本发明属于医药领域，具体涉及一种包含脂肪干细胞提取物的抗衰老组合物。
背景技术：
：衰老是多环节的生物学过程，是机体在退化时期功能下降和紊乱的综合表现。普遍性、进行性、退化性和内因性是人体衰老的基本特征。衰老机制的研究至20世纪40年代才进入生理、生化及形成诸方面系统的研究。在大量实验证据的基础上提出了许多新的学说，诸如自由基学说、遗传程序学说、交联学说、脂褐素累积学说、内分泌功能减退学说等，分别从不同的角度探讨了衰老发生的机制和对策。抗衰老药物是一类以提高生命效率为最终目的，从多系统、多层次和多阶段发挥其调整功能，能在遗传学上所界定的寿限内延迟衰老或提高生命质量的药物。人们进行了大量探索，积累了一些经验和有效的方法，也开发出了一些抗衰老药物。例如银杏叶提取物、维生素E以及激素等，虽然目前有很多药物都被证明能够延缓衰老，但抗衰老药物不可乱用，其导致的毒副反应病例日渐增多。脂肪干细胞(Adipose-derivedStemCells，ADSCs)，是目前广泛应用于组织工程及再生医学研究领域的一种成体干细胞。脂肪干细胞与骨髓间充质干细胞一样具有多向分化潜能，在特定条件下可以向脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞、成肌细胞、成内皮细胞和成神经细胞等多个方向分化。除此之外，脂肪干细胞还具有分泌各种各样的营养因子的能力，这些因子包括脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、碱性成纤维生长因子(bFGF)等，这些因子也可以参与组织器官的损伤修复。技术实现要素：本发明的一个目的是提供一种包含脂肪干细胞提取物的抗衰老组合物，所述脂肪干细胞提取物的制备方法如下：1)0.1％明胶铺T75细胞培养瓶半个小时，吸干并静置5分钟；2)将人脂肪干细胞用无血清培养基调至1×105个/ml的人脂肪干细胞悬液；培养瓶中添加15ml悬液进行培养，在培养箱培养三天后无血清培养基更换含β淀粉样蛋白(Aβ)的无血清培养基，换液后利用紫外交联仪对培养瓶进行照射；3)照射后培养三天；吸出培养液，用PBS清洗2-3次，然后加2-3ml细胞裂解液溶解细胞，然后收集到离心管中，离心取上清；4)取上清液置于透析袋中，以4℃PBS溶液透析8小时；将透析袋内溶液冷冻干燥，保存在-80℃冰箱。在本发明的一个实施方案中，所述β淀粉样蛋白的浓度为0.1μg/L。在本发明的另一个实施方案中，所述紫外交联仪对培养瓶进行照射的具体条件为以1mJ/cm2照射10min。在本发明的又一个实施方案中，步骤3中所述离心的具体条件为12000rpm离心10min。在本发明的又一个实施方案中，步骤4中所述透析袋截留分子量为5000kD。在本发明进一步地实施方案中，所述抗衰老组合物由所述脂肪干细胞提取物和二甲双胍组成，所述脂肪干细胞提取物与二甲双胍的质量比为10：0.3。所述抗衰老组合物可经配制用于口服给药、注射给药、经皮给药、植入储库或直肠给药，或为适于通过吸入或吹入给药的形式(通过嘴或鼻)。对于口服给药，所述抗衰老组合物可采取诸如片剂或胶囊的形式，所述片剂或胶囊通过常规方法用药学上可接受的赋型剂来制备，所述药学上可接受的赋型剂为例如粘合剂(例如，预胶化玉米淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如，乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或淀粉羟乙酸钠)；或润湿剂(例如，月桂基硫酸钠)。可通过本领域公知的方法对所述片剂进行包衣。用于口服给药的液体制剂可采取例如溶液剂、糖浆剂或悬浮剂的形式，或者它们可按无水产物形式提供用于在使用前用水或其他适当的媒介物重溶。这样的液体制剂可通过常规方法用药学上可接受的添加剂制备，所述药学上可接受的添加剂为例如助悬剂(例如，山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化可食用脂质)；乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯胶)；非水性媒介物(例如，杏仁油、油性酯、乙醇或分馏植物油)；和防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)。所述制剂也可根据需要含有缓冲盐、矫味剂、着色剂和甜味剂。用于口服给药的制剂可经适当的配制，以提供活性化合物的控制释放。所述抗衰老组合物可经配制用于经皮给药。经皮给药可包括局部应用或透皮给药。透皮应用可通过适当的贴剂、乳剂、软膏剂、溶液剂、悬浮剂、糊剂、泡沫剂、气雾剂、洗剂、乳膏剂或凝胶剂来完成，其是本领域通常已知的，并且专门被设计用来透皮递送活性剂，并任选在具体渗透促进剂的存在下。局部组合物可同样采取这些形式中的一种或多种。一种或多种活性化合物可与一种或多种药学上可接受的无毒辅料联合存在，并且根据需要与其他活性成分联合存在，所述药学上可接受的辅料，例如赋型剂、助剂(例如，缓冲剂)、载体、惰性固体稀释剂、助悬剂、防腐剂、填充剂、稳定剂、抗氧化剂、食品添加剂、生物利用度增强剂、包衣物质、制粒剂和崩解剂、粘合剂等。在本发明中，所述人脂肪干细胞是指人脂肪间质干细胞，其可通过商业渠道购买得到，也可以通过现有技术已知方法自行制备，例如专利CN2014103601433公开的制备方法进行制备(其说明书实施例1)，只要所获的脂肪干细胞经抗原检测，带有CD34、CD31和CD45的脂肪干细胞占总干细胞比例低于1％；带有CD29、CD73、CD90、CD105和CD49d的脂肪干细胞在总干细胞的比例高于95％即可。本发明发现在紫外照射和Aβ的轻微损伤下，可以激活干细胞内部的防御机制，从而使其大量分泌有益的生长因子及相关物质，从而使干细胞的抗衰老活性大幅提高。另外，在进一步的研究中，本发明发现所述脂肪干细胞提取物与二甲双胍产生了明显的协同作用；从而使药效大幅提高。具体实施方式下面将进一步的详细说明本发明。需要指出的是，以下说明仅仅是对本发明要求保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范围以所附权利要求书记载的内容为准。实施例1脂肪干细胞提取物的制备1)0.1％明胶铺T75细胞培养瓶半个小时，吸干并静置5分钟；2)将人脂肪干细胞用无血清培养基(型号MSCSFM，ThermoFisher公司，美国，下同)调至1×105个/ml的人脂肪干细胞悬液；培养瓶中添加15ml悬液进行培养，在培养箱培养三天后无血清培养基更换含0.1μg/L的β淀粉样蛋白(Aβ)的无血清培养基，换液后利用紫外交联仪对培养瓶进行照射；条件为以1mJ/cm2照射10min。3)照射后培养三天；吸出培养液，用PBS清洗2-3次，然后加2-3ml细胞裂解液溶解细胞，然后收集到离心管中，12000rpm离心10min，取上清；4)取上清液置于透析袋(截留分子量为5000kD)中，以4℃PBS溶液透析8小时；将透析袋内溶液冷冻干燥，保存在-80℃冰箱。实施例2D-半乳糖致衰老细胞模型研究取H9C2心肌细胞、PC12神经细胞和人成纤维细胞HDF分别以1×105个/ml铺于不同的96孔板，培养箱培养3天后，加入含脂肪干细胞提取物和D-半乳糖的培养基孵育；每孔D-半乳糖的终浓度为30mg/ml；对照组不添加半乳糖和药物，而模型组添加半乳糖但不添加药物，培养48h后，采用MTT法测定细胞活性，并且采用FDG法检测β-半乳糖苷酶的含量(每组5个复孔，平行测试3次)。具体结果如下表所示：OD590浓度H9C2PC12HDF对照组-0.77±0.030.56±0.020.84±0.04模型组-0.52±0.020.31±0.010.61±0.03实施例110μg/L0.69±0.030.48±0.020.76±0.0330μg/L0.78±0.030.54±0.030.83±0.04对比例110μg/L0.58±0.020.37±0.010.68±0.0230μg/L0.62±0.030.45±0.020.74±0.03对比例210μg/L0.60±0.030.41±0.030.71±0.0330μg/L0.67±0.030.47±0.030.78±0.02β-半乳糖苷酶浓度H9C2PC12HDF对照组-1764±87892±421344±98模型组-7942±2744672±1486109±176实施例110μg/L2542±1191614±941952±8330μg/L1913±941035±751479±71对比例110μg/L5274±1893352±1214743±19430μg/L3751±1572514±1082719±164对比例210μg/L4359±1722845±1473259±17630μg/L3039±1471861±1132152±132对比例1为脂肪干细胞提取物，制备方法同实施例1，区别仅在于脂肪干细胞不经紫外照射及Aβ处理；对比例2为脂肪干细胞提取物，制备方法同实施例1，区别仅在于脂肪干细胞不经Aβ处理。实施例3SAM老化小鼠模型研究取快速老化模型小鼠SAM-P/8(3月龄)，雌雄各半，随机分组，每组15-20只，各给药组均按照给药剂量5mg/kg进行灌胃给药，对照组给予等量生理盐水，每天灌胃一次直至试验结束，常规条件饲养，饲养10个月后统计各组小鼠寿命及死亡率并对存活小鼠进行以下测试：1)水迷宫测试：将小鼠放入含有圆形平台的圆形水池中，水深30cm，如果小鼠超过60s找不到平台，由试验者将小鼠放到平台熟悉环境10s，连续训练3天后，记录每只小鼠找到平台时间。2)骨髓细胞增殖能力测定：无菌取小鼠双侧股骨上段，用Hanks液冲洗后，剪开两端，1640冲洗出骨髓细胞，离心获取细胞，用1640培养基调细胞浓度至1×106个/ml，每孔100微升接种至96孔板，培养3天，采用MTT法测定590nm的OD值。3)脾脏指数和胸腺指数测定：取小鼠脾脏和胸腺，称重，计算脾脏和胸腺重量与小鼠体重的比值。具体结果如下：1、饲养10个月后各组小鼠平均寿命及死亡率死亡率(％)平均寿命(天)对照组51.3127.5实施例15.2269.6对比例121.9184.3对比例214.3224.9试验例11.3292.6对比例1和2给药药物参见实施例3制备的对比例1和2；试验例1为实施例1制备的脂肪干细胞提取物和二甲双胍的组合物，将两者混匀，脂肪干细胞提取物和二甲双胍的重量比为10：0.3。2、水迷宫潜伏期(s)对照组61.9±6.7实施例130.9±4.8对比例149.5±4.2对比例240.3±3.9试验例125.2±4.43、骨髓细胞增殖能力OD值对照组0.24±0.05实施例10.41±0.04对比例10.29±0.05对比例20.32±0.04试验例10.54±0.064、脾脏指数和胸腺指数脾脏指数(mg/g)胸腺指数(mg/g)对照组3.9±0.71.7±0.3实施例15.7±1.12.8±0.5对比例14.4±0.61.9±0.4对比例24.8±0.52.2±0.4试验例16.1±1.23.2±0.6本
发明内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案，其中一个或更多个技术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合，这些经组合而得到的技术方案也在本申请保护范围内，就像这些经组合而得到的技术方案已经在本发明公开内容中具体记载一样。当前第1页1 2 3