巨大戟二萜醇类化合物及其衍生物在抗HIV治疗上的应用的制作方法

本发明涉及医药领域，具体地涉及巨大戟二萜醇类化合物及其衍生物在抗hiv治疗上的应用。

背景技术：

获得性免疫缺陷综合征(aids)是由hiv感染引起的一种严重危害人们生命健康的传染性疾病。据who统计全球艾滋病患者已超过4000万，每年新增患者500万，而每年死亡约为300万。目前，艾滋病临床治疗方法主要是高效抗逆转录病毒疗法(highlyactiveantiretroviraltherapy,haart)，通过将几类不同作用机制的抗艾滋病药物的联合使用，联合抗逆转录疗法从病毒的进入，病毒的逆转录，病毒的复制以及病毒的释放等各个阶段阻断hiv的产生，从而显著降低患者的血浆病毒，改善hiv患者的健康，延长了患者寿命，大大降低了hiv的传播风险，让艾滋病成为一个慢性可控制的疾病。人们曾寄希望于凭借haart完全清除体内的hiv，从而达到彻底治愈aids的目的。但随后的实践证明，虽然haart可以最大限度地抑制患者体内病毒复制，使血浆病毒载量(virusload)降低至现有常规检测方法测不出的水平，但感染者体内仍有病毒持续存在，一旦停止药物治疗,病毒载量又会反弹到治疗前水平。另一方面，长期服药产生的严重的副作用以及耐药性也是不容忽视的问题。研究发现截止目前，hiv的耐药性较30年前已经有了明显的提高，所以艾滋病的完全清除依然非常必要。hiv难以在体内被完全清除的一个重要原因是hiv-1能够潜伏在静息的记忆cd4+t细胞中，该潜伏感染细胞是由一小部分hiv感染的活化cd4+t细胞转化而产生的,其整合的前病毒缺乏转录活性，因而,不会被免疫系统和抗逆转录酶病毒的药物攻击。尽管感染个体携带潜伏感染细胞数量较少,但衰减率是如此之慢，以至于欲在个体生存期内仅靠haart治疗将其彻底清除是不可能的.因此,hiv潜伏感染的静息cd4+t细胞是构成机体内病毒储藏库(reservoir)的主要部分，同时也是目前临床治疗不能彻底清除hiv的巨大障碍。一般认为hiv-1潜伏感染细胞形成的分子机制与整合位点处的染色质状态,抑制性核小体nuc-1的存在,以乙酰化为代表的表观遗传修饰,宿主转录因子如nf-κb以及病毒转录活化因子tat等因素有关。据此机制，有研究提出了清除潜伏病毒储存库的治疗策略，即试图通过药物诱导hiv潜伏感染细胞的前病毒表达，使其潜伏病毒再次激活，同时结合高效抗逆转录病毒疗法及在人免疫系统作用下，来杀死激活的潜伏感染的细胞，以此加速病毒库的清除。尽管，该策略已在临床上已有几个治疗方案，但其结果仍未尽人意，不是激活剂无效，就是虽有效但其毒副作用大，而在国内，至今仅有一例自主知识产权的抗艾滋病新药上市。因而，研发具有自主知识产权、安全、有效的、价廉的能清除hiv-1病毒储存库的新型干预药物具有十分重要的意义。

中药是中国医药学宝库中的巨大宝藏，具有上千年的悠久历史，广泛用于各种疾病的治疗，维护人体的健康。中药大戟科植物广泛分布于全世界，药理作用显著，具有清热解毒，抗肿瘤等作用。药典收录的大戟科植物有甘遂，千金子，狼毒，大戟，飞扬草等，其中甘遂在我国山西等地区广泛栽培。甘遂主要含有二萜醇类，三萜类和甾体类化合物，已有研究表明甘遂具有抗肿瘤，抗氧化，抗生育，抗病毒，泻下利尿，以及治疗胰腺炎等多种药理作用，在临床上具有用量小活性高的特点，具有较高的研究价值，越来越受到现代医药学的关注。

因此，本领域迫切需要开发一种能够显著干预hiv的潜伏，有效激活潜伏的hiv，而且可作为进入抑制剂，能够抑制hiv对细胞的感染，具有强的抗hiv活性的药物。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种能够显著干预hiv的潜伏，有效激活潜伏的hiv，而且可作为进入抑制剂，能够抑制hiv对细胞的感染，具有强的抗hiv活性的药物。

本发明第一方面提供了一种式i化合物或其药学上可接受的盐的用途，用于制备一组合物或制剂，所述组合物或制剂用于(a)干预hiv潜伏；(b)抑制hiv感染；和/或(c)降低cd4细胞表面受体的表达：

式中，

r1选自h、取代或未取代的coch3、取代或未取代的co-(ch＝ch)2-(ch2)4-ch3、取代或未取代的coch(ch3)ch(ch3)2或取代或未取代的occ6h5；

r2选自h、取代或未取代的coch3、取代或未取代的coch(ch3)ch(ch3)2、或取代或未取代的occ6h5；

r3选自h、取代或未取代的coch3、取代或未取代的co(ch＝ch)2-(ch2)4-ch3、取代或未取代的coch(ch3)ch(ch3)2、取代或未取代的occ6h5、取代或未取代的c6h12o5或取代或未取代的so3h；

r4选自下组：ch2or5、-c(o)r6、取代或未取代的c1-c6烷基、或其组合；其中，r5选自h、c1-c6烷基、co-(ch＝ch)2-(ch2)4-ch3、coch3、och2ch3、co(ch2)10ch3、或co(ch2)14ch3；r6选自下组：h、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c2-c6链烯基、取代或未取代的c2-c6链炔基、取代或未取代的c1-c6烷氧基、-oh、取代或未取代的c1-c6酯基、或其组合；

或者，r1和r2、r2和r3、r3和r4的任意一组或两组分别独立地与相邻的碳原子形成5-7元取代或未取代的杂环，所述杂环含有1-3个选自n、o、或s的杂原子；

其中，所述“取代的”是指基团中的h被选自下组的一个或多个取代基所取代：卤素、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c2-c6链烯基、c2-c6链炔基；

附加条件是，r1为co-(ch＝ch)2-(ch2)4-ch3时，r2、r3不同时为h。

在另一优选例中，所述“取代的”是指基团中的h被选自下组的一个或多个取代基所取代：卤素、c1-c4烷基、c1-c4卤代烷基、c2-c4链烯基、c2-c4链炔基。

在另一优选例中，所述r4选自下组：ch2or5、-c(o)r6、取代或未取代的c1-c4烷基、或其组合；其中，r5选自h、c1-c4烷基、co-(ch＝ch)2-(ch2)4-ch3、coch3、och2ch3、co(ch2)10ch3、或co(ch2)14ch3；r6选自下组：h、取代或未取代的c1-c4烷基、取代或未取代的c2-c4链烯基、取代或未取代的c2-c4链炔基、取代或未取代的c1-c4烷氧基、-oh、取代或未取代的c1-c4酯基、或其组合。

在另一优选例中，r1和r2、r2和r3、r3和r4的任意两组分别独立地形成5-7元取代或未取代的杂环，所述杂环含有1-2个选自n、o、或s的杂原子。

在另一优选例中，r1和r2、r2和r3、r3和r4的任意两组分别独立地形成5-7元取代或未取代的杂环，所述杂环含有1-2个o原子。

在另一优选例中，r1为co-(ch＝ch)2-(ch2)4-ch3时，r4选自下组：ch2or5、-c(o)r6、取代或未取代的c1-c6烷基、或其组合；其中，r5选自c1-c6烷基、co-(ch＝ch)2-(ch2)4-ch3、coch3、och2ch3、co(ch2)10ch3、或co(ch2)14ch3；r6选自下组：h、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c2-c6链烯基、取代或未取代的c2-c6链炔基、取代或未取代的c1-c6烷氧基、-oh、取代或未取代的c1-c6酯基、或其组合；其中，所述“取代的”是指基团中的h被选自下组的一个或多个取代基所取代：卤素、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c2-c6链烯基、c2-c6链炔基。

在另一优选例中，r1为co-(ch＝ch)2-(ch2)4-ch3时，所述r4选自下组：ch2or5、-c(o)r6、取代或未取代的c1-c4烷基、或其组合；其中，r5选自c1-c4烷基、co-(ch＝ch)2-(ch2)4-ch3、coch3、och2ch3、co(ch2)10ch3、或co(ch2)14ch3；r6选自下组：h、取代或未取代的c1-c4烷基、取代或未取代的c2-c4链烯基、取代或未取代的c2-c4链炔基、取代或未取代的c1-c4烷氧基、-oh、取代或未取代的c1-c4酯基、或其组合；其中，所述“取代的”是指基团中的h被选自下组的一个或多个取代基所取代：卤素、c1-c4烷基、c1-c4卤代烷基、c2-c4链烯基、c2-c4链炔基。

在另一优选例中，所述卤素选自下组：f、cl、br、或i。

在另一优选例中，所述化合物为光学异构体或外消旋体。

在另一优选例中，所述化合物选自下组：

在另一优选例中，所述的组合物或制剂还用于(d)抑制hiv结合进入；和/或(e)治疗艾滋病；和/或(f)与艾滋病治疗剂(如抗逆转录病毒药物)联用从而治疗艾滋病。

在另一优选例中，所述的干预hiv潜伏包括：诱导hiv潜伏感染细胞中hiv前病毒表达、和/或激活潜伏的hiv；和/或

所述的治疗艾滋病包括抗hiv潜伏治疗。

在另一优选例中，所述抗逆转录病毒药物选自下组：逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、辅助受体拮抗剂、逆转录病毒整合酶抑制剂、病毒吸附抑制剂、特异性病毒转录抑制剂、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂、抗hiv抗体、或其组合。

在另一优选例中，所述抑制hiv包括：抑制hiv介导的细胞融合、抑制hiv侵入细胞、抑制hiv复制、抑制hiv感染活性。

在另一优选例中，所述组合物或制剂还包括其他用于干预hiv潜伏的药物。

在另一优选例中，所述的其他用于干预hiv潜伏的药物选自下组：组蛋白乙酰化酶抑制剂、组蛋白甲基转移酶抑制剂、dna甲基转移酶抑制剂、溴化酶抑制剂、蛋白激酶c(pkc)激动剂、细胞因子和趋化因子、正性转录延伸因子b(p-tefb)激活剂、或其组合。

在另一优选例中，所述组合物或制剂还包括其他的艾滋病治疗剂。

在另一优选例中，所述其他的艾滋病治疗剂选自下组：抗逆转录病毒药物、免疫调节剂、治疗性抗体、或其组合。

在另一优选例中，所免疫调节剂选自下组：tlr(toll样受体，toll-likereceptor)激动剂、抗pd-1或抗pd-l1单克隆抗体、趋化因子受体激动剂、mtor(哺乳动物雷帕霉素靶标，mammaliantargetofrapamycin)抑制剂、jak激酶1和2(januskinases1and2)抑制剂、或其组合。

在另一优选例中，所述趋化因子受体激动剂选自下组：il-7；il-15升级版(alt-803)、ifn-α、或其组合。

在另一优选例中，所述jak激酶1和2抑制剂包括鲁索替尼(ruxolitinib)。

在另一优选例中，所述治疗性抗体选自下组：靶向cd4的治疗性抗体、靶向v3环的治疗性抗体、靶向v1/v2区的治疗性抗体、靶向膜近端区域(mper)的治疗性抗体、、bnabs、darts(双亲和重新靶向分子，dual-affinityre-targetingmolecules)、cars(嵌合抗原受体，chimericantigenreceptors)、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向cd4的治疗性抗体选自下组：vrc01、3bnc117、vrc07-523、n6、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向v3环的治疗性抗体选自下组：10-1074、pgt121、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向v1/v2区的治疗性抗体选自下组：pgdm1400、cap256、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向膜近端区域(mper)的治疗性抗体包括10e8。

在另一优选例中，所述式i化合物、或其药学上可接受的盐为化学合成的。

在另一优选例中，所述式i化合物、或其药学上可接受的盐是提取自植物。

在另一优选例中，所述的提取包括采用选自下组的方法进行提取：溶剂提取法、萃取法、和色谱法。

在另一优选例中，所述的植物包括大戟科植物。

在另一优选例中，所述大戟科植物包括甘遂(euphorbiakansuit.n.liouexs.b.ho)。

在另一优选例中，组合物包括药物组合物、食品组合物或保健品组合物。

在另一优选例中，所述的药物还包括选自下组的额外组分：抗逆转录病毒的活性成分或增强免疫力的活性成分。

在另一优选例中，所述的药物组合物含有(i)式i所示的化合物或其药学上可接受的盐；以及(ii)药学上可接受的载体或辅料。

在另一优选例中，所述组分(i)占所述药物组合物总重量的0.001-99.9wt％,较佳地0.1-99wt％，更佳地1％-90wt％。

在另一优选例中，所述的组合物或药物包括：口服制剂和非口服制剂。

在另一优选例中，所述的制剂包括：粉剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂、酊剂、口服液、片剂或含片。

在另一优选例中，药学上可接受的载体或辅料包括增溶的载体。

在另一优选例中，所述增溶的载体选自下组：乙醇、丙二醇、甘油、山梨醇、卵磷脂－正丁醇－乙酰化单甘油脂肪酸酯－水、卵磷脂－聚乙二醇、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(peg-dspe)－大豆油－水、聚乙二醇－磷脂－胆固醇－维生素e、乳化剂与助乳化剂组合(乳化剂：聚乙二醇羟基硬脂酸酯solutolhs15、泊洛沙姆poloxamer188、聚氧乙烯蓖麻油和卵磷脂；助乳化剂：中链甘油三酸酯mct、大豆油和油酸)、peg－聚酯类嵌段共聚物(包括聚甘氨酸、聚乳酸pla、聚己内酯pcl和聚乳酸-聚乙醇酸plga)、或其组合。

在另一优选例中，药学上可接受的载体或辅料包括增溶的辅料。

在另一优选例中，所述增溶的辅料选自下组：β-环糊精、聚乙二醇，聚维酮、山梨醇、苯甲酸、枸橼酸、吐温80、淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、羟甲基纤维素、阿拉伯胶、玉米淀粉、明胶、糊精、或其组合。

在另一优选例中，所述组合物为口服制剂。

在另一优选例中，所述的组合物(如药物组合物)通过以下方式施用于哺乳动物：口服、静脉注射、或局部注射。

在另一优选例中，所述哺乳动物包括患有获得性免疫缺陷综合征(aids)的哺乳动物。

在另一优选例中，所述哺乳动物包括人或非人哺乳动物。

在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括啮齿动物，如小鼠、大鼠或灵长类动物，如猴。

本发明第二方面提供了一种药物组合物，包括：

(a1)用于干预hiv潜伏和/或抑制hiv感染的第一活性成分，所述第一活性成分为式i化合物或其药学上可接受的盐；和

(a2)用于抑制hiv复制的第二活性成分，所述第二活性成分为艾滋病治疗剂；和

(b)药学上可接受的载体；

其中式i化合物的定义如本发明第一方面所述。

在另一优选例中，所述药物组合物还包括其他干预hiv潜伏(或hiv潜伏激活)的药物。

在另一优选例中，所述其他的干预hiv潜伏(或hiv潜伏激活)的药物选自下组：组蛋白乙酰化酶抑制剂、组蛋白甲基转移酶抑制剂、dna甲基转移酶抑制剂、溴化酶抑制剂、蛋白激酶c(pkc)激动剂、细胞因子和趋化因子、正性转录延伸因子b(p-tefb)激活剂、或其组合。

在另一优选例中，所述艾滋病治疗剂选自下组：抗逆转录病毒药物、免疫调节剂、治疗性抗体、或其组合。

在另一优选例中，所述抗逆转录病毒药物选自下组：逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、辅助受体拮抗剂、逆转录病毒整合酶抑制剂、病毒吸附抑制剂、特异性病毒转录抑制剂、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂、抗hiv抗体、或其组合。

在另一优选例中，所免疫调节剂选自下组：tlr(toll样受体，toll-likereceptor)激动剂、抗pd-1或抗pd-l1单克隆抗体、趋化因子受体激动剂、mtor(哺乳动物雷帕霉素靶标，mammaliantargetofrapamycin)抑制剂、jak激酶1和2(januskinases1and2)抑制剂、或其组合。

在另一优选例中，所述趋化因子受体激动剂选自下组：il-7；il-15升级版(alt-803)、ifn-α、或其组合。

在另一优选例中，所述jak激酶1和2抑制剂包括鲁索替尼(ruxolitinib)。

在另一优选例中，所述治疗性抗体选自下组：靶向cd4的治疗性抗体、靶向v3环的治疗性抗体、靶向v1/v2区的治疗性抗体、靶向膜近端区域(mper)的治疗性抗体、、bnabs、darts(双亲和重新靶向分子，dual-affinityre-targetingmolecules)、cars(嵌合抗原受体，chimericantigenreceptors)、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向cd4的治疗性抗体选自下组：vrc01、3bnc117、vrc07-523、n6、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向v3环的治疗性抗体选自下组：10-1074、pgt121、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向v1/v2区的治疗性抗体选自下组：pgdm1400、cap256、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向膜近端区域(mper)的治疗性抗体包括10e8。

在另一优选例中，所述第一活性成分和第二活性成分的重量比为0.1％-99％，较佳地，20％-80％。

在另一优选例中，所述的药物剂型为口服给药或非口服给药剂型。

在另一优选例中，所述的口服给药剂型是片剂、散剂、颗粒剂或胶囊剂，或乳剂或糖浆剂。

在另一优选例中，所述的非口服给药剂型是注射剂或针剂。

在另一优选例中，所述的式i化合物或其药学上可接受的盐的浓度为0.001ng-1000000ng/ml，较佳地为0.01ng-1000ng/ml，更佳地，0.1ng-100ng/ml。

本发明第三方面提供了一种体外非治疗性诱导hiv潜伏感染细胞中hiv前病毒表达的方法，包括步骤：在如本发明第一方面中定义的式i化合物的存在下，培养hiv病毒潜伏感染的细胞，使得潜伏的hiv前病毒表达，从而激活潜伏的hiv病毒。

在另一优选例中，所述的方法还包括：对被激活的hiv进行杀灭或抑制。

本发明第四方面提供了一种体外非治疗性的激活潜伏的hiv和/或抑制hiv感染的方法，包括步骤：给需要的对象施用如本发明第一方面中定义的式i化合物，从而激活潜伏的hiv和/或抑制hiv感染。

本发明第五方面提供了一种制备用于预防和/或治疗艾滋病的药物组合物的方法，包括步骤：将如本发明第一方面中定义的式i化合物或其药学上可接受的盐、与药学上可接受的载体混合，从而形成药物组合物。

在另一优选例中，所述方法还包括与艾滋病治疗剂混合的步骤。

在另一优选例中，所述方法还包括与其他干预hiv潜伏(或hiv潜伏激活)的药物混合的步骤。

本发明第六方面提供了一种激活潜伏的hiv；和/或抑制hiv感染的方法，其特征在于，向需要的对象施用安全有效量的如本发明第一方面中定义的式i化合物或本发明第二方面所述的药物组合物。

在另一优选例中，所述需要的对象为哺乳动物，例如人。

在另一优选例中，所述施用的剂量为成人每日0.1～2000mg，优选1～300mg/天。

本发明第七方面提供了一种药盒，所述的药盒包括：

一含有如本发明第一方面中定义的式i化合物或其药学上可接受的盐的制剂；

一含有艾滋病治疗剂的制剂；和

说明书。

在另一优选例中，所述药盒还包括含有其他干预hiv潜伏(或hiv潜伏激活)的药物的制剂。

在另一优选例中，所述含有如权利要求1中定义的式i化合物或其药学上可接受的盐的制剂或含有其他治疗剂的制剂或含有干预hiv潜伏(或hiv潜伏激活)的药物的制剂的剂型分别包括胶囊、片剂、栓剂、或静脉注射剂。

在另一优选例中，所述含有如权利要求1中定义的式i化合物或其可接受的盐的制剂中，所述如权利要求1中定义的式i化合物或其可接受的盐的浓度为为0.001μg-1000000μg/ml，较佳地，较佳地为0.01μg-1000μg/ml。

在另一优选例中，所述艾滋病治疗剂选自下组：抗逆转录病毒药物、免疫调节剂、治疗性抗体、或其组合。

在另一优选例中，所述抗逆转录病毒药物包括反转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、融合抑制剂、整合酶抑制剂或其组合。

在另一优选例中，所述的其他干预hiv潜伏(或hiv潜伏激活)的药物选自下组：组蛋白乙酰化酶抑制剂、组蛋白甲基转移酶抑制剂、dna甲基转移酶抑制剂、溴化酶抑制剂、蛋白激酶c(pkc)激动剂、细胞因子和趋化因子、正性转录延伸因子b(p-tefb)激活剂、或其组合。

在另一优选例中，所免疫调节剂选自下组：tlr(toll样受体，toll-likereceptor)激动剂、抗pd-1或抗pd-l1单克隆抗体、趋化因子受体激动剂、mtor(哺乳动物雷帕霉素靶标，mammaliantargetofrapamycin)抑制剂、jak激酶1和2(januskinases1and2)抑制剂、或其组合。

在另一优选例中，所述趋化因子受体激动剂选自下组：il-7；il-15升级版(alt-803)、ifn-α、或其组合。

在另一优选例中，所述jak激酶1和2抑制剂包括鲁索替尼(ruxolitinib)。

在另一优选例中，所述治疗性抗体选自下组：靶向cd4的治疗性抗体、靶向v3环的治疗性抗体、靶向v1/v2区的治疗性抗体、靶向膜近端区域(mper)的治疗性抗体、bnabs、darts(双亲和重新靶向分子，dual-affinityre-targetingmolecules)、cars(嵌合抗原受体，chimericantigenreceptors)、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向cd4的治疗性抗体选自下组：vrc01、3bnc117、vrc07-523、n6、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向v3环的治疗性抗体选自下组：10-1074、pgt121、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向v1/v2区的治疗性抗体选自下组：pgdm1400、cap256、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向膜近端区域(mper)的治疗性抗体包括10e8。

在另一优选例中，所述的说明书中记载了如下的使用方法：

(i)给需要的对象施用含有如权利要求1中定义的式i化合物或其可接受的盐的制剂；

(ii)步骤(i)后的5-120小时,较佳地为24-96小时，更佳地为72-96小时，给所述对象施用含有艾滋病治疗剂的制剂；和任选的(iii)重复步骤(i)-(ii)。

在另一优选例中，所述步骤(i)还包括给需要的对象施用其他含有干预hiv潜伏(或hiv潜伏激活)的药物的制剂。

本发明第八方面提供了一种体外非治疗性的抑制和/或杀灭潜伏hiv的方法，包括步骤：

(i)在如本发明第一方面中定义的式i化合物或其药学上可接受的盐存在下，培养被hiv潜伏感染的细胞，从而获得含经激活的hiv的细胞，并抑制和/或杀灭潜伏的hiv；

(ii)任选的，向(i)中含经激活的hiv的细胞中加入艾滋病治疗剂，从而抑制和/或杀灭潜伏的hiv。

在另一优选例中，步骤(i)中的培养时间为5-120小时,较佳地为24-96小时，更佳地为48-72小时。

在另一优选例中，所述艾滋病治疗剂选自下组：抗逆转录病毒药物、免疫调节剂、治疗性抗体、或其组合。

在另一优选例中，所述抗逆转录病毒药物包括反转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、融合抑制剂、整合酶抑制剂或其组合。

在另一优选例中，所免疫调节剂选自下组：tlr(toll样受体，toll-likereceptor)激动剂、抗pd-1或抗pd-l1单克隆抗体、趋化因子受体激动剂、mtor(哺乳动物雷帕霉素靶标，mammaliantargetofrapamycin)抑制剂、jak激酶1和2(januskinases1and2)抑制剂、或其组合。

在另一优选例中，所述趋化因子受体激动剂选自下组：il-7；il-15升级版(alt-803)、ifn-α、或其组合。

在另一优选例中，所述jak激酶1和2抑制剂包括鲁索替尼(ruxolitinib)。

在另一优选例中，所述治疗性抗体选自下组：靶向cd4的治疗性抗体、靶向v3环的治疗性抗体、靶向v1/v2区的治疗性抗体、靶向膜近端区域(mper)的治疗性抗体、bnabs、darts(双亲和重新靶向分子，dual-affinityre-targetingmolecules)、cars(嵌合抗原受体，chimericantigenreceptors)、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向cd4的治疗性抗体选自下组：vrc01、3bnc117、vrc07-523、n6、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向v3环的治疗性抗体选自下组：10-1074、pgt121、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向v1/v2区的治疗性抗体选自下组：pgdm1400、cap256、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向膜近端区域(mper)的治疗性抗体包括10e8。

本发明第九方面提供了一种抑制hiv结合进入的方法，包括步骤：给需要的对象施用如本发明第一方面中定义的式i化合物，从而抑制hiv结合进入。

在另一优选例中，所述需要的对象包括人或非人哺乳动物。

在另一优选例中，所述对象为哺乳动物，例如人。

在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括啮齿动物(如小鼠、大鼠)、灵长类动物(如猴)。

在另一优选例中，所述施用的剂量为成人每日0.1～2000mg，优选1～300mg/天。

本发明第十方面提供了一种治疗hiv潜伏感染的方法，包括步骤：

(i)给需要的对象施用含有如本发明第一方面中定义的式i化合物或其药学上可接受的盐的制剂；

(ii)任选的，步骤(i)后的5-120小时,较佳地为24-96小时，更佳地为48-96小时，给所述对象施用含有艾滋病治疗剂的制剂；和任选的，

(iii)重复步骤(i)-(ii)；

从而治疗hiv潜伏感染。

在另一优选例中，所述艾滋病治疗剂选自下组：抗逆转录病毒药物、免疫调节剂、治疗性抗体、或其组合。

在另一优选例中，所述抗逆转录病毒药物包括反转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、融合抑制剂、整合酶抑制剂或其组合。

在另一优选例中，所免疫调节剂选自下组：tlr(toll样受体，toll-likereceptor)激动剂、抗pd-1或抗pd-l1单克隆抗体、趋化因子受体激动剂、mtor(哺乳动物雷帕霉素靶标，mammaliantargetofrapamycin)抑制剂、jak激酶1和2(januskinases1and2)抑制剂、或其组合。

在另一优选例中，所述趋化因子受体激动剂选自下组：il-7；il-15升级版(alt-803)、ifn-α、或其组合。

在另一优选例中，所述jak激酶1和2抑制剂包括鲁索替尼(ruxolitinib)。

在另一优选例中，所述治疗性抗体选自下组：靶向cd4的治疗性抗体、靶向v3环的治疗性抗体、靶向v1/v2区的治疗性抗体、靶向膜近端区域(mper)的治疗性抗体、bnabs、darts(双亲和重新靶向分子，dual-affinityre-targetingmolecules)、cars(嵌合抗原受体，chimericantigenreceptors)、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向cd4的治疗性抗体选自下组：vrc01、3bnc117、vrc07-523、n6、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向v3环的治疗性抗体选自下组：10-1074、pgt121、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向v1/v2区的治疗性抗体选自下组：pgdm1400、cap256、或其组合。

在另一优选例中，所述靶向膜近端区域(mper)的治疗性抗体包括10e8。

本发明第十一方面提供了一种预防和/或治疗艾滋病的方法，向需要的对象施用安全有效量的如本发明第一方面中定义的式i化合物或本发明第二方面所述的药物组合物。

在另一优选例中，所述需要的对象为哺乳动物，例如人。

在另一优选例中，所述施用的剂量为成人每日0.1～2000mg，优选1～300mg/天。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1显示了荧光显微镜观察ek-5a对hiv潜伏的诱导激活；

其中，图1具体显示了c11细胞未处理或经5ng/mlek-5a处理48h后，荧光显微镜观察细胞内的绿色荧光表达情况；未加药物组(图1-1为白光照片，图1-2为同一视野荧光照片)，ek-5a处理组(图1-3为白光照片，图1-4为同一视野荧光照片)；为了便于在打印文本上识别，荧光照片经去色处理后，其荧光细胞为白色。

图2显示了流式细胞术检测ek-5a对hiv潜伏的诱导激活效率；

其中，图2具体显示了c11细胞未处理或经5ng/mlek-5a处理48h后，流式细胞术分析得到的荧光细胞所占比例。

图3显示了ek-5a和对照药pep005对c11细胞中潜伏hiv的激活效率的比较；

其中，流式细胞术检测不同浓度ek-5a和pep005对c11细胞系中潜伏hiv的激活效果，并绘制浓度依赖曲线。所有数据结果皆为通过3次独立实验得到数据的平均值。

图4显示了ek-5a和对照药pep005对j-lat-a10.6细胞中潜伏hiv的激活效率比较；

其中，流式细胞术检测不同浓度ek-5a和pep005对j-lat-a10.6细胞系中潜伏hiv的激活效果，并绘制浓度依赖曲线。所有数据结果皆为通过3次独立实验得到数据的平均值。

图5显示了ek-5a对cd3细胞表面cd4\ccr5和cxcr4受体表达的作用；

其中，流式细胞术检测不同浓度ek-5a对人cd3细胞表面cd4、ccr5和cxcr4受体的表达。所有数据结果皆为通过3次独立实验得到数据的平均值。

图6为显示了ek-5a对hiv的抑制作用；

其中，通过p24-basedelisa，用m7细胞检测ek-5a针对r5型病毒株bal的抑制能力,cd34为阳性药物。所有数据结果皆为通过3次独立实验得到数据的平均值。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究，通过筛选大量的化合物，首次意外发现本发明的巨大戟二萜醇类化合物及其衍生物(式i化合物)具有于(a)干预hiv潜伏；(b)抑制hiv感染；和/或(c)降低cd3细胞表面受体的表达的作用，此外，本发明的巨大戟二萜醇类化合物及其衍生物还具有(d)预防和/或治疗艾滋病；(e)抑制hiv的结合进入；和/或(f)与抗逆转录病毒药物联用从而治疗艾滋病的作用。在此基础上，本发明人完成了本发明。

具体地，本发明人采用独创的活性筛选方法筛选出巨大戟二萜醇类化合物及其衍生物(式i化合物)，可作为抗艾滋病的治疗药物。本发明的巨大戟二萜醇类化合物及其衍生物(式i化合物)具有干预hiv潜伏的作用和抑制hiv感染的作用，或可清除被激活的潜伏感染的细胞，以此加速潜伏病毒储藏库的清除，将为艾滋病的彻底治愈提供新的途径。

基团定义

如本文所用，术语“取代或未取代的”指所述基团可以是未取代的，或者所述基团中的h被一个或多个(如1-10个，较佳地1-5个，更佳地1-3个，最佳地，1-2个)取代基所取代。

如本文所用，所述的“取代”或“取代的”指所述基团具有一个或多个(较佳地1-6个，更佳地1-3个)选自下组的取代基：卤素、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c2-c6链烯基、c2-c6链炔基。

如本文所用，术语“c1-c6烷基”是指具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。

如本文所用，术语“c1-c4烷基”是指具有1-4个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。

如本文所用，术语“c2-c6链烯基”指具有2-6个碳原子的直链或支链的烯基，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、或类似基团。

如本文所用，术语“c2-c4链烯基”指具有2-4个碳原子的直链或支链的烯基，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、或类似基团。

如本文所用，术语“c2-c6链炔基”是指具有2-6个碳原子的直链或支链的炔基，例如乙炔基、丙炔基、或类似基团。

如本文所用，术语“c2-c4链炔基”是指具有2-4个碳原子的直链或支链的炔基，例如乙炔基、丙炔基、或类似基团。

如本文所用，术语“c1-c6卤代烷基”是指氢被1个或1个以上的卤素取代的具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，例如，卤代甲基、卤代乙基、卤代丙基、卤代异丙基、或类似基团。

如本文所用，术语“c1-c4卤代烷基”是指氢被1个或1个以上的卤素取代的具有1-4个碳原子的直链或支链烷基，例如，卤代甲基、卤代乙基、卤代丙基、卤代异丙基、或类似基团。

如本文所用，术语“c1-c6烷氧基”是指具有(c1-c6烷基)-o-结构的基团，例如，ch3-o-、c2h5-o-、c3h8-o-、或类似基团。

如本文所用，术语“c1-c4烷氧基”是指具有(c1-c4烷基)-o-结构的基团，例如，ch3-o-、c2h5-o-、c3h8-o-、或类似基团。

如本文所用，术语“c1-c6酯基”是指具有(c1-c6烷基)-coo-结构的基团，例如ch3coo-、c2h5coo-、c3h8coo-、(ch3)2chcoo-、nc4h9coo-、tc4h9coo-、或类似基团。

如本文所用，术语“c1-c4酯基”是指具有(c1-c4烷基)-coo-结构的基团，例如ch3coo-、c2h5coo-、c3h8coo-、(ch3)2chcoo-、nc4h9coo-、tc4h9coo-、或类似基团。

如本文所用，术语“卤素”是指氟、氯、溴、或碘，优选氟和氯。

如本文所用，术语“卤代的”指被相同或不同的一个或多个上述卤原子取代的基团，可以部分卤代或全部卤代，例如三氟甲基、五氟乙基、七氟异丙基、或类似基团。

本发明的化合物可以含有一个或多个不对称中心，并因此以消旋体、外消旋混合物、单一对映体、非对映异构体化合物和单一非对映体的形式出现。可以存在的不对称中心，取决于分子上各种取代基的性质。每个这种不对称中心将独立地产生两个旋光异构体，并且所有可能的旋光异构体和非对映体混合物和纯或部分纯的化合物包括在本发明的范围之内。本发明包括化合物的所有异构形式。

活性成分

如本文所用，术语“本发明的活性成分”、“本发明的巨大戟二萜醇类化合物及其衍生物”、“本发明的抗hiv潜伏的活性成分”和“本发明的式i化合物”可互换使用，都指提取自植物甘遂的、具有诱导hiv潜伏感染细胞的前病毒表达和/或抑制hiv感染的作用的活性成分。在本发明中，抗hiv的活性成分可用甘遂属植物为原料进行提取，可以通过化学合成的方式获得。

在本发明中，本发明的活性成分具有式i所示的通式：

式中，

r1选自h、取代或未取代的coch3、取代或未取代的co-(ch＝ch)2-(ch2)4-ch3、取代或未取代的coch(ch3)ch(ch3)2或取代或未取代的occ6h5；

r2选自h、取代或未取代的coch3、取代或未取代的coch(ch3)ch(ch3)2、或取代或未取代的occ6h5；

r3选自h、取代或未取代的coch3、取代或未取代的co(ch＝ch)2-(ch2)4-ch3、取代或未取代的coch(ch3)ch(ch3)2、取代或未取代的occ6h5、取代或未取代的c6h12o5或取代或未取代的so3h；

r4选自下组：ch2or5、-c(o)r6、取代或未取代的c1-c6烷基、或其组合；其中，r5选自h、c1-c6烷基、co-(ch＝ch)2-(ch2)4-ch3、coch3、och2ch3、co(ch2)10ch3、或co(ch2)14ch3；r6选自下组：h、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c2-c6链烯基、取代或未取代的c2-c6链炔基、取代或未取代的c1-c6烷氧基、-oh、取代或未取代的c1-c6酯基、或其组合；

或者，r1和r2、r2和r3、r3和r4的任意一组或两组分别独立地与相邻的碳原子形成5-7元取代或未取代的杂环，所述杂环含有1-3个选自n、o、或s的杂原子；

其中，所述“取代的”是指基团中的h被选自下组的一个或多个取代基所取代：卤素、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c2-c6链烯基、c2-c6链炔基；

附加条件是，r1为co-(ch＝ch)2-(ch2)4-ch3时，r2、r3不同时为h。

在另一优选例中，所述化合物选自下组：

在另一优选例中，所述式i化合物、或其药学上可接受的盐为化学合成的或提取的。

抑制hiv感染

本发明的研究发现，hiv感染细胞有多个环节，包括病毒与免疫细胞受体(cd4，ccr5、cxcr4)结合进入、逆转录、整合、转录、复制及组装分泌等环节，任何环节被阻断，即可以抑制病毒复制，从而抑制hiv感染。

在本发明中，本发明化合物降低免疫细胞受体(cd4，ccr5、cxcr4)的表达，因而，阻断了hiv结合进入，从而抑制hiv感染，因此，本发明的化合物属于hiv进入抑制剂。本发明的化合物可以与逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、整合酶抑制剂等多个抑制剂联用，从而获得更强的抑制hiv感染效果。

活性筛选试验

本发明采用hiv潜伏细胞模型进行活性筛选试验，结果显示式i所示的巨大戟二萜醇化合物及其衍生物具有抗hiv潜伏作用，并用相应的赋型剂，按照常规的方法制成适用剂型，进行抗hiv潜伏作用试验，结果证实，所述的式i所示的巨大戟二萜醇化合物能使感染细胞内潜伏的hiv表达，具有干预hiv潜伏的作用，与抗逆转录病毒药物联合使用，可清除被激活的潜伏感染的细胞，以此加速潜伏病毒储藏库的清除。

本发明涉及的hiv潜伏细胞模型，包括：一个建立的hiv潜伏筛选模型c11克隆，由hiv慢病毒感染t细胞经2次分选和激活而获得(中国专利：200810038851.x)；另一个携带绿色荧光蛋白基因的人t细胞10.6克隆株克隆株(j-lat-a10.6)，由美国国家健康卫生研究院aids参考试剂计划部提供，由加洲大学ericverdin博士建立。由携带绿色荧光蛋白基因hiv-r7/e-/gfp反转录病毒载体转染人t细胞jurkat细胞分选而来(jordana,bisgroved,verdine.hivreproduciblyestablishesalatentinfectionafteracuteinfectionoftcellsinvitro.emboj22:1868-1877,2003)。

抑制hiv感染试验

本发明采用m7细胞模型进行hiv抑制试验，m7细胞由美国国家健康卫生研究院aids参考试剂计划部提供，由加州大学stephaniem.brandt建立，是稳定整合hiv-1ltr和gfp报告基因的cem淋巴细胞系，能够稳定表达cd4和cxcr4、ccr5受体(brandtsm,marianir,hollandau,hopetj,landaunr.associationofchemokine-mediatedblocktohiventrywithcoreceptorinternalization.jbiolchem2002；277:17291–17299.)结果显示，式i所示的巨大戟二萜醇化合物及其衍生物具有抗hiv感染作用，并用相应的赋型剂，按照常规的方法制成适用剂型，进行抗hiv感染作用试验，结果证实，所述的式i所示的巨大戟二萜醇化合物能使抑制hiv感染，具有抗hiv作用。

组合物和施用方法

如本文所用，术语“组合物”包括(a)治疗和/或预防艾滋病的组合物，(b)激活潜伏的hiv的组合物。此外，所述的组合物包括药物组合物、食品组合物或保健品组合物。

本发明的抗hiv潜伏的活性成分具有干预hiv潜伏的作用。因此，当在治疗上施用或给予本发明的抗hiv潜伏的活性成分时，可促进潜伏的hiv的表达，进而激活潜伏的hiv。通常，可将本发明的活性成分配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的载体介质。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)：口服、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、皮内、或局部给药。

本发明的抗hiv潜伏的活性成分具有抑制hiv感染活性的作用。因此，当在治疗上施用或给予本发明的抗hiv的活性成分时，可抑制hiv的感染，进而达到抗病毒作用。通常，可将本发明的活性成分配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的载体介质。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)：口服、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、皮内、或局部给药。

本发明还提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明的活性成分以及药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约1纳克-10毫克/千克体重，优选地，式i或其衍生物的用量可以为：成年人每日0.1～20000ng，优选1～3000ng/天。

作为预防和抗艾滋病药物，可以制成口服和非口服制剂。口服给药可制成片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等常用剂型，所用的赋型剂可以为淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、羟甲基纤维素等中的一种或几种。崩解剂可以为马铃薯淀粉、羟甲基纤维素等中的一种或几种。粘合剂可以为阿拉伯胶、玉米淀粉、明胶、糊精等中的一种或几种。口服制剂除上述剂型外，还可以制成乳剂、糖浆剂等。

非口服制剂可以制成注射剂，可以与注射用水、生理盐水、葡萄糖水制成注射剂，也可以在其中加入一定比例的乙醇、丙醇、乙二醇等。

此外，本发明的活性成分还特别适合与其他抗hiv的药物联用。本发明的活性成分可单独或与其他抗逆转录病毒药物/hiv潜伏感染激活药物联合使用，清除潜伏感染的细胞，从而用于艾滋病的治疗。

本发明的进一步目的是提供一种治疗艾滋病药物的制备方法，采用所述的式i所示的巨大戟二萜醇化合物及其衍生物为药物原料，用相应的赋型剂，按照常规的方法制成口服和非口服制剂，其中式i、式ia所示的巨大戟二萜醇化合物及其衍生物的用量可以为：成年人每日0.1～20000ng，优选1～3000ng/天，每日服用1～5次；儿童的用量和次数需在成人的基础上酌情递减。

药盒

本发明还提供了一种药盒(或本发明第一方面所述的治疗艾滋病的药物)，所述的药盒含有：

--含有式i所示的巨大戟二萜醇化合物及其衍生物的制剂；

--含有艾滋病治疗剂的制剂；和

--说明书。

在一优选实施方式中，所述药盒还包括含有其他hiv潜伏激活药物的制剂。

所述含有式i所示的巨大戟二萜醇化合物及其衍生物的制剂可以是含有巨大戟二萜醇化合物及其衍生物的单元剂型，所述含有艾滋病治疗剂的制剂可以是含有艾滋病治疗剂的单元剂型，所述含有其他hiv潜伏激活药物可以是含有hiv潜伏激活药物的单元制剂。

药盒中装有至少一个含有巨大戟二萜醇化合物及其衍生物的单元剂型、以及含有艾滋病治疗剂、hiv潜伏激活药物的单元剂型；较佳地，各为4-10个。

如本文所用，术语“单元剂型”是指为了服用方便，将组合物制备成单次服用所需的剂型，包括但不限于各种固体剂(如片剂)、液体剂、胶囊剂、缓释剂。

本发明药盒所述的说明书中记载了如下的使用方法：

(i)给需要的对象施用含有巨大戟二萜醇化合物及其衍生物的制剂；

(ii)和/或步骤(i)后的5-50小时,较佳地为10-48小时，更佳地为15-24小时，给所述对象施用含有艾滋病治疗剂的制剂；

(iii)重复步骤(i)-(ii)。

此外，可用于本发明药盒的艾滋病治疗剂的制剂可以为一种或多种，优选地，所述艾滋病治疗剂可以为多种，更优选地，可以为本领域技术人员所熟知的艾滋病治疗剂鸡尾酒疗法的药物组合。

激活潜伏hiv和/或抑制hiv感染的方法

本发明还提供了体外非治疗性的以及体内治疗性的激活潜伏hiv和/或抑制hiv的方法。

其中，体外非治疗性的激活潜伏hiv(或诱导hiv潜伏感染细胞中hiv前病毒表达)的方法包括步骤：

在巨大戟二萜醇化合物及其衍生物(或巨大戟二萜醇化合物及其衍生物和其他hiv潜伏激活药物)的存在下，培养所述的hiv潜伏感染细胞中，从而再激活潜伏的hiv。

当在该步骤后，巨大戟二萜醇化合物及其衍生物本身对再激活潜伏的hiv具有抑制其感染的作用，因此，在体内外研究体系中，巨大戟二萜醇化合物及其衍生物或与艾滋病治疗剂(如抗逆转录病毒药物、免疫调节剂、治疗性抗体等)联合使用，则获得了本发明先激活后抑制或杀灭hiv的方法。

其中，体外非治疗性的抑制hiv的方法包括步骤：

在巨大戟二萜醇化合物及其衍生物的存在下，检测其对hiv毒株抑制能力。

适用于体内的治疗方法，包括以下步骤：

(i)给需要的对象施用含有巨大戟二萜醇化合物及其衍生物；

(ii)任选的，步骤(i)后的5-120小时,较佳地为24-96小时，更佳地为72-96小时，给所述对象施用含有艾滋病治疗剂的制剂；和任选的(iii)重复步骤(i)-(ii)。

在一优选实施方式中，步骤(i)中还包括施用其他hiv潜伏激活药物的制剂。

本发明的主要优点包括：

1.经过大量筛选，本发明首次发现能够显著干预hiv的巨大戟二萜醇化合物的衍生物。

2.本发明首次提出了巨大戟二萜醇化合物的新用途，所述的巨大戟二萜醇化合物在低浓度时即能明显使感染细胞内潜伏的hiv表达；所述的巨大戟二萜醇化合物在低浓度时又能抑制hiv感染。

3.本发明首次发现，所述的巨大戟二萜醇化合物及其衍生物，在低浓度时抑制hiv感染的作用是通过降低cd4细胞表面hiv感染受体cd4、ccr5、cxcr4的表达，从而抑制hiv的进入，制备抗hiv药物。

4.本发明首次发现，巨大戟二萜醇化合物经c6h12o5获so3h修饰后具有增加水溶性效果，或与增溶的载体和或辅料组合增加水溶性。

5.本发明的化合物可进一步制备治疗艾滋病药物，将为艾滋病的彻底治愈提供新的途径。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。

如无特别说明，则本发明实施例中所用的材料和试剂均为市售产品。

实施例1本发明的巨大戟二萜醇化合物ek-5a的制备

甘遂(e.kansui)根及根茎5kg,分别用8倍量的95％乙醇回流提取两次，每次两小时，将所得提取物回收至无醇味，得浸膏。加水稀释至1000ml,用等体积的二氯甲烷萃取三次，回收二氯甲烷溶剂，得二氯甲烷萃取物101.2g。

所述的硅胶柱层析的条件：采用的流动相为体积比为10～2：1的石油醚-乙酸乙酯溶液。所述的反相色谱纯化的条件：采用的填料为十八烷基键合硅胶，采用的流动相为体积比为90％甲醇-水的溶液等度洗脱，14分钟得化合物ek-5a(80mg)，淡黄色粘稠状固体，紫外吸收268nm。

所述的分离纯化包括：将萃取液浓缩后进行硅胶柱层析，薄层检识得到所需要的馏分，再通过反相色谱纯化，得到化合物ek-5a，80mg。

1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.71(ddd,j＝23.0,15.6,4.8hz,1h)；6.16(p,j＝11.1hz,2h)；6.08(t,j＝7.1hz,1h)；6.02–5.88(m,2h)；5.62(d,j＝10.7hz,1h)；5.32(s,1h)；4.77(d,j＝12.5hz,1h)；4.50(d,j＝12.5hz,1h)；4.11(dd,j＝11.7,4.2hz,1h)；3.90(s,1h；3.52(d,j＝17.6hz,2h)；2.60–2.44(m,1h)；2.37–2.18(m,4h)；2.08(s,3h)；1.97(s,1h)；1.86–1.78(m,4h)；1.51–1.39(m,3h)；1.39–1.24(m,6h)；1.08(d,j＝9.3hz,7h)；1.00(t,j＝7.8hz,4h)；0.97(dd,j＝8.1,3.6hz,1h)；0.94–0.87(m,4h)；0.79–0.66(m,1h).

实施例2本发明的巨大戟二萜醇化合物ek-1a的制备

甘遂(e.kansui)根及根茎5kg,分别用8倍量的95％乙醇回流提取两次，每次两小时，将所得提取物回收至无醇味，得浸膏。加水稀释至1000ml,用等体积的二氯甲烷萃取三次，回收二氯甲烷溶剂，得二氯甲烷萃取物101.2g。

所述的硅胶柱层析的条件：采用的流动相为体积比为10～2：1的石油醚-乙酸乙酯溶液。所述的反相色谱纯化的条件：采用的填料为十八烷基键合硅胶，采用的流动相为体积比为86％甲醇-水的溶液等度洗脱，15分钟得化合物ek-1a(30mg)，淡黄色粘稠状固体，紫外吸收268nm。

所述的分离纯化包括：将萃取液浓缩后进行硅胶柱层析，薄层检识得到所需要的馏分，再通过反相色谱纯化，得到化合物ek-1a，30mg。

1hnmr(400mhz,cdcl3)：δ7.74–7.57(m,1h)；6.24–6.13(m,1h)；6.10(d,j＝8.8hz,1h)；6.03–5.83(m,3h)；4.84(d,j＝12.8hz,1h)；4.62(d,j＝12.8hz,1h)；4.45(d,j＝10.5hz,1h)；4.30–4.00(m,3h)；3.84(s,1h)；3.78(s,1h)；3.71(s,1h)；2.49–2.00(m,8h)；1.86(t,j＝9.8hz,4h)；1.83–1.70(m,2h)；1.51–1.39(m,2h)；1.39–1.25(m,5h)；1.17–1.04(m,6h)；0.98(dd,j＝12.5,7.8hz,4h)；0.91(t,j＝6.9hz,3h)；0.72(dd,j＝15.0,8.5hz,2h).

实施例3本发明的巨大戟二萜醇化合物及其衍生物高效激活潜伏细胞中hiv-1的表达

按每孔2×10e4个细胞将j-lat-a10.6或c11细胞种植于96孔板，每孔加入100μl含10％fbs(gibco)的1640培养基(gibco)。细胞经实施例1、2的化合物处理48h后，在荧光显微镜下观察细胞绿色荧光表达情况，并收集细胞进行流式细胞术检测，分析荧光细胞所占比例。

结果如图1和图2所示。结果显示,未加诱导剂处理的hiv潜伏感染细胞，其荧光阳性的细胞比例仅有约为1-2％的背景激活(图1-1和图1-2)。经5ng/ml的ek-5a(即5a)处理,细胞模型中表达绿色荧光的细胞比例明显增加；其中，j-lat-a10.6细胞经实施例1的化合物处理后绿色荧光阳性的细胞比例高达90％(图1-3，图1-4，图2)，c11细胞中绿色荧光阳性的细胞比例也有近80％。

结果显示，与对照组相比，实施例1、2化合物处理后，hiv的激活率增加了32-45倍。

实施例4巨大戟二萜醇化合物及其衍生物与pkc激活剂pep005对潜伏hiv-1激活效率的比较

按每孔2×10e4个细胞将j-lat-a10.6或c11细胞种植于96孔板，每孔加入100μl含10％fbs(gibco)的1640培养基(gibco)。细胞分别经不同浓度的化合物(如实施例1、2的化合物)和pep005处理48h后，收集细胞进行流式细胞术检测，分析荧光细胞所占比例。

结果如图3及图4所示。

结果显示，巨大戟二萜醇化合物及其衍生物的较好激活浓度范围为1-100ng/ml，且在两种细胞模型上均具有剂量效应关系。在c11细胞上，巨大戟二萜醇化合物5a激活潜伏hiv-1的ec50为0.23ng/ml，而pep005为0.31ng/ml；而在j-lat-a10.6细胞上，巨大戟二萜醇化合物及其衍生物(如1a,5a)激活潜伏hiv-1的最低ec50为0.12ng/ml，而pep005为0.82ng/ml。在两种潜伏细胞系上，巨大戟二萜醇化合物及其衍生物的ec50均比pep005低。巨大戟二萜醇化合物及其衍生物对于激活潜伏hiv-1的活性极高，在极低的浓度下就能诱导hiv-1高水平的激活。

实施例5本发明的巨大戟二萜醇化合物及其衍生物显著降低cd4细胞表面cd4,ccr5,cxcr4受体的表达

人原代pbmc经不同浓度的ek-5a和pep005处理48h后，收集细胞，pbs洗涤两遍,100μlpbs重悬细胞，分别加入humanpeconjugatedanti-cd4、humanfitcconjugatedanti-ccr5和humanfitcconjugatedanti-cxcr4抗体，冰上避光孵育30min,pbs洗涤两遍，再用200μlpbs重悬细胞后，用流式细胞仪检测细胞表面cd4、ccr5和cxcr4的表达情况。

结果如图5所示。

结果显示，ek-5a在其有效激活浓度下可降低cd4、ccr5和cxcr4分子的表达表明ek-5a具有降低hiv感染的作用。

实施例6本发明的巨大戟二萜醇化合物及其衍生物能够有效降低hiv的感染

96孔板中每孔加入50μlbal病毒(用无血清1640稀释)以及50μl按倍比稀释(4倍)的ek-5a(用无血清1640稀释)，37℃孵育30分钟，再加入100μl细胞(105个/ml，用加入10％血清的1640培养液稀释)，以只加了同等终浓度的m7细胞的孔作为阴性对照，以加入了同等终浓度的bal病毒和m7细胞，未加入药物的孔为阳性对照；第二天每孔吸走上清150μl，加入150μl新鲜的含10％血清的1640培养液，第五天收取上清50μl，并在上清中加入50μl含5％triton的pbs，混合后4℃放置过夜，用elisa检测上清中p24的含量来定量hiv-1感染m7的情况，检测p24需要在前一天晚上将半区96孔板(corning)包被上hivigg(5μg/ml，pbs稀释)，4℃放置12个小时，洗板后加入2％的pbs溶牛奶进行封闭，37℃放置2小时。洗板后加入10μl收取的上清与加入了triton的pbs的混合物，再加入40μlpbs，37℃放置1小时，洗板后加入一抗(1.5μg/ml，实验室自行提取的183抗体)50μl，37℃放置一小时，洗板后加入二抗(稀释3000倍，dakodenmark兔抗鼠单抗)50μl，37℃放置一小时，洗板后加入显色液，待3-5分钟，加入硫酸终止反应，用酶标仪(tecaninfinitem200pro)检测每孔的od450，得出数据；依前述方法，计算每一浓度样品的抑制率和有效抑制浓度。

如图6所示。

结果显示，本发明的化合物(如ek-5a)具有显著的抑制hivbal病毒的活性。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。