本发明属于医药技术领域，涉及到一种猪血提取物的制备方法。
技术背景
猪血提取物由猪的新鲜血液这一味药材经现代工艺制备而成。猪血提取物可用于益血精颗粒等产品中。
猪血提取物是一种补血的药物，这种药物主要是从猪血中提取血红素铁，由于猪血中的铁是有机铁元素，能直接被人体的肠粘膜上皮细胞吸收，为人体提供造血的原料，促进人体制造红细胞，提高人体血红素的含量，改善人体的造血功能，纠正缺铁性贫血，改善由于缺铁性贫血导致的身体乏力、面色萎黄、苍白、嘴唇和眼睑淡白、舌淡白、心慌、记忆力减退等症状。多年来，凭着安全可靠的疗效，为中医领域治疗缺铁性贫血的首选药物。
猪血提取物由猪的新鲜血液100-2000重量份制备而成。
现有工艺制法如下：
将经检疫合格猪的新鲜血液(猪血应为鲜红色粘稠液或其凝聚物，有血腥气味，无异臭)，经乙酸法加工制成回流提取物。
猪血提取物作为有的中药回流提取物，代表着我国药物研究和应用的新成果，但随着科技的飞速发展和人民的物质文化需求的不断提升，传统工艺的中药回流提取物就显得美中不足，运用高科技的回流提取技术，可产生新的猪血提取物。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种猪血提取物的制备方法。
本发明的目的是这样实现的：通过对处方的工艺不断优化，将处方中的猪血进行充分前处理，然后采用适宜的回流提取技术，通过优化回流提取参数，使回流提取更充分。充分冷却，在用合适的过滤方式，充分洗涤，适度干燥，粉碎，即得。
本发明的制备方法，包括如下步骤：
1.前处理：将猪的新鲜血液100-2000重量份，根据凝固情况，过滤除去残血，采用胶体磨研磨技术，针对研磨时间、物料进料温度、进料速度、研磨粒径进行工艺研究，按上述参数进行工艺筛选，确定最佳前处理工艺。
2.回流提取：将前处理后的猪血，在搪瓷罐中进行回流提取，针对回流提取时间、原料加料时间、反应温度、辅料加料量、辅料种类、搅拌速度、乙酸加入量、乙酸种类等参数进行工艺研究，按上述参数进行工艺筛选，确定最佳回流提取工艺。
3.冷却：将回流提取反应后的物料充分冷却，针对冷却时间、冷却温度等参数进行工艺研究，按上述参数进行工艺筛选，确定最佳冷却参数。
4.过滤、精制：将冷却后的回流提取液，用合适的过滤方式，充分洗涤。针对过滤目数、精制次数、精制溶剂、精制溶剂量、精制方式进行工艺研究，按上述参数进行工艺筛选，确定最佳过滤、精制参数。
5.干燥工艺：将精制后猪血提取物湿品进行干燥，针对干燥方式、干燥温度、干燥时间等参数进行筛选，确定最佳干燥工艺。
6.粉碎工艺：粉碎，过120目即得。
具体的，本发明的猪血提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)胶体磨研磨：将猪血进行前处理，根据凝固情况，过滤除去残血，研磨时间10-50秒，物料进料温度5-25度，进料速度1-2t/h，研磨粒径0.1-0.3厘米；
2)回流提取：将上述前处理后的猪血，用3-5倍量浓度为4％-100％的乙酸回流提取，提取时间20-40分钟、反应温度95-115℃、搅拌速度20-40转/分，
3)药液冷却：将上述猪血回流提取液，冷却时间6-30小时，冷却温度20-40℃，
4)药液过滤、精制：将上述冷却后的猪血回流提取液，过滤目数100-250目、精制次数5-20次、精制溶剂选自水、50％-95％乙醇、精制溶剂的用量为6-15倍量，
5)沉淀干燥：将过滤、精制后的猪血提取物湿品，干燥，即得。
其中，2)回流提取：回流提取过程中加入辅料，辅料选自氯化钠、柠檬酸钠中的一种或一种以上，辅料加料量0.15％-0.25％。
其中，4)药液过滤、精制：精制方式选自：滤布过滤、板框压滤、管式离心、正压过滤。
其中，5)沉淀干燥：干燥方式选自：常压干燥、真空减压干燥、或低温冷冻干燥，干燥温度-20-100℃、干燥时间1小时20分-9小时10分。
优选的，本发明所述的制备方法，包括以下步骤：
1)胶体磨研磨：将药材猪血，进行前处理，根据凝固情况，过滤除去残血，研磨时间10-50秒，物料进料温度5-25度，进料速度1-2t/h，研磨粒径0.1-0.3厘米，
2)回流提取：将上述前处理后的猪血，用3-5倍量浓度为4％-100％的乙酸回流提取，提取时间20-40分钟、反应温度95-115℃、搅拌速度20-40转/分，回流提取过程中加入辅料，辅料选自氯化钠、柠檬酸钠中的一种或一种以上，氯化钠、柠檬酸钠用量比1:1，辅料加料量0.15％-0.25％，
3)药液冷却：将上述猪血回流提取液，冷却时间6-30小时，冷却温度20-40℃，
4)药液过滤、精制：将上述冷却后的猪血回流提取液，过滤目数100-250目、精制次数5-20次、精制溶剂选自水、50％-95％乙醇、精制溶剂量6-15倍量，精制方式选自：滤布过滤、板框压滤、管式离心、或正压过滤，
5)沉淀干燥，将过滤、精制后的猪血提取物湿品，干燥方式选自：常压干燥、真空减压干燥、或低温冷冻干燥，干燥温度-20-100℃、干燥时间1小时20分-9小时10分。
进一步优选的，本发明所述的制备方法，包括以下步骤：
1)胶体磨研磨：将药材猪血，进行前处理，根据凝固情况，过滤除去残血，研磨时间30-35秒，物料进料温度5-10度，进料速度1-2t/h，研磨粒径0.1-0.3厘米，
2)回流提取：将上述前处理后的猪血，用3-5倍量无水乙酸回流提取，提取时间30-35分钟、反应温度95-100℃、搅拌速度30-40转/分，回流提取过程中加入辅料，辅料选自氯化钠、柠檬酸钠中的一种或一种以上，氯化钠、柠檬酸钠用量比1:1，辅料加料量0.2％-0.25％，
3)药液冷却：将上述猪血回流提取液，冷却时间24-30小时，冷却温度20-30℃，
4)药液过滤、精制：将上述冷却后的猪血回流提取液，过滤目数100-150目、精制次数15-20次、精制溶剂为50％乙醇、精制溶剂量10-15倍量，精制方式选自：管式离心，
5)沉淀干燥，将过滤、精制后的猪血提取物湿品，干燥方式选自：真空减压干燥，干燥温度70-80℃、干燥时间2小时50分-3小时40分。
最优选的，本发明所述的制备方法，包括以下步骤：
将猪的新鲜血液100-2000重量份，根据凝固情况，过滤除去残血，采用胶体磨研磨，研磨时间30秒，研磨粒径0.3cm，物料进料温度5℃，进料速度1.5t/h，然后用5倍量的无水乙酸，加入0.25％柠檬酸钠和氯化钠按1:1混合回流提取30分钟，原料加料时间为15分钟，反应温度95℃，搅拌速度30转/分，然后在20℃冷却时间24小时，过100目滤，用15倍量50％乙醇，管式离心精制20次，然后采用真空减压干燥于70度干燥水分不高于2.0％，粉碎过120目即得。
本发明的制备方法是经过大量的实验筛选后得到的。
为了提高猪血提取物的前处理效果，根据实验参数，优化相应的前处理参数。其优选过程如下：
将猪的新鲜血液100-2000重量份，根据凝固情况，过滤除去残血，取粘稠液或其凝聚物。在前期研究的基础上，发现猪血的粘稠液及其凝聚物为不规则的块状，采用捣碎的方法无法有效的保证其充分反应，但是研磨的过细也会影响回流提取工艺的开展，因此需要对研磨工艺进行优化。
针对研磨时间、物料进料温度、进料速度、研磨粒径进行工艺研究，按上述参数进行工艺筛选，确定最佳前处理工艺。
分别使用实验后的样品用乙酸回流30分钟，取回流液检测血红素铁的含量，根据检测结果，进行实验筛选。见表1。
步骤1的前处理，进行工艺优化。以检测结果为考察指标按4因素3水平进行正交实验，进行工艺优化实验结果及方差分析见表1、表2、表3.
表1影响猪血提取物前处理的4因素3水平表
表2关于前处理因素筛选的正交实验表
表3影响因素的方差分析
(f临界值大于19，有显著性)
由上表可以看出：研磨时间和研磨粒径有显著性影响，最佳工艺为研磨时间30秒，研磨粒径0.3cm，物料进料温度5℃，进料速度1.5t/h。因物料进料温度为5℃，因此新鲜猪血在前处理前，因冷藏保存，以保证最佳的处理效果。
为了提高猪血提取物的回流提取效果，根据实验参数，优化相应的回流提取参数。
其优选过程如下：
取前处理后的猪血50重量份，在搪瓷罐中进行回流提取，针对回流提取时间、原料加料时间、反应温度、辅料加料量、辅料种类、搅拌速度、乙酸加入量、乙酸种类等参数进行工艺研究，按上述参数进行工艺筛选，确定最佳回流提取工艺。
根据影响因素程度，首先对乙酸的种类、原料加料时间、辅料加料量、辅料种类进行4因素3水平进行的正交实验。以回流提取液的血红素铁的含量为考察指标。固定前处理后的猪血加入量为20重量份，反应温度95℃，乙酸加入量5倍量，回流提取时间20分钟，搅拌速度20转/分。
表4影响回流提取的4因素3水平表
表5因素筛选的正交实验表
表6影响因素的方差分析
(f临界值大于19，有显著性)
由上表可以看出：乙酸的种类和辅料的种类有显著性影响，最佳工艺为：乙酸的种类为无水乙酸，辅料种类为柠檬酸钠和氯化钠按1:1混合物，原料加料时间为15分钟，辅料加料量为0.25％。
在前面实验的基础上对回流提取时间、反应温度、搅拌速度、乙酸加入量进行4因素3水平进行的正交实验。以回流提取液的血红素铁的含量为考察指标。固定前处理后的猪血加入量为20重量份，乙酸的种类为无水乙酸，辅料种类为柠檬酸钠和氯化钠按1:1混合物，原料加料时间为15分钟，辅料加料量为0.25％。
表7影响回流提取的4因素3水平表
表8因素筛选的正交实验表
表9影响因素的方差分析
(f临界值大于19，有显著性)
综上分析可以看出：乙酸的加入量和回流提取时间是显著性影响因素。最佳工艺为：乙酸加入量为5倍量，回流提取时间为30分钟，反应温度95℃，搅拌速度30转/分。
因此回流提取的最佳工艺参数为：
乙酸的种类为无水乙酸，辅料种类为柠檬酸钠和氯化钠按1:1混合物，原料加料时间为15分钟，辅料加料量为0.25％，乙酸加入量为5倍量，回流提取时间为30分钟，反应温度95℃，搅拌速度30转/分。
为了提高猪血提取物的冷却效果，根据实验参数，优化相应的冷却参数。其优选过程如下：
冷却：分别取回流提取后的猪血回流提取液50重量份，针对冷却时间、冷却温度等参数进行工艺研究，按上述参数进行工艺筛选，以最终药液的血红素铁的单位含量、药液性状为考察指标确定最佳冷却参数。
表10冷却工艺效果考察表
从上表数据可以看出：随着冷却时间的延长，药液中的成分不断析出，直至溶液清亮，含量极地为止。从生产实际情况及成本考虑，选在冷却时间为24小时，冷却温度为20℃为冷却最佳参数。
为了提高猪血提取物的过滤、精制效果，根据实验参数，优化相应的过滤、精制参数。
其优选过程如下：
过滤、精制：分别取冷却后猪血回流提取液50重量份，过滤后再进行精制，需要对过滤目数、精制次数、精制溶剂、精制溶剂量、精制方式等参数进行工艺研究，按上述参数进行工艺筛选，将精制后的粗品干燥后，以血红素铁的纯度为考察指标，确定最佳过滤、精制参数。
表11影响回流提取的5因素4水平表
表12因素筛选的正交实验表
表13影响因素的方差分析
(f临界值大于9.280，有显著性)
综上所述：最佳过滤、精制工艺参数为：精制溶剂为50％乙醇，精制次数20次，过滤目数100目，精制溶剂量15倍，精制方式管式离心。
为了提高猪血提取物的干燥效果，根据实验参数，优化相应的干燥参数。其优选过程如下：
干燥工艺：分别取精制后猪血提取物湿品50重量份，进行干燥，针对干燥方式、干燥温度、干燥时间等参数进行筛选，确定最佳干燥工艺。以干燥后的物料水分不高于2.0％为标准，以干燥后的物料的血红素铁的含量、及物料性状为考察指标，确定最佳干燥参数。(真空减压干燥的真空度控制在-0.075mpa,低温冷冻干燥的真空度控制在-0.1mpa)
表14干燥工艺摸索
从上述实验可以看出：采用常压干燥方式，干燥后物料性状不佳，结合生产成本等因素考虑，因此优选的最佳工艺为：采用真空减压干燥于70度干燥约3小时40分钟，至水分不高于2.0％。
通过上述大量实验：本产品猪血提取物的最佳工艺为：将猪的新鲜血液100-2000重量份，根据凝固情况，过滤除去残血，采用胶体磨研磨，研磨时间30秒，研磨粒径0.3cm，物料进料温度5℃，进料速度1.5t/h。(因物料进料温度为5℃，因此新鲜猪血在前处理前，因冷藏保存，以保证最佳的处理效果。)然后用5倍量的无水乙酸，加入0.25％柠檬酸钠和氯化钠按1:1混合物，回流提取30分钟，原料加料时间为15分钟，反应温度95℃，搅拌速度30转/分。然后在20℃冷却时间24小时，过100目滤，用15倍量50％乙醇，管式离心精制20次，然后采用真空减压干燥于70度干燥水分不高于2.0％，粉碎过120目即得。
选取最佳工艺制备的样品，采用药用复合膜包装，进行加速稳定性考察，考察条件为：温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月。在试验期间第0个月，第1个月，第2个月，第3个月，第6个月分别取样一次，进行检测。如表15
表15方案的加速稳定性数据
从上述所有数据分析得出：采用最佳工艺制备的样品稳定性好，所得产品抗引湿能力强、稳定性强，疗效稳定；整体工艺易于操作，适于推广应用。
对比实验：
将本发明最佳工艺制备的样品与现有制备方法：福建省药品标准汇编(1994年版)所制备的样品进行对比分析。
通过上述对比分析，不难看出本发明相对于现有方法，在产品质量、稳定性等各方面均优于现有制法。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1：一种猪血提取物的制备方法
将猪的新鲜血液180重量份，根据凝固情况，过滤除去残血，采用胶体磨研磨，研磨时间30秒，研磨粒径0.3cm，物料进料温度5℃，进料速度1.5t/h。(因物料进料温度为5℃，因此新鲜猪血在前处理前，因冷藏保存，以保证最佳的处理效果。)然后用5倍量的无水乙酸，加入0.25％柠檬酸钠和氯化钠按1:1混合物回流提取30分钟，原料加料时间为15分钟，反应温度95℃，搅拌速度30转/分。然后在20℃冷却时间24小时，过100目滤，用15倍量50％乙醇，管式离心精制20次，然后采用真空减压干燥于70度干燥水分不高于2.0％，粉碎过120目即得猪血提取物。
实施例2：一种猪血提取物的制备方法
将猪的新鲜血液350重量份，根据凝固情况，过滤除去残血，采用胶体磨研磨，研磨时间20秒，研磨粒径0.2cm，物料进料温度5℃，进料速度1.0t/h。(因物料进料温度为5℃，因此新鲜猪血在前处理前，因冷藏保存，以保证最佳的处理效果。)然后用5倍量的无水乙酸，加入0.25％柠檬酸钠和氯化钠按1:1混合物回流提取30分钟，原料加料时间为15分钟，反应温度95℃，搅拌速度20转/分。然后在20℃冷却时间24小时，过100目滤，用15倍量50％乙醇，管式离心精制20次，然后采用真空减压干燥于70度干燥水分不高于2.0％，粉碎过120目即得猪血提取物。
实施例3：一种猪血提取物的制备方法
将猪的新鲜血液550重量份，根据凝固情况，过滤除去残血，采用胶体磨研磨，研磨时间10秒，研磨粒径0.1cm，物料进料温度5℃，进料速度1.5t/h。(因物料进料温度为5℃，因此新鲜猪血在前处理前，因冷藏保存，以保证最佳的处理效果。)然后用4倍量的无水乙酸，加入0.25％柠檬酸钠和氯化钠按1:1混合物回流提取20分钟，原料加料时间为10分钟，反应温度100℃，搅拌速度20转/分。然后在20℃冷却时间24小时，过100目滤，用15倍量50％乙醇，管式离心精制20次，然后采用真空减压干燥于70度干燥至水分不高于2.0％，粉碎过120目即得猪血提取物。
实施例4：一种猪血提取物的制备方法
将猪的新鲜血液1000重量份，根据凝固情况，过滤除去残血，采用胶体磨研磨，研磨时间30秒，研磨粒径0.1cm，物料进料温度10℃，进料速度1.5t/h。(因物料进料温度为10℃，因此新鲜猪血在前处理前，因冷藏保存，以保证最佳的处理效果。)然后用3倍量的无水乙酸，加入0.25％柠檬酸钠和氯化钠按1:1混合物回流提取40分钟，原料加料时间为10分钟，反应温度105℃，搅拌速度30转/分。然后在20℃冷却时间30小时，过150目滤，用15倍量75％乙醇，管式离心精制15次，然后采用真空减压干燥于80度干燥至水分不高于2.0％，粉碎过120目即得猪血提取物。
实施例5：一种猪血提取物的制备方法
将猪的新鲜血液1500重量份，根据凝固情况，过滤除去残血，采用胶体磨研磨，研磨时间30秒，研磨粒径0.1cm，物料进料温度5℃，进料速度2.0t/h。(因物料进料温度为5℃，因此新鲜猪血在前处理前，因冷藏保存，以保证最佳的处理效果。)然后用4倍量的无水乙酸，加入0.25％柠檬酸钠和氯化钠按1:1混合物回流提取20分钟，原料加料时间为15分钟，反应温度95℃，搅拌速度20转/分。然后在30℃冷却时间24小时，过100目滤，用20倍量50％乙醇，管式离心精制20次，然后在-20度用采用低温冷冻干燥至水分不高于2.0％，粉碎过120目即得猪血提取物。
实施例6：一种猪血提取物的制备方法
将猪的新鲜血液2000重量份，根据凝固情况，过滤除去残血，采用胶体磨研磨，研磨时间10秒，研磨粒径0.3cm，物料进料温度5℃，进料速度1.5t/h。(因物料进料温度为5℃，因此新鲜猪血在前处理前，因冷藏保存，以保证最佳的处理效果。)然后用5倍量的无水乙酸，加入0.25％柠檬酸钠和氯化钠按1:1混合物回流提取30分钟，原料加料时间为15分钟，反应温度100℃，搅拌速度30转/分。然后在40℃冷却时间30小时，过100目滤，用9倍量75％乙醇，管式离心精制20次，然后在-10度用采用低温冷冻干燥至水分不高于2.0％，粉碎过120目即得猪血提取物。
实施例7：一种猪血提取物的制备方法
1)胶体磨研磨：将100重量份的药材猪血，进行前处理，根据凝固情况，过滤除去残血，研磨时间30秒，物料进料温度5度，进料速度1t/h，研磨粒径0.1厘米，
2)回流提取：将上述前处理后的猪血，用3倍量无水乙酸回流提取，提取时间30分钟、反应温度95℃、搅拌速度30转/分，回流提取过程中加入辅料，辅料为用量比1:1的氯化钠和柠檬酸钠，辅料加料量0.2％，
3)药液冷却：将上述猪血回流提取液，冷却时间24小时，冷却温度20℃，
4)药液过滤、精制：将上述冷却后的猪血回流提取液，过滤目数100目、精制次数15次、精制溶剂为50％乙醇、精制溶剂量10-倍量，精制方式选自：管式离心，
5)沉淀干燥，将过滤、精制后的猪血提取物湿品，干燥方式选自：真空减压干燥，干燥温度70℃、干燥时间3小时40分。
实施例8：一种猪血提取物的制备方法
1)胶体磨研磨：将药材猪血，进行前处理，根据凝固情况，过滤除去残血，研磨时间35秒，物料进料温度10度，进料速度2t/h，研磨粒径0.3厘米，
2)回流提取：将上述前处理后的猪血，用5倍量无水乙酸回流提取，提取时间35分钟、反应温度100℃、搅拌速度40转/分，回流提取过程中加入辅料，辅料选自氯化钠和柠檬酸钠，氯化钠、柠檬酸钠用量比1:1，辅料加料量0.2％-0.25％，
3)药液冷却：将上述猪血回流提取液，冷却时间30小时，冷却温度30℃，
4)药液过滤、精制：将上述冷却后的猪血回流提取液，过滤目数150目、精制次数20次、精制溶剂为50％乙醇、精制溶剂量15倍量，精制方式选自：管式离心，
5)沉淀干燥，将过滤、精制后的猪血提取物湿品，干燥方式选自：真空减压干燥，干燥温度80℃、干燥时间2小时50分。