一种防治心血管疾病的药物组合物的制作方法

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种防治心血管疾病的药物组合物。

背景技术：

心血管疾病发病率、致残率高，是我国居民的首位死亡原因。随着人均寿命的延长、物质条件的富裕和生活文化方式的变化，心血管病危险因素水平持续增加，心血管病负担日渐加重，已成为重大的公共卫生问题。中国城乡居民心血管病患病率呈上升趋势，死亡率居高不下，全国每年约有350万人死于心血管病。目前，估计全国有心血管病患者2.9亿，其中高血压2.7亿，脑卒中至少700万，心肌梗死250万，心力衰竭450万，肺原性心脏病500万，风湿性心脏病250万，先天性心脏病200万。每5个成人中有1人患心血管病。心脑血管疾病已成为威胁人类健康的主要因素之一。

然而对于心血管疾病发病机制复杂，临床上常见的治疗心血管疾病的药物有硝酸甘油、钙离子通道阻断剂，然而这些药物长期服用，会产生头晕、心跳加快等不良反应。西药单靶点治疗逐渐显现出局限性。例如心血管类疾病中的首要致死疾病冠心病，目前以单靶点西药治疗的效果并不明显，冠心病的死亡率仍没有降低。同时西药常伴随大量的副作用。随着研究的深入，复方药物，特别是以天然化合物成分开发的复方药物，可通过多种成分作用于多个靶点，同时控制多条病理变化途径，发挥协同作用，从而全面抑制疾病的进展，在复杂疾病的预防和治疗上具有显著的优势。因此，亟待开发临床疗效显著、不良反应较少、生产工艺简单、质量稳定性好的新型抗心血管药物，这对于充分利用我国丰富的动植物资源丰富，缓解社会医疗费用的压力也具有重要意义。

丹参素，来源于唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge和甘西鼠尾草的根。该化合物为酚性芳香酸类化合物，棕黄色粉末或黄色粉末。其药理作用为：抑制血小板聚集及抗凝作用、抗菌消炎及增强机体免疫作用、抗动脉粥样硬化及降血脂作用。多用于活血化瘀，理气止痛，用于胸憋闷，心绞痛。

羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A)来源于菊科植物红花Carthamustinctorius L的干燥花。该化合物具有单查尔酮苷类结构，是红花最主要的有效水溶性成分，可抑制血小板激活因子诱发的血小板聚集与释放，可竞争性地抑制血小板激活因子与血小板受体的结合，从而发挥活血化瘀的药理作用。

对香豆酸(p-Coumaric acid)，化学名称为4-羟基肉桂酸，广泛存在于自然界植物当中，为白花蛇舌草、海金沙草、杜仲叶的有效成分之一。对香豆酸具有预防心血管疾病、抗氧化、防癌、抗菌消炎和利胆等对人体有益的生物活性。

丹酚酸D，来源于唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bunge的干燥根及根茎。其具有抗氧化、保护脑组织细胞损伤、保护心脑血管系统的药理作用。

迷迭香酸，是从唇形科植物迷迭香Rosmarinus officinalis中分离得到的一种水溶性的天然酚酸类化合物，分布较为广泛，主要存在于唇形科、紫草科、葫芦科、椴树科、伞形科等多种植物中，尤以唇型科和紫草科植物中含量最高。其具有较强的抗炎活性，同时迷迭香酸还具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤的活性。

紫草酸，来源于唇形科甘西鼠尾Salvia przewalskii Maxim的根，具有广泛药理功能：改善肾功能、防治心血管疾病、抗氧化、抗缺血损伤、保肝、抗纤维化、防治神经毒性、抗凝等药理作用。

丹酚酸B，从唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge的根及根茎提取而得。药理学研究表明，丹酚酸B具有对心肌缺血再灌注损伤的保护作用、对心脏微血管内皮细胞的延迟保护作用、对动脉粥样硬化的防治作用。

丹酚酸A，存在于唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge的根中。适用于心绞痛及急性心肌梗塞，用于治疗脑血栓形成的后遗症亦有效。此外还可用于治疗血栓闭塞性脉管炎、硬皮病、视网膜中央动脉栓塞、神经性耳聋、白噻氏综合征及结节性红斑等疾病。

通过检索国内外专利文献检索，现有技术中没有报道关于丹参素、羟基红花黄色素、对香豆酸、丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A的药物组合物的相关报道。

技术实现要素：

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种防治心血管疾病的药物组合物，本申请的发明人通过大量试验研究并不懈探索，最终获得了疗效确切，毒副作用小的药物组合物。该药物组合物可以降低大鼠全血黏度、改善凝血功能、抑制纤维蛋白原的升高，对心肌缺血症起到较好的预防和治疗作用。

本发明是通过以下技术方案实现的：一种防治心血管疾病的药物组合物，所述药物组合物是由下述重量百分比的组分制成：丹参素25～35％、羟基红花黄色素A15～25％、对香豆酸0.4～1.5％、丹酚酸D3.0～4.2％、迷迭香酸5.0～8.0％、紫草酸1.3～2.5％、丹酚酸B13～20％、丹酚酸A 15％～25％。

作为本发明的优选，所述药物组合物是由下述重量百分比的组分制成：丹参素27～33％、羟基红花黄色素A17～23％、对香豆酸0.6～1.2％、丹酚酸D3.2～4.0％、迷迭香酸6.0～7.0％、紫草酸1.6～2.2％、丹酚酸B15～18％、丹酚酸A18％～22％。

作为本发明的最佳优选，所述药物组合物是由下述重量百分比的组分制成：丹参素30.4％、羟基红花黄色素A19.8％、对香豆酸0.9％、丹酚酸D 3.6％、迷迭香酸6.5％、紫草酸1.9％、丹酚酸B16.9％、丹酚酸A 20％。

作为本发明的进一步优选，所述药物组合物的剂型为注射剂、冻干粉、胶囊剂、颗粒剂、片剂、滴丸剂、口服液剂、丸剂、软胶囊剂。

所述中药注射液所使用的辅料可以为，注射用水、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇-200、-300、-400、-600、苯甲醇等。

所述冻干粉所使用的辅料可以为，乳糖、甘露醇、山梨醇、葡萄糖、海藻糖、右旋糖酐等。

所述胶囊剂所使用的辅料可以为，淀粉、磷酸二氢钙、淀粉浆、糖浆、水、乙醇、微粉硅胶、羧甲基淀粉钠等。

所述颗粒剂使用的辅料可以为淀粉、乳糖、糊精、糖粉、蔗糖、甘露醇、微晶纤维素、葡萄糖。

所述片剂使用的辅料可以为，淀粉、糊精、磷酸钙、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁等。

所述滴丸剂所使用的辅料可以为，聚乙二醇类、硬脂酸、硬脂酸钠、泊洛沙姆、单硬脂酸甘油脂等。

所述口服液剂使用的辅料可以为蜂蜜、柠檬酸、聚山梨酯类、苯甲酸钠、山梨酸等。

所述丸剂使用的辅料可以为水、蜂蜜、糖浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素等。

本发明所述药物组合物在制备防治心血管疾病的药物中的用途。

所述软胶囊剂使用的辅料可以为植物油、PEG400、蜂蜡、甘油、明胶、水等。

本发明药物组合物的有益效果：

⑴、本发明药物组合物的处方优选

本发明药物组合物的处方，选择丹参素和羟基红花黄色素A两药相配，既可抑制血小板聚集，又可竞争性地抑制血小板激活因子与血小板受体的结合，使得药物组合物具有活血化瘀作用；配以对香豆酸和丹酚酸D组分，可以发挥保护脑组织细胞损伤，可以对心肌缺血症起到较好的预防和治疗作用；再选以迷迭香酸、紫草酸组分，使得处方具有抗缺血损伤及抗炎的作用；最后配以丹酚酸A和B组分，两药配合使用，可以发挥协同增效，使得药物组合物首先对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用，又可以使上述有效成分更好的通过血脑屏障，增加药物有效成分在脑部的分布及代谢，以增强药物组合物的治疗效果。

⑵、本发明药物组合物的有益效果

本发明的药物组合物具有药理药效作用明显、安全性好的优势。且本发明药物组合物的各原料药来源丰富、价廉、未见毒副作用，制备工艺简单，可制成注射剂、冻干粉、胶囊剂、颗粒剂、片剂、滴丸剂、口服液剂、丸剂、软胶囊剂。本发明药物组合物可以改善5个切变率下全血黏度、凝血功能指标PT、APTT，且能显著抑制纤维蛋白原的升高。这些数据也说明，本发明药物组合物较强的抗心肌缺血作用。

本发明药物组合物还意外发现可以显著减低模型组的ALT(丙氨酸转氨酶)、AST(天门冬氨酸转氨酶)、TBIL(总胆红素)、LDH(血清乳酸脱氢酶)、CREA(血肌酐)的各项指标，说明本发明药物组合物对肝肾损伤具有保护作用。

附图说明

图1-各实验组给药后5s^-1切变率下全血粘度的改善情况；

图2-各实验组给药后30s^-1切变率下全血粘度的改善情况；

图3-各实验组给药后50s^-1切变率下全血粘度的改善情况；

图4-各实验组给药后150s^-1切变率下全血粘度的改善情况；

图5-各实验组给药后200s^-1切变率下全血粘度的改善情况；

图6-各实验组给药后APTT的改善情况；

图7-各实验组给药后PT的改善情况；

图8-各实验组给药后Fbg的改善情况；

图9-给药后丙氨酸转氨酶(ALT)的改善情况；

图10-给药后天门冬氨酸转氨酶(AST)的改善情况；

图11-给药后总胆红素(TBIL)的改善情况；

图12-给药后血清乳酸脱氢酶(LDH)的改善情况；

图13-给药后血肌酐(CREA)的改善情况。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步的说明，但本发明不仅限于这些实施例，在未脱离本发明宗旨的前提下，所作的任何改进均落在本发明的保护范围之内。实施例1本发明药物组合物的药效学实验

1.1试验材料与仪器

1.1.1实验动物：

雄性SD大鼠24只，体重240-260g，SPF级，由广东省医学实验动物中心供给，合格证号：SCXK-(粤)2013-0002。

1.1.2实验药品与试剂：

羟基红花黄色素A(批号：11637-201207)，购自中国药品生物制品检定所，纯度为92.5％；丹酚酸A(批号：151017)、迷迭香酸(批号：150210)、丹参素(批号：151106)、紫草酸(批号：151004)、丹酚酸B(批号：121521)、丹酚酸D(批号：142998)、对香豆酸(批号：150927)，购自上海远慕生物科技有限公司，纯度经HPLC检测均大于98％；0.1％盐酸肾上腺素注射液(上海禾丰制药有限公司，批号：130301)，用生理盐水稀释至0.4mg/ml；0.9％氯化钠注射液二水合柠檬酸三钠；水合氯醛(水合三氯乙醛)。

1.1.3实验仪器：

Ultimate 3000DGLC高效液相色谱仪(美国Dionex公司，DGP-3600SD双三元泵、SRD-3600脱气机、WPS-3000SL自动进样器、TCC3000-RS柱温箱、DAD检测器、Chromeleon7.2数据处理软件)；色谱柱：Elite Hypersil ODS2(4.6×250mm，5μm，S.N.E2618699)。涡旋振荡器：Scientific Industries Vortex-Genie 2；十万分之一电子天平：sartorius BP211D；超低温冰箱：海尔BCD-568W；冷冻离心机：Eppendorf 5430R、TD5A-WS、TDL-5M；北京普利生LBY-NJ4血小板聚集仪；Sysmex CA-510全自动血凝分析仪；北京普利生LBY-N6B全自动自清洗血流变仪；北京普利生LBY-XC40全自动动态血沉测试仪进行血沉检测。

1.1.4实验环境：经中山大学生命科学学院动物伦理委员会批准饲养于广东省中山大学海洋与中药实验室SPF级动物房，许可证号：SCXK-(粤)2009-0020。观察室温度20℃-23℃，相对湿度50％-65％，颗粒饲料，在实验动物适应新环境一周后开始实验并实验过程中采取适当的方法减轻对动物的伤害。药效指标检测在广州医药工业研究院药物非临床评价研究中心动物医学部、广东省中山大学海洋与中药实验室进行。

1.2实验方法

1.2.1本发明药物组合物样品的制备：

精密称取丹参素、羟基红花黄色素A、对香豆酸、丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A适量，加生理盐水制成每1ml含丹参素1.17mg、羟基红花黄色素A 0.76mg、对香豆酸0.033mg、丹酚酸D 0.14mg、迷迭香酸0.25mg、紫草酸0.075mg、丹酚酸B0.65mg、丹酚酸A 0.77mg的溶液，即得。

1.2.2急性血瘀大鼠模型的构建：

实验分组及给药：大鼠随机分为3组，分别为正常组、急性血瘀模型组、本发明药物组合物组3ml/kg/d。实验动物在饲养环境中适应一周后开始给药，给药方式为肌肉注射，空白对照组与模型组肌肉注射同体积生理盐水，每天给药一次，连续给药10d。

1.2.3大鼠急性血瘀模型建立：

末次给药后30min，除正常组外其余各组大鼠均皮下注射盐酸肾上腺素0.8mg/kg，正常组大鼠皮下注射等量生理盐水，过2h后除正常组外其余各组大鼠均浸入0-4℃冰水内进行冷刺激5min，2h后再次皮下注射等量盐酸肾上腺素0.8mg/kg，处置后禁食12h后各组进行给药，1h后10％水合氯醛0.35ml/100g腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，枸橼酸钠1:9抗凝，血样处理及检测全部按照标准操作规程进行，所取血液全部用于血液流变和凝血功能相关药效指标检测。

1.2.4大鼠血液药效指标检测：

取1.5ml抗凝血液放入TDL-5M冷冻离心机进行离心(3820r/m,2000g,15min,20℃)得血浆，一部分血浆放入Sysmex CA-510全自动血凝分析仪进行活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)及纤维蛋白原(Fbg)项目检测；取0.9ml抗凝血液放入北京普利生LBY-N6B全自动自清洗血流变仪进行全血粘度(WBV,5s^-1、30s^-1、50s^-1、150s^-1、200s^-1)等指标的检测。

1.2.5数据处理方法：

将所得计量资料均以均值±标准差表示，采用SPSS18.0版本运用单因素方差分析(ANOVA)及T检验的方法进行数据分析，P值小于0.05及P值小于0.01认为存在统计学差异。

1.3实验结果：

1.3.1对全血黏度指标的影响

全血黏度升高是血液高凝状态的宏观体现，被认为是绝大多数心脑血管疾病的重要危险因素之一。实验结果(见附图1-5)表明：模型组全血黏度在5s^-1、30s^-1、50s^-1、150s^-1、200s^-1切变率下显著升高(P<0.05)；本发明药物组合物对5个切变率下全血黏度均有一定改善作用。

1.3.2对凝血功能指标的影响

PT、APTT分别为表征外源性和内源性凝血系统的药效指标，常用来监测溶栓药物的临床疗效。实验结果(见附图6、7)表明：模型组的PT、APTT均显著降低(P<0.01)。本发明药物组合物对PT、APTT具有一定改善作用。

1.3.3对纤维蛋白原指标的影响

纤维蛋白原的增高常见于心绞痛、急性心肌梗死、脑梗死等疾病，是临床常用凝血四项检验指标之一。实验结果(见附图8)表明：模型组纤维蛋白原显著升高(纤维蛋白原形成纤维蛋白的时间显著缩短)(P<0.01)。本发明药物组合物均可显著抑制纤维蛋白原的升高(P<0.05)。

1.3.4对肝肾损伤相关指标的影响

丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)常用来指示肝脏或胆道是否发生异常，当肝脏发生炎症、坏死、中毒等损害时，这三种指标均升高。血清乳酸脱氢酶(LDH)是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，广泛存在于人体组织中，可辅助诊断心梗、肝病等疾病。血肌酐(CREA)增高见于各种肾病、急性或慢性肾功能衰竭、重度充血性心力衰竭、心肌炎、肌肉损伤、巨人症、肢端肥大症等。

实验结果(见附图9-13)表明：造模后，模型组的ALT、AST、TBIL、LDH、CREA均显著升高(P<0.01)，提示大鼠肝脏和肾脏受到损伤。本发明药物组合物可抑制这几种指标的异常升高，说明本发明药物组合物具有对肝肾损伤具有保护作用。

实施例2本发明药物组合物的毒性实验

健康小鼠20只，体重在18～24g，采用本实施例中制备的溶液，尾静脉注射给药，给药剂量为10ml/Kg，给药后观察，7d中无一动物死亡情况。

大鼠长期毒性实验选择健康、体重70～110g Wistar大鼠40只，采用本发明实施例1中制备的药物组合物溶液，尾静脉注射给药，给药剂量为8ml/Kg/d，每周测量大鼠体质量1次，根据体质量调整剂量，连续给药90d后，对大部分大鼠取血做血常规、血液生化指标的测定，并处死取主要脏器进行病理组织学检查。停药2周后，处死剩余大鼠，取主要脏器进行病理组织学检查，判定药物的延迟毒性。结果表明，3个月后，实验大鼠一般状况良好，生长发育正常，体质量增长率、大鼠的器官系数、血液生化指数、主要器官包括心、肝、脾、肾、肾上腺、脑、胸腺、睾丸、卵巢、胃、肠等均未见异常。这也说明本发明药物组合物安全性良好。

实施例3本发明药物组合物中药注射剂的制备

取丹参素30.4g、羟基红花黄色素A19.8g、对香豆酸0.9g、丹酚酸D 3.6g、迷迭香酸6.5g、紫草酸1.9g、丹酚酸B16.9g、丹酚酸A 20g、将上述原料药进行混合均匀，并将上述原料药加入到1000ml蒸馏水中，进行溶解分散，再分别甘油10g、丙二醇5g、进行搅拌，混合均匀后，过滤，灌封，灭菌，分装1000支，即得。

实施例4本发明药物组合物冻干粉剂的制备

取丹参素31g、羟基红花黄色素A18g、对香豆酸1.0g、丹酚酸D 3.3g、迷迭香酸6.2g、紫草酸1.7g、丹酚酸B16.0g、丹酚酸A 21g、甘露醇21g、葡萄糖10g、蒸馏水1000ml，将上述组分混匀后，经冷冻干燥，分装1000支，即得。实施例5本发明药物组合物胶囊剂的制备

取丹参素33g、羟基红花黄色素A17g、对香豆酸1.2g、丹酚酸D3.2g、迷迭香酸7.0g、紫草酸2.2g、丹酚酸B15g、丹酚酸A 22g，将上述药物组分混合后，加入适量的淀粉、磷酸氢钙，制粒，装胶囊，制成硬胶囊剂。

实施例5本发明药物组合物颗粒剂的制备

取丹参素27g、羟基红花黄色素A23g、对香豆酸0.6g、丹酚酸D4.0g、迷迭香酸6.0g、紫草酸1.6g、丹酚酸B18g、丹酚酸A 18g，将上述药物搅拌混合均匀，加入适量的糊精、蔗糖，混匀，制粒，干燥，制成颗粒剂。

实施例6本发明药物组合物片剂的制备

取丹参素35g、羟基红花黄色素A25g、对香豆酸1.5g、丹酚酸D3.0g、迷迭香酸8.0g、紫草酸1.3g、丹酚酸B20g、丹酚酸A 15g，将上述药物搅拌混合均匀，加入适量的微晶纤维素、硬脂酸镁、混匀，制粒，压制成片剂。

实施例7本发明药物组合物滴丸剂的制备

取丹参素25g、羟基红花黄色素A15g、对香豆酸0.4g、丹酚酸D4.2g、迷迭香酸5.0g、紫草酸2.5g、丹酚酸B13g、丹酚酸A 25g，将上述药物搅拌混合均匀，再加入PEG4000、PEG6000作为基质，加热搅拌均匀后，进行滴制，制成滴丸剂。实施例8本发明药物组合物口服液的制备

取丹参素30g、羟基红花黄色素A20g、对香豆酸0.9g、丹酚酸D3.6g、迷迭香酸6.5g、紫草酸1.9g、丹酚酸B16g、丹酚酸A 20g，将上述药物搅拌混合均匀，加入蜂蜜、柠檬酸、山梨酸钾，搅拌均匀后，制成口服液剂。

实施例9本发明药物组合物丸剂的制备

取丹参素30g、羟基红花黄色素A20g、对香豆酸1.0g、丹酚酸D3.6g、迷迭香酸6.5g、紫草酸1.9g、丹酚酸B16g、丹酚酸A 20g，将上述药物搅拌混合均匀，加入羟丙基甲基纤维素，再以70％乙醇为粘合剂，制丸，进行干燥后，成丸。

实施例10本发明药物组合物软胶囊的制备

取丹参素31g、羟基红花黄色素A18g、对香豆酸0.8g、丹酚酸D3.4g、迷迭香酸6.8g、紫草酸2.1g、丹酚酸B18g、丹酚酸A 17g，将上述药物搅拌混合均匀，再加入聚乙二醇400、甘油，搅匀后得囊液，再将甘油、明胶及水加热熔融后，最后再加入山梨酸钾，经胶体磨磨匀，制成胶皮后，将留用囊液与胶皮压制，压制成软胶囊。