专利名称：云谷霉素(谷氏菌素)作为抗肿瘤药物的应用的制作方法
云谷霉素(Yungumycin)是从我国云南省关坪自然保护区土壤中分离得到的链霉菌2321号菌株产生的抗肿瘤活性物质。研究证明云谷霉素对体外培养的肿瘤细胞显示杀伤作用，对实验动物肿瘤有显著疗效，有可能用于肿瘤治疗。(云谷霉素的产生菌已保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，北京中关村。保藏日期1995年7月26日，编号0234)。
经理化性质与鉴别研究确定，云谷霉素与前已报道的谷氏菌素(gougerotin)相同 据早期文献报道，谷氏菌素是广谱抗菌抗生素，但仅有弱的抗菌活性；未报道有抗肿瘤活性(Journal of Antibiotics，Series A，1962；1593)。据报道星霉素(asteromycin)与谷氏菌素相同，星霉素在体外试验对HeLa细胞有抑制作用，有效浓度为1-2μg/ml；据称星霉素腹腔内注射对小鼠肉瘤180(腹水型)有活性，但未报道具体数据(Journal of Antibiotics，1972；25548)。庆丰霉素据报告是一个化学结构与谷氏菌素相类似的抗生素，但未报道有抗肿瘤活性(微生物学报，1975；15101)。宁南霉素据称为谷氏菌素同分异构体，未报告有抗肿瘤作用(中华人民共和国发明专利申请公开说明书，申请号93104287.9)。综上所述，迄今国内外未见报道谷氏菌素动物体内试验对肿瘤有确切疗效，也未见报道谷氏菌素应用于临床肿瘤治疗。云谷霉素经研究确定与谷氏菌素相同。本项发明的研究证明，云谷霉素对动物肿瘤有显著疗效，可能用于治疗肿瘤。
本发明的目的是利用云谷霉素(谷氏菌素)作为抗肿瘤药物，治疗肿瘤。
本项发明的内容与要点是1.云谷霉素对肿瘤细胞的杀伤作用体外培养人体癌细胞(口腔鳞癌KB细胞)，用克隆形成测定法检测，药物与癌细胞接触6天，研究证明云谷霉素对KB细胞有杀伤作用，抑制50％克隆形成的浓度(IC50)为3μg/ml(附图1)。
2.云谷霉素对小鼠结肠癌的疗效取结肠癌26的瘤组织小块(直径2mm)接种在BALB/c小鼠腋部皮下；接种后24小时经腹腔内注射(ip)或灌胃(po)给药，对照组动物给予生理盐水，10天后处死动物，取肿瘤称重量，计算抑瘤率。研究结果表明，云谷霉素ip给药对肠癌26有一定疗效，抑瘤率为41％-43％，p＜0.01(表1)。云谷霉素po给药有显著疗效，抑瘤率可达72％-86％(表2)。
表1云谷霉素腹腔内注射对小鼠结肠癌26的抑制作用剂量动物 体重(g) 瘤重(g)抑制率(mg/kg) 死亡数开始/结束 X±SD (％)对照 0 19.8/21.51.73±0.31云谷霉素 0.06×100 20.2/19.91.58±0.7140.12×100 19.4/17.91.34±0.28220.25×100 20.5/16.80.97±0.3543*对照 0 18.6/17.82.44±0.56云谷霉素 0.25×5 0 19.0/18.41.80±0.3426*0.50×5 0 20.9/17.01.44±0.2441**1.00×3 0 18.7/18.51.39±0.1943**皮下接种肿瘤，ip给予云谷霉素；n＝6*p＜0.05，**p＜0.01，与对照组比较。
表2云谷霉素灌胃给药对小鼠结肠癌26的抑制作用剂量 动物 体重(g)瘤重(g)抑制率(mg/kg) 死亡数 开始/结束X±SD (％)对照0 22.7/19.4 1.40±0.19云谷霉素 12.5×3 0 22.5/15.2 0.39±0.1572**25.0×3 1 22.4/16.9 0.20±0.0886**皮下接种肿瘤，灌胃给予云谷霉素；n＝6**p＜0.01，与对照组比较。
3.云谷霉素对小鼠肉瘤180的疗效取小鼠肉瘤180腹水加生理盐水(1∶3)稀释，接种于昆明种小鼠腋部皮下，每鼠0.2ml。接种后24小时灌胃给予云谷霉素，对照动物给予生理盐水，10天后处死动物，取肿瘤称重量，计算抑瘤率。研究结果表明，云谷霉素灌胃给药对小鼠肉瘤180(实体型)有显著疗效，使用可耐受剂量(25mg/kg)，单次给药的抑瘤率可达83％，p＜0.01；使用较小剂量(15mg/kg和20mg/kg)，3次给药的抑瘤率分别为72％和81％，p＜0.01(表3)。
表3云谷霉素灌胃给药对小鼠肉瘤180的抑制作用剂量 动物 体重(g) 瘤重(g)抑制率(mg/kg) 死亡数 开始/结束 X±SD (％)I.对照0 19.1/28.82.86±0.52云谷霉素 15×10 19.8/27.31.59±0.6744**20×10 19.0/25.40.84±0.2971**25×10 20.3/24.80.50±0.2083**II.对照 19.5/29.42.74±0.86云谷霉素 15×30 19.0/28.60.76±0.3272**20×31 20.1/24.70.52±0.2081**25×31 19.7/25.10.47±0.1883**皮下接种肿瘤，ip给予云谷霉素；n＝10**p＜0.01，与对照组比较。
4.云谷霉素与5-氟尿嘧啶的抗肿瘤作用比较采用上述(3)的试验方法，小鼠皮下接种肉瘤180细胞，灌胃给予云谷霉素或5-氟脲嘧啶，使用剂量分别相当于1/3LD50，即云谷霉素15mg/kg，5-氟脲嘧啶40mg/kg；共给药3次。研究结果证明，云谷霉素与5-氟脲嘧啶对肉瘤180(实体型)的疗效相近，抑瘤率分别为72％和70％，两者比较p＞0.05(附图2)。
5.云谷霉素的毒性对小鼠的急性毒性LD50(po)为90mg/kg。云谷霉素灌胃给药组动物(25mg/kg×1或25mg/kg×3，对肉瘤180的抑瘤率为83％)，经病理组织学检查，心、肺、肝、肾、脾、胃、小肠等均未见毒性病变。
本发明的优点与积极效果是为云谷霉素(谷氏菌素)开拓了新的用途。云谷霉素口服给药对实验动物肿瘤有显著疗效。云谷霉素与目前临床使用的5-氟脲嘧啶的抗肿瘤效果相近，但化学结构有别，预期云谷霉素(谷氏菌素)用于临床肿瘤治疗，将可取得良好的效果。
图1云谷霉素对口腔鳞癌KB细胞的杀伤作用；图2云谷霉素与5-对小鼠肉瘤180的抑制作用。
(n＝10)
权利要求
1.云谷霉素(谷氏霉素)用作抗肿瘤药的应用，其特征是，云谷霉素体外试验对肿瘤细胞有杀伤作用，体内试验对肿瘤有显著治疗效果。
2.按照权利要求1.所述的抗肿瘤药的应用，其特征是体外培养人体癌细胞，用克隆形成法检测，云谷霉素对人口腔鳞癌KB细胞有杀伤作用，IC50为3μg/ml。
3.按照权利要求1.所述的抗肿瘤药的应用，其特征是动物体内试验，在BALB/c小鼠皮下接种结肠癌26，或在昆明种小鼠皮下接种肉瘤180，接种24小时后给药，10天后处死动物，判断腹腔内注射给药和灌胃给药的抑瘤率。
全文摘要
一种具有已知结构的云谷霉素(谷氏菌素)，体外试验用培养的人体癌细胞(KB细胞)，克隆形成测定法检测，它对KB细胞有杀伤作用，抑制50％克隆形成的浓度(IC50)为3μg/ml；体内试验用结肠癌26和肉瘤180，分别取结肠癌26组织小块接种在BALB/c小鼠腋部皮下或取小鼠肉瘤180腹水加生理盐水(1∶3)稀释，接种于昆明小鼠腋部皮下，24小时后经腹腔内注射(ip)和灌胃(po)给药，抑瘤率分别为结肠癌(ip)41-43％，(po)72-86％，肉瘤180(po)83％，其效果与临床常用的抗癌药5-氟脲嘧啶相近，开拓了云谷霉素(谷氏菌素)治疗肿瘤新用途。
文档编号A61K31/7042GK1127117SQ95115838
公开日1996年7月24日 申请日期1995年9月1日 优先权日1995年9月1日
发明者甄永苏, 戚长菁, 薛玉川, 胡继兰, 陈文君, 张春颖 申请人:中国医学科学院医药生物技术研究所