，其中所述方法顺序地包括以下步骤：(i)从胎盘(例如，从获自刚生产的母亲的胎盘或从存储的胎盘)获得绒毛膜；(ii)刮擦和清洁绒毛膜；(iii)绒毛膜用引起与绒毛膜相关的细胞的渗透破坏的溶液处理；(iv)使绒毛膜与包含清洁剂的溶液接触；和(v)研磨和冻干。在某些其它实施方式中，从胎盘制备ECM组合物的方法使用胎盘(例如，人胎盘)的绒毛膜，其中所述方法顺序地包括以下步骤：(i)从胎盘(例如，从获自刚生产的母亲的胎盘或从存储的胎盘)获得绒毛膜；(ii)刮擦和清洁绒毛膜；(iii)绒毛膜用引起与绒毛膜相关的细胞的渗透破坏的溶液处理；(iv)使绒毛膜与包含的第一清洁剂溶液接触，然后与第二清洁剂溶液接触，所述溶液包含清洁剂和螯合剂，例如，EDTA；和(v)冻干。重要地，本文描述的制备ECM组合物的方法使用例如，碱、清洁剂、螯合剂的组分，其量导致产生具有本文描述的那些的特定特征的ECM组合物。

本文提供的产生ECM的方法中使用的胎盘一般在足月产后获得，且可以是新鲜分离的或者之前分离并冷冻保存的。一般地，当冷冻的胎盘用于根据本文描述的方法制备ECM组合物时，胎盘在使用前被解冻，例如，在室温下。例如，胎盘可以在～22-23℃下解冻～24小时或直到胎盘准备就绪。

在某些实施方式中，在根据本文描述的方法从胎盘制备ECM组合物前，胎盘被放血，即，排干在生产后保留的脐带血。在某些实施方式中，胎盘在用于本文提供的方法中之前是70％放血的、80％放血的、90％放血的、95％放血的或99％放血的。

使胎盘组织(例如，已经从其除去羊膜、绒毛膜和脐带的胎盘组织；或者来自胎盘的绒毛膜)与引起与在本文提供的方法中处理的胎盘组织相关的细胞的渗透破坏的溶液接触的步骤导致除去血液和血液组分以及通常与胎盘组织相关的细胞和细胞碎片。因此，本领域技术人员将理解，能够引起细胞的渗透破坏的任何溶液可用于本文描述的方法中。例如，NaCl、氯化钾(KCl)、硫酸铵、单糖、二糖(例如，20％的蔗糖)、亲水聚合物(例如，聚乙二醇)、甘油可以由于其渗透势而用于破坏细胞。

在具体的实施方式中，NaCl用于引起与在本文描述的方法中使用的胎盘组织(例如，已经从其除去羊膜、绒毛膜和脐带的胎盘组织；或者来自胎盘的绒毛膜)相关的细胞的渗透破坏。在具体的实施方式中，包含约0.25M、0.5M、0.75M、1.0M、1.25M、1.5M、1.75M、2M、2.25M或2.5M NaCl的溶液用于引起与本文描述的方法中使用的胎盘组织相关的细胞的渗透破坏。在具体的实施方式中，包含约0.25M-5M、约0.5M-4M、约0.75M-3M或约1.0M-2.0M NaCl的溶液用于引起与本文描述的方法中使用的胎盘组织相关的细胞的渗透破坏。

使胎盘组织(例如，已经从其除去羊膜、绒毛膜和脐带的胎盘组织；或者来自胎盘的绒毛膜)与引起渗透破坏的溶液接触的步骤可以根据本领域技术人员的判断在任何温度下进行。在某些实施方式中，该步骤在约0℃-30℃、约5℃-25℃、约5℃-20℃或约5℃-15℃的温度下进行。在某些实施方式中，该步骤在约0℃、约5℃、约10℃、约15℃、约20℃、约25℃或约30℃下进行。在具体的实施方式中，该步骤在室温下进行。在另一具体实施方式中，该步骤在37℃±5℃下进行。

使胎盘组织(例如，已经从其除去羊膜、绒毛膜和脐带的胎盘组织；或者来自胎盘的绒毛膜)与引起渗透破坏的溶液接触的步骤可以根据本领域技术人员的判断进行合适的时间。在某些实施方式中，该步骤可以进行约1-24小时、约2-20小时、约5-15小时、约8-12小时或约2-5小时。在具体的实施方式中，该步骤在室温下进行约18-26小时。在另一具体实施方式中，该步骤在37℃±5℃下进行约18-26小时。

使胎盘组织(例如，已经从其除去羊膜、绒毛膜和脐带的胎盘组织；或者来自胎盘的绒毛膜)与清洁剂接触的步骤导致从本文提供的ECM除去细胞和细胞碎片(例如，细胞膜)以及除去核酸。因此，用于本文描述的方法中的清洁剂可以是本领域技术人员已知能够破坏细胞或亚细胞膜的任何清洁剂。在某些实施方式中，清洁剂是离子型的。例如，在某些实施方式中，清洁剂是脱氧胆酸钠、脱氧胆酸或十二烷基硫酸钠。在某些实施方式中，清洁剂是两性离子的。在某些实施方式中，清洁剂是非离子的。例如，在某些实施方式中，清洁剂可以是清洁剂，如-20或Triton X清洁剂，如Triton X 100。胶原蛋白组合物可以在由本领域技术人员判断为适合从组合物除去不希望的组分的条件下与清洁剂接触。

在具体的实施方式中，本文提供的方法中使用的清洁剂是脱氧胆酸钠或脱氧胆酸。所述脱氧胆酸钠或脱氧胆酸可以以合适的浓度用于本文描述的方法中以除去细胞、细胞碎片和核酸。在本文描述的方法的特定实施方式中，脱氧胆酸钠或脱氧胆酸可以以例如，约1.5％、约2％或约2.5％的终浓度使用。在具体的实施方式中，所述脱氧胆酸钠或脱氧胆酸以约2％的终浓度用于本文描述的方法中。

本文描述的方法的其它特定实施方式中，例如，在第一清洁剂溶液中使用清洁剂，例如脱氧胆酸钠或脱氧胆酸，以及螯合剂，例如乙二胺四乙酸(EDTA)的方法中，例如，可以以约0.05-约0.1％、约0.05％-约0.2％、约0.2-约0.3％、约0.3％-约0.4％或约0.4-约0.5％的终浓度或者以约0.05％、约0.06％、约0.07％、约0.08％、约0.09％、约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％或约0.5％的终浓度使用这样的脱氧胆酸钠或脱氧胆酸。在具体的这类实施方式中，脱氧胆酸钠或脱氧胆酸可以以约0.067％的终浓度使用。对于这样的第一清洁剂溶液中存在的螯合剂，当螯合剂是EDTA时，例如，可以以约1-约5mM、约2-约5mM、约2-约4mM、约3-约4mM、约3mM-约5mM、约5-约10mM、约6-约10mM、约7-约9mM或约8-约10mM的终浓度或者约1mM、约2mM、约3mM、约4mM、约5mM、约6mM、约7mM、约8mM、约9mM或约10mM的终浓度使用这种EDTA。在第一清洁剂溶液的具体实施方式中，溶液可以包含约0.067％的终浓度的脱氧胆酸钠或脱氧胆酸和约4mM的终浓度的EDTA。

本文描述的方法的实施方式中，例如，在第二清洁剂溶液中使用清洁剂，例如脱氧胆酸钠或脱氧胆酸，以及螯合剂，例如EDTA的方法中，这样的脱氧胆酸钠或脱氧胆酸可以以例如，约0.05-约0.1％、约0.05％-约0.2％、约0.2-约0.3％、约0.3％-约0.4％或约0.4-约0.5％的终浓度；或者约0.05％、约0.06％、约0.07％、约0.08％、约0.09％、约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％或约0.5％的终浓度使用。在具体的这类实施方式中，脱氧胆酸钠或脱氧胆酸(约0.2％-约0.6％)可以以约0.39％的终浓度使用。对于这样的第二清洁剂溶液中存在的螯合剂，当螯合剂是EDTA时，这样的EDTA可以以例如，约1-约5mM、约2-约5mM、约2-约4mM、约3-约4mM、约3mM-约5mM、约5-约10mM、约6-约10mM、约7-约9mM或约8-约10mM；或者约1mM、约2mM、约3mM、约4mM、约5mM、约6mM、约7mM、约8mM、约9mM或约10mM的终浓度使用。在第一清洁剂溶液的具体实施方式中，溶液可以包含约0.39％的终浓度的脱氧胆酸钠或脱氧胆酸和约8mM的终浓度的EDTA。

使胎盘组织(例如，已经从其除去羊膜、绒毛膜和脐带的胎盘组织；或者来自胎盘的绒毛膜)与清洁剂接触的步骤可以根据本领域技术人员的判断在任何温度下进行。在某些实施方式中，清洁剂处理在约0℃-30℃、约5℃-25℃、约5℃-20℃或约5℃-15℃的温度下进行。在某些实施方式中，清洁剂处理步骤在约0℃、约5℃、约10℃、约15℃、约20℃、约25℃或约30℃的温度下进行。在具体的实施方式中，清洁剂处理步骤在室温下进行。在另一具体实施方式中，清洁剂处理步骤在37℃±5℃下进行。

清洁剂处理(具有或不具有螯合剂)可以根据本领域技术人员的判断进行适当的时间。在某些实施方式中，清洁剂处理可以进行约1-24小时、过夜、约24-48小时或约48-72小时。在具体的实施方式中，清洁剂处理步骤进行约72小时。在另一具体实施方式中，清洁剂处理步骤在室温下进行约72小时。在另一具体实施方式中，清洁剂处理步骤在37℃±5℃下进行约72小时。

使胎盘组织(例如，已经从其除去羊膜、绒毛膜和脐带的胎盘组织；或者来自胎盘的绒毛膜)与碱接触的步骤导致通过使某些ECM组分变性而从本文提供的ECM组合物除去这些ECM组分，例如，除去纤连蛋白和层粘连蛋白。用于碱处理的示例性的碱包括生物相容性碱、挥发性碱或本领域技术人员已知容易地和安全地从ECM除去的碱。碱可以是例如，0.2M-1.0M浓度的本领域技术人员已知的任何有机或无机碱。在某些实施方式中，碱是氢氧化铵、氢氧化钾或氢氧化钠，例如，氢氧化铵溶液、氢氧化钾溶液或氢氧化钠溶液。

在具体的实施方式中，本文提供的方法的碱处理步骤中使用的碱是氢氧化钠(NaOH)。NaOH可以以适合于从本文提供的ECM组合物除去例如，层粘连蛋白和纤连蛋白的任何浓度用于本文描述的方法中。例如，NaOH可以以约0.1M NaOH、0.25M NaOH、0.5M NaOH、1M NaOH、1.5M NaOH或2M NaOH的浓度用于本文描述的方法中。在具体的实施方式中，NaOH以约1M NaOH的浓度用于本文描述的方法中。

碱处理步骤可以根据本领域技术人员的判断在任何温度下进行。在某些实施方式中，碱处理在约0℃-30℃、约5℃-25℃、约5℃-20℃或约5℃-15℃下进行。在某些实施方式中，碱处理在约0℃、约5℃、约10℃、约15℃、约20℃、约25℃或约30℃下进行。在具体的实施方式中，碱处理步骤在室温下进行。在另一具体实施方式中，碱处理步骤在37℃±5℃下进行。

碱处理步骤可以根据本领域技术人员的判断进行适宜的时间。在某些实施方式中，碱处理步骤可以进行约15分钟-30分钟、30分钟-1小时、1-2小时、2-4小时、4-8小时、8-12小时或约12-24小时。在具体的实施方式中，碱处理步骤进行约30分钟。在另一具体实施方式中，碱处理步骤在室温下进行约30分钟。在另一具体实施方式中，碱处理步骤在37℃±5℃下进行约30分钟。

在某些实施方式中，本文描述的方法的任何或所有步骤在无菌条件下进行。在进一步的实施方式中，根据本文描述的方法制备的ECM组合物按照本领域技术人员清楚的和以下描述的技术进一步灭菌。

在具体的实施方式中，本文提供了制备ECM组合物的方法，所述方法包括(i)从胎盘(例如，从获自刚生产的母亲的胎盘或从存储的胎盘)除去羊膜、绒毛膜和脐带；(ii)将剩余胎盘组织置于引起与胎盘组织相关的细胞的渗透破坏的溶液(例如，氯化钠(NaCl，例如，1M NaCl))中并使胎盘组织均质化；(iii)使胎盘组织与包含清洁剂，例如，脱氧胆酸钠(例如，2％的脱氧胆酸钠)的溶液接触；(iv)用例如水洗涤胎盘组织；(v)使胎盘组织与包含碱，例如，氢氧化钠(NaOH，例如，1M NaOH)的溶液接触；(vi)向包含胎盘组织的溶液添加酸溶液，例如，盐酸(HCl)，以使其达到或接近中性pH(例如，pH 6.0-8.0)；和(vii)将胎盘组织与溶液的液体部分分离(例如，通过离心)并收集胎盘组织，由此制备ECM组合物。根据该方法产生的ECM组合物一般是糊的形式(ECM糊)，其可以在收集后冷冻和存储用于随后使用，或者其可以在收集后直接用于制备本文描述的ECM制剂，例如，ECM薄片的制剂、ECM颗粒物制剂或ECM可流动基质。

在另一具体实施方式中，本文提供了制备ECM组合物的方法，所述方法包括(i)从胎盘(例如，从获自刚生产的母亲的胎盘或从存储的胎盘)除去羊膜、绒毛膜和脐带；(ii)切割胎盘成条，例如，2x 2厘米条；(iii)将胎盘组织置于1.5升1M NaCl溶液中并使胎盘组织(例如，使用Omni Mixer Homogenizer(Omni International,Kennesaw,GA))均质化；(iv)将均质化的胎盘组织置于处理容器(例如，袋)中并添加1M NaCl到9.2升的体积；(v)用1M NaCl洗涤均质化的胎盘组织三次，其中所述洗涤包括(a)在振动器上搅拌处理容器10分钟，(b)允许胎盘组织在处理容器中沉降10分钟，和(c)通过重力排空除去6.2升的上清液；(vi)允许洗涤的胎盘组织在振动器上在剩余的1M NaCl溶液中在室温下混合～18-26小时；(vii)如上所述用水洗涤胎盘组织四次；(viii)允许洗涤的胎盘组织在振动器上在水中在室温下混合～18-26小时；(ix)在水中过夜混合后，如上所述用水洗涤最后一次，然后添加6.2L的3％脱氧胆酸钠到混合物中，达到2％脱氧胆酸钠的浓度；(x)允许胎盘组织在振动器上在2％脱氧胆酸钠溶液中在室温下混合～72小时；(xi)以如上所述的方式在水中洗涤胎盘组织五次；(xii)在水的最后添加后，通过添加1M NaOH调节溶液的pH到约10-12，得到碱性溶液；(xiii)允许胎盘组织在振动器上在碱性溶液中在室温下混合～30分钟；(xiv)使用0.1N HCl调节溶液的pH到约7.0-7.5；和(xv)从处理容器移除上清液(例如，通过离心)和收集胎盘组织，从而制备ECM组合物。

在具体的实施方式中，本文提供了制备ECM组合物的方法，所述方法包括(i)从胎盘(例如，从获自刚生产的母亲的胎盘或从存储的胎盘)获得绒毛膜；(ii)将胎盘绒毛膜置于引起与胎盘绒毛膜相关的细胞的渗透破坏的溶液中，例如，氯化钠(NaCl，例如，1M NaCl)，并使胎盘绒毛膜均质化；(iii)使胎盘绒毛膜组织与包含清洁剂，例如，脱氧胆酸钠(例如，2％脱氧胆酸钠)的溶液接触；(iv)用例如水洗涤胎盘绒毛膜组织；(v)使胎盘绒毛膜组织与包含碱，例如，氢氧化钠(NaOH，例如，1M NaOH)的溶液接触；(vi)添加酸溶液，例如，盐酸(HCl)，到包含胎盘绒毛膜组织的溶液中，以使其达到或接近中性pH(例如，pH 6.0-8.0)；和(vii)从溶液的液体部分分离胎盘绒毛膜组织(例如，通过离心)并收集胎盘绒毛膜组织，从而制备ECM组合物。根据该方法产生的ECM组合物一般是糊的形式(ECM糊)，其可以在收集后冷冻和存储用于随后使用，或者其可以在收集后直接用于制备本文描述的ECM制剂，例如，ECM薄片的制剂、ECM颗粒物制剂或ECM可流动基质。在某些实施方式中，该方法的各个步骤(例如，渗透破坏、清洁剂处理、洗涤、碱处理)在室温下进行。在某些实施方式中，该方法的各个步骤(例如，渗透破坏、清洁剂处理、洗涤、碱处理)在37℃±5℃下进行。在某些实施方式中，洗涤步骤使用1/2-2升体积的流体进行1-3次。

在另一具体实施方式中，本文提供了制备ECM组合物的方法，所述方法包括(i)从胎盘(例如，从获自刚生产的母亲的胎盘或从存储的胎盘)获得绒毛膜；(ii)切割绒毛膜成条，例如，2x 2厘米条；(iii)将胎盘绒毛膜组织置于1.5升1M NaCl溶液中并使胎盘绒毛膜组织(例如，使用Omni Mixer Homogenizer(Omni International,Kennesaw,GA))均质化；(iv)将均质化的胎盘绒毛膜组织置于处理容器(例如，袋)中并添加1M NaCl到9.2升的体积；(v)用1M NaCl洗涤均质化的胎盘绒毛膜组织三次，其中所述洗涤包括(a)在振动器上搅拌处理容器10分钟，(b)允许胎盘绒毛膜组织在处理容器中沉降10分钟，和(c)通过重力排空除去6.2升的上清液；(vi)允许洗涤的胎盘绒毛膜组织在振动器上在剩余的1M NaCl溶液中在室温下混合～18-26小时；(vii)如上所述用水洗涤胎盘绒毛膜组织四次；(viii)允许洗涤的胎盘绒毛膜组织在振动器上在水中在室温下混合～18-26小时；(ix)在水中混合过夜后，如上所述用水洗涤最后一次，然后添加6.2L的3％脱氧胆酸钠到混合物中，达到2％脱氧胆酸钠的浓度；(x)允许胎盘绒毛膜组织在振动器上在2％脱氧胆酸钠溶液中在室温下混合～72小时；(xi)以如上所述的方式在水中洗涤胎盘绒毛膜组织五次；(xii)在水的最后添加后，通过添加1M NaOH调节溶液的pH到约10-12，得到碱性溶液；(xiii)允许胎盘绒毛膜组织在振动器上在碱性溶液中在室温下混合～30分钟；(xiv)使用0.1N HCl调节溶液的pH到约7.0-7.5；和(xv)从处理容器移除上清液(例如，通过离心)和收集胎盘绒毛膜组织，从而制备ECM组合物。在某些实施方式中，洗涤步骤使用1/2-2升体积的流体进行。

在另一具体实施方式中，本文提供了制备ECM组合物的方法，所述方法包括(i)从胎盘(例如，从获自刚生产的母亲的胎盘或从存储的胎盘)获得绒毛膜(例如，绒毛膜板)；(ii)刮擦和清洁绒毛膜；(iii)将绒毛膜组织置于引起与绒毛膜组织相关的细胞的渗透破坏的溶液中，例如，氯化钠(NaCl，例如，0.5M NaCl)溶液；(iv)使绒毛膜组织与包含清洁剂的溶液接触，例如，脱氧胆酸或脱氧胆酸钠(例如，2％脱氧胆酸或脱氧胆酸钠)，并清洗，例如，通过水清洗；和(v)研磨和冻干。ECM组合物，一般地糊(ECM糊)，可以配制(例如，碾磨和配制)成多种形状和形式，例如，ECM薄片、ECM颗粒物制剂或ECM可流动基质。在某些实施方式中，该方法的各个步骤(例如，渗透破坏、清洁剂处理、清洗)在室温下进行。在某些实施方式中，该方法的各个步骤(例如，渗透破坏、清洁剂处理、清洗)在37℃±5℃下进行。在某些实施方式中，清洗步骤使用1/2-2升体积的流体进行1-3次。

在特定的实施方式中，本文提供了制备ECM组合物的方法，所述方法顺序地包括：(i)从刚足月生产的母亲获得人胎盘，或获得先前分离的冷冻人胎盘，其允许解冻，例如，允许在室温下解冻大约24小时；(ii)在0.5M NaCl中洗涤胎盘；(iii)从胎盘除去羊膜、脐带和壁蜕膜，并保留胎盘的绒毛膜板；(iv)刮擦和清洁绒毛膜；(v)在0.5M NaCl和水中清洗绒毛膜；(vi)在2％脱氧胆酸中清洗绒毛膜过夜，接着多次水清洗，例如，3、4、5、6、7或更多次水清洗；和(vii)研磨和冻干处理的绒毛膜。ECM组合物，一般地糊(ECM糊)，可以配制(例如，碾磨和配制)成多种形状和形式，例如，ECM薄片、ECM颗粒物制剂或ECM可流动基质。在某些实施方式中，该方法的各个步骤(例如，NaCl处理、脱氧胆酸处理、清洗)在室温下进行。在某些实施方式中，该方法的各个步骤(例如，NaCl处理、脱氧胆酸处理、清洗)在37℃±5℃下进行。在某些实施方式中，清洗步骤使用1/2-2升体积的流体进行1-3次。

在再另一具体实施方式中，本文提供了制备ECM组合物的方法，所述方法包括(i)从胎盘(例如，从获自刚生产的母亲的胎盘或从存储的胎盘)获得绒毛膜(例如，绒毛膜板)；(ii)刮擦和清洁绒毛膜；(iii)将绒毛膜组织置于引起与绒毛膜组织相关的细胞的渗透破坏的溶液中，例如，氯化钠(NaCl，例如，1.0M NaCl)溶液；(iv)使绒毛膜组织与包含清洁剂，例如，脱氧胆酸或脱氧胆酸钠(例如，0.05％-0.2％或0.3％-0.6％脱氧胆酸或脱氧胆酸钠)，和EDTA(例如，1-5mM EDTA或5-10mM EDTA)的第一清洁剂溶液接触；(v)使绒毛膜组织与包含清洁剂，例如，脱氧胆酸或脱氧胆酸钠(例如，0.05％-0.2％或0.3％-0.6％脱氧胆酸或脱氧胆酸钠)，和EDTA(例如，1-5mM EDTA或5-10mM EDTA)的第二清洁剂溶液接触，并清洗，例如，通过水；和(vi)冻干以产生去细胞的、冻干的全绒毛膜，其可以配制，例如，碾磨到和重悬在溶液(例如，水或磷酸盐缓冲盐水)中以形成去细胞的ECM糊，并配制成多种形状和形式，例如，ECM薄片、ECM颗粒物制剂或ECM可流动基质。在某些实施方式中，该方法的各个步骤(例如，渗透破坏、清洁剂/EDTA处理、清洗)在室温下进行。在某些实施方式中，该方法的各个步骤(例如，渗透破坏、清洁剂/EDTA处理、清洗)在37℃±5℃下进行。在某些实施方式中，清洗步骤使用1/2-2升体积的流体进行1-3次。

在特定的实施方式中，本文提供了制备ECM组合物的方法，所述方法顺序地包括：(i)从刚足月生产的母亲获得人胎盘，或获得先前分离的冷冻人胎盘，其允许解冻，例如，允许在室温下解冻大约24小时；(ii)从胎盘除去羊膜、脐带和壁蜕膜，并保留胎盘的绒毛膜板；(iii)刮擦和清洁绒毛膜；(iv)在1.0M NaCl和水中清洗绒毛膜；(v)在包含0.067％脱氧胆酸和4mM EDTA的第一清洁剂溶液中清洗绒毛膜过夜，接着多次水清洗，例如，3、4、5、6、7或更多次水清洗；(vi)在包含0.39％脱氧胆酸和8mM EDTA的第二清洁剂溶液中清洗绒毛膜过夜，接着多次水清洗，例如，3、4、5、6、7或更多次水清洗；和(vii)冻干处理的绒毛膜。所得的组合物是适合于进一步配制(例如，碾磨和配制)的去细胞的ECM糊。在某些实施方式中，该方法的各个步骤(例如，NaCl处理、脱氧胆酸/EDTA处理、清洗)在室温下进行。在某些实施方式中，该方法的各个步骤(例如，NaCl处理、脱氧胆酸/EDTA处理、清洗)在37℃±5℃下进行。在某些实施方式中，清洗步骤使用1/2-2升体积的流体进行1-3次。

在具体的实施方式中，本文提供了产生ECM薄片的方法，所述方法包括(i)根据本文描述的方法制备ECM糊；(ii)悬浮ECM糊在，例如，水中，并添加悬浮的ECM溶液到合适的基材用于形成薄片，例如，添加ECM到模具；(iii)冷冻ECM；(iv)冻干冷冻的ECM；(v)从基材移除冻干的ECM并将其浸没于水中；和(vi)干燥ECM，例如，使用真空干燥器。在复水后和在干燥之前，本文提供的ECM薄片可以形成为任何有用的形状，例如，块、管或另一形状。

在具体的实施方式中，本文提供了产生ECM颗粒物的方法，所述方法包括(i)根据本文描述的方法制备ECM糊；(ii)悬浮ECM糊在，例如，水中；(iii)冷冻ECM；(iv)冻干冷冻的ECM；和(v)碾磨冻干的ECM。

在具体的实施方式中，本文提供了产生ECM可流动基质的方法，所述方法包括(i)根据本文描述的方法制备ECM糊；(ii)悬浮ECM糊在，例如，水中；(iii)冷冻ECM；(iv)冻干冷冻的ECM；和(v)使冻干的ECM微粉化。在微粉化的ECM重悬浮在，例如，盐水中时，产生ECM可流动基质。

按照本文描述的方法产生的ECM组合物的冻干可以通过本领域中已知的任何方式完成，且一般地一直进行到ECM组合物基本上干燥，例如，少于约30％、25％、20％、25％、20％、5％、4％、3％、2％或1％重量的水。

4.2.1任选的进一步处理

在某些实施方式中，本文提供的方法包括另外的步骤，例如，导致所制备的ECM组合物用能够引起细胞渗透破坏的溶液、清洁剂或碱以外的另一试剂进行处理的步骤。

在具体的实施方式中，本文提供的方法包括用处理根据本文描述的方法所制备的ECM组合物的步骤。是源自粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的遗传工程化核酸内切酶，其攻击和降解所有形式的DNA和RNA。因此，可以根据本文描述的方法用于确保所得的ECM组合物不含(或基本上不含)核酸。在用处理后，可以使处理的ECM组合物达到高pH，然后低pH，这是适合于灭活的条件。

在具体的实施方式中，本文提供的方法包括用乙二胺四乙酸(EDTA)处理根据本文描述的方法所制备的ECM组合物。EDTA是本领域技术人员公知的金属螯合剂，且可以根据本文提供的方法用于从本文提供的ECM组合物除去二价金属离子。EDTA可以使用本领域技术人员已知的方法从ECM组合物洗掉。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物中的胶原蛋白可以交联。交联可以用本领域技术人员已知的任何交联剂，例如，以上所述的交联剂进行。在某些实施方式中，交联剂是戊二醛，且交联可以按照本领域技术人员已知的胶原蛋白的戊二醛交联方法进行。在其它实施方式中，交联剂是1,4-丁二醇二缩水甘油醚或京尼平。

4.2.2储存

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物储存在室温下(例如，～22-25℃)。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物冷储存，例如，在约0℃、约4℃或约8℃的温度下冷藏。在一些实施方式中，ECM不冷藏。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物冷冻储存，即在低于0℃的温度下，例如，在-10℃、-15℃、-20℃、-25℃、-30℃、-35℃、-40℃、-45℃、-50℃、-55℃、-60℃、-65℃、-70℃、-75℃、-80℃或-85℃或者更低温度。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物的所述冷冻和储存在0℃至-10℃、-10℃至-20℃、-20℃至-30℃、-30℃至-40℃、-40℃至-50℃、-50℃至-60℃、-60℃至-70℃或-70℃至-80℃之间的温度下进行。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物在无菌非氧化条件下储存。在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物在以上指定的任何温度下储存12个月或更长时间。

4.2.3灭菌

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物根据本领域技术人员已知用于对这类组合物除菌的技术灭菌。在具体的实施方式中，本文提供的ECM组合物通过照射除菌，例如，γ照射。

在具体的实施方式中，本文提供的ECM组合物的灭菌使用本领域技术人员已知的方法通过电子束照射进行，参见，例如，Gorham,D.Byrom(ed.),1991,Biomaterials,Stockton Press,New York,55-122。足以杀死至少99.9％的细菌或其它潜在污染生物体的任何照射剂量在本文提供的方法的范围内。在特定的实施方式中，至少18-25kGy的剂量用于实现本文提供的ECM组合物的终端灭菌。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物通过允许内毒素通过和保留ECM组合物的过滤器过滤。可以使用本领域技术人员已知用于过滤内毒素的任何尺寸的过滤器，例如30kDa。在某些实施方式中，过滤器在5kDa和100kDa之间，例如，过滤器为约5kDa、约10kDa、约15kDa、约20kDa、约30kDa、约40kDa、约50kDa、约60kDa、约70kDa、约80kDa、约90kDa或约100kDa。过滤器可以为本领域技术人员已知与本文提供的ECM组合物相容的任何材料，如纤维素或聚醚砜。过滤可以重复如本领域技术人员所希望的那么多的次数。内毒素可以按照标准技术检测以监测清除。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物被过滤以产生不含病毒颗粒或病毒颗粒减少的ECM组合物。可以使用本领域技术人员已知可用于清除病毒的任何过滤器。例如，1000kDa过滤器可用于细小病毒、甲型肝炎病毒和HIV的清除或减少。750kDa过滤器可以用于细小病毒和甲型肝炎病毒的清除或减少。500kDa过滤器可以用于细小病毒的清除或减少。过滤器可以为本领域技术人员已知与本文提供的ECM组合物相容的任何材料，如纤维素或聚醚砜。过滤可以重复如本领域技术人员所希望的那么多的次数。病毒的存在可以按照标准技术检测以监测清除。

4.3用途

本文提供的ECM组合物(参见4.1节)可以以多种方式使用和用于许多目的，包括，但不限于ECM组合物用于制造工程化组织和器官，包括如补片或组织栓或基质材料的结构，假体和其它植入物；ECM组合物用作组织支架；ECM组合物用于修复或包扎伤口；ECM组合物用作止血装置；ECM组合物用作用于组织修复和支持的装置，如缝线、手术和整形螺钉、手术和整形板、用于合成植入物的天然涂层或组分、美容植入物和支持体；ECM组合物用于器官或组织的修复或者用作器官或组织的结构支持；ECM组合物用于物质递送；ECM组合物用作生物工程平台；ECM组合物用作用于测试物质对细胞的作用的平台；和ECM组合物用于细胞培养。此外，ECM组合物可用于美容目的。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物的使用需要向受试者施用本文提供的ECM组合物。如本文中使用的，术语“受试者”是指动物，如哺乳动物，包括，但不限于灵长动物(例如，人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等等。在具体的实施方式中，受试者是人。

向受试者体内施用本文提供的ECM组合物的方法包括，但不限于口服施用(例如，口腔或舌下施用)、局部施用、气雾剂施用、透皮施用、皮内施用、皮下施用、肌肉内施用和手术施用。

在某些实施方式中，作为本文提供的用途的部分，本文提供的ECM组合物可以以乳膏、凝胶、溶液、悬浮液、脂质体、颗粒的形式或者治疗和美容化合物的制剂和递送领域的技术人员已知的其它方式应用。用于皮下施用的适宜制剂的一些实例包括，但不限于植入物、储库、针、胶囊和渗透泵。用于口服施用的适宜制剂的一些实例包括，但不限于：糊剂、贴片、薄片、液体、糖浆、悬浮液、气雾剂和薄雾。用于透皮施用的适宜制剂的一些实例包括，但不限于乳膏、糊剂、贴片、喷雾和凝胶。用于皮下施用的适宜递送机制的一些实例包括，但不限于植入物、储库、针、胶囊和渗透泵。

本文提供的ECM组合物可以以产生所需的生理或药理结果的任何形式和/或浓度施用于受试者。ECM组合物的形式和浓度取决于所希望的治疗终点、作用位点处或体液中的所需有效浓度及施用类型。关于物质施用于受试者的信息是本领域技术人员已知的且可以在如L.S.Goodman和A.Gilman,eds,The Pharmacological Basis of Therapeutics,Macmillan Publishing,New York和Katzung,Basic&Clinical Pharmacology,Appleton&Lang,Norwalk,Conn.,(6th Ed.1995)的参考文献中找到。所需治疗的熟练的临床医生可以选择特定的形式和浓度及施用频率，如待施用的环境和物质所需要的。

4.3.1用于伤口的处理

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物用于伤口的处理。

在一个实施方式中，本文提供的ECM组合物用于通过将ECM组合物直接置于伤口部位的受试者皮肤上而处理伤口，以使得伤口被覆盖。在另一实施方式中，本文提供的ECM组合物用于通过利用ECM组合物作为植入物，例如，作为皮下植入物而处理伤口。本领域技术人员将认识到，ECM组合物的某些制剂适合于这样的用途。例如，配制为薄片的ECM组合物可以用于通过将ECM薄片置于受试者皮肤上的伤口上而处理伤口。

在某些实施方式中，当用于处理伤口时，本文提供的ECM组合物可以配制为包含一种或多种药理活性剂，包括但不限于，血小板源生长因子、胰岛素样生长因子、表皮生长因子、转化生长因子β、血管生成因子、抗生素、抗真菌剂、杀精子剂、激素、酶和酶抑制剂。

可以用本文提供的ECM组合物处理的伤口包括，但不限于表皮伤口、皮肤伤口、慢性创面、急性创面、外伤、内伤(例如，ECM组合物可以在手术过程中包裹在吻合术部位周围以防止血液从缝合线泄漏和防止身体形成与缝合材料的粘连)、先天性伤口(congenital wound)(例如，营养不良型大疱表皮松解症)、压迫性溃疡(例如，褥疮性溃疡)、部分和全厚度创面、静脉性溃疡、糖尿病性溃疡、慢性血管性溃疡、管道性/不定性伤口(tunneled/undermined wound)、手术伤口(例如，供区/移植物、Moh's手术后、激光手术后、足病术、伤口裂开)、创伤伤口(例如，摩擦、撕裂伤、二级烧伤和皮肤撕裂伤)和引流伤口(draining wound)。

在具体的实施方式中，本文提供的ECM组合物用于处理烧伤和/或与烧伤相关的状况，包括但不限于，一级烧伤、二级烧伤(部分厚度烧伤)、三级烧伤(全厚度烧伤)、烧伤创面的感染、切割和未切割的烧伤创面的感染、从先前移植或愈合的烧伤创面的上皮损失和烧伤创面脓疱疮。

4.3.2牙科

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物用于治疗牙科疾病和障碍。

在一个实施方式中，本文提供的ECM组合物用于牙周手术、用于再生牙周组织的引导组织再生、引导骨再生和/或牙根覆盖。这样的方法涵盖使用ECM组合物促进牙周骨内缺损(periodontal intrabony defect)的再生，包括但不限于，匹配的双侧牙周缺陷、牙间骨内缺损(interdental intrabony defect)、深部3-壁骨内缺损、2-壁骨内缺损及骨内缺损2和3。

在另一实施方式中，本文提供的ECM组合物用于治疗II类根分叉部缺损(furcation defect)，包括但不限于，双侧骨缺损、配对的口腔II类下颌磨牙根分叉部缺损(paired buccal Class II mandibular molar furcation defect)和双侧下颌根分叉部缺损(bilateral mandibular furcation defect)。

在另一实施方式中，本文提供的ECM组合物用于治疗牙周疾病，包括但不限于，牙周炎和牙龈炎。在一个实施方式中，本文提供的ECM组合物可以通过，例如，将ECM组合物(其可以用抗生素如葡萄糖酸氯己定浸渍)插入受试者的一个或多个牙周袋(例如，大于或等于5mm)中而用于治疗患有牙周疾病的受试者。

4.3.3口腔病变

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物用于治疗口腔病变，其中所述病变不是通过牙科手术或口腔手术引起。在某些实施方式中，本文提供的治疗是治疗具有口腔病变的受试者的方法，包括向受试者施用(例如，施用至口腔病变)治疗有效量的本文提供的ECM组合物。在这种情况中，“治疗有效量”意思是起到减轻或消除口腔病变的至少一种症状或方面的ECM组合物的量。例如，ECM组合物可以施用以修复病变，或可以作为缓解剂施用，例如，以减轻由口腔病变引起或与口腔病变相关的疼痛或炎症。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物作为治疗手段直接施用到口腔病变中。在其它实施方式中，本文提供的ECM组合物邻近至少一部分口腔病变或在至少一部分口腔病变的周边施用。这种施用可以是，例如，通过将ECM组合物的薄片置于至少一部分或整个口腔病变上。在某些实施方式中，ECM组合物作为糊施用于口腔病变。在某些实施方式中，ECM组合物以喷雾或气雾剂的形式施用于口腔病变。在某些实施方式中，ECM组合物以溶液，例如，以嗽口水的形式施用于口腔病变。

按照本文提供的方法治疗的口腔病变可以由本领域中已知引起口腔病变的任何状况或处理导致。在一个实施方式中，使用本文提供的ECM组合物治疗的口腔病变由剥脱(desquamation)，例如，剥脱性口腔障碍引起或与其相关。在另一实施方式中，使用本文提供的ECM组合物治疗的口腔病变是口疮性溃疡，例如，由白塞氏病引起或作为白塞氏病的部分的口疮性溃疡。在另一实施方式中，使用本文提供的ECM组合物治疗的口腔病变由受试者的颌骨坏死引起或与其相关。

在另一实施方式中，使用本文提供的ECM组合物治疗的口腔病变由移植物抗宿主病引起或与其相关。在另一实施方式中，使用本文提供的ECM组合物治疗的口腔病变由患有口腔病变的受试者使用美法仑引起或与其相关。

在另一实施方式中，使用本文提供的ECM组合物治疗的口腔病变由化疗引起或与其相关，例如，已经施用于受试者以治疗肿瘤、血癌或其它类型的癌症的化疗。在具体的实施方式中，口腔病变由化疗后口腔黏膜炎或化疗诱导的口腔黏膜炎引起。在另一具体实施方式中，口腔病变是或诊断为口疮性口炎，例如，特发性口疮性口炎。在另一具体实施方式中，口腔病变由患有口腔病变的受试者使用mTOR(雷帕霉素的哺乳动物靶标)抑制剂引起或与其相关。在另一具体实施方式中，口腔病变由患有口腔病变的受试者使用5-氟尿嘧啶引起或与其相关。在其中口腔病变由化疗引起或与其相关(例如，由使用化疗剂引起或与其相关)的具体的实施方式中，化疗剂是，例如，烷化剂(例如，白消安、顺伯、卡铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、异环磷酰胺、氮芥或美法仑)；抗代谢物(例如，5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、吉西他滨、阿糖胞苷或氟达拉滨)；具有抗肿瘤作用的抗生素(例如，博莱霉素、更生霉素、道诺霉素、多柔比星或伊达比星)；或有丝分裂抑制剂(例如，紫杉醇、多西他赛、依托泊苷、长春花碱、长春新碱或长春瑞滨)。在另一具体实施方式中，所述受试者(其中所述受试者正接受或已经接受疗程，例如，化疗疗程)中所述口腔病变的发生已经引起或预期引起所述疗程的过早终止。在这种情况中，“过早终止”意思是部分或完全地作为所述口腔病变的结果而在对于所述受试者规定的疗程之前终止疗程。

在另一实施方式中，使用本文提供的ECM组合物治疗的口腔病变由施用抗体于需要治疗的受试者引起或与其相关。在某些实施方式中，抗体是抗-CD20抗体。在更具体的实施方式中，抗体是利妥昔单抗(例如，)、奥法木单抗(例如，)、维妥珠单抗(veltuzumab)或奥瑞珠单抗(ocrelizumab)。在另一实施方式中，抗体是抗-肿瘤坏死因子抗体。在更具体的实施方式中，抗体是阿达木单抗(例如，)、依那西普(例如，)、英夫利昔单抗(例如，)、赛妥珠单抗(certolizumab pegol)(例如，)、那他珠单抗(例如，)或戈利木单抗(例如，)。在另一具体实施方式中，所述受试者(其中所述受试者正接受或已经接受抗体疗程)中所述口腔病变的发生已经引起所述抗体疗程的过早终止。在这种情况中，“过早终止”意思是部分或完全地作为所述口腔病变的结果而在对于所述受试者规定的疗程之前终止抗体疗程。

4.3.4空隙填充

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物用于密封、填充和/或另外地处理受试者身体内的空隙。如本文中使用的，术语“空隙”意图包括受试者中由，例如，老化、疾病、手术、先天性异常或其组合产生的中空空间。例如，空隙可以在从受试者的身体手术除去肿瘤或其它团块后产生。可以用本文提供的ECM组合物填充的空隙的非限制性实例包括裂隙、瘘管、憩室(divercula)、动脉瘤、囊肿、病变或受试者身体的任何器官或组织中的任何其它不希望的中空空间。

在一些实施方式中，本文提供的ECM组合物可以用于整体地或部分地填充、密封和/或另外地处理身体的组织、器官或其它结构内的裂沟、裂隙或瘘管(例如，血管)，或者相邻组织、器官或结构之间的接缝，以防止生物流体如血液、尿液或其它生物流体的泄漏。例如，本文提供的ECM组合物可以注射、植入、旋入或以其它方式施用到内脏之间的瘘管中或者到从内脏到受试者身体外部的开口或孔隙中。本文提供的ECM组合物可以用于填充通过这些病理状态形成的空隙或其它缺陷并刺激成纤维细胞浸润、愈合和组织内生。

在一个实施方式中，本文提供了填充、密封和/或另外地处理受试者的瘘管的方法，所述方法包括向受试者注射或另外地施用本文提供的ECM组合物。ECM组合物可以通过用针注射到一个瘘管孔隙中和填充该孔隙的大多数或所有分支而施用于受试者。或者，ECM组合物的绳或棒可以通过孔隙旋入瘘管病变中，或胶原蛋白可以用套管引入受试者中。各种类型的瘘管可以使用本文提供的ECM组合物填充、密封和/或另外地处理，如肛门的、动静脉的、膀胱、颈内动脉海绵窦的、外部的、胃的、肠的、壁腔的、唾液的、阴道的和肛门直肠的瘘管，或其组合。

在一个实施方式中，本文提供了填充、密封和/或另外地处理受试者的憩室的方法，所述方法包括向受试者注射或另外地施用本文提供的ECM组合物。憩室是作为管状或囊状器官(如肠、膀胱等)的袋或囊开口的异常生理结构，且可以使用本文提供的ECM组合物填充或增强。

在另一实施方式中，本文提供了填充、密封和/或另外地处理受试者的囊肿的方法，所述方法包括向受试者注射或另外地施用本文提供的ECM组合物。在一些实施方式中，囊肿是具有例如流体的累积但不包含上皮或其它膜性内衬的假囊肿。可以填充、密封和/或另外地处理的囊肿的其它非限制性实例包括皮脂囊肿、皮样囊肿、骨囊肿或浆液囊肿，或其组合。

在另一实施方式中，本文提供的ECM组合物可以注射或另外地施用以整体地或部分地填充由于从受试者手术、化学或生物移除不需要的或不希望的生长、流体、细胞或组织而产生的任何空隙。ECM组合物可以在空隙部位局部地注射或另外地施用以增强剩余的和周围的组织、帮助愈合过程和最小化感染的风险。这种增强特别地用于在肿瘤切除后产生的空隙部位，如在乳腺癌手术、除去肿瘤性结缔组织、骨组织或软骨组织的手术等后。

4.3.5组织增量

在另一实施方式中，本文提供的ECM组合物可以用于组织增量。如本文中使用的，“组织增量”是指受试者的(例如，人的)非皮肤软组织的天然状态由于外部活动或效应导致的任何变化。本文中涵盖的组织包括，但不限于肌肉组织、结缔组织、脂肪和神经组织。该组织可以是许多器官或身体部位的部分，包括但不限于，括约肌、膀胱括约肌和尿道。

4.3.6尿失禁

在另一实施方式中，本文提供的ECM组合物可以用于治疗尿失禁(包括应激性尿失禁)，其是随着导致腹内压提高的活动(如咳嗽、喷嚏、笑或运动)而发生的尿液突然泄漏。按照这样的实施方式，本文提供的ECM组合物可以例如，注射到受试者中以增强受试者的括约肌组织，由此在受试者中实现改善或恢复。ECM组合物可以尿道周地注射或另外地施用以增加尿道周围的组织体量(bulk)而控制和/或治疗尿失禁。应激性尿失禁的改善可以通过增加组织体量并从而提高尿外流的阻力而实现。

在一些实施方式中，ECM组合物在尿道周围的区域中注射或另外地施用于受试者，例如，以封闭尿液通过其泄漏的孔洞或增加尿道壁的厚度，从而在憋尿时紧密地密封。

在另一实施方式中，ECM组合物在尿道周围恰好于膀胱出口处尿道肌肉外侧注射或另外地施用于受试者。注射增量材料可以通过皮肤、通过尿道或者，在女性中，通过阴道进行。

4.3.7膀胱输尿管反流

在另一实施方式中，本文提供的ECM组合物可以用于治疗膀胱输尿管反流(VUR)(或尿反流)，其特征为尿液从膀胱到肾的返行性流动。按照这样的实施方式，本文提供的ECM组合物可以注射或另外地施用于需要的受试者，其中受试者的输尿管壁被增强，且VUR的症状减轻或消除。组合物可以使用本领域技术人员已知的任何方法注射(例如，subtrigonal注射)或另外地施用(如在内窥镜指导下)到输尿管口下方的逼尿肌背层中。

4.3.8胃食管反流病

在另一实施方式中，本文提供的ECM组合物可以用于治疗胃食管反流病(GERD)，这是通常因为下食道括约肌(LES)—食管与胃接合处的肌肉瓣膜—未正确关闭、松弛或弱化及胃内容物回漏或回流到食管中而发生的障碍。按照这样的实施方式，本文提供的ECM组合物可以注射或另外地施用于需要的受试者，其中受试者的LES增强，且GERD的症状减轻或消除。在一些实施方式中，ECM组合物在内窥镜指导下施用到食管胃接合处的食管壁中。为阻止回流，增量效应由保留的材料和相应的组织反应的组合产生。ECM组合物可以通过标准或大口径(例如，大号)注射针注射。

4.3.9声带和喉

在另一实施方式中，本文提供的ECM组合物可以用于控制或治疗影响声带(声襞)和/或喉(喉头)之一或两者的疾病、障碍(如神经障碍)或其它异常。喉和声带的这类疾病、障碍或其它异常的非限制性实例包括声门闭合不全、单侧声带麻痹、双侧声带麻痹、麻痹性发声障碍、非麻痹性发声障碍、痉挛性发音障碍或其组合。在其它实施方式中，本文提供的ECM组合物可以用于控制或治疗导致声带不正确关闭的疾病、障碍或其它异常，如声带的不完全麻痹(“轻度麻痹”)、一般弱化声带，例如，伴随老年的声带弱化(“presbylaryngis”)和/或声带的瘢痕(例如，来自之前的手术或放射治疗)。

本文提供的ECM组合物可以用于对缺乏声带曾经具有的体量(如在声带弯折(vocal fold bowing)或萎缩中)或运动性(如在麻痹中)的受试者的声襞提供支持或体量。在一些实施方式中，声带和/或喉的其它软组织可以用本文提供的ECM组合物单独地或者与其它处理或药物治疗组合增强。在一个实施方式中，本文提供的ECM组合物对一个(或两个)声襞增强或增大体量以使得其可以与另一声襞接触。

本领域技术人员公知的多种过程中的任一种可以用于向受试者的声带或喉施用本文提供的ECM组合物。在一些实施方式中，弯曲针用于通过受试者的口注射本文提供的ECM组合物。在其它实施方式中，针(如较高号的短针)可用于直接通过受试者的皮肤和喉结注射本文提供的ECM组合物。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物可以用于控制或治疗声带麻痹。在一个实施方式中，本文提供的ECM组合物用于通过向受试者注射或另外地施用ECM组合物控制或治疗受试者的单侧或双侧声带麻痹或者与其相关的症状，其中声襞关闭在受试者中得到改善。在一个实施方式中，ECM组合物增强一个(两个)麻痹的声带或增大其体量以使得其可以与另一声襞接触。ECM组合物注射到受试者可以通过受试者的口或直接通过受试者的皮肤和喉结。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物可以用于治疗发声障碍，其是声音的任何受损或说话困难。

4.3.10声门闭合不全

在另一实施方式中，本文提供的ECM组合物可以用于控制或治疗声门闭合不全。经皮的喉胶原蛋白增强可以通过使用本领域中已知的方法注射本文提供的ECM组合物到受试者的声带中而发生。在一些情况中，受试者具有发声过弱和/或声门闭合不全(其影响喉的语音功能)、增加的肌强直和降低的甲杓肌的运动能力。在另一实施方式中，发声过弱是帕金森病的结果。在一个实施方式中，ECM组合物可以用于通过向受试者的声带注射或另外地施用ECM组合物来控制或治疗需要的受试者的声门闭合不全，其中注射增强声带且改善声门闭合(glottic closure)，以使得受试者中声门闭合不全减轻或消除。

4.3.11生物工程

在另一实施方式中，本文提供的ECM组合物可以用于组织或器官的生物工程，该组织或器官的生物工程可以用于，例如，组织置换应用。可以使用本文提供的ECM组合物产生的生物工程化部件的实例包括，但不限于骨、牙结构、关节、软骨、骨骼肌、平滑肌、心肌、肌腱、半月板、韧带、血管、支架、心脏瓣膜、角膜、耳鼓膜、神经导引管(nerve guide)、组织或器官补片或密封剂、缺失组织的填充剂、用于美容修复的薄片、皮肤(具有添加的细胞以制备皮肤替代物的薄片)、喉如气管、会厌和声带的软组织结构、其它软骨质结构如鼻软骨、睑板、气管环、甲状软骨和杓状软骨、结缔组织、血管移植物及其部件，及用于局部施用的薄片、和器官如肝、肾和胰腺的修复或替换。

4.3.12美容应用

本文提供的ECM组合物进一步可用于美容应用。一般地，这类美容用途是基于本文提供的ECM组合物用于填充受试者皮肤中或皮肤上的纹路、皱纹和其它皱褶并因此恢复更平滑、更年轻的外貌的事实。

在某些实施方式中，本文提供的ECM组合物可以用于受试者的皮肤增强。在一个实施方式中，用于受试者的皮肤增强的方法包括注射或另外地施用本文提供的ECM组合物到需要增强的受试者的面部或身体区域，其中该受试者的面部或身体区域与施用胶原蛋白之前的区域相比得到增强。如本文中使用的“皮肤增强”是指受试者的(例如，人的)皮肤和相关区域的天然状态由于外部活动或效应导致的任何变化。可以通过皮肤增强改变的非限制性皮肤区域包括表皮、真皮、皮下层、脂肪、竖毛肌(arrector pill muscle)、毛干、汗孔、皮脂腺或其组合。

本文提供的ECM组合物的示例性美容用途包括使用ECM组合物增强面部的皱纹或凹陷区域和/或对受试者的面部和身体区域增加或提高丰满度；使用ECM组合物处理皮肤缺陷，包括但不限于，皱纹、凹陷或其它摺痕(例如，抬头纹、烦恼纹(worry line)、鱼尾纹、嘴角纹)、妊娠纹、内部和外部疤痕(如由损伤、伤口、事件、咬伤或手术产生的)；使用ECM组合物矫正“眍”眼和导致眼睛周围的黑眼圈的可见血管；使用ECM组合物矫正或补充整形手术，包括在从下睑袋切除术精准去除眼袋脂肪垫后眼袋的矫正、精准颊脂抽取后下脸颊的矫正及鼻整形术、皮肤移植或其它手术导致的不规则性的结果(如由抽脂术导致的压痕)的矫正；使用ECM组合物矫正面部或身体疤痕(例如，伤口、水痘或痤疮疤痕)；和使用ECM组合物进行面部整形。

5.试剂盒

在另一方面中，本文提供了包含本文提供的ECM组合物的试剂盒。

在一个实施方式中，本文提供了包含本文提供的ECM组合物的试剂盒，其中所述ECM组合物配制为薄片。ECM薄片以无菌形式提供，且包装在袋中。在这样的试剂盒中提供的ECM的薄片可以为不同的尺寸(例如，5x 5cm或9x 9cm)和厚度(例如，1.5-2.5mm)且准备由实施者使用，例如，用作伤口敷料。

在另一实施方式中，本文提供了包含本文提供的ECM组合物的试剂盒，其中所述ECM组合物可以配制为可流动基质。在这样的试剂盒中，ECM组合物以无菌形式提供，且作为微粉化ECM包装在玻璃小瓶中。这样的小瓶可以包含不同量的微粉化ECM，例如，200mg微粉化ECM。包含配制为可流动基质的ECM组合物的试剂盒可以进一步包含适合用于悬浮微粉化ECM的成分，如悬浮溶液(例如，盐水)及具有针和柔性施药器的注射器。

在另一实施方式中，本文提供了包含本文提供的ECM组合物的试剂盒，其中所述ECM组合物配制为颗粒物。在这样的试剂盒中，ECM组合物以无菌形式提供，且作为碾磨的ECM包装在玻璃小瓶中。这样的小瓶可以包含不同量的碾磨的ECM，例如，100mg或200mg碾磨的ECM。

本文提供的试剂盒可以包含关于使用试剂盒中提供的ECM组合物的说明的标签或标记。在某些实施方式中，试剂盒可以包含可用于实施ECM组合物可用的方法的部件，如用于施用试剂盒中的ECM组合物的装置，例如，一个或多个喷雾瓶、镊子、抹刀(用于涂布糊或颗粒物)、插管、导管等。

6.实施例

6.1实施例1：产生胎盘ECM的方法

本实施例描述了产生胎盘ECM的方法，最初配制为糊。

方法1：获得先前分离的冷冻的人胎盘并允许在室温下解冻～24小时。在胎盘解冻后，从胎盘除去羊膜、绒毛膜和脐带并丢弃。接下来，胎盘切割成2x 2厘米条用于处理。

胎盘组织然后置于含有1.5升的1M NaCl溶液的容器中，并使用Omni Mixer Homogenizer(Omni International,Kennesaw,GA)均质化。接下来，均质化的胎盘组织置于处理袋中，且该袋填充1M NaCl溶液到9.2升的总体积。均质化的胎盘组织然后如下在1M NaCl溶液中洗涤三次：(i)处理袋在定轨摇床上摇动10分钟，(ii)允许胎盘组织在处理袋中沉降10分钟，和(iii)通过重力排空从处理袋除去6.2升的上清液，这是从混合物除去血液和碎片的步骤。

在第三洗涤步骤后，洗涤的胎盘组织允许在室温下在定轨摇床上1M NaCl溶液中(共3升混合物)混合～18-26小时。接下来，胎盘组织按以上对于NaCl洗涤所述的相同方式用无菌水洗涤四次。在水中第四次洗涤后，胎盘组织允许在室温下在定轨摇床上在水中(共3升混合物)混合～18-26小时。在水中～18-26小时混合后，胎盘组织如上所述用水洗涤最后一次，然后6.2L的3％脱氧胆酸钠添加到混合物中达到混合物中2％脱氧胆酸钠的终浓度。

胎盘组织允许在室温下在定轨摇床上于2％脱氧胆酸钠溶液中混合～72小时。在～72小时混合后，胎盘组织按以上所述的方式用无菌水洗涤五次。在最终的水添加后，通过逐滴添加1M NaOH使溶液的pH达到约10-12，从而得到碱性溶液。胎盘组织允许在室温下在定轨摇床上于碱性溶液中混合～30分钟。在～30分钟混合后，溶液的pH通过逐滴添加0.1N HCl调节到约7.0-7.5。

上清液然后从处理袋移除并收集剩余的胎盘组织和离心。在离心后，上清液移除并作为最终洗涤步骤将收集的胎盘组织重悬在无菌水中，且再次离心，接着丢弃上清液。所得的组合物代表包含胶原蛋白和弹性蛋白的胎盘ECM，且为白色糊的形式。

方法2：在放出用于加工时，冷冻的人胎盘在2-8℃下解冻并然后转移到生物安全柜(BSC)，且然后如方法1中进行处理。胎盘从其存储容器移出并置于无菌的一次性托盘上。胎盘然后进行清洁以除去过量的血液和血凝块，并然后切割成小段。切割的胎盘材料悬浮在无菌水中并然后使用机械均浆器均质化，这产生具有增加的表面积的小的组织颗粒物，从而允许更有效地分离和除去来自胎盘ECM的细胞和细胞碎片。来自胎盘的均质化的组织转移到具有1M氯化钠溶液的处理袋中。组织通过在定轨摇床上振摇用无菌的1M氯化钠(NaCl)洗涤几次；NaCl溶液通过允许胎盘组织沉降，然后排水和用另外的无菌1M NaCl溶液更新而进行交换。胎盘组织在无菌1M NaCl溶液中伴随振摇保持18-24小时，接着用无菌水重复洗涤。所有处理步骤在室温下进行。胎盘组织暴露于高浓度氯化钠和接着暴露于水构成对组织的“渗压震扰”，其用于清除组织的血液、血液成分、细胞和细胞碎片。胎盘组织在下一步骤(清洁剂洗涤)之前经历第二“渗压震扰”。

清洗的胎盘组织在室温下于生物-处理袋中伴随振摇用无菌的0.1-0.3％脱氧胆酸(DOC)钠溶液和4-8mM乙二胺四乙酸(EDTA)溶液保持48-72小时。在无菌水清洗后，组织经历DOC/EDTA的第二洗涤18-24小时。无菌水然后用于清洗组织和除去DOC和EDTA。

在完成水洗涤后，上清液从生物处理袋移除并用2mM氯化镁和10U/mL的的溶液，pH 8-9代替，且在室温下混合18-24小时。是降解所有形式的核酸(RNA&DNA)的核酸内切酶；所得的较短多核苷酸片段用胎盘组织的顺序清洗洗掉。

在胎盘组织清洗以除去残留核酸后，材料作为病毒灭活步骤经历低和高pH处理。在第一步骤中，胎盘组织在无菌的0.67M NaCl溶液的存在下经历3.3或更低的pH并允许在22+/-1℃下在定轨摇床上振摇24小时。在第二步骤中，溶液的pH使用氢氧化钠(NaOH)调节到≥13并允许在22+/-1℃下在定轨摇床上于生物处理袋中混合最少4小时。在NaOH暴露结束时，溶液的pH调节到5.5-9.0的范围。

在酸和碱处理完成时，组织用1M NaCl孵育并允许在定轨摇床上混合48-72小时。在NaCl处理后，胎盘ECM用无菌水洗涤18-24hr以除去碎片和残留污染物。ECM糊通过离心悬浮液产生。ECM糊储存在-20℃冰箱中直到产物进行配制和灭菌。

作为薄片的制剂：为产生ECM薄片，ECM糊在2℃-22℃下解冻24-48小时，并在生物安全柜中重悬在无菌的磷酸盐缓冲液中。组织均质化以制备均匀的ECM悬浮液，其分布到无菌塑料模具中并冷冻。冷冻的ECM的模具使用冻干来脱水。所得的脱水ECM干胶片用无菌水复水且然后在室温下在真空辅助干燥器上压实18-36小时。薄片置于双重袋(double pouch)中并使用医药级密封剂密封、标记和使用γ照射灭菌。

作为颗粒物的制剂：为产生ECM颗粒物，ECM糊重悬于无菌水中，转移到模具中，使用Controlled Rate Freezer(Thermo Scientific,Marietta,OH)冷冻并在冻干机(LabConco,Kansas City,MO)中冻干48小时。冻干的ECM使用喷射磨机(Fluid Energy,Telford,PA)碾磨，从而得到ECM颗粒物。碾磨的ECM粉末可以填充到琥珀色玻璃小瓶中并密封。

作为可流动基质的制剂：ECM可流动基质可以使用ECM颗粒物制备。一般地，ECM可流动基质可以通过悬浮冻干的、碾磨的ECM(ECM颗粒物)在例如，无菌水或盐水溶液中来制备。

6.2实施例2：ECM组合物的胶原蛋白含量的测定

本实施例说明了ECM组合物的胶原蛋白含量的分析。

如实施例1中所述制备成颗粒物、薄片或可流动基质形式的ECM组合物使用比色羟脯氨酸测定法分析总胶原蛋白含量。胶原蛋白是独特的蛋白质，因为它具有非常高的脯氨酸浓度。另外，胶原蛋白被翻译后修饰为羟脯氨酸。如此，可以从在热盐酸中水解的胶原蛋白获得羟脯氨酸的定量，这可以用作胶原蛋白定量的替代。

ECM样品在110℃下用6N HCl水解，且羟脯氨酸然后使用Chloramine-T(N-氯代4-甲基苯磺酰胺)氧化为吡咯-2-羧酸(吡咯)。使用4-二甲基氨基苯甲醛(DMAB)显色，且通过读取550nm下的吸光度测定羟脯氨酸含量。样品吸光度针对使用已知量的羟脯氨酸的羟脯氨酸标准曲线内推。

ECM组合物测定为包含ECM组合物重量的31重量％的总胶原蛋白至53重量％的总胶原蛋白(表1)。14/16个样品落入ECM组合物重量的34％-43％总胶原蛋白的范围，且12/16个样品落入ECM组合物重量的37％-42％总胶原蛋白的范围。相反，源自猪膀胱基质的比较基质产品(Wound Matrix薄片或MATRISTEM颗粒物)和胎牛真皮基质(PRIMATRIX^TM Dermal Repair Matrix)发现分别包含67重量％、67重量％和69重量％的总胶原蛋白。

表1：作为ECM组合物干重的百分比的总胶原蛋白

6.3实施例3：ECM组合物的弹性蛋白含量的测定

本实施例说明了ECM组合物的弹性蛋白含量的分析。

如实施例1中所述制备为颗粒物或薄片的ECM组合物使用Fastin Elastin Assay试剂盒(BioColor,Ltd.(UK))分析弹性蛋白含量，其使用5,10,15,20-四苯基-21,23-卟吩四-磺酸酯(TPPS)作为染料以染色来自测试样品的提取的和溶解的α-弹性蛋白。弹性蛋白在100℃下于0.25M草酸中从ECM组合物提取。弹性蛋白然后用三氯乙醇和盐酸(TCA/HCl)沉淀，且随后用TPPS染色。TPPS然后从弹性蛋白解离，且释放的TPPS水平通过分光光度法定量。ECM组合物样品中的弹性蛋白水平通过针对弹性蛋白标准曲线内推来测定。

ECM组合物测定为具有ECM组合物重量的13％-29％范围的弹性蛋白(表2)。14/16个样品落入ECM组合物重量的16％-24％弹性蛋白的范围，13/16个样品落入ECM组合物重量的17％-24％弹性蛋白的范围，且10/16个样品落入ECM组合物重量的20％-24％弹性蛋白的范围。相反，源自猪膀胱基质的比较基质产品(Wound Matrix薄片或MATRISTEM颗粒物)发现包含4％的弹性蛋白。弹性蛋白未在胎牛真皮基质(PRIMATRIX^TM Dermal Repair Matrix)中检测到。

在表2和3中，样品8代表与表1中的样品8相同的ECM组合物。但是，分析的ECM组合物类型不同(即，ECM组合物的可流动基质形式在表1中分析，而ECM组合物的颗粒物形式在表2和3中分析)。

表2：总ECM组合物干重的弹性蛋白百分比

6.4实施例4：ECM组合物的纤连蛋白含量的测定

本实施例描述了ECM组合物的纤连蛋白含量的分析。

如实施例1中所述制备为颗粒物或薄片的ECM组合物使用TaKaRa Fibronectin EIA试剂盒(Mountain View,CA)分析纤连蛋白含量，其是基于利用两种小鼠单克隆抗-人纤连蛋白抗体以通过两步骤过程检测纤连蛋白的夹心ELISA方法。另外，开发了使用2M尿素缓冲液的特定的纤连蛋白提取方法。

15mg的ECM组合物与3mL的提取缓冲液(2M尿素,0.05M PO4,2mM PMSF,pH 7.1)混合并在搅拌板上混合4小时。样品然后以10,000X g离心20分钟。上清液在–20℃下存储直到分析时间或直接使用。使用TaKaRa Fibronectin EIA试剂盒分析16个ECM组合物样品按照制造商的指示进行。纤连蛋白浓度的标准曲线使用可商购的冻干纤连蛋白构建，且样品纤连蛋白浓度从曲线内推。

ECM组合物的纤连蛋白含量低，平均为197ng纤连蛋白每mg ECM组合物(ECM组合物的0.0197重量％)，范围为21.3ng/mg-361.3ng/mg。测试猪膀胱基质(Wound Matrix薄片或MATRISTEM颗粒物)和胎牛真皮基质(PRIMATRIX^TM Dermal Repair Matrix)的样品，但在该试验中未显示纤连蛋白含量，可能是因为分析中使用的抗体不与牛或猪基质交叉反应。

表3：总ECM组合物干重的纤连蛋白百分比

6.5实施例5：ECM组合物的层粘连蛋白组成的测定

如实施例1中所述制备并配制为薄片或颗粒物的十六个ECM组合物样品使用TaKaRa Laminin EIA试剂盒(Mountain View,CA)按照制造商的指示分析层粘连蛋白含量。试剂盒是基于利用两种小鼠单克隆抗-人层粘连蛋白抗体以通过两步骤过程检测层粘连蛋白的夹心ELISA方法。另外，开发了使用2M尿素缓冲液的特定的层粘连蛋白提取方法。层粘连蛋白浓度的标准曲线使用可商购的冻干层粘连蛋白构建，且样品层粘连蛋白浓度从曲线内推。

结果：层粘连蛋白未在16个ECM样品中的任何一个中检测到。

层粘连蛋白也未在用于比较的所分析猪膀胱基质(薄片或颗粒物)或胎牛真皮薄片中检测到。

6.6实施例6：ECM组合物的生物相容性

如实施例1中所述制备并配制为薄片、颗粒物或可流动基质的ECM组合物在研究开始时年龄4.7-6.3个月和体重2.4-2.9kg的白化新西兰白兔中测试生物相容性。作为对照，ECM薄片与Wound Matrix(猪膀胱基质)比较；ECM颗粒物与MATRISTEM比较，且ECM可流动基质与INTEGRA^TMFlowable Wound Matrix(胶原蛋白和糖胺聚糖)比较。

可流动基质的制备：ECM可流动和INTEGRA^TM Flowable通过用3mL Vial Access注射器抽吸2mL的注射用水，消除任何气泡和调节体积到2mL而制备。套管然后从Vial Access注射器除去。这一注射器然后尖对尖连接于含有2mL水的ECM注射器。水缓慢地从小瓶连接(vial access)注射器注射到Vial Access注射器中，且使用10-15次往复移动小心地混合直到粉末均匀地水化。整个重构的糊推入注射器之一中。然后丢弃空注射器，空的1mL注射器连接于其余的ECM糊注射器，且1mL的ECM可流动或INTEGRA^TM Flowable糊转移到1mL注射器中。这一最后步骤用第二个1mL注射器重复。糊对于各剂量在加载到1mL注射器中之前重混合。INTEGRA^TM Flowable与3.0mL注射用盐水混合。测试和对照品使用填充的1mL注射器直接施用。

植入：对于各动物，2-4cm的皮肤切口在背部中央形成，通过两个椎旁肌的筋膜延伸。对于各植入位点，5mm切口在椎旁肌中形成且小袋用止血钳产生用于植入，距中线约2cm且与肌纤维轴平行，从而使得在植入位点之间有至少2.5cm。四个测试或四个对照品在椎旁肌的一侧植入。对于各组，测试品在右侧植入和对照品在左侧植入。所有植入位点然后用非可吸收缝线封闭，且皮肤切口用缝线和/或缝皮钉封闭。50μL的可流动制剂、5mg的颗粒物制剂和1片(1x 3x 10mm)薄片制剂植入所产生的肌肉袋中。对照品是50μL的牛来源的伤口基质产物(INTEGRA^TM Flowable)、5mg的源自猪膀胱的细胞外基质(MATRISTEM)的颗粒物制剂和源自猪膀胱的细胞外基质(MATRISTEM)的薄片制剂(1x 3x 10mm)。动物在植入后第1、2或4周杀死，且在进行组织学分析。

结果：ECM薄片显示比猪膀胱基质明显较低的组织反应性。在植入后第1周，邻近膀胱基质(UBM)薄片的组织显示肉芽形成和炎症反应的明显征兆(图1A)，而ECM薄片显示散布着粒细胞的轻度浸润的肌肉组织。在第2和4周，邻近UBM薄片的肉芽形成仍然明显(图1C和1E)，而邻近ECM薄片的组织实际上不显示肉芽形成且看起来是正常的(图1D和1F)。ECM薄片在植入后第1、2和4周被认为是非-刺激性的。

ECM颗粒物和可流动基质也工程化为具有比对照颗粒物或可流动基质低的组织反应性(图2和3)。例如，在移植后第1周，ECM颗粒物显示出表明炎症的肉芽形成(图2B)，但显著少于UBM颗粒物(图2A)，而在第2和4周，ECM颗粒物与UBM颗粒物相比显示出肉芽形成的显著减少(分别图2D和2F)，UBM颗粒物在第2和4周仍显示显著的炎症(分别图2C和2E)。类似地，尽管牛来源的伤口基质产物(INTEGRA^TM Flowable)在第1周时显示肉芽形成(图3A)，接着在第2和4周时显示瘢痕形成(图3C和3E中的较亮区域)，但ECM可流动仅在第1周中显示实质的炎性反应(图3B)，接着在第2和4周时接近完全痊愈(分别图3D和3F)。

6.7实施例7：从胎盘绒毛膜产生胎盘ECM的方法

本实施例描述了从胎盘绒毛膜产生胎盘ECM的方法，最初配制为糊。

方法1：获得先前分离的冷冻的人胎盘并允许在室温下解冻～24小时。在胎盘解冻后，从胎盘获得绒毛膜。接下来，胎盘切割成2x 2厘米条用于处理。

胎盘绒毛膜组织然后置于含有1.5升的1M NaCl溶液的容器中，并使用Omni Mixer Homogenizer(Omni International,Kennesaw,GA)均质化。接下来，均质化的胎盘绒毛膜组织置于处理袋中，且袋填充1M NaCl溶液到9.2升的总体积。均质化的胎盘绒毛膜组织然后如下在1M NaCl溶液中洗涤三次：(i)处理袋在定轨摇床上摇动10分钟，(ii)允许胎盘绒毛膜组织在处理袋中沉降10分钟，和(iii)通过重力排空从处理袋除去6.2升的上清液，这是从混合物除去血液和碎片的步骤。

在第三洗涤步骤后，洗涤的胎盘绒毛膜组织允许在室温下在定轨摇床上1M NaCl溶液中(共3升混合物)混合～18-26小时。接下来，胎盘组织按以上对于NaCl洗涤所述的相同方式用无菌水洗涤四次。在水中第四次洗涤后，胎盘绒毛膜组织允许在室温下在定轨摇床上水中(共3升混合物)混合～18-26小时。在水中～18-26小时混合后，胎盘绒毛膜组织如上所述用水洗涤最后一次，然后6.2L的3％脱氧胆酸钠添加到混合物中达到混合物中2％脱氧胆酸钠的终浓度。

胎盘绒毛膜组织允许在室温下在定轨摇床上2％脱氧胆酸钠溶液中混合～72小时。在～72小时混合后，胎盘绒毛膜组织按以上所述的方式用无菌水洗涤五次。在最终的水添加后，通过逐滴添加1M NaOH使溶液的pH达到约10-12，从而得到碱性溶液。胎盘绒毛膜组织允许在室温下在定轨摇床上碱性溶液中混合～30分钟。在～30分钟混合后，溶液的pH通过逐滴添加0.1N HCl调节到约7.0-7.5。

上清液然后从处理袋移除并收集剩余的胎盘绒毛膜组织和离心。在离心后，上清液移除和作为最终洗涤步骤将收集的胎盘绒毛膜组织重悬在无菌水中，并再次离心，接着丢弃上清液。所得的组合物代表包含胶原蛋白和弹性蛋白的胎盘ECM，且为白色糊的形式。

方法2：在放出用于加工时，冷冻的人胎盘在2-8℃下解冻并然后转移到生物安全柜(BSC)。胎盘从其存储容器移除并置于无菌的一次性托盘上。胎盘然后清洁以除去过量的血液和血凝块。获得胎盘的绒毛膜并切割成小段。切割的胎盘绒毛膜材料悬浮在无菌水中并然后使用机械均浆器均质化，这产生具有增加的表面积的小的组织颗粒物，从而允许更有效地从胎盘ECM分离和除去细胞和细胞碎片。来自胎盘绒毛膜的均质化的组织转移到具有无菌的1M氯化钠溶液的无菌处理袋中。组织通过在定轨摇床上振摇用无菌的1M氯化钠(NaCl)洗涤几次；NaCl溶液通过允许胎盘组织沉降，然后排水和用另外的无菌1M NaCl溶液更新而进行交换。胎盘组织在无菌的1M NaCl溶液中伴随振摇保持18-24小时，接着用无菌水重复洗涤。所有处理步骤在室温下进行。胎盘绒毛膜组织暴露于高浓度氯化钠和接着暴露于水构成对组织的“渗压震扰”，其用于清除组织的血液、血液成分、细胞和细胞碎片。胎盘组织在下一步骤(清洁剂洗涤)之前经历第二“渗压震扰”。

清洗的胎盘绒毛膜组织在室温下于生物-处理袋中伴随振摇用无菌0.1-0.3％脱氧胆酸(DOC)钠溶液和4-8mM乙二胺四乙酸(EDTA)溶液保持48-72小时。在无菌水清洗后，组织经历DOC/EDTA的第二洗涤18-24小时。无菌水然后用于清洗组织并除去DOC和EDTA。

在完成水洗涤后，上清液从生物处理袋移除并用2mM氯化镁和10U/mL的的溶液，pH 8-9代替，且在室温下混合18-24小时。是降解所有形式的核酸(RNA&DNA)的核酸内切酶；所得的较短多核苷酸片段用胎盘组织的顺序清洗洗掉。

在胎盘绒毛膜组织清洗以除去残留核酸后，材料作为病毒灭活步骤经历低和高pH处理。在第一步骤中，胎盘绒毛膜组织在无菌的0.67M NaCl溶液的存在下经历3.3或更低的pH并允许在22+/-1℃下在定轨摇床上振摇24小时。在第二步骤中，溶液的pH使用氢氧化钠(NaOH)调节到≥13并允许在22+/-1℃下在定轨摇床上生物处理袋中混合最少4小时。在NaOH暴露结束时，溶液的pH调节到5.5-9.0的范围。

在酸和碱处理完成时，组织用1M NaCl孵育并允许在定轨摇床上混合48-72小时。在NaCl处理后，胎盘绒毛膜ECM用无菌水洗涤18-24hr以除去碎片和残留污染物。ECM糊通过离心悬浮液产生。ECM糊可以储存在-20℃冰箱中直到产物进行配制和灭菌。

作为薄片的制剂：为产生ECM薄片，ECM糊在2℃-22℃下解冻24-48小时，并在生物安全柜中重悬在无菌的磷酸盐缓冲液中。组织均质化以制备均匀的ECM悬浮液，其分布到无菌塑料模具中并冷冻。冷冻的ECM的模具使用冻干来脱水。所得的脱水ECM干胶片用无菌水复水且然后在室温下在真空辅助干燥器上压实18-36小时。薄片置于双重袋中并使用医药级密封剂密封、标记和使用γ照射灭菌。

作为颗粒物的制剂：为产生ECM颗粒物，ECM糊重悬于无菌水中，转移到模具中，使用Controlled Rate Freezer(Thermo Scientific,Marietta,OH)冷冻并在冻干机(LabConco,Kansas City,MO)中冻干48小时。冻干的ECM使用喷射磨机(Fluid Energy,Telford,PA)碾磨，从而得到ECM颗粒物。碾磨的ECM粉末可以填充到琥珀色玻璃小瓶中并密封。

作为可流动基质的制剂：ECM可流动基质可以使用ECM颗粒物制备。一般地，ECM可流动基质可以通过悬浮冻干的、碾磨的ECM(ECM颗粒物)在例如，无菌水或盐水溶液中来制备。

ECM的胶原蛋白、弹性蛋白、纤连蛋白和/或层粘连蛋白含量可以分别以实施例2、3、4和5中描述的方式分析。此外，ECM的生物相容性可以以实施例6中描述的方式评价。

6.8实施例8：从胎盘绒毛膜产生胎盘ECM的方法(2)

本实施例描述了用于从胎盘绒毛膜产生胎盘ECM组合物的方法，最初配制为糊。

使用从刚足月生产的母亲获得的人胎盘或先前分离的冷冻人胎盘(其允许解冻)。胎盘在0.5M NaCl中洗涤。羊膜、脐带和壁蜕膜从胎盘除去，且保留绒毛膜板，其然后刮擦和清洁。刮擦的、清洁的绒毛膜在0.5M NaCl和水中清洗，且然后在2％脱氧胆酸中清洗过夜，接着几次水清洗。处理的绒毛膜然后研磨和冻干。所得的组合物是适合于进一步配制(例如，研磨和配制)的去细胞ECM糊。

作为薄片的制剂：为产生ECM薄片，ECM糊在2℃-22℃下解冻24-48小时，并在生物安全柜中重悬在无菌的磷酸盐缓冲液中。组织均质化以制备均匀的ECM悬浮液，其分布到无菌塑料模具中并冷冻。冷冻的ECM的模具使用冻干来脱水。所得的脱水ECM干胶片用无菌水复水且然后在室温下在真空辅助干燥器上压实18-36小时。薄片置于双重袋中并使用医药级密封剂密封、标记和使用γ照射灭菌。

作为颗粒物的制剂：为产生ECM颗粒物，ECM糊重悬于无菌水中，转移到模具中，使用Controlled Rate Freezer(Thermo Scientific,Marietta,OH)冷冻并在冻干机(LabConco,Kansas City,MO)中冻干48小时。冻干的ECM使用喷射磨机(Fluid Energy,Telford,PA)碾磨，从而得到ECM颗粒物。碾磨的ECM粉末可以填充到琥珀色玻璃小瓶中并密封。

作为可流动基质的制剂：ECM可流动基质可以使用ECM颗粒物制备。一般地，ECM可流动基质可以通过悬浮冻干的、碾磨的ECM(ECM颗粒物)在例如，无菌水或盐水溶液中来制备。

ECM的胶原蛋白、弹性蛋白、纤连蛋白和/或层粘连蛋白含量可以分别以实施例2、3、4和5中描述的方式分析。此外，ECM的生物相容性可以以实施例6中描述的方式评价。

6.9实施例9：从胎盘绒毛膜产生胎盘ECM的方法(3)

本实施例描述了用于从胎盘绒毛膜产生胎盘ECM组合物的方法。

使用了从刚足月生产的母亲获得的人胎盘。羊膜、脐带和壁蜕膜从胎盘除去，且保留绒毛膜板，其然后刮擦和清洁。刮擦的、清洁的绒毛膜在1.0M NaCl和水中清洗，且然后在含有0.067％脱氧胆酸和4mM EDTA的溶液中清洗过夜，接着几次水清洗。绒毛膜然后在含有0.39％脱氧胆酸和8mM EDTA的溶液中清洗过夜，接着几次水清洗。处理的全绒毛膜然后冻干。

作为薄片的制剂：为产生ECM薄片，ECM在2℃-22℃下解冻24-48小时，并在生物安全柜中重悬在无菌的磷酸盐缓冲液中以形成ECM糊。组织均质化以制备均匀的ECM悬浮液，其分布到无菌塑料模具中并冷冻。冷冻的ECM的模具使用冻干来脱水。所得的脱水ECM干胶片用无菌水复水且然后在室温下在真空辅助干燥器上压实18-36小时。薄片置于双重袋中并使用医药级密封剂密封、标记和使用γ照射灭菌。

作为颗粒物的制剂：为产生ECM颗粒物，ECM重悬于无菌水中以形成ECM糊，转移到模具中，使用Controlled Rate Freezer(Thermo Scientific,Marietta,OH)冷冻并在冻干机(LabConco,Kansas City,MO)中冻干48小时。冻干的ECM使用喷射磨机(Fluid Energy,Telford,PA)碾磨，从而得到ECM颗粒物。碾磨的ECM粉末可以填充到琥珀色玻璃小瓶中并密封。

作为可流动基质的制剂：ECM可流动基质可以使用ECM颗粒物制备。一般地，ECM可流动基质可以通过悬浮冻干的、碾磨的ECM(ECM颗粒物)在例如，无菌水或盐水溶液中来制备。

ECM的胶原蛋白、弹性蛋白、纤连蛋白和/或层粘连蛋白含量可以分别以实施例2、3、4和5中描述的方式分析。此外，ECM的生物相容性可以以实施例6中描述的方式评价。

使用这种方法产生、预除菌的ECM组合物的表征表现出以下表4中总结的干重特征：

表4

本说明书中引用的所有公开出版物和专利申请通过引用并入本文，正如各单个出版物或专利申请具体地和单独地表明通过引用并入。虽然本发明已经为清楚理解的目的通过例示和实施例的方式相当详细地进行描述，但本领域技术人员参照本文提供的教导很容易理解，可以对其进行某些改变和修饰而不脱离所附权利要求的精神或范围。