王不留行黄酮苷在制备抗糖尿病糖脂代谢紊乱药物中的应用的制作方法

本发明涉及抗糖尿病糖脂代谢紊乱中药开发，具体设计王不留行黄酮苷在制备抗糖尿病糖脂代谢紊乱药物中的应用，属中药药物开发领域。

背景技术：

糖尿病是是常见的代谢性疾病之一，也是影响人类健康的非传染性慢性疾病之一。糖尿病的病理特征主要是由于胰岛功能受损，或者靶细胞对胰岛素的敏感性下降引起机体自身糖脂代谢紊乱，临床上根据病因常将糖尿病分为1型糖尿病和2型糖尿病。2014年国际糖尿病联盟调查结果表明全世界约有3.87亿糖尿病患者，预计2035年糖尿病患病人数将达到6亿。中华医学会糖尿病学分会2012年调查显示我国成人糖尿病患病人数达到9240万，并且发病人数逐年攀升，2型糖尿病的发病率超过90％，我国可能已经是世界上糖尿病患病人数最多的国家。无论发展中国家还是发达国家，糖尿病患者的数量都明显增加。随着超重和肥胖青少年人数的不断增多，2型糖尿病可能会发生于青春前期的儿童。糖尿病引发的心、脑、肾、血管、神经系统、眼底病变等并发症，致残率被致死率较高，糖尿病其并发症给患者、家庭以及社会带来沉重经济和精神负担，糖尿病以及其他慢性非传染性心血管疾病的预防和治疗将成为21世纪医疗卫生事业的主要挑战。

王不留行为石竹科植物麦蓝菜Vaccaria Segetalis(Neck.)Garcke的干燥成熟种子，是一种常见的中药，具有活血通经、下乳消肿等功效。王不留行主要含有刺桐碱、三萜皂苷、黄酮苷、类脂、环肽、脂肪酸和单糖等成分，过去实验室研究发现王不留行黄酮苷具有促进血管新生，加快开放性创伤的愈合速度，对抗高糖和氧化应激的引起的内皮细胞损伤，提示王不留行黄酮苷可能具有心血管保护作用，尤其是目前尚未有报道王不留行黄酮苷在制备抗糖尿病药物中的作用。

技术实现要素：

本发明要解决的是为现有的抗糖尿病药物制备技术领域提供一种新的途径，提供王不留行黄酮苷在抗糖尿病药物中的作用，因此本研究提供的技术方法是将王不留行黄酮苷应用于制备治疗糖尿病的药物。

本发明的有益效果是：王不留行黄酮苷改善糖尿病的血糖和血脂，将王不留行黄酮苷应用到抗糖尿病相关药物的开发中，以制备更好的抗糖尿病的新思路，不仅拓展了抗糖尿病药物的选择，也为我国抗糖尿病中药的筛选提供的新的策略。

附图说明

图1：王不留行黄酮苷对糖尿病小鼠血糖的影响。

图2：王不留行黄酮苷对糖尿病小鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(T-CHO)，低密度脂蛋白(LDL)的影响。

图3：王不留行黄酮苷对糖尿病小鼠肝脏病理的影响。

实施例1 2型糖尿病模型小鼠的制备

糖尿病模型小鼠制作方法：参考国内外权威期刊，我们采用链脲霉菌(STZ)联合高脂饮食(HFD)诱导2型糖尿病模型，将6周龄的C57BL/6J小鼠禁食4小时后一次性腹腔注射小剂量STZ(120mg/kg)，正常对照组注射溶媒作为对照。3周后，糖尿病模型组开始给予高脂饮食(21.8kJ/g,脂肪含量60％)直至实验完成，对照组始终给予正常饮食(14.7kJ/g,脂肪含量13％)。

实施例2实验分组及王不留行黄酮苷干预

将6周龄的C57BL/6J小鼠随机分三组：

(1)正常小鼠-生理盐水组：为正常对照组，始终给予正常饮食和饮水，5周后给予生理盐水皮下灌注4周作为王不留行黄酮苷(Vaccarin)的对照；

(2)糖尿病-生理盐水组采用链脲霉菌(STZ)联合高脂饮食(HFD)方法引起糖尿病，5周后给予生理盐水(saline)腹腔注射4周作为王不留行黄酮苷(Vaccarin)的对照；

(3)糖尿病-黄酮苷低剂量组(1mg/kg)：采用链脲霉菌(STZ)联合高脂饮食(HFD)诱导2型糖尿病模型，5周后给予王不留行黄酮苷(Vaccarin)腹腔注射4周。

(4)糖尿病-黄酮苷低剂量组(10mg/kg)：采用链脲霉菌(STZ)联合高脂饮食(HFD)诱导2型糖尿病模型，5周后给予王不留行黄酮苷(Vaccarin)腹腔注射4周。

实施例3空腹血糖测定

测量空腹血糖需将小鼠禁食过夜，第二天用血糖仪经尾静脉采血测定。

实施例4血清脂质代谢指标测定

采用生化分析试剂盒测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)和低密度脂蛋白(LDL)。

实施例5肝脏苏木素伊红(HE)染色

戊巴比妥钠麻醉小鼠，打开胸腔、暴露心脏，经左心室插管至升主动脉，夹壁腹主动脉，左心耳剪开一小出口，快速灌注0.01M PBS(37℃)冲洗至流出液清亮后再灌注预冷(4℃)的4％多聚甲醛固定(先快后慢，在大鼠肢体伸展后减慢速度)。取出肝脏，置于4℃的4％多聚甲醛后固定24h，脱水，石蜡包埋，切片，进行常规苏木素伊红(HE)染色。

实验结果如附图1至3中所示：

(1)王不留行黄酮苷(Vaccarin)腹腔注射干预后对空腹血糖水平的影响：

与对照组(Control)相比，模型组(STZ/HFD)C57BL/6小鼠血糖显著升高，而给予不同剂量的王不留行黄酮苷组显著降低血糖升高，详见图1。

数据均以均值±标准差(mean±SD)表示，每组样本为7，P<0.05为有统计学差异，***与Control组相比，P<0.001；_$$$与STZ/HFD组相比，P<0.001。Control，对照组；STZ/HFD，高血糖模型组；STZ/HFD-Vaccarin1，给予王不留行黄酮苷的剂量为1mg/kg；STZ/HFD-Vaccarin1，给予王不留行黄酮苷的剂量为10mg/kg。

(2)王不留行黄酮苷(Vaccarin)腹腔注射干预后对血清脂质代谢指标的影响：

与对照组(Control)相比，模型组(STZ/HFD)C57BL/6小鼠的TG、TCH、LDL-C显著升高，而给予不同剂量的王不留行黄酮苷组显著降低上述代谢指标的水平，详见图2。

数据均以均值±标准差(mean±SD)表示，每组样本为7，P<0.05为有统计学差异，***与Control组相比，P<0.001；_$$与STZ/HFD组相比，P<0.01；_$$$与STZ/HFD组相比，P<0.001。Control，对照组；STZ/HFD，高血糖模型组；STZ/HFD-Vaccarin1，给予王不留行黄酮苷的剂量为1mg/kg；STZ/HFD-Vaccarin1，给予王不留行黄酮苷的剂量为10mg/kg。

(3)王不留行黄酮苷(Vaccarin)腹腔注射干预后对肝脏病理病变的影响：

与对照组(Control)相比，模型组(STZ/HFD)C57BL/6小鼠肝细胞排列紊乱，肝细胞体积增大，密度不均，偶见脂肪变性，而给予不同剂量的王不留行黄酮苷组上述改变均有不同程度的减轻，详见图3。