本发明属于生物医药领域，涉及吗氯贝胺的新用途，具体涉及吗氯贝胺的药物组合物及其在急性胃溃疡损伤中的应用。
背景技术：
吗氯贝胺为单胺氧化酶抑制剂类抗抑郁药，其作用是通过可逆性抑制脑内A型单胺氧化酶，从而提高脑内去甲肾上腺素、多巴胺和5-羟色胺的水平，起到抗抑郁作用，具有作用快，停药后单胺氧化酶活性恢复快的特点。
迄今为止，尚未见吗氯贝胺及其药物组合物与急性胃溃疡损伤的相关性报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种吗氯贝胺的药物组合物，该药物组合物中含有吗氯贝胺和一种天然产物，吗氯贝胺和该天然产物可以协同治疗急性胃溃疡损伤。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
一种吗氯贝胺的药物组合物，包括吗氯贝胺、化合物(Ⅰ)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型；所述化合物(Ⅰ)具有如下结构式：
进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
进一步地，上述化合物(Ⅰ)的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将三白草粉碎，用80～90％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇取物用大孔树脂除杂，先用30％乙醇洗脱6个柱体积，再用85％乙醇洗脱12个柱体积，收集85％洗脱液，减压浓缩得85％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中85％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为100:1、50:1、25:1和12:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、12:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为88％的甲醇水溶液等度洗脱，收集13～16个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)。
进一步地，化合物(Ⅰ)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
上述吗氯贝胺的药物组合物在制备治疗急性胃溃疡损伤的药物中的应用。
本发明的优点：
本发明提供的吗氯贝胺的药物组合物中含有吗氯贝胺和一种结构新颖的天然产物，吗氯贝胺和该天然产物单独作用时，对急性胃溃疡损伤具有治疗作用；二者联合作用时，对急性胃溃疡损伤的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗急性胃溃疡损伤的药物。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
实施例1：化合物(Ⅰ)分离制备及结构确证
试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
分离方法：(a)将三白草(2kg)粉碎，用85％乙醇热回流提取(15L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水饱和的正丁醇(3L×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用30％乙醇洗脱6个柱体积，再用85％乙醇洗脱12个柱体积，收集85％洗脱液，减压浓缩得85％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中85％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为100:1(12个柱体积)、50:1(10个柱体积)、25:1(8个柱体积)和12:1(8个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1(6个柱体积)、12:1(8个柱体积)和2:1(6个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为88％的甲醇水溶液等度洗脱，收集13～16个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)(HPLC归一化纯度大于98％)。
结构确证：HR-ESI-MS显示[M+H]+为m/z 405.1470，结合核磁特征可得分子式为C21H24O8，不饱和度为10。核磁共振氢谱数据δH(ppm，CDCl3，500MHz)：H-2(6.18，d，J＝6.8Hz)，H-3(3.79，d，J＝6.8Hz)，H-5(2.66，d，J＝6.8Hz)，H-6(4.57，dd，J＝6.8，9.6Hz)，H-7(3.11，ddt，J＝9.6，3.5，3.3Hz)，H-8(5.14，ddd，J＝9.6，4.7，4.7Hz)，H-9a(2.57，dd，J＝14.0，4.7Hz)，H-9b(2.43，dd，J＝14.0，4.7Hz)，H-13a(6.01，d，J＝3.5Hz)，H-13b(5.51，d，J＝3.5Hz)，H-14a(5.14，s)，H-14b(5.06，s)，H-15a(4.75，d，J＝12.5Hz)，H-15b(4.33，d，J＝12.5Hz)，H-3’a(6.02，s)，H-3’b(5.62，s)，H-4’(1.95，s)，15-OAc(2.05，s)；核磁共振碳谱数据δC(ppm，CDCl3，125MHz)：141.2(C，1-C)，117.8(CH，2-C)，83.4(CH，3-C)，83.4(C，4-C)，57.4(CH，5-C)，77.2(CH，6-C)，48.7(CH，7-C)，74.6(CH，8-C)，38.7(CH2，9-C)，137.8(C，10-C)，134.9(C，11-C)，168.2(C，12-C)，121.3(CH2，13-C)，116.4(CH2，14-C)，67.2(CH2，15-C)，164.6(C，1’-C)，136.1(C，2’-C)，122.4(CH2，3’-C)，18.1(CH3，4’-C)，172.8(C，15-COCH3)，21.7(CH3，15-COCH3)。红外光谱表明该化合物含有五元内酯环(1765cm-1)和羟基(3600cm-1)。13C-NMR和HSQC谱显示21个碳信号，包括两个甲基(一个乙酰甲基)，五个亚甲基(一个连氧亚甲基，三个烯属亚甲基)，六个次甲基(三个连氧碳和一个烯属碳)以及八个季碳(三个酯羰基，四个烯烃季碳以及一个连氧季碳)。1H-NMR显示两个特征性的单质子双峰信号[δH6.01(1H，d，J＝3.5Hz，H-13a)和5.51(1H，d，J＝3.5Hz，H-13b)]，且都与H-7[δH3.11(1H，ddt，J＝9.6，3.5，3.3Hz)]相连，证实了α-亚甲基-γ-内酯结构的存在。此外，H-6和H-7的耦合常数(J6,7＝9.6Hz)以及H-7和H-13的烯丙基耦合常数(J7,13＝3.5Hz)表明内酯为反式连接。七元环环外双键信号[δH5.14(1H，s，H-14a)和5.06(1H，s，H-14b)]。两个单峰质子信号δH6.02和5.62(H-3’a和H-3’b)，以及三个质子形成的一个尖锐单峰信号δH1.95(CH3-4’)表明该化合物含有一个2-甲基丙烯酰氧基侧链。HMBC谱中H-8(δH5.14)与羰基碳C-1’(δC164.6)的相关性表明侧链位于C-8位。同时，H2-15与C-COCH3的相关性说明C-15位连有一个乙酰氧基。根据上述核磁数据可知该化合物为一个倍半萜类化合物。通过查阅文献可以发现该化合物和已知化合物2α3β4α-trihydroxy-4β-(acetoxymethyl)-8α(4-methacrylate)-1αH,5αH,6βH,7αH-guai-10(14),11(13)-dien-6,12-olide具有相似的结构。比较两者的核磁数据可以发现，该新化合物和已知化合物的区别在于，新化合物多出了一个双键信号。进一步的HMBC谱解析，H-2与C-1，H-3与C-2以及H-5与C-2的相关性说明多出来的双键信号是位于C-1和C-2位的。NOESY谱中，H-3/H-5，H-5/H-7之间的相关性说明该化合物中的3-OH，以及C-7位上的基团是位于β位的。此外，H-15/H-6，H-6/H-13以及H-8/H-6的相关性说明4-OH，C-6位上的基团以及C-8位上的基团是位于α位的。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。该化合物化学式及碳原子编号如下：
实施例2：药理作用
本实施例采用乙醇制备小鼠急性胃粘膜损伤模型，测定胃粘膜损伤指数包括小鼠胃组织SOD活性、MAD及PEG2含量，观察药物对急性胃黏膜损伤的治疗作用。
1、材料与方法
1.1动物
昆明小鼠，(25±4)g，雌雄各半，山东中医药大学动物中心提供。
1.2试剂与样品
吗氯贝胺购自中国药品生物制品检定所。化合物(Ⅰ)自制，制备方法见实施例1。三九胃泰颗粒购自三九医药股份有限公司。超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、丙二醛(MAD)试剂盒均购自上海蓝基生物科技有限公司。
1.3仪器
紫外可见分光光度计(型号：UV-2450/2550)，日本岛津公司生产。
1.4小鼠分组及模型制备
选取健康小鼠60只(雌雄各半)，随机分为6组，分别为空白对照组、模型对照组、阳性对照组(三九胃泰颗粒)和吗氯贝胺组(80mg·kg-1)、化合物(Ⅰ)组(80mg·kg-1)、吗氯贝胺与化合物(Ⅰ)组合物组【40mg·kg-1吗氯贝胺+40mg·kg-1化合物(Ⅰ)】。模型对照组和空白对照组给予生理盐水，其他给药连续灌胃10d。末次给药后禁食不进水24h，在最后一次给药1h后，除空白对照组外，每只均灌胃给无水乙醇，按0.1mL/10g给药。
1.5胃组织SOD活性、MAD含量测定
胃大体标本的制备：动物处死后，将其置于冰盒上，快速取全胃，沿胃大弯剪开，用生理盐水冲洗胃壁内侧，展平置于体显微镜下观察胃粘膜损伤程度。根据试剂盒说明测定组织SOD活性、MAD含量测定。
1.6胃组织PGE2含量测定
取胃组织匀浆2mL，4℃3000rpm离心15min后取上清液，以放射法测定PGE2含量。
1.7统计学方法
用Excel工作表进行分析，各试验组与对照组之间采用t检验进行比较。
2、实验结果
2.1对急性胃粘膜损伤模型小鼠胃组织中SOD、MAD、PGE2含量的影响
与空白对照组比，模型对照组SOD含量降低(P<0.05)、MAD含量升高(P<0.05)、PGE2含量降低(P<0.05)，说明造模成功；与模型对照组比，阳性对照组SOD含量显著升高(P<0.01)、MAD含量显著降低(P<0.01)、PGE2含量升高(P<0.05)；与模型对照组比，吗氯贝胺与化合物(Ⅰ)组合物组SOD含量显著升高(P<0.01)、MAD含量显著降低(P<0.01)、PGE2含量显著升高(P<0.01)；与模型对照组比，吗氯贝胺组、化合物(Ⅰ)组SOD含量升高(P<0.05)、MAD含量降低(P<0.05)、PGE2含量升高(P<0.05)。
试验结果见表1。
表1对急性胃粘膜损伤模型小鼠胃组织中SOD、MAD、PGE2含量的影响
急性胃粘膜损伤是临床常见的急症，近几年发现病理机制主要是内源及外源性攻击因子和胃粘膜保护机制的平衡关系失衡，目前已证实，OH·自由基和O·自由基与多种类型的胃粘膜损伤有关，研究认为O·自由基既参与组织细胞的损伤过程，也是细胞正常代谢的中间产物。由于氧自由基与胃粘膜损伤有关，即参与组织细胞的损伤也是细胞正常代谢产物。MAD含量的高低间接反映了机体受氧自由基攻击的程度，SOD能消除自由基，其活性高低间接反映了机体清除氧自由基的能力。PGE2有抑制胃酸分泌的作用，并且能促进胃粘液分泌并增加胃粘膜血流量而发挥保护作用，所以其含量高低反映了对胃粘膜的保护能力。
上述结果表明，吗氯贝胺、化合物(Ⅰ)单独作用时，对急性胃溃疡损伤具有保护作用；吗氯贝胺和化合物(Ⅰ)联合作用时，对急性胃溃疡损伤的保护作用进一步增强，可以开发成治疗急性胃溃疡损伤的药物。
上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。