本发明涉及抗肿瘤药物的
技术领域：
，具体涉及一种牡荆素在制备预防和/或治疗恶性肿瘤药物中的应用。
背景技术：
：肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。现有技术中，肺癌治疗过程常采用西医化疗药物和中药。常用的治疗非小细胞肺癌疗效好的中药有参莲胶囊、益肺清化颗粒、清肺散结丸等；常用的治疗小细胞肺癌疗效好的中药有益肺清化膏、益肺清化颗粒、清肺散结丸等。山楂叶(Crataeguspinnatifida)属蔷薇科植物，味酸，性平，归肝经，主要功效为活血化瘀，理气通脉，用于气滞血瘀、胸闷憋气、心悸健忘、眩晕耳鸣，是中药活血化瘀药中重要的药物之一。现代医学研究证明山楂叶具有强心、降压、抗心绞痛及降血脂等作用。目前对山楂叶研究最多、最广泛和最深入的是在心血管效应方面，在临床上能用于治疗冠心病、心绞痛、高脂血症、心律失常等。山楂叶的化学研究表明，山楂叶中主要的活性成分为黄酮类物质。山楂叶中的主要黄酮有牡荆素、山柰酚、槲皮素、牡荆素鼠李糖甙和牡荆素葡萄糖甙等近20种。公开号为CN1300164的中国专利公开了一种牡荆素的提取方法、用途及制剂，从山楂叶中分离出单一有效成分牡荆素，使其纯度达到98％以上，用于心血管疾病领域，效果显著。但现有技术中并未报道牡荆素在治疗恶性肿瘤，尤其是在肺癌、肉瘤中的应用。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种牡荆素在制备预防和/或治疗恶性肿瘤药物中的应用，牡荆素对于恶性肿瘤的治疗效果好，作用速度快，毒副作用低，提供了一种牡荆素的新用途。本发明提供了一种牡荆素制备预防和/或治疗恶性肿瘤药物中的应用，所述牡荆素的结构如式Ⅰ所示：优选的是，所述恶性肿瘤为肺癌肿瘤、肉瘤。优选的是，所述肺癌为小细胞肺癌肿瘤。优选的是，所述药物的剂型为注射剂。优选的是，所述药物还包括辅料，所述辅料包括甘露醇、氢氧化钠、盐酸。优选的是，所述药物的剂量为3mg/次～60mg/次。本发明提供的牡荆素制备预防和/或治疗恶性肿瘤药物中的应用，能够提供一种抗恶性肿瘤的有效药物，对肺癌或肉瘤治疗效果好，作用速度快，毒副作用低，实现了对牡荆素更好的应用。具体实施方式本发明提供了一种牡荆素制备预防和/或治疗恶性肿瘤药物中的应用，所述牡荆素的结构如式Ⅰ所示：在本发明中，所述牡荆素优选从山楂叶中提取、分离，得到单一有效成分牡荆素，使其纯度达到98％以上。本发明对所述提取分离纯化方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的牡荆素的提取分离纯化方法即可，如优选通过水解、结晶、重结晶对牡荆素进行提取。在本发明中，所述恶性肿瘤优选为肺癌肿瘤、肉瘤。在本发明中，所述肺癌优选为小细胞肺癌。在本发明中，所述药物的剂型优选为注射剂。在本发明中，所述药物还包括辅料，所述辅料包括甘露醇、氢氧化钠、盐酸。在本发明中，所述药物的剂量为3mg/次～60mg/次。本发明对所述注射剂药物的制备没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的注射剂的制备方法即可。如所述注射剂的制备方法优选为：称取甘露醇、牡荆素混合，加注射用水，搅拌均匀，再加氢氧化钠溶液进行溶解，再用盐酸调至pH值为8.0～9.0，加针用活性炭，搅拌10～15min，微孔钛过滤器减压粗滤，脱炭，检查含量、pH合格后，再经微孔滤膜终端过滤后，分装于西林瓶中，低温冷冻干燥，进行后续预冻、干燥和包装，得到牡荆素注射剂成品。下面结合具体实施例对本发明提供的牡荆素制备预防和/或治疗恶性肿瘤药物中的应用做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。实施例1牡荆素注射剂的制备a、称取牡荆素3g、甘露醇180g原料均匀混合，加600ml注射用水，搅拌均匀，再加0.1mol/L的氢氧化钠溶液1500ml，搅拌溶解，再用1mol/L的盐酸溶液调至PH为8.5，加注射用水至3000ml，加0.05％的针用活性炭，搅拌10min，微孔钛过滤器减压粗滤，脱炭，检查含量、pH合格后，再经0.22μm微孔滤膜终端过滤后，分装于10ml西林瓶中，每瓶装3ml，低温冷冻干燥。b、预冻：把分装好的药品放入冻干箱内隔板上预冻开始至+25℃～-40℃，2小时；-40℃，3小时。c、升华干燥：将冷凝器温度下降至-45℃以下，启动真空泵，待真空度达到一定数值后，缓缓打开蝶阀，当干燥箱内的真空度达13.33Pa(0.1mmHg)以下关闭冷冻机，通过隔板下的加热系统缓缓加热，使冻结产品的温度逐渐升高至-20℃，再由-20℃逐渐升高至25℃。整个升华干燥过程约26小时。d、再干燥：在25℃下干燥5小时，干燥失重符合规定，在无菌条件下加盖胶塞，轧盖，包装，检验，入库。实施例2牡荆素注射剂的制备a、称取牡荆素30g、甘露醇180g原料均匀混合，加600ml注射用水，搅拌均匀，再加0.1mol/L的氢氧化钠溶液1500ml，搅拌溶解，再用1mol/L的盐酸溶液调至PH为8.5，加注射用水至3000ml，加0.05％的针用活性炭，搅拌10min，微孔钛过滤器减压粗滤，脱炭，检查含量、pH合格后，再经0.22μm微孔滤膜终端过滤后，分装于10ml西林瓶中，每瓶装3ml，低温冷冻干燥。b、预冻：把分装好的药品放入冻干箱内隔板上预冻开始至+20℃～-40℃，3小时；-40℃，4小时。c、升华干燥：将冷凝器温度下降至-45℃以下，启动真空泵，待真空度达到一定数值后，缓缓打开蝶阀，当干燥箱内的真空度达13.33Pa(0.1mmHg)以下关闭冷冻机，通过隔板下的加热系统缓缓加热，使冻结产品的温度逐渐升高至-15℃，再由-15℃逐渐升高至30℃。整个升华干燥过程约30小时。d、再干燥：在25℃下干燥4小时，干燥失重符合规定,在无菌条件下加盖胶塞，轧盖，包装，检验，入库。实施例3牡荆素注射剂的制备a、称取牡荆素60g、甘露醇240g原料均匀混合，加600ml注射用水，搅拌均匀，再加0.1mol/L的氢氧化钠溶液1500ml，搅拌溶解，再用1mol/L的盐酸溶液调至PH为8.5，加注射用水至3000ml，加0.05％的针用活性炭，搅拌10min，微孔钛过滤器减压粗滤，脱炭，检查含量、pH合格后，再经0.22μm微孔滤膜终端过滤后，分装于10ml西林瓶中，每瓶装3ml，低温冷冻干燥。b、预冻：把分装好的药品放入冻干箱内隔板上预冻开始至+25℃～-40℃，2小时；-40℃，3小时。c、升华干燥：将冷凝器温度下降至-45℃以下，启动真空泵，待真空度达到一定数值后，缓缓打开蝶阀，当干燥箱内的真空度达13.33Pa(0.1mmHg)以下关闭冷冻机，通过隔板下的加热系统缓缓加热，使冻结产品的温度逐渐升高至-20℃，再由-20℃逐渐升高至25℃。整个升华干燥过程约26小时。d、再干燥：在25℃下干燥约5小时，干燥失重符合规定,在无菌条件下加盖胶塞，轧盖，包装，检验，入库。实施例4牡荆素注射剂对小鼠肉瘤S180的抑瘤作用。方法：1、取肿瘤将腹腔接种小鼠肉瘤S180细胞后一周的昆明小鼠颈椎脱臼处死，用碘酒和75％(v/v)乙醇腹部局部消毒，在无菌条件下取出腹水，用生理盐水稀释3倍，得到瘤液。2、接种瘤液给每只小鼠腋窝皮下准确接种瘤液0.2ml。注意接种位置各组应当一致，为防止瘤液接种后漏出皮下，一般是从胸部或背部皮肤进针，到达腋下。3、分组给药接种后次日，将动物随机分组、称重，牡荆素注射剂设三个剂量组，分别为3、6、12mg/kg；同时设阳性对照(环磷酰胺)及阴性对照(生理盐水)，每组10只动物。牡荆素注射剂按3、6、12mg/kg三个剂量组以等体积(0.2ml)不同浓度给动物腹腔注射，每天一次，连续给药7天，阳性对照组于接种后次日以100mg/kg剂量给动物腹腔注射环磷酰胺1次，每日一次，阴性对照组是每日1次，每次0.2ml。4、称瘤重末次给药后24小时，颈椎脱臼处死动物，分别称体重，计算肿瘤抑制率，进行疗效评价，并将各组结果进行统计学处理。实体瘤以每组动物的评价肿瘤重量作为疗效指标。计算对照组的平均瘤重及治疗组的平均瘤重之比值(T/C-％)，也可计算肿瘤生长抑制率(％)，计算公式如下：肿瘤生长抑制率％＝(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重×％结果：牡荆素注射剂对小鼠肉瘤S180有较强的抑制作用，12mg/kg的抑制率为55.7％(P＜0.05)，结果见表1:表1接种药物对肉瘤S180小鼠体重及瘤重的影响(n＝10)与对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01由表1可知，牡荆素对小鼠体重及瘤重的影响均有统计学意义，且在12mg/kg剂量达到很好的效果，不低于阳性对照药。实施例5牡荆素注射剂对小鼠Lewis肺癌生长的抑制作用原理：同种动物移植性肿瘤模型系选择三种或三种以上的小鼠、大鼠移植性肿瘤，进行实验治疗。实体观察瘤重抑制率或T/C％，给药途径应与临床一致，并设三个或三个以上剂量组。对每一种瘤株的实验治疗应获得可重复性的结果，牡荆素注射剂对同种动物移植性肿瘤具有一定的生长抑制作用。材料：动物：C57BL/6小鼠。瘤株：小鼠Lewis肺癌。器材：手术刀、剪、镊子，注射器，玻璃匀浆器或套管针，超净工作台。药品及试剂：牡荆素注射剂实验前用生理盐水将药物配成所需浓度的溶液，氟尿嘧啶(5-Fu)试验前用生理盐水稀释成所需浓度的溶液。方法：1.取瘤种用小鼠移植性肿瘤Lewis肺癌生长良好的瘤源，无菌条件下取荷瘤动物的实体瘤组织，用剪刀减成小碎块，用套管针移植或玻璃匀浆器加无菌生理盐水磨成匀浆，计数每1ml匀浆液中的瘤细胞数。2.接种瘤液给每只动物皮下接种2×106细胞。3.分组给药接种后24小时分组给药，每组10只动物。实验共分5组，①阴性对照组，②氟尿嘧啶阳性药对照组，③牡荆素注射剂小剂量组3mg/kg，④牡荆素注射剂中剂量组6mg/kg，⑤牡荆素注射剂高剂量组12mg/kg。氟尿嘧啶25mg/kg隔日灌胃给药，共给3次。牡荆素注射剂每天灌胃给药1次，连续10天。4.称瘤重末次给药后24小时处死动物、称体重及剥瘤称重，计算抑制率，并进行统计学处理数据。计算肿瘤生长抑制率(％)，计算公式如下：肿瘤生长抑制率％＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％结果：牡荆素注射剂在3mg/kg、6mg/kg、12mg/kg的剂量时，对小鼠Lewis肺癌均有一定的抑制作用，且呈剂量效应关系。说明牡荆素注射剂具有一定的抗肿瘤作用，结果如表2所示。表2小鼠Lewis肺癌生长抑制情况(x±s，n＝10)组别剂量(mg/kg)体重(g)始/末瘤重(g)抑制率(％)对照--20.2/+2.13.00±0.68--5-Fu2520.0/+5.71.50±0.6250.0**牡荆素注射剂321.2+4.32.11±0.8730**牡荆素注射剂620.4+7.31.62±0.9446**牡荆素注射剂1220.5+6.51.51±0.8650**与对照组比：**P＜0.01由表2可知，牡荆素注射剂对小鼠Lewis肺癌生长抑制有明显作用，有统计学意义，且在12mg/kg剂量达到很好的效果，不低于阳性对照药。实施例6牡荆素注射剂对人小细胞肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用原料：裸鼠又称无胸腺小鼠，具有四个特点：①先天性胸腺缺失，②胸腺依赖性免疫功能缺乏，其T细胞功能接近于零，但B细胞功能大致正常；③人体肿瘤异种移植时无排斥反应，故可供人体肿瘤移植。异种移植后的人体肿瘤在裸鼠仍保持其原有的组织形态及免疫学特点以及特有的染色体组型和对抗肿瘤药的原有敏感型。移植后的人肿瘤细胞仍保持其原有的性能。④裸鼠因皮肤无毛、操作方便，易于动态观察肿瘤的生长状态，牡荆素注射剂可抑制人小细胞肺癌在裸鼠的生长。材料：动物：裸鼠BALB/C/nu。瘤株：人小细胞肺癌。器材：手术用刀、剪、镊子，注射器，玻璃匀浆器或套管针、游标卡尺、超净工作台。药品及试剂：牡荆素注射剂实验前用生理盐水配成所需浓度的溶液，环磷酰胺实验前用生理盐水配成所需浓度的溶液。方法：1.取瘤种并接种选择肿瘤生长旺盛的人小细胞肺癌荷瘤小鼠，颈椎脱臼处死。在超净台用碘酒和酒精消毒动物皮肤，剪开皮肤剥离肿瘤，用匀浆器将瘤组织加无菌生理盐水制成细胞悬液，接种于动物右上肢腋窝皮下，接种肿瘤细胞数约为5×104/只。2.分组给药接种后第6天分组给药并测量肿瘤体积。试验共设5组：①阴性对照组，②环磷酰胺阳性药对照组，③牡荆素注射剂低剂量组3mg/kg，④牡荆素注射剂中剂量组6mg/kg，⑤牡荆素注射剂高剂量组12mg/kg。环磷酰胺60mg/kg腹腔注射1次。牡荆素注射剂灌胃给药每天一次，连续11天，停药后24小时处死动物，剥瘤称重，并用统计学方法处理数据，进行疗效评分。相对瘤体积(mm3)＝1/2a2b(a为宽，b为长)；肿瘤生长抑制率％＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％结果：见表3和表4表3人小细胞肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制情况(雄性裸鼠)(x±s，n＝7)组别剂量(mg/kg)体重(g)始/末瘤重(g)抑制率(％)对照--20.8/+4.03.22±1.598--5-Fu6020.0/+3.00.12±0.06896.3**牡荆素注射剂321.1+4.02.44±1.51724.2牡荆素注射剂621.0+2.41.80±0.49244.1**牡荆素注射剂1220.0+1.81.45±0.57954.9**注：**P＜0.01表4人小细胞肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制情况(雄性裸鼠)(x±s，n＝7)组别剂量(mg/kg)体重(g)始/末瘤重(g)抑制率(％)对照--19.9/+1.32.89±1.312--5-Fu6019.4/+1.20.17±0.05194.1**牡荆素注射剂319.6/+0.92.02±0.49830.1**牡荆素注射剂619.9/-0.71.26±0.65856.4**牡荆素注射剂1220.4/-0.41.08±0.77162.6**注：**P＜0.01由表3、表4可以看出，牡荆素注射剂在6mg/kg、12mg/kg剂量时，对荷瘤裸鼠人小细胞肺癌有较好的抑瘤作用，6mg/kg剂量时，雄鼠抑瘤率为44.1％(P＜0.01)，雌鼠抑瘤率为56.4％(P＜0.01)；12mg/kg剂量时，雄鼠抑瘤率为54.9％(P＜0.01，雌鼠抑瘤率为62.6％(P＜0.01)。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页1 2 3