具有增强记忆，改善抑郁情绪作用的中药散剂及其制备方法与应用与流程

老年痴呆症(另译阿尔茨海默症)与抑郁症，是神经病变中较受社会关注的两大类疾病。老年痴呆症，是一种进行性发展的致死性神经退行性疾病，临床表现为认知和记忆功能不断恶化，日常生活能力进行性减退，并有各种神经精神症状和行为障碍。全世界有2400万病患，早期最显著的症状为健忘，通常表现为逐渐增加的短期记忆缺失。随着病情的加重，病人的语言能力、空间辨别能力、认知能力会逐步衰退。调查显示，80岁以后15％的人有罹患痴呆性疾患的危险。亲族中有阿兹海默病患者的场合患病的几率也相对要高。其中，更有13岁的年轻小女孩罹患老人痴呆症的纪录。抑郁症，是一种以显著而持久的心境低落为主要临床特征的病症，同时伴有失眠，记忆缺失，饮食失调等症状，严重者可出现自杀念头和行为。多数病例有反复发作的倾向，每次发作大多数可以缓解，部分可有残留症状或转为慢性。据报道，人群中有16％的人在一生的某个时期会出现抑郁症症状。若患者出现这些症状持续两周以上，并且没有明显改善，可确诊为抑郁症。据世界卫生组织统计,抑郁症已成为世界第4大疾患，并且预计到2020年,可能成为仅次于冠心病的第二大疾病。最为严重的是，抑郁症患者不能适应社会，注意力下降，是自杀的高危人群。目前，临床研究发现，在老年人患者中，经常出现抑郁症与老年痴呆症并发的现象，多表现为发病初期以抑郁症状为主，随着疾病的发展，出现记忆缺失等老年痴呆症的症状。这两种疾病，不仅严重影响了老年人的生活质量，还给老龄化社会带来沉重的经济负担与社会负担

老年痴呆症与抑郁症的发病机理虽尚未完全明了，但对其发病机理的认识趋于统一，即都可以归结为神经退行性疾病，均与神经元退化死亡密切相关。具体可归结为如下几种假说：(1)神经元突触间隙内神经递质五羟色胺(serotonin)，去甲肾上腺素(norepinepherine)，多巴胺(dopamine)含量降低,导致记忆缺失与情绪低落；(2)下丘脑-垂体-肾上腺-海马通路(Hypothalamus-pituitary-adrenal gland pathway，HPA axis)调控紊乱，致使主管情绪与记忆的下丘脑(hypothalamus)与海马神经元(Hippocampus)损伤，坏死；(3)神经生长因子(NGF)与脑源性神经营养因子(BDNF)分泌不足导致神经元生长异常，最终坏死。(4)脑中出现类淀粉斑以及神经纤维纠结，致使神经元坏死。

目前针对老年痴呆症的药物，临床主要有(1)改善胆碱神经传递药物，如他克林，安理申，艾斯能，加兰他敏等；(2)改善脑血液循环和脑细胞代谢的药物，如脑复康等；(3)自由基清除剂和抗氧剂，如维生素E，维生素C等。这些药物的靶标主要是抑制胆碱酯酶以提高乙酰胆碱的在突触中的相对含量，抑制自由基对神经的伤害等。针对抑郁症，现在普遍用于治疗抑郁症的药物，均依据神经递质假说，抑制神经递质再摄取与抑制其在神经元突触间隙降解，以提高其在神经突触间隙的含量为靶标，进行药物设计与开发。当前临床上常用的治疗抑郁症的药物，包括：(1)三环类抗抑郁药(TCAs)，如米帕明等(2)五羟色胺摄取抑制剂(SSRI)，如氟西汀等；(3)单胺氧化酶抑制剂(MAOI)。但是，用于治疗老年痴呆症与抑郁症的药物都存在许多副作用，如体重增加、性功能降碍、嗜睡、虚弱等，对心脏毒性较大，可引起心肌损害，并且需要长期用药。同时，由于这两种疾病发病机理复杂，现有的药物往往效果较差。例如现有的用于抗抑郁的神经递质摄取抑制剂，至少有30％的抑郁症病人无效。更为严重的是，一些抗抑郁药物，例如氟西汀，长期使用后病人易于产生自杀倾向。另外，由于两种疾病多呈伴生状态，病人往往同时需要服用两种不同的药物，不仅用药不便，更带来沉重的经济负担。种种不便，使医学界更为迫切的希望在传统草药中寻找可从多靶点，多环节起作用的有效治疗方法与药物，用于同时治疗老年痴呆症与抑郁症。

技术实现要素：

发明目的：本发明的目的在于提供一种增强记忆，改善抑郁情绪作用的中药散剂。本发明的另一目的是提供上述中药散剂的制备方法和应用。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种具有增强记忆，改善抑郁情绪作用的中药散剂，它由麋鹿角粉碎制成。

一种具有增强记忆与改善抑郁情绪作用的中药散剂，其特征在于，它由麋鹿角经过水提取或有机溶剂提取得到。

作为优选方案，所述的具有增强记忆与改善抑郁情绪作用的中药散剂，其特征在于，所述的有机溶剂为乙醇，提取方法为回流、浸渍或渗漉。

本发明所述的具有增强记忆，改善抑郁情绪作用的中药散剂的制备方法，它包括以下步骤：

(1)取麋鹿角药材，洗净烘干。

(2)取步骤(1)中洗净烘干的麋鹿角药材，以粉碎机粉碎，过筛，即得。

作为优选方案，所述的烘干条件为：烘干温度60℃，时间为8小时；步骤(2)所述的过筛条件为：100目。

本发明所述的具有增强记忆，改善抑郁情绪作用的中药散剂的制备方法，它包括以下步骤：

(1)取麋鹿角药材，加入6～15倍量的水或乙醇提取1～3次，每次2～8小时；

(2)取步骤(1)中提取物浓缩、干燥，即得。

本散剂来自麋鹿角药材的新用途认识，在动物模型上均可有效改善神经退行性痴呆症与抑郁症的主要病理环节，增强动物记忆能力，改善抑郁情绪；降低血液中β淀粉样蛋白含量，降低tau蛋白的磷酸化水平，增强皮层神经营养因子的表达，降低乙酰胆碱酯酶活性，提高脑组织SOD水平。在细胞模型上表现出增加神经胶质细胞内神经营养因子的表达。上述研究表明本发明提供的中药散剂对神经退行性痴呆与抑郁症有显著的改善作用，可用于制备具有改善神经退行性痴呆症与抑郁症的药品或保健品，适合神经退行性痴呆症与抑郁症的患者。

本发明所述的具有增强记忆，改善抑郁情绪作用的中药散剂在制备神经退行性痴呆症与抑郁症中的应用，可结合药学上可接受的载体制成散剂、片剂、丸剂、汤剂、颗粒剂、煎膏剂或浸膏剂剂型的药物。

附图说明

图1为中药散剂对多因素神经损伤小鼠潜伏期的影响的柱状图。

图2为中药散剂对多因素神经损伤小鼠脑内胆碱酯酶活性测试结果的柱状图。

图3为中药散剂对多因素神经损伤小鼠脑内SOD活性测试结果的柱状图。

图4为中药散剂对多因素神经损伤小鼠脑内神经营养因子表达影响的柱状图。

图5为中药散剂对血管痴呆大鼠潜伏期的影响的柱状图。

图6为中药散剂对血管痴呆大鼠脑内神经营养因子表达影响的柱状图。

图7为中药散剂对CUMS小鼠糖水消耗量的影响的柱状图。

图8为中药散剂对CUMS小鼠强迫游泳不动时间影响的柱状图。

图9为中药散剂对CUMS小鼠脑内BDNF表达影响的柱状图。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施例1 一种具有增强记忆，改善抑郁情绪作用的中药散剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)取麋鹿角药材，洗净，于60℃烘干8小时；

(2)取步骤(1)中的麋鹿角药材，以粉碎机粉碎，过100目筛即得。

实施例2 一种具有增强记忆，改善抑郁情绪作用的中药散剂的制备方法，它包括以下步骤：

(1)取麋鹿角药材，加入10倍量的水回流提取3次，每次2小时；

(2)取步骤(1)中提取物浓缩、干燥，即得。

实施例3 一种具有增强记忆，改善抑郁情绪作用的中药散剂的制备方法，它包括以下步骤：

(1)取麋鹿角药材，加入10倍量的乙醇回流提取2次，每次6小时；

(2)取步骤(1)中提取物浓缩、干燥，即得。

实施例4 抗神经退行性痴呆症实验研究

一、实验材料与药物

1.药物和试剂

氯化铝、硫酸亚铁、氢溴酸东莨菪碱、D-半乳糖酶，石杉碱甲，均购自阿拉丁试剂(上海)有限公司。小鼠胆碱酯酶(ChE)试剂盒(A023)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(A001-3)，均购自南京建成生物工程研究所。

2.实验仪器

水迷宫行为测试仪(上海吉量仪器有限公司)；酶标仪(美国Perkin-Elmer公司)；BT125型电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)；KQ-250E型超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)；Anke GL-16GII型离心机(上海安亭科学仪器厂)。

3.实验动物

SPF级雄性昆明种小鼠，体重18～22g。购自南京中医药大学实验动物中心。

二、实验方法

1.造模与给药

健康小鼠适应性喂养5d后，随机分为空白组、模型组、阳性对照组和实施例1制备得到的中药散剂低、高浓度剂量组，每组8只，经称重显示各组间体重差异无统计学意义。除空白组外，其余各组用多因素损伤造成记忆损伤，具体方式为小鼠每天腹腔注射D-半乳糖(120mg/kg)与东莨菪碱(1.0mg/kg)，口服灌胃氯化铝(10mg/kg)与硫酸亚铁(150mg/kg)，连续4周。模型组给以等体积生理盐水。阳性组给以石杉碱甲(4mg/kg)。中药散剂低剂量组为2g·kg^-1，高剂量组给药剂量为4g·kg^-1，10d，给药10天后，利用水迷宫实验进行行为学测试。

2.药效评价方法

(1)行为学测试方法

30d多因素复合损伤造模结束后，进行连续4天的Morris水迷宫定位航行实验，以测试其空间记忆能力。将水迷宫内水温调到25±℃，水深约20cm，保持学习、训练和测试时水迷宫平台和周围物体位置固定不变。让小鼠在水迷宫内自由游120s,然后引导其找到水下平台，让其处于平台上10s。此操作一天进行2次，时间间隔2h以上。每天训练2个象限，训练共4天。第5天开始正式测试。让小鼠从平台所在象限对侧象限的最远点背对平台入睡，拍摄记录小鼠找到平台的全过程。共测试2天，每天测试2次。以各组小鼠自水迷宫起点游至平台终点所需的时间(潜伏期)与上台次数为衡量小鼠学习获得与记忆巩固能力的指标。

(2)生化指标测试

水迷宫测试结束后，取小鼠脑组织匀浆测定胆碱酯酶(ChE)和超氧化物歧化酶(SOD)活性，另用ELISA法测定皮层神经营养因子的表达。

3.统计学处理

所有实验数据均采用SPSS18.0统计处理软件进行统计学处理，结果以x±s表示，组间差异采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

三、实验结果

1.行为学测试结果

多因素复合损伤30d，给予本发明实施例1制备得到的中药散剂10天后，进行水迷宫实验测试。由图1可以看出小鼠经多重因素神经损伤后，潜伏期显著延长(P<0.01)，经服用中药散剂后，潜伏期显著缩短(见图1)。表明本发明实施例1制备得到的中药散剂具有很好的对抗神经损伤，增强记忆的作用。

2.胆碱酯酶活性测试结果

小鼠进行完行为学测试后，处死取脑，制得匀浆，依据胆碱酯酶试剂盒的操作方法，测量小鼠脑内胆碱酯酶活性。由图2可以看出，模型组小鼠经多重因素损伤后，脑内胆碱酯酶活性显著增高(P<0.01)。给以本发明提供的中药散剂后，胆碱酯酶活性显著降低(P<0.01)，其作用趋势与阳性药石杉碱甲作用相当。表明本发明所提供的中药散剂具有很好的降低胆碱酯酶活性，改善受损胆碱能神经功能的作用。

3.SOD活性测试结果

小鼠进行完行为学测试后，处死取脑，制得匀浆，依据SOD试剂盒的操作方法，测量小鼠脑内SOD活性。由图3可以看出，模型组小鼠经多重因素损伤后，脑内SOD活性显著降低(P<0.01)。给以本发明中药散剂后，SOD活性显著增加(P<0.01)，其作用趋势与阳性药石杉碱甲作用相当。表明本发明所提供的中药散剂具有很好的抗氧化作用。

4.NGF测试结果

小鼠进行完行为学测试后，处死取脑，分取大脑皮层，制得匀浆，利用western blotting技术，测量小鼠大脑皮层神经营养因子(NGF)表达。由图4可以看出，模型组小鼠经多重因素损伤后，大脑皮层NGF表达显著降低(P<0.01)。给以本发明提供的中药散剂后，NGF表达显著增加(P<0.01)，其作用趋势与阳性药石杉碱甲作用相当。表明本发明所提供的中药散剂具有很好的增强NGF表达，营养胆碱能神经元，对抗神经退行性痴呆的作用。

实施例5抗神经退行性痴呆症实验研究

一、实验材料与药物

1.药物和试剂

氯化铝、硫酸亚铁、氢溴酸东莨菪碱、D-半乳糖酶，石杉碱甲，均购自阿拉丁试剂(上海)有限公司。大鼠NGF ELISA试剂盒(LF-EK50289)购自Abfrontier公司。

2.实验仪器

动物行为测试系统，购自上海吉量软件科技有限公司。Western blotting蛋白印迹分析系统购自Bio-RAD公司。酶标仪购自美国Perkin-Elmer公司)。BT125型电子天平购自赛多利斯科学仪器有限公司)。KQ-250E型超声波清洗器购自昆山禾创超声仪器有限公司)。Anke GL-16GII型离心机购自上海安亭科学仪器厂。

3.实验动物

SPF级雄性SD大鼠，体重180～220g。购自南京中医药大学实验动物中心。

二、实验方法

1.造模与给药

健康大鼠适应性喂养5d后，随机分为空白组、模型组、阳性对照组和实施例1制备得到的中药散剂低、高浓度剂量组，每组8只，经称重显示各组间体重差异无统计学意义。除空白组外，其余各组均用双侧颈总动脉结扎模型造成记忆，具体方式为将大鼠用10％水合氯醛腹腔注射麻醉后，仰卧位，颈部正中切口，分离双侧颈总动脉并结扎。术后1周为恢复期。而后，模型组给以等体积生理盐水。阳性组给以石杉碱甲(0.6mg/kg)。中药散剂低剂量组为2g·kg^-1，高剂量组给药剂量为4g·kg^-1，10d。给药10天后，利用水迷宫实验进行行为学测试。

2.药效评价方法

(1)行为学测试方法

大鼠血管性痴呆造模结束后，进行连续4天的Morris水迷宫定位航行实验，以测试其空间记忆能力。将水迷宫内水温调到25±℃，水深约20cm，保持学习、训练和测试时水迷宫平台和周围物体位置固定不变。让大鼠在水迷宫内自由游120s,然后引导其找到水下平台，让其处于平台上10s。此操作一天进行2次，时间间隔2h以上。每天训练2个象限，训练共4天。第5天开始正式测试。让大鼠从平台所在象限对侧象限的最远点背对平台入睡，拍摄记录大鼠找到平台的全过程。共测试2天，每天测试2次。以各组小鼠自水迷宫起点游至平台终点所需的时间(潜伏期)与上台次数为衡量大鼠学习与记忆巩固能力的指标。

(2)生化指标测试

水迷宫测试结束后，取大鼠脑组织匀浆测定皮层神经营养因子的表达。

3.统计学处理

所有实验数据均采用SPSS18.0统计处理软件进行统计学处理，结果以x±s表示，组间差异采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

三、实验结果

1.行为学测试结果

颈动脉结扎造模后，给予中药散剂10天后，进行水迷宫实验测试。由图1与图2可以看大鼠双侧颈总动脉结扎后，与正常组动物比较，潜伏期显著延长(P<0.01)，提示模型组动物记忆力受损。经服用中药散剂后，潜伏期显著缩短(见图5)。表明本中药散剂具有很好的对抗神经损伤与血供减少，增强记忆的作用。

2.NGF测试结果

大鼠进行完行为学测试后，处死取脑，分取大脑皮层，制得匀浆，利用ELISA测量大鼠大脑皮层神经营养因子(NGF)表达。由图6可以看出，模型大鼠大脑皮层NGF表达显著降低(P<0.01)。给以实施例中中药散剂后，NGF表达显著增加(P<0.01)，其作用趋势与阳性药石杉碱甲作用相当。表明本发明所提供的中药散剂具有很好的增强NGF表达，营养胆碱能神经元，对抗神经退行性痴呆的作用。

实施例6 抗抑郁症实验研究

一、实验材料与药物

1.药物和试剂

蔗糖、氟西汀均购自阿拉丁试剂(上海)有限公司。小鼠BDNF ELISA试剂盒(LF-EK50009)购自Abfrontier公司。

2.实验仪器

动物行为测试系统，购自上海吉量软件科技有限公司。Western blotting蛋白印迹分析系统购自Bio-RAD公司。酶标仪购自美国Perkin-Elmer公司)。BT125型电子天平购自赛多利斯科学仪器有限公司)。KQ-250E型超声波清洗器购自昆山禾创超声仪器有限公司)。Anke GL-16GII型离心机购自上海安亭科学仪器厂。

3.动物

ICR小鼠(全雄，20-22g)，购自南京青龙山动物繁殖场。动物饲养于SPF级环境中，自由饮食进水。

二、实验方法

1.慢性应激压力抑郁小鼠模型构建

所有小鼠适应环境5d后，综合体重、旷场和糖水基础测试评分，选取评分相近的60只小鼠，随机选取10只作为正常组，每笼5只饲养，其余50只小鼠均单笼孤养。

正常组小鼠不给予任何刺激。孤养的小鼠每天随机给予两种刺激，刺激因素包括：禁食24h，禁水24h，倾斜12h，束缚2h，230-240r.min^-1震荡30min，光照24h，足部电击(5次，每次2mA)。造模过程中，每周进行糖水消耗量测试1次，监测抑郁表型。待4周抑郁表型出现后，将50只刺激后的孤养小鼠随机分为5组，即模型组、阳性药组、中药散剂低剂量组与高剂量组。正常组和模型组小鼠每天灌胃20mL·g^-1的蒸馏水，阳性组给予氟西汀(7.2mg·kg^-1)，中药散剂低剂量组为2g·kg^-1，高剂量组给药剂量为4g·kg^-1。按上述方法给药7d后，用糖水消耗实验与强迫游泳实验评价各组小鼠行为学得分，评价抗抑郁效果。

2.药效评价方法

(1)行为学测试方法

a.糖水偏嗜实验

糖水消耗实验于慢性压力应激后4周进行。正式测试前72小时，首先给以小鼠1％的蔗糖水两瓶各200ml。24小时后，将其中1瓶1％的蔗糖水替换为白开水。然后将各笼小鼠禁食禁水24小时。正式实验开始，同时给予各笼小鼠1％蔗糖水与白开水各200ml，并称取蔗糖水与白开水重量。3小时后，统计各笼小鼠的饮水量。糖水偏嗜度＝糖水消耗量/(白开水消耗量+糖水消耗量)x 100％。

b.强迫游泳实验

糖水偏好实验结束24小时后，将小鼠放入高20cm、直径14cm的圆柱型玻璃缸中，每缸1只，缸中水深10cm，水温25℃。强迫游泳时间共计6min，待小鼠游泳2min后，统计后4min内的不动时间(小鼠在水中停止挣扎，或呈漂浮状态时间)。

3.生化指标测试

水迷宫测试结束后，取小鼠大脑海马匀浆测定皮层脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。

三、实验结果

1.行为学测试结果

由图7所示，经过4周的慢性应激刺激后，模型组小鼠体重与正常组比较，显著下降，糖水偏嗜度明显低于正常组(p<0.01)，提示出现抑郁样行为。给予阳性药氟西汀与中药散剂7天后，四组小鼠体重与模型组比较，均有增加，糖水摄入量均明显高于模型组(p<0.01)，表现出抗抑郁作用。由图8所示，统计强迫游泳实验中动物不动时间，模型组与正常组比较，漂浮时间显著增加(p<0.01)，提示出现了明显的抑郁行为。而给予氟西汀的治疗组与中药散剂组，漂浮时间均显著缩短(p<0.01)，显示出明显的改善抑郁作用。

2.BDNF测试结果

大鼠进行完行为学测试后，处死取脑，分取大脑皮层，制得匀浆，利用ELISA测量小鼠大脑海马脑源性神经营养因子(BDNF)表达。由图9可以看出，模型小鼠大脑海马BDNF表达显著降低(P<0.01)。给以实施例中中药散剂后，BDNF表达显著增加(P<0.01)，其作用趋势与阳性药氟西汀作用相当。表明本发明所提供的中药散剂具有很好的增强BDNF表达，对抗抑郁症的作用。

以上实验结果表明，本发明提供的中药散剂具有显著的对抗多因素所致的记忆损伤、改善抑郁情绪等功能，表明本发明提供的中药散剂具有很好的对抗神经退行性痴呆症与抑郁症的作用。与现有的对抗神经退行性痴呆症与抑郁症的化学药物相比，该散剂具有多靶点的作用特点，可改变现有技术药物仅作用于胆碱酯酶或氧化损伤等单一靶点，尤其还具有显著的神经营养功能，取得了很好的预料不到的技术效果。麋鹿角增强记忆，缓解抑郁情绪的功效未见报道。因此，该中药散剂具有较高的创新性与药物开发价值。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。