本发明属于医药领域，具体涉及包含绿原酸和甘草酸二铵的注射组合物在制备具有皮肤增白作用的注射剂中的用途。
背景技术：
黑色素是由动物黑色素细胞合成的生物色素，可以吸收紫外线从而保护皮肤免受紫外线的伤害。然而，在经济快速发展的现代社会中，污染越来越严重，造成了臭氧空洞的形成和扩大，使得人体皮肤接触吸收到的紫外线含量越来越多；再加上现代城市生活压力的增加，作息时间的不规律，譬如熬夜以及劣质化妆品的使用等等，这些因素都会使黑色素细胞合成黑色素能力失调，造成各种色素沉积失常，譬如晒斑、黄褐斑等等。色素失常不仅严重影响面容美观，也会对患者带来一定的精神压力和心理问题。
影响皮肤颜色的因素主要有以下两方面：一方面是皮肤的解剖生理学特点，包括皮肤的表面状态、厚度、水分含量、皮肤内血管分布情况、血液中氧化还原血红蛋白的含量等。另一方面是皮肤内色素的含量及分布，包括皮肤和皮下脂肪内胡萝卜素的含量、黑色素及其他色素的含量等等。由皮肤生理学可知，决定肤色深浅主要因素是皮肤黑色素含量及其分布情况。黑色素细胞位于皮肤的基底层，黑色素细胞分泌黑色素是一个极其复杂的生物学过程，涉及黑色素细胞的发生、树突形成，黑色素小体成熟、转运等机制，并与角质细胞和细胞外基质等密切相关。
目前的皮肤增白产品大多是通过外用涂抹或口服施用的，例如使用具有抑制黑色素小体转运作用的代表性成分烟酰胺，但是外用和口服的皮肤增白产品通常效果较差且起效较慢。美白针是将美白药物注射到身体内，以实现迅速且均匀遍及全身的美白效果的皮肤增白产品。由于美白针美白的效果立竿见影，令人叹为观止，因而其一经面市即得到众多明星和爱美人士的追捧，但是美白针目前存在很大争议，有很多专业人士认为其存在非常大的安全性风险。
美白针最为常用的是以曲酸、传明酸或熊果苷为活性成分，通过从根本上抑制黑色素的合成达到增白的目的。但它们有各自的不足之处：曲酸在世界卫生组织国际癌症研究机构公布3类致癌物清单中，具有引发癌症的潜在危险；传明酸也叫氨甲环酸，是一种止血药，长期输入传明酸对凝血功能有影响，导致月经提前，量变少甚至闭经，血流变慢，代谢降低，形成血栓；熊果苷对黑色素含量的影响具有双向性，即在某个浓度可以抑制黑色素的合成，而在另外一个浓度范围内可以增加黑色素的含量。可见，目前注射用美白产品中的活性成分不尽如人意，其或多或少都存在安全性和有效性方面的缺陷。因此，开发新的安全、高效的具有皮肤增白作用的注射产品具有重大的应用价值和商业价值。
绿原酸(chlorogenicacid,cga)又名咖啡鞣酸，是由咖啡酸(caffeicacid,ca)和奎尼酸(quinicacid,qa)组成的缩酚酸，其化学名为3-o-咖啡酰奎尼酸(3-o-caffeoylquinicacid,cga)。绿原酸是植物在进行有氧呼吸的过程中，经磷酸戊糖途径中间产物合成的一种苯丙素类物质。绿原酸已经被开放应用于食品，保健品，化妆品和药品等多个领域。由于它广泛的存在于常见的各种蔬菜水果中，具有多种生物活性，如心血管保护作用、抗氧化作用、抗紫外及抗辐射作用、抗诱变及抗癌作用、抗菌作用、抗病毒作用、降脂降糖作用、免疫调节作用等。在医药化工和食品等领域都具有广泛的应用。
本发明是发明人对“绿原酸在制备具有皮肤增白作用的注射剂中的用途”(参见cn108685891a，公开日期：2018年10月23日)发明的改进。本发明人在对绿原酸皮肤增白作用的深入研究中意外地发现了能够显著提高绿原酸皮肤增白作用并显著降低其用量的方法，研制出了一种安全、高效的包含绿原酸的皮肤增白注射产品。
技术实现要素：
为了解决上述技术问题，本发明通过以特定用量比例将主要活性成分绿原酸与辅助成分甘草酸二铵组合，显著增强了绿原酸的皮肤美白作用，从而降低了绿原酸的用量，研制出一种安全、高效的包含绿原酸的皮肤增白注射产品。
具体地，通过以下几个方面的技术方案实现了本发明：
在第一个方面中，本发明提供了一种具有皮肤增白作用的注射组合物，所述注射组合物包含绿原酸和甘草酸二铵，所述绿原酸和所述甘草酸二铵的重量比为(10-20)：(0.5-1)，其中所述绿原酸是用于皮肤增白作用的主要活性成分，所述甘草酸二铵是用于皮肤增白作用的辅助成分，所述甘草酸二铵增强所述绿原酸的皮肤增白作用。
作为可选方式，在上述注射组合物中，所述注射为静脉输注、静脉推注、肌肉注射、皮下注射、皮内注射或腹膜内注射。
作为可选方式，在上述注射组合物中，所述绿原酸和所述甘草酸二铵的重量比为20：1。
作为可选方式，在上述注射组合物中，所述注射组合物具有抑制黑色素合成的作用。
作为可选方式，在上述注射组合物中，所述绿原酸和所述甘草酸二铵在同一注射剂中施用，或者所述绿原酸和所述甘草酸二铵分别在单独的注射剂中施用，在所述在单独的注射剂中施用的情况下，所述绿原酸和所述甘草酸二铵同时施用或顺序施用，且所述绿原酸和所述甘草酸二铵采用相同注射方式施用或不同注射方式施用。
在第二个方面中，本发明提供了上述注射组合物在制备具有皮肤增白作用的注射剂中的用途。
在第三个方面中，本发明提供了上述注射组合物在制备抑制黑色素合成的注射剂中的用途。
在第四个方面中，本发明提供了上述注射组合物在制备改善皮肤色素沉积的注射剂中的用途。
在第五个方面中，本发明提供了上述注射组合物在制备预防或治疗无规律色素过度沉着的注射剂中的用途。
作为可选方式，在上述用途中，所述无规律色素过度沉着是老年斑、雀斑、黑斑、黄褐斑、晒斑或蝴蝶斑中的一种或多种。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一赘述。
本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：
(1)本发明以特定用量比例将主要活性成分绿原酸与辅助成分甘草酸二铵组合，后者能够有效增强绿原酸的皮肤增白作用，从而极大地降低绿原酸用量，但是却能够达到比单独使用绿原酸更好的皮肤增白效果。
(2)针对本发明注射组合物中的成分绿原酸，发明人针对其通过注射给药而实现的各种用途已经进行了二十余年的研究，累积了大量安全性数据，使得注射用绿原酸的安全性能够得到充分保障。
(3)针对本发明注射组合物中的另一成分甘草酸二铵，甘草酸二铵注射液本身就是一种临床上常用的治疗伴有丙氨酸氨基转移酶(alt)升高的急、慢性病毒性肝炎的药物，因而其安全性也是经过验证的。
具体实施方式
本发明人在对绿原酸药理作用的深入研究中，通过大量筛选，意外地发现了能够显著提高绿原酸皮肤增白作用并显著降低其用量的方法，研制出了一种安全、高效的包含绿原酸的皮肤增白注射产品。在此基础上完成了本发明。
如本文所用，“辅助成分”通常指不具有或几乎不具有目标药理活性，但是能够增强主要活性成分目标药理活性的物质。本发明的目标药理活性主要是皮肤增白作用。
在本发明中，注射可以是静脉输注、静脉推注、肌肉注射、皮下注射、皮内注射或腹膜内注射。
在本发明中，绿原酸和甘草酸二铵可以在同一注射剂中施用，或者绿原酸和甘草酸二铵分别在单独的注射剂中施用，在单独的注射剂中施用的情况下，绿原酸和甘草酸二铵可以同时施用或顺序施用，且绿原酸和甘草酸二铵可以采用相同的注射方式施用，也可以采用不同的注射方式施用。
上述本发明注射组合物的注射剂可以根据药物制剂领域的常规工艺制备而成，其剂型可以是冻干粉针剂或水针剂。
下面参照具体的实施例对本发明做进一步说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明的范围。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。
下面实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。
以下实验主要参考cn108685891a中所示的方法进行。
实施例1：本发明注射组合物抑制色素合成的动物研究
1.主要实验药品和动物
注射用绿原酸冻干粉针剂，四川九章生物科技有限公司提供。甘草酸二铵注射液，正大天晴药业集团股份有限公司提供。
2.实验动物分组和实验方法
将检疫合格的实验小鼠，随机分为5组，每组10只：第1组为溶剂对照组，第2组为传明酸组，第3组为绿原酸组，第4组为甘草酸二铵组，第5组为绿原酸+甘草酸二铵组。
其中，溶剂对照组的小鼠每天尾静脉注射给予5％葡萄糖溶液100μl，给药4周。第2组小鼠，每天尾静脉注射给予传明酸溶液100μl，给药量为每只小鼠2mg，给药溶剂为5％葡萄糖溶液，给药4周。第3组小鼠，每天尾静脉注射给予绿原酸溶液100μl，给药量为每只小鼠2mg，给药溶剂为5％葡萄糖溶液，给药4周。第4组小鼠，每天尾静脉注射给予甘草酸二铵溶液100μl，给药量为每只小鼠0.1mg，给药溶剂为5％葡萄糖溶液，给药4周。第5组小鼠，每天尾静脉注射给予绿原酸+甘草酸二铵溶液100μl，给药量为每只小鼠绿原酸2mg+甘草酸二铵0.1mg，给药溶剂为5％葡萄糖溶液，给药4周。
4周后，麻醉小鼠，用剃毛器剔除腹部被毛，取皮肤组织3×3cm，10倍匀浆后，取500μl混合物，离心后去除上层液体。将小球状的表皮均质物置于尿素溶液中，搅拌30min，用针将球体分离，再把混合物置于温控搅拌器中常温下剧烈搅拌30min，离心10min，将上层液体转移，制成500μl液体，下层液体带非碱溶性黑素成分分析。上层液体与氯仿混合均匀、离心，取150μl上层液体至微滴定盘中，在340nm处测定其光学密度。将下层的非碱溶性球状物导入氢氧化钠中，用针将球体分离，按前述方法用氯仿对混合物分离，离心。取150μl至微滴定盘中，在340nm处测定其光学密度。将人造黑素制成溶液，制作光学密度标准曲线，估算样品中碱溶性(褐黑素)和非碱溶性(优黑素)物质中的黑素含量，测得的数据按照皮肤组织重量进行换算，总黑素含量是二者的加和。
3.实验结果
实验结果如下表1中所示。实验结果表明，与溶剂对照组相比，传明酸(**p＜0.01)、绿原酸(*p＜0.05)以及绿原酸+甘草酸二铵(**p＜0.01)静脉注射均能显著降低实验小鼠皮肤的黑色素含量，各组小鼠的褐黑素、优黑素和总黑素均显著降低。甘草酸二铵组小鼠的黑色素与溶剂对照组相比几乎没有差异，表明甘草酸二铵单用不具有降低小鼠皮肤黑色素含量的作用。
实验结果还表明，绿原酸单用降低实验小鼠黑色素的作用不及传明酸单用。但是，在组合物中加入较低剂量的甘草酸二铵后，绿原酸降低实验小鼠黑色素的作用显著增加。绿原酸+甘草酸二铵组小鼠黑色素(包括褐黑素、优黑素和总黑素)的降低程度与绿原酸组相比具有统计学上的显著性差异(##p＜0.01)。
表1：各组小鼠皮肤中各组黑色素的含量(平均值±sd，μg/g)
注释：*p＜0.05，**p＜0.01，与溶剂对照组比较，##p＜0.01，与绿原酸组比较。
实施例2：本发明注射组合物对黄体酮诱导的色素沉积小鼠的治疗作用研究
1.主要实验药品和动物
注射用绿原酸冻干粉针剂，四川九章生物科技有限公司提供。甘草酸二铵注射液，正大天晴药业集团股份有限公司提供。
2.实验模型和实验方法
将检疫合格的实验动物，随机分为6组，每组10只，各组小鼠(除溶剂对照组外)均采用雌激素全身共刺激，20mg/kg黄体酮注射雌性小鼠大腿根部，每日一次，给药4周。本研究采用一边造模一边给药的实验方式。
其中，第1组溶剂对照组的小鼠每天尾静脉注射给予5％葡萄糖溶液100μl，给药4周。第2组模型对照组的小鼠，在进行雌激素造模的同时，每天尾静脉注射给予5％葡萄糖溶液100μl，给药4周。第3组小鼠，在进行雌激素造模的同时，每天尾静脉注射给予传明酸溶液100μl，给药量为每只小鼠2mg，给药溶剂为5％葡萄糖溶液，给药4周。第4组小鼠，在进行雌激素造模的同时，每天尾静脉注射给予绿原酸溶液100μl，给药量为每只小鼠2mg，给药溶剂为5％葡萄糖溶液，给药4周。第5组小鼠，在进行雌激素造模的同时，每天尾静脉注射给予甘草酸二铵溶液100μl，给药量为每只小鼠0.1mg，给药溶剂为5％葡萄糖溶液，给药4周。第6组小鼠，在进行雌激素造模的同时，每天尾静脉注射给予绿原酸+甘草酸二铵溶液100μl，给药量为每只小鼠绿原酸2mg+甘草酸二铵0.1mg，给药溶剂为5％葡萄糖溶液，给药4周。
4周后，麻醉小鼠，取小鼠皮肤组织标本1×1cm，固定后的皮肤组织进行石蜡包埋后，采用柠檬酸钠缓冲液热抗原修复后，置于室温下冷却。用pbs冲洗切片，滴加预备好的显色剂dab工作液60ml，室温孵育15min，显色完全后终止，溶剂对照组小鼠作为阴性对照，模型对照组小鼠作为阳性对照，将染色后的切片于显微镜下观察，拍照。
3.实验结果
实验结果表明，溶剂对照组小鼠的表皮中未见明显的黑色素细胞表达，而在模型对照组中，黑色素细胞阳性表达明显增多，着色较深。甘草酸二铵组小鼠的表皮中也出现了黑色素细胞阳性表达明显增多和着色较深，表明甘草酸二铵单用不具有降低小鼠皮肤黑色素含量的作用。传明酸组、绿原酸组和绿原酸+甘草酸二铵组与模型对照组相比，黑色素细胞阳性表达均显著降低，但上述三组的作用效果之间也存在差异，其中效果最好的是绿原酸+甘草酸二铵组，效果最差的是绿原酸组。实施例2中的实验结果与实施例1中的实验结果具有基本一致的变化趋势。
综上所述，以特定用量比例将主要活性成分绿原酸与辅助成分甘草酸二铵组合，后者能够有效增强绿原酸的皮肤增白作用，从而极大地降低绿原酸用量，但是却能够达到比单独使用绿原酸更好的皮肤增白效果。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。