专利名称：环肽杀真菌剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及半合成环肽化合物，其用作杀真菌剂和抗寄生物剂，并且其具有提高的稳定性和水溶性。具体地说，本发明涉及环肽心形海胆蛋白(echinocandin)类衍生物；治疗真菌和寄生物感染的方法，以及该方法中使用的制剂。
本发明提供的化合物是半合成化合物，其由通过培养各种微生物而产生的肽衍生。本领域已知的一些环肽包括心形海胆蛋白B(A30912A)，脱水簕钩内酯(aculeacin)，mulundocandin，sporiofungin，L-671329，和S31794/F1。
一般而言，这些环肽的结构特征是在其中一个核氨基酸上有一个酰化的氨基基团的环六肽核(或核心)。氨基基团一般与生成核心外侧链的脂肪酸基团成酰化作用。例如心形海胆蛋白B具有亚油酰侧链，而脱水簕钩内酯具有棕榈酰侧链。
脂肪酸侧链可以从环肽核心上去除以提供一个氨基核(例如其中R2是氢的下面的式I化合物)。然后该氨基可以再酰化得到例如本申请所要求的那些半合成化合物。
心形海胆蛋白B核心用某些非天然存在的侧链部分再酰化得到一些杀真菌剂(参见，Debono，美国专利No.4293489)。在这些杀真菌剂中有西洛芬净，其由其中R′，R″，R_是甲基；Rx1和Rx2是羟基，Rx1，Ry2，Ry3，Ry4是羟基，R0是羟基，R2是对-辛氧基苯甲酰基的式I化合物代表。
本发明提供了式I化合物
其中R′是氢，甲基或NH2C(O)CH2-；R″和R_独立地是甲基或氢；Rx1，Rx2，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4独立地是羟基或氢；R0是下式基团
R1是C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，苯基，对-卤代苯基，对-硝基苯基，苯氧基，苄基，对-卤代苯甲基，或对硝基苯甲基；1)R2是下式基团
其中A)R3是C1-C12烷基，C1-C6烷氧基，或喹啉基；B)R3是-O-(CH2)m-[O-(CH2)n]p-O-(C1-C12烷基)；
m和n独立地是2，3或4；p是0或1；或C)R3是-Y-(C1-C12烷基)；Y是-C≡C-或-CH＝CH-；或D)R3是-O-(CH2)q-G；q是2，3或4；G是C7-C10双环烷基或C7-C14三环烷基；或II)R2是下式基团
其中Z是-O-，-C≡C-，-CH＝CH-，-CH2-CH2-，-CH2-，或键；A)R4是氢，C1-C12烷基，C1-C12取代的烷基，C2-C12链烯基，C2-C12取代的链烯基，C2-C12链炔基，C2-C12取代的链炔基，C1-C12烷氧基，C3-C12环烷基，C7-C10双环烷基，C7-C14三环烷基，C3-C12环烷基氧基，萘基，吡啶基，噻吩基，苯并噻吩基，喹啉基或苯基；或B)R4是被下列基团取代的苯基氨基，C1-C12烷硫基，卤素，C1-C12烷基，C2-C12链烯基，C2-C12链炔基，C1-C12取代的烷基，C2-C12取代的链烯基，C2-C12取代的链炔基，C1-C12烷氧基，三氟甲基，苯基，取代的苯基，或被下式基团取代的苯基-O-(CH2)m-[O-(CH2)n]p-O-(C1-C12烷基)，其中m，n和p如上定义；或者C)R4是被下列基团取代的C1-C12烷氧基卤素，C3-C12环烷基，C7-C10双环烷基，C7-C14三环烷基，C1-C6烷氧基，C2-C12链炔基，氨基，C1-C4烷基氨基，二(C1-C4烷基)氨基，甲酰氨基，C2-C12烷酰氨基，或者被下式基团取代的苯基-O-(CH2)m-[O-(CH2)n]p-O-(C1-C12烷基)，其中m，n和p如上定义；或者D)R4是-O-(CH2)r-W-R5；r是2，3，或4；
W是吡咯烷子基(pyrrolidino)，哌啶子基，哌嗪子基(piperazino)；R5是氢，C1-C12烷基，C3-C12环烷基，苄基或C3-C12环烷基甲基；或E)R4是-Y1-R6；Y1是-C≡C-或-CH＝CH-；R6是C3-C12环烷基，C7-C10双环烷基，C7-C14三环烷基，C3-C12环链烯基，萘基，苯并噻唑基，噻吩基，2，3-二氢化茚基，芴基，或者被C1-C12烷硫基，C2-C12链烯基，C2-C12链炔基，卤代(C1-C6烷氧基)或式-O-(CH2)r-W-R5基团取代的苯基，其中r，W和R5如上定义；或者R6是被式-O-(CH2)m-[O-(CH2)n]p-O-(C1-C12烷基)基团取代的苯基，其中m，n和p如上定义；或者F)R4是被式-NHC(O)R7基团取代的C1-C12烷氧基；R7是C1-C6烷氧基，或苯基(C1-C6烷氧基)；或者III)R2是下式基团
其中R8是C1-C12烷氧基，或式-O-(CH2)m-[O-(CH2)n]p-O-(C1-C12烷基)基团，其中m，n和p如上定义；或者IV)R2是下式基团
其中Y和R6如上定义；R9是苯基，C1-C12烷基，或C1-C12烷氧基；或者V)R2是被R4取代的萘甲酰基，其中R4如上定义；或者其可药用盐。
也提供了药物组合物，抑制寄生物或真菌活性的方法，以及应用本发明化合物治疗真菌或寄生物感染的方法。
这里所使用的术语“C1-C12烷基”指具有1-12个碳原子的直链或支链烷基。典型的C1-C12烷基包括甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，5-甲基戊基，己基，庚基，3，3-二甲基庚基，辛基，2-甲基-辛基，壬基，癸基，十一烷基，十二烷基等。术语“C1-C12烷基”其定义内包括术语“C1-C6烷基”和“C1-C4烷基”。
术语“卤素”指氯，氟，溴或碘。
术语“C2-C12链烯基”指具有2-12个碳原子的直链或支链链烯基，典型的C2-C12链烯基包括乙烯基，1-丙烯-2-基，3-丁烯-1-基，1-丁烯-2-基，1-丁烯-1-基，1-戊烯-3-基，2-己烯-3-基，1-癸烯-2-基，2-癸烯-5-基等。
术语“C2-C12链炔基”指具有2-12个碳原子的直链或支链链炔基，典型的C2-C12链炔基包括乙炔基，1-丙炔-1-基，1-丙炔-2-基，1-丁炔-1-基，1-丁炔-3-基，1-戊炔-3-基，4-戊炔-2-基，1-己炔-3-基，3-己炔-1-基，5-甲基-3-己炔-1-基，5-辛炔-1-基，7-辛炔-1-基，4-癸炔-1-基，6-癸炔-1-基等。
术语“C1-C12烷硫基”指具有1-12个碳原子的直链或支链的与硫原子连接的烷基链，典型的C1-C12烷硫基包括甲硫基，乙硫基，丙硫基，异丙硫基，丁硫基，3-甲基-庚硫基，辛硫基，5，5-二甲基-己硫基等。
术语“C1-C12烷氧基”指具有1-12个碳原子的直链或支链的与氧原子连接的烷基链，典型的C1-C12烷氧基包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，丁氧基，仲丁氧基，戊氧基，5-甲基-己氧基，庚氧基，辛氧基，癸氧基，十二烷氧基等。术语“C1-C12烷氧基”包括其定义内术语“C1-C6烷氧基”和术语“C1-C4烷氧基”。
术语“C1-C12取代的烷基”，“C2-C12取代的链烯基”和“C2-C12取代的链炔基”指被一个或两个独立地选自下列取代基取代的特定基团部分卤素，羟基，保护的羟基，氨基，保护的氨基，C1-C7酰氧基，硝基，羧基，保护的羧基，氨基甲酰基，氨基甲酰基氧基，氰基，甲基磺酰氨基，苯基，取代的苯基或C1-C12烷氧基。
术语“取代的苯基”指被一个，两个或三个独立地选自下列取代基取代的苯基卤素-，羟基，保护的羟基，氰基，硝基，C1-C12烷基，C1-C12烷氧基，羧基，保护的羧基，羧基甲基，羟基甲基，氨基，氨基甲基，三氟甲基或N-甲基磺酰氨基。
术语“C3-C12环烷基”是指具有3-12个碳原子的饱和烃环结构。典型的C3-C12环烷基基团包括环丙基，环丁基，环戊基，环己基，和环庚基，环辛基等。
术语“C3-C12环烷氧基”是指与氧原子连接的C3-C12环烷基。典型的C3-C12环烷氧基基团包括环丙氧基，环丁氧基，环戊氧基，环己氧基，和环庚氧基等。
术语“C3-C12环烯基”是指具有3-12个碳原子且有至少一个双键的烃环结构。典型的C3-C12环烯基基团包括环丙烯基，环丁烯基，环戊烯基等。
术语“甲基(C3-C12环烷基〕”是指被甲基取代的C3-C12环烷基。典型的甲基(C3-C12环烷基〕基团包括2-甲基环丙基，2-甲基环丁基，3-甲基环戊基，4-甲基环己基等。
术语“C1-C4烷基氨基”是指与氮原子连接的具有1-4个碳原子的直链或支链烷基氨基。典型的C1-C4烷基氨基基团包括甲基氨基，乙基氨基，丙基氨基，异丙基氨基，丁基氨基，仲丁基氨基等。
术语“二(C1-C4烷基)氨基”是指两个具有1-4个碳原子的直链或支链烷基与共同氮原子连接而成的二(C1-C4烷基)氨基。典型的二(C1-C4烷基)氨基基团包括二甲基氨基，二乙基氨基，乙基甲基氨基，甲基异丙基氨基，二丙基氨基，二丁基氨基，甲基丁基氨基，叔丁基异丙基氨基，二叔丁基氨基等等。
术语“C2-C12烷酰基”是指与羰基部分连接的具有1-4个碳原子的直链或支链烷基。典型的C2-C12烷酰基基团包括乙酰基，丙酰基，异丙酰基，丁酰基，异丁酰基，仲丁酰基，叔丁酰基，戊酰基，等。
术语“C2-C12烷酰基氨基”是指与羰基氨基部分连接的直链或支链烷基。典型的C2-C12烷酰基氨基基团包括乙酰氨基，丙酰氨基，异丙酰氨基，丁酰氨基，异丁酰氨基，仲丁酰氨基，叔丁酰氨基，戊酰氨基，等。
术语“C7-C10双环烷基”代表具有总共7-10个碳原子的两个稠合的环烷基，而“C7-C14三环烷基”代表总共具有7-14个碳原子的三个稠合的环烷基。典型的“C7-C10双环烷基”和“C7-C14三环烷基”包括双环[2.2.1.]庚-2-基，双环[2.2.1.]庚-4-烯-2-基，双环[3.3.1.]壬-3-基，双环[3.3.1.]壬-2-基，双环[3.2.1.]辛-2-基，双环[2.2.2.]辛-2-基，双环[2.2.2.]辛-5-烯-2-基，金刚烷基等。
术语“羟基保护基团”指一种羟基的取代基，其一般用来封闭或保护羟基官能度，同时反应在该化合物的其它官能团上进行。这种羟基保护基的例子包括四氢吡喃基，2-甲氧基丙-2-基，1-乙氧乙-1-基，甲氧甲基，β-甲氧基乙氧基甲基，甲硫基甲基，叔丁基，叔戊基，三苯甲基，4-甲氧基三苯甲基，4，4′-二甲氧基三苯甲基，4，4′，4″-三甲氧基三苯甲基，苄基，烯丙基，三甲基硅烷基，叔丁基二甲基硅烷基，和2，2，2-三氯乙氧基羰基等。羟基保护基的种类没有严格限制，只要衍生的羟基对下面的反应条件稳定，而且在合适的时间可以去除且不干扰分子的其它部分。优选的羟基保护基的例子是三甲基硅烷基。羟基保护基的其它例子参见T.W.Greene，“有机合成中的保护基团”(Protective Groups Organic Synthesis)，John Wiley和Sons，NewYork，N.Y.，(第二版，1991)，第2和3章。术语“保护的羟基”指与一个上述羟基保护基键联的羟基。
术语“二去氧”指其中Rx1和Rx2各自为氢的式I化合物。
术语“抑制”，即一种抑制寄生物或真菌活性的方法，包括停止，阻滞或预防性阻止或防止其生长或由于寄生物或真菌的存在而产生的任何伴随的指征。
术语“接触”，即本发明化合物与一种寄生物或真菌接触，包括本发明化合物与一种寄生物或真菌结合或连接，或明显接触或相切。但是该术语不意味着对该方法的任何进一步的限定，例如抑制作用机理，而且这些方法定义为包括本发明精神，即通过这些化合物的作用和其固有的抗寄生物和抗真菌性质来抑制寄生物或真菌活性，或者换句话说，所要求方法中使用的化合物是引起这种抑制作用的原因。
这里使用的术语“可药用盐”指对活生物体基本上没有毒性的上述结构式化合物的盐。典型的药学上可接受的盐包括通过本发明化合物与一种无机或有机酸或无机碱反应而制备的那些盐。这样的盐已知为酸加成盐和碱加成盐。
一般用来生成酸加成盐的酸是无机酸，例如盐酸，氢溴酸，氢碘酸，硫酸，磷酸等，有机酸例如对甲苯磺酸，甲磺酸，草酸，对-溴苯磺酸，碳酸，琥珀酸，柠檬酸，苯甲酸，乙酸等。这种可药用盐的例子是硫酸盐，焦硫酸盐，硫酸氢盐，亚硫酸盐，亚硫酸氢盐，磷酸盐，磷酸一氢盐，磷酸二氢盐，偏磷酸盐，焦磷酸盐，盐酸盐，溴酸盐，碘酸盐，乙酸盐，丙酸盐，癸酸盐，辛酸盐，丙烯酸盐，甲酸盐，异丁酸盐，己酸盐，庚酸盐，丙炔酸盐，草酸盐，丙二酸盐，琥珀酸盐，辛二酸盐，癸二酸盐，富马酸盐，马来酸盐，丁炔-1，4-二酸盐，己炔-1，6-二酸盐，苯甲酸盐，氯代苯甲酸盐，甲基苯甲酸盐，二硝基苯甲酸盐，羟基苯甲酸盐，甲氧基苯甲酸盐，邻苯二甲酸盐，磺酸盐，二甲苯磺酸盐，苯基乙酸盐，苯基丙烯酸盐，苯基丁酸盐，柠檬酸盐，乳酸盐，γ-羟基丁酸盐，乙醇酸盐，酒石酸盐，甲磺酸盐，丙磺酸盐，萘基-1-磺酸盐，萘基-2-磺酸盐，扁桃酸盐等。优选的可药用的酸加成盐是与无机酸例如盐酸或氢溴酸生成的那些盐和与有机酸例如马来酸或甲磺酸生成的那些盐。
碱加成盐包括自无机碱例如氨或碱金属或碱土金属氢氧化物衍生的那些盐，碳酸盐，碳酸氢盐等。因此，用于制备本发明盐的碱包括氢氧化钠，氢氧化钾，氢氧化铵，碳酸钾，碳酸钠，碳酸氢钠，碳酸氢钾，氢氧化钙，碳酸钙等。钾盐和钠盐的形式是特别优选的。
应该明白生成本发明任何盐的一部分的具体抗衡离子没有严格的性质限定，只要整个盐是可药用的，而且，只要该抗衡离子不给整个盐带来不期望的性质。
式I中R2酰基的典型例子包括多氧杂烷基基团取代的苯甲酰基，多氧杂烷基基团例如2-甲氧基乙氧基(p是0，m是1)，2-乙氧基乙氧基(p是0，m是2)，2-(2-乙氧基乙氧基〕乙氧基(p是1，m是2，n是2)，3-(2-乙氧基乙氧基〕丙氧基，4-(2-甲氧基乙氧基〕丁氧基等，或被炔基基团(-C≡C-(C1-C12烷基))取代的苯甲酰基，炔基基团例如丙炔基，丁炔基，己炔基，十一炔基等，或者被顺式或反式链烯基基团(-CH2＝CH2-(C1-C12烷基)) 例如丙烯基，丁烯基，己烯基，癸烯基等取代的苯甲酰基。
其中R2是下式基团的酰基的例子
包括二苯醚类(Z是-O-)，二苯基乙炔类(Z是-C≡C-)，均二苯代乙烯类(Z是-CH＝CH-)，和联苯基类(Z是一个键)。
二苯醚类基团的例子包括4-(4-丁氧基苯氧基)苯甲酰基，4-(4-己氧基苯氧基)苯甲酰基，4-(4-乙氧基苯氧基)苯甲酰基，4-(4-苯氧基苯氧基)苯甲酰基，4-[4-4-(4-十二烷氧基苯氧基)苯甲酰基，4-(4-(3-二-甲基氨基丙氧基〕苯氧基)苯甲酰基，等。
二苯基乙炔类和均二苯代乙烯类基团的例子包括4-苯乙烯基苯甲酰基，4-(4-甲氧基苯乙烯基)苯甲酰基，4-(4-丁氧基苯乙烯基)苯甲酰基，4-(苯基乙炔基)苯甲酰基，4-(4-乙氧基苯基乙炔基)苯甲酰基，4-(4-环己基氧基苯基乙炔基)苯甲酰基，等。
联苯基类基团的例子包括4-(4-(丁氧基)苯基〕苯甲酰基，4-(4-(环丁基甲氧基)苯基)苯甲酰基，4-(4-(环戊基甲氧基)苯基)苯甲酰基，4-(4-(环己基乙氧基)苯基)苯甲酰基，4-(4-(己氧基〕苯基)苯甲酰基，4-苯基苯甲酰基，4-(4-(11-氨基-十一烷氧基)苯基)苯甲酰基，4-(4-(11-甲酰氨基-十一烷氧基)苯基)苯甲酰基，4-(4-(异戊氧基)苯基)苯甲酰基等。
其中R4是-O-(CH2)r-W-R5的联苯基类基团的例子包括4-(4-(2-(N-环己基哌啶-4-基)乙氧基)苯基)苯甲酰基，4-(4-(2-(N-己基哌啶-4-基)乙氧基)苯基)苯甲酰基，4-(4-(2-(4-苄基哌啶子基)乙氧基)苯基)苯甲酰基，4-(4-(2-(4-环己基哌啶子基)乙氧基)苯基)苯甲酰基，等。
其中R4是-Y1-R6的联苯基和二苯基醚的例子是4-[4-(苯基乙炔基)苯基]苯甲酰基，4-[4-(苯基乙炔基)苯氧基]苯甲酰基，4-[4-(己炔基)苯基]苯甲酰基，4-[4-(苯乙烯基)苯氧基]苯甲酰基，4-[4-[4-[(4-甲基哌啶子基)乙氧基]苯基乙炔基]苯基]苯甲酰基等。
其中R4是-O-(CH2)r-W-R5的酰基基团可以与无机或矿物酸以及有机酸生成哌啶和哌嗪杂环基团之碱性氨基的酸加成盐，所述无机或矿物酸例如是盐酸，氢溴酸，硫酸和磷酸，有机酸例如是磺酸，苯磺酸，对甲苯磺酸，甲磺酸，乙酸，氯乙酸，三氟乙酸，苯甲酸，间苯二甲酸，水杨酸，柠檬酸，马来酸，琥珀酸，丙二酸等。
下面的表1提供了式I环肽上R2酰基的其它例子。
表1R2
表1(续)R2
表1(续)R2
表1(续)R2
表1(续)R2
表1(续)R2
优选的酰基R2包括下式基团
其中Z是-C≡C-，-CH＝CH-，-CH2-CH2-，或键；A)R4是氢，C1-C12烷基，C1-C12取代的烷基，C2-C12链烯基，C2-C12取代的链烯基，C2-C12链炔基，C2-C12取代的链炔基，C1-C12烷氧基，C3-C12环烷基，C7-C10双环烷基，C7-C14三环烷基，C3-C12环烷基氧基，萘基，吡啶基，噻吩基，苯并噻吩基，喹啉基或苯基；或B)R4是下列基团取代的苯基氨基，C1-C12烷硫基，卤素，C1-C12烷基，C2-C12链烯基，C2-C12链炔基，C1-C12取代的烷基，C2-C12取代的链烯基，C2-C12取代的链炔基，C1-C12烷氧基，三氟甲基，苯基，取代的苯基，或下式基团-O-(CH2)m-[O-(CH2)n]p-O-(C1-C12烷基)，其中m，n和p如上定义；或者C)R4是下列基团取代的C1-C12烷氧基卤素，C3-C12环烷基，C7-C10双环烷基，C7-C14三环烷基，C1-C6烷氧基，C2-C12链炔基，氨基，C1-C4烷基氨基，二(C1-C4烷基)氨基，甲酰氨基，C2-C12烷酰氨基，或者被式-O-(CH2)m-[O-(CH2)n]p-O-(C1-C12烷基)基团取代的苯基，其中m，n和p如上定义；或者D)R4是-O-(CH2)r-W-R5；r是2，3，或4；W是吡咯烷子基，哌啶子基，哌嗪子基；R5是氢，C1-C12烷基，C3-C12环烷基，苄基或C3-C12环烷基甲基；或E)R4是-Y1-R6；Y1是-C≡C-或-CH＝CH-；R6是C3-C12环烷基，C7-C10双环烷基，C7-C14三环烷基，C3-C12环链烯基，萘基，苯并噻唑基，噻吩基，2，3-二氢化茚基，芴基，或者被C1-C12烷硫基，C2-C12链烯基，C2-C12链炔基，卤代(C1-C6烷氧基)或式-O-(CH2)r-W-R5基团取代的苯基，其中r，W和R5如上定义；或者R6是式-O-(CH2)m-[O-(CH2)n]p-O-(C1-C12烷基)基团取代的苯基，其中m，n和p如上定义；或者F)R4是式-NHC(O)R7基团取代的C1-C12烷氧基；R7是C1-C6烷氧基，或苯基(C1-C6烷氧基)；或者其可药用的盐。
最优选下式酰基R2
其中Z是-C≡C-或键；或其可药用的盐。
下面的表2提供了式I环肽中的优选酰基R2。
表2R2
表2(续)R2
本发明优选的化合物是式I化合物，其中R′，R″，R_各自是甲基；Ry1，Ry2，Ry3，Ry4各自是羟基；或其可药用的盐。
这些化合物中最为优选的是其中Rx1和Rx2是氢的式I化合物；或其可药用的盐。
式I化合物可以根据下面的反应路线I而制备。
反应路线I
其中
Rnat是天然存在的环肽侧链；R是羟基；Rb是羟基保护基；R′，R″，R_，Rx1，Rx2，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4，R，R0，和R2如上文所定义。
上面的反应路线I是按反应A-C(或A-C_)依次进行的。一旦一个反应完成，则中间体化合物可以用本领域已知的方法分离，例如，化合物可以结晶后过滤收集，或者通过萃取，蒸发或倾析去除反应溶剂。如果需要，在进行反应路线下一步反应之前可以通过常规技术例如结晶或通过固体载体色谱如硅胶，氧化铝等将中间体化合物进一步纯化。
在反应IA中，用本领域已知的方法将式(IA)天然存在的环肽脱酰化得到式(IB)氨基核心。该反应一般通过将该天然存在的环肽暴露于脱酰酶，应用酶酰化作用进行。脱酰酶可以从微生物犹他游动放线菌(Actinoplanes utahensis)获得，并且基本上根据这里引入作为参考的美国专利No.4293482和4304716中的说明而使用。脱酰酶也可以从假单孢菌(Pseudomonas)获得。脱酰作用可以通过用犹他游动放线菌或假单孢菌全细胞或其粗产物酶或纯化的酶或该酶的固定化形式进行。参见欧洲专利申请No.0460882(1991-12-11)。可以用作起始物的天然存在的环肽的例子包括脱水簕钩内酯(棕榈酰侧链)，四氢心形海胆蛋白B(硬脂酰侧链)，mulundocandin(支化的C15侧链)，L-671329(C16支化的侧链)，S31794/F1(十四酰基侧链)，sporiofungin(C15支化的侧链)，FR901379(棕榈酰侧链)等。优选的天然存在的环肽是心形海胆蛋白B(一种式(IA)化合物，其中R′，R″，R_各自是甲基，，Rx1，Rx2各自是羟基，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4各自是羟基，R是羟基，R2是亚油酰基)。
在反应IB中，得到的氨基核心然后用本领域已知的方法再酰化得到其中R2是如上定义的酰基的式I化合物。
例如，氨基核心可以通过与合适的取代的酰卤反应而被酰化，优选存在酸清除剂例如一种叔胺如三乙胺。反应一般在大约-20℃-大约25℃温度下进行。反应的典型的溶剂包括极性质子惰性溶剂例如二噁烷或二甲基甲酰胺。对溶剂的选择并不严格，只要使用的溶剂对正在进行的反应是惰性的，而且反应物能够充分溶溶解以促进所期反应。
氨基核心也可以通过在偶联剂存在下与合适的取代的羧酸反应而被酰化。典型的偶联剂包括二环己基碳化二亚胺(DCC)，N，N′-碳酰二咪唑，双(2-氧代-3-噁唑烷基)次磷酰氯(BOP-Cl)，N-乙氧羰基-2-乙氧基-1，2-二氢喹啉(EEDQ)，苯并三唑-1-基氧三吡咯烷磷鎓六氟磷酸盐(PyBOP)等。
另外，氨基核心可以用羧酸(RCOOH)的活性酯酰化，例如式R2-COOH羧酸的对硝基苯酯，2，4，5-三氯苯酯，羟基苯并三唑一水合物的酯(HOBT.H2O)，五氟苯酚酯，N-羟基琥珀酰亚胺酯等。优选的酰化部分是R2COOH羧酸的活性酯，例如2，4，5-三氯苯酯和HOBT酯。反应一般在质子惰性溶剂中在大约0℃-大约30℃的温度下反应1-65小时。当在大约15℃-大约30℃温度下进行时，反应一般在大约24-48小时后完成。用于该反应的典型的溶剂是四氢呋喃和二甲基甲酰胺或这些溶剂的混合物。氨基核心一般以相对于活性酯的等摩尔比例或者稍微过量于氨基核心的量使用。
在反应IC中，式(IC)化合物通过与合适的取代的磷酸烷基酯或苯酯反应而被磷酸化得到其中R0是-P(O)2OH-R1，R1是C1-C6烷氧基或苯氧基的式I化合物，或者与合适的取代的膦酸烷基酯或苯酯反应得到其中R0是P(O)2OH-R1，R1是C1-C6烷基(一种合适的取代的苯基或苄基部分)的式I化合物。反应在存在有一种碱的条件下进行，所述碱例如三甲基硅烷醇锂(LiOTMS)，双(三甲基硅烷基)氨化锂(LHMDS)，吡啶等。反应一般在质子惰性溶剂如四氢呋喃和二甲基甲酰胺中在大约-30℃-大约0℃的温度下进行至多1小时。当在这些条件下进行时，反应一般在大约15分钟内完成。磷酸酯或膦酸酯反应物一般在等摩尔或稍过量碱的存在下以相对于氨基核心的等摩尔比例至大约1摩尔过量的量使用。带有未保护的胺化的羟基(Rx1和Rx2)的氨基核心的磷酸化作用一般在大约-30℃-大约-15℃的温度下进行。
或者，在反应(IC′)中，其中Rx1和/或Rx2是羟基的式(IC)酰化的核心可任选地用本领域已知的方法用羟基保护基保护。例如，一般情况下，反应在相互惰性的溶剂中，在大约0℃-大约40℃的温度范围内，存在催化剂下，使式(IC)化合物与合适的羟基保护基结合，反应大约进行1-5小时。羟基保护基的用量一般是大约相对于式(IC)化合物等摩尔比至100摩尔过量。优选大摩尔过量。合适的催化剂包括强酸例如对甲苯磺酸，樟脑磺酸(CSA)，盐酸，硫酸，三氟乙酸等。适用于该反应的一般溶剂包括任何有机溶剂例如二噁烷。溶剂的选择不严格，只要使用的溶剂对正在进行的反应是惰性的，而且反应物足以被溶解以促进所需反应。反应优选在大约20℃-大约30℃的温度范围内进行大约2-4小时。没有必要保护式(IC)二去氧化合物，即其中Rx1和Rx2是氢的式(IC)化合物。
如上文反应IC的说明进行反应IC″。
在反应IC_中，根据本领域已知的方法去除用来保护上面反应IC′中胺化的羟基部分的羟基保护基，得到所需式I化合物。例如，保护基可以通过与路易斯酸在相互惰性的有机溶剂如二氯甲烷中反应而被去除。路易斯酸的例子包括三甲基甲硅烷基溴，三氟化硼乙醚化物等。反应一般在大约0℃-大约40℃的温度下进行，优选在大约20℃-大约30℃的温度下进行。优选的路易斯酸是三氟化硼乙醚化物。
用来制备本发明化合物的环肽可以通过发酵已知的微生物而制备。例如，其中R′，R″和R_是甲基，RX1和RX2是羟基，RY1，RY2，RY3，RY4是羟基，R是羟基的式(IB)环肽(相应于A-30912A环形核心)可以使用这里引入作为参考的Abbott等的美国专利登记号No.4293482中详细说明的方法制备。其中R′，R″和R_是甲基，RX1是羟基，Rx2是氢，RY1，RY2，RY3，RY4是羟基，R是羟基的式(IB)环肽(相应于A-30912B环形核心)可以使用这里引入作为参考的Abbott等的美国专利登记号No.4299763中详细说明的方法制备。其中R′，R″和R_是甲基，RX1和RX2是氢，RY1，RY3和RY4是羟基，RY2是氢，R是羟基的式(IB)环肽(相应于A-30912D环形核心)可以使用这里引入作为参考的Abbott等的美国专利登记号No.4299762中详细说明的方法制备。脱水簕钩内酯可以使用这里引入作为参考的Mizuno等的美国专利登记号No.3978210中详细说明的方法制备。其中R′是-CH2C(O)NH2，R″是甲基，和R_是氢，RX1，RX2，Rx2，RY3，RY4是羟基，R是羟基的式(IB)环肽可以通过将用这里引入作为参考的Shieh-Shung等的美国专利登记号No.5198421中详细说明的方法制备的环肽脱酰化而制备。
式I的二去氧化合物通过去除苄基化和胺化的羟基(分别是RX2和RX1)而制备。羟基可以通过用一种强酸和一种还原剂在-5℃至70℃之间的温度下在合适的溶剂中处理式I未二去氧的化合物而被去除。典型的强酸包括三氯乙酸，三氟乙酸或三氟化硼乙醚化物。优选的强酸是三氟乙酸。典型的还原剂包括氰基硼氢化钠或三乙基硅烷。优选的还原剂是三乙基硅烷。合适的溶剂包括二氯甲烷，氯仿或乙酸，优选二氟甲烷。强酸应该以每摩尔底物2-60mol的量存在，还原剂应该以每摩尔底物2-60mol的量存在。该方法使选择性去除胺化的和苄基化的羟基。
R2-COOH前体酸通过水解式R2-CN的腈或式R2-COO(C1-C4烷基)的酯而制备。该腈和酯中间体可以用本领域已知的方法制备。
例如，其中R2是烷氧基芳基部分的腈和酯中间体可以用下面说明的方法A或方法B制备。
方法A向含有1当量碱例如叔丁醇钾或碳酸钾和1当量羟基芳基化合物的混合物的200-300ml乙腈中加入1当量烷基溴化物，碘化物或对甲苯磺酸烷基酯。所得反应混合物回流大约6小时后真空浓缩得一残余物。该残余物溶解于乙醚和2N氢氧化钠溶液的混合物中。分离各层，有机层用硫酸镁干燥，过滤，干燥，得到所需烷氧基芳基产物。
方法B室温下10分钟内向含有1当量羟基芳基化合物，1当量烷基醇和1当量三苯基膦的混合物的200-300ml四氢呋喃中滴加1当量偶氮二甲酸二乙酯。大约17小时后真空去除溶剂得一残余物。该残余物溶解于乙醚中。所得混合物用2N氢氧化钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得到一产物后从乙醚/戊烷混合物中结晶，或者，如果该产物包含叔胺，则生成盐酸盐，并从甲醇/乙酸乙酯混合物中结晶。
使用下面的方法C可以制备其中R2是链炔基或链烯基芳基基团的腈和酯中间体。
方法C氮气下向含有1当量芳基溴化物，碘化物或三氟甲磺酸共香酯的乙腈溶液(600ml/0.1mol芳基反应物)中加入含有2当量三乙胺，0.05当量二氯化钯，0.1当量三苯基膦，0.025当量碘化亚铜和1当量炔或2当量烯烃的混合物，反应混合物回流大约17小时后真空去除溶剂得一残余物。该残余物溶在300ml乙醚中成浆状物后过滤去除固体。所得滤液用1N盐酸溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，然后干燥，得到所需产物。
使用下面的方法D可以制备其中R2是三联苯基的酯中间体。
方法D1.生成硼酸反应物向冷的(-78℃)1当量芳基卤化物的四氢呋喃溶液中加入丁基锂(1.2当量)。大约15分钟后，加入2当量硼酸三异丙酯。大约10分钟后，将反应混合物升至室温，然后加入水，再加入1N盐酸溶液终止反应。分离各层，真空浓缩有机层得到一固体。过滤收集固体后用己烷洗涤，得到纯的硼酸产物。2.生成三联苯酯向含有1当量芳基硼酸，1.5当量碳酸钾和1当量4-碘代苯甲酸甲酯(或碘代苯甲酸三氯苯酯)混合物的充入氮气的甲苯中加入四(三苯基膦)钯(0.03当量)。反应混合物回流大约7小时后倾析去除碳酸钾并真空干燥得到一残余物。该残余物在乙腈中研制后过滤得到所需固体产物。
上述芳基腈或酯可以通过使用下面的方法E或F水解转化成相应的羧酸。
方法E芳基腈溶解于乙醇和过量的50％氢氧化钠溶液中，回流大约2小时，向所得反应混合物中加入水直到有固体沉淀生成。过滤收集该固体，加入到二噁烷/6N盐酸混合物中。所得混合物回流大约17小时。当反应基本完全时加入水结晶羧酸产物，然后过滤收集并真空干燥。
方法F向芳香酯的甲醇溶液中加入过量2N氢氧化钠溶液，所得溶液回流大约5小时后加入过量盐酸酸化。向所得反应混合物中加入水得到固体沉淀(羧酸)。过滤收集该羧酸并真空干燥。
这些羧酸可以利用下面的方法G转化成相应的2，4，5-三氯代苯酯。然后这些活性酯按上面反应路线IC所描述的方法被用来酰化氨基核。
方法G将含有1当量芳基羧酸，1当量2，4，5-三氯代苯酚，和1当量N，N′-二环己基碳化二亚胺(DCC)混合物的二氯甲烷溶液搅拌大约17小时后过滤。浓缩滤液得到一残余物。该残余物溶解于乙醚，过滤，加入戊烷直到开始结晶。过滤收集结晶产物并真空干燥。
下面的制备例和实施例进一步说明怎样合成本发明化合物。术语熔点，质子核磁共振谱，质谱，红外光谱，紫外光谱，元素分析，高效液相色谱，和薄层色谱分别缩写为“m.p”，“NMR”，“MS”，“IR”，“UV”，“Analysis”，“HPLC”，和“TLC”。另外红外光谱中列出的最大吸收值只是所感兴趣的那些而不是所发现的全部的最大吸收峰。
与NMR谱相关使用了下面的缩写“s”是单峰，“d”是双峰，“dd”是双重双峰，“t”是三峰，“q”是四重峰，“m”是多重峰，“dm”是多重双峰，“br.s”，“br.d”，“br.t”和“br，m”分别是宽单峰，宽双峰，宽三峰，和宽多峰。“J”表示以赫兹表示的耦合常数(Hz)。除非另有说明，NMR数据指化合物的游离碱。
核磁共振谱使用General Electric QE-300 300MHz仪获得。化学位移以(δ)值表示(以三甲基硅烷作参照，每百万低磁场位移份数)。
制备例1基本上根据上文详细说明的方法A制备其中R2是烷氧基芳基部分的下面的腈和酯中间体。
表A
表A(续)
制备例2基本上根据上文详细说明的方法B制备其中R2是烷氧基芳基部分的下面的腈和酯中间体。
表B
制备例3基本上根据上文详细说明的方法C制备其中R2是链炔基或链烯基芳基部分的下面的酯中间体。
表C
表C(续)
制备例4基本上根据上文详细说明的方法D制备其中R2是三联苯基部分的下面的酯中间体。
表D.1
表D.2
制备例5基本上根据上文详细说明的方法G制备下面活化酯。
表6
表G(续)
表G(续)
表G(续)
实施例1环肽核的N-酰化作用下面表3中列出的N-酰基环肽衍生物通过将心形海胆蛋白B(A-30912A)核(其中R′，R″，R_各自是甲基，，Rx1和Rx2各自是羟基，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4各自是羟基，R是羟基的式IB化合物)，和制备例6中描述的活性酯(2，4，5-三氯苯酚酯)中间体溶解于25-50ml二甲基甲酰胺而制备。所得反应混合物在室温搅拌大约17-65小时后真空去除溶剂得到一残余物。将该残余物溶于乙醚成浆状物，过滤收集，用二氯甲烷洗涤后溶解于甲醇或1∶1(v/v)乙腈/水混合物。所得溶液进行反相HPLC(C18；洗脱剂是含有0.5％一代磷酸铵的20-40％乙腈水溶液(w/v)；20ml/min.；230nm)。去除没有反应的A30912A核后用乙腈水溶液洗脱剂从柱子上洗脱下来所需要的产物。合并含有所需产物的级分后真空浓缩或冷冻干燥得到所需酰化的核。产物可以用反相HPLC(C18；洗脱剂是含有0.5％一代磷酸铵的40％乙腈水溶液(w/v)；2ml/min.；230nm)或用MS(FAB)分析。
例如下面的表3II中列出的化合物基本上根据该方法制备，使用溶解于8.5L二甲基甲酰胺的348.1g(60.2mmol)A30912A核，26.0g(48.2mmol)[(4″-戊基氧)-1，1′4′，1″-三联苯]-4-羧酸的2，4，5-三氯苯酚酯。所得反应混合物反应大约48小时后真空浓缩，并用HPLC纯化得到18g 3II化合物。MS(FAB)1140.5103(M+1).
基本上根据上述方法制备化合物A-PP(下面表3列出)。
表3
*(m-1)+[Na]+；**(m+1)；***m+[Na]+；↑m+1；↑↑m+[Li]+.
表3(续)
*[m-1)+[Na]+；**(m+1)；***m+[Na]+；↑m+1；↑↑m+[Li]+.
表3(续)
*(m-1)+[Na]+；**(m+1)；***m+[Na]+；↑m+1；↑↑m+[Li]+.表3(续)
*(m-1)+[Na]+；**(m+1)；***m+[Na]+；↑m+1；↑↑m+[Li]+.
实施例2二去氧西洛芬净向10.00g(9.71mmol)西洛芬净的100ml二氯甲烷悬浮液中加入溶解于50ml二氯甲烷的96ml(602mmol)三乙基硅烷溶液。然后，在15分钟内缓慢加入溶解于50ml二氯甲烷的46.4ml(602mmol)三氟乙酸。所得反应物溶液在室温搅拌大约2小时后真空浓缩得到一残余物。该残余物用乙醚研磨后用反相HPLC(C18；梯度洗脱剂是10-20％乙腈水溶液(v/v)；500psi)纯化。合并含有所需产物的级分，真空浓缩后从对二噁烷中冷冻干燥得到所需标题化合物。产率6.66g(68.7％)。MS(FAB)C49H72N7O15计算值998.5086；实测值998.512；UVλ(EtOH)nm(ε)202.60(61012)，256.20(18569)实施例3制备二去氧化合物，其中R′， R″和R_各自是甲基，Rx1和Rx2各自是羟基，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4各自是羟基，R是羟基，R2是表3II列出的酰基基团向250ml二氯甲烷中的5g(4.4mmol)表3II化合物和17ml三氟乙酸的混合物中加入35ml三乙基硅烷。用HPLC(C18；洗脱剂是55％乙腈；2ml/min.；280nm；RT(起始物)＝4.19min；RT(产物)＝6.40min.)监测反应基本完成时真空浓缩反应混合物得到一固体。该固体溶于100ml 50％丙酮水溶液成浆状物后通过将混合物调节至大约pH7而溶解。产物溶液倒入大体积水中(大约1升)，结果沉淀出白色固体。该固体通过烧结玻璃板漏斗过滤，乙醚洗涤后在55℃真空干燥得到3.718g标题化合物。用甲醇冲洗漏斗收集残留固体，真空干燥，另外得到0.154g标题化合物。产率3.872g(79％)。MS(FAB)m/e 1108.7(M)HPLC(C18；洗脱剂是55％乙腈；2ml/min.；280nm；RT＝6.40min.)
实施例4制备二去氧环己肽类化合物基本上根据实施例3详细说明的方法制备下面的二去氧化合物，使用指定量的式IC化合物，其中R′，R″和R_是甲基，Rx1和Rx2是羟基，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4是羟基，R是羟基，R2如表中指定，使用三乙基硅烷(TES)和三氟乙酸(TFA)。
表4
实施例5制备化合物，其中R′，R″和R_各自是甲基，Rx1和Rx2各自是羟基，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4各自是羟基，R0是膦酸乙酯，R2是表3II指定的酰基基团A.保护室温下向50ml二噁烷中的2.00g(1.75mmol)表3II化合物的溶液中加入25ml(175mmol)2-(三甲基甲硅烷基)乙醇和对-甲苯磺酸(15mol％)。所得反应混合物在室温反应大约3小时。根据HPLC监测反应基本上完全时用固体碳酸氢钠终止反应并过滤，用反相HPLC(50％乙腈/50％水；50ml/min.；280nm)从滤液中分离所需标题化合物。B.生成膦酸乙酯衍生物向10ml四氢呋喃中的234.1mg(0.191mmol)实施例5A标题化合物的冷溶液(0℃)中滴加0.21ml(0.210mmol)1.0M双(三甲基甲硅烷基)氨化锂(LHMDS)的己烷溶液。反应混合物搅拌大约20分钟后滴加24.5μl(0.223mmol)乙基膦酸二氯化物。反应混合物搅拌大约30分钟，用1ml水终止后真空浓缩得到白色固体。产量42mg。HPLC(洗脱剂是50％乙腈/50％水；50ml/min.；280nm；)RT＝1.37C.去保护向20ml二氯甲烷中的40.0mg(0.028mmol)实施例5B标题化合物的混合物中滴加35μl(0.28mmol)三氟化硼乙醚化物。反应混合物反应大约30分钟后用1.0ml水终止，生成白色沉淀。反应混合物用乙醚研磨后过滤得到浅黄色固体。产量12mg。MS(FAB)1238.6(M+Li)。
实施例6制备化合物，其中R′，R″和R_各自是甲基，Rx1和Rx2各自是羟基，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4各自是羟基，R0是膦酸甲酯，R2是表3II指定的酰基基团A.生成膦酸甲酯衍生物基本上根据实施例5B详细说明的方法制备小标题化合物，使用271.1mg(0.221mmol)实施例.5A标题化合物，0.24ml(0.24mmol)1.0MLHMDS的己烷溶液和10ml四氢呋喃中的35.3mg(0.266mmol)甲基膦酸二氯化物得到40mg粗产物，不用进一步纯化即可使用。B.去保护基本上根据实施例5C详细说明的方法制备小标题化合物，使用实施例6A分离的化合物和35μl(0.28mmol)三氟化硼乙醚化物得到白/灰色固体。MS(FAB)1200.5(M-H2O)。
实施例7制备化合物，其中R′R″和R_各自是甲基，Rx1和Rx2各自是羟基，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4各自是羟基，R0是膦酸苯酯，R2是表3II指定的酰基基团A.生成膦酸苯酯衍生物基本上根据上面实施例5B详细说明的方法制备小标题化合物，使用359.6mg(0.294mmol)实施例5A标题化合物，0.333ml(0.323mmol)1.0M LHMDS的己烷溶液和50μl苯基膦酸二氯化物得到52mg粗产物，不用进一步纯化即可使用。B.去保护基本上根据实施例5C详细说明的方法制备小标题化合物，使用实施例6A分离的化合物和361μl三氟化硼乙醚化物得到亮黄色固体。产量32mgMS(FAB)1262.4(M-H2O)。
实施例8制备化合物，其中R′，R″和R_各自是甲基，Rx1和Rx2各自是氢，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4各自是羟基，R0是磷酸异丙酯，R2是表3II指定的酰基基团A.二氯磷酸异丙酯氮气下向5ml四氯化碳中的1.55g(16.6mmol)亚磷酰氯的溶液中加入1.28ml(16.6mmol)异丙醇，结果使温度升高。必要时使用冰浴使温度保持在20℃和35℃之间。所得反应混合物在氮气下室温反应大约7小时。所得混合物真空浓缩得一澄清的油状物。产量1.9g(65％)。B.生成磷酸异丙酯衍生物向10ml四氢呋喃中的0.5g(0.45mmol)实施例3标题化合物的冷溶液(0℃)和54μl(0.54mmol)三甲基硅烷醇锂(LiOTMS)中加入88mg(0.5mmol)实施例8A小标题化合物。反应混合物搅拌大约10分钟。向反应混合物中加入另外的LiOTMS直到混合物pH为碱性。当根据HPLC监测反应基本上完全后用水终止反应，搅拌大约1小时后真空浓缩得到黄色固体。该固体用HPLC(洗脱剂是45％乙腈/45％水/10％三氟乙酸(1％水溶液))纯化得到白色固体。产量105mg。MS(FAN)1230.4(M+)实施例9制备化合物，其中R′，R″和R_各自是甲基，Rx1和Rx2各自是氢，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4各自是羟基，R0是磷酸丁酯，R2是表3II指定的酰基基团A.二氯磷酸丁酯基本上根据实施例8A详细说明的方法制备所需的小标题化合物，使用1.25ml(13.5mmol)亚磷酰氯，5ml四氯化碳中的1g(13.5mmol)丁醇，得无色油状物。B.生成磷酸丁酯衍生物基本上根据实施例8B详细说明的方法制备所需的小标题化合物，使用0.5g(0.45mmol)实施例3标题化合物，LiOTMS和95mg(0.50mmol)实施例9A小标题化合物得到黄色固体。该固体用反相HPLC(梯度洗脱剂是45％乙腈/45％水/10％三氟乙酸(1％水溶液)至50％乙腈/40％水/10％三氟乙酸(1％水溶液))纯化得到126mg所需产物。MS(FAN)1244.4(M+)实施例10制备化合物，其中R′，R″和R_各自是甲基，Rx1和Rx2各自是氢，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4各自是羟基，R0是磷酸甲酯，R2是表3II列出的酰基基团向5ml四氢呋喃中的500mg(0.45mmol)实施例3标题化合物和0.5ml(0.5mmol)TiOTMS的混合物中加入0.075ml(0.75mmol)二氯磷酸甲酯，得到不溶解的固体物质。用HPLC(洗脱剂是70％乙腈；2ml/min.；280nm；)监测反应，向反应混合物中加入另外的0.7ml TiOTMS和0.02ml二氯磷酸甲酯，当用HPLC(洗脱剂是含有0.1％三氟乙酸的50％乙腈；2ml/min.；280nm；)监测反应基本完成时，用HPLC(洗脱剂是含有0.1％三氟乙酸的40％乙腈；90ml/min.；280nm；)分离所需化合物。合并含有所需化合物的级分并真空浓缩得到232mg标题化合物(纯度81％，HPLC)。该化合物用HPLC(梯度洗脱剂是30％→35％→40％含有0.1％三氟乙酸的乙腈；90ml/min.；280nm；)纯化得到109mg标题化合物(94％纯度)MS(FAB)m/e 1202.6(M+)实施例11制备化合物，其中R′，R″和R_各自是甲基，Rx1和Rx2各自是氢，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4各自是羟基，R0是膦酸己酯，R2是表3II指定的酰基基团向5ml四氢呋喃中的1g(0.902mmol)实施例3标题化合物的冷混合物(0℃)中滴加1.35ml 1MLHMDS的四氢呋喃溶液(1.35mmol)。所得反应混合物搅拌大约30分钟后，加入309μl(1.804mmol)二氯磷酸己酯。使反应混合物升至室温后加入水。真空浓缩所得反应混合物至干得到所需标题化合物。
实测值1262.5979(M+Li)。
实施例12制备化合物，其中R′，R″和R_各自是甲基，Rx1和Rx2各自是氢，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4各自是羟基，R0是膦酸甲酯，R2是表3II指定的酰基基团基本上根据实施例11详细说明的方法制备标题化合物，使用221.9mg(0.200mmol)实施例3标题化合物和0.240ml 1MLHMDS的己烷溶液(0.240mmol)和20ml四氢呋喃中的35mg(0.26mmol)甲基膦酸二氯化物。产量44mg。MS(FAN)1192.2(M+Li)实施例13制备化合物，其中R′，R″和R_各自是甲基，Rx1和Rx2各自是羟基，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4各自是羟基，R0是磷酸甲酯，R2是表3II指定的酰基基团A.生成磷酸甲酯衍生物氮气下向5ml四氢呋喃中的400mg(0.32mmol)实施例5A小标题化合物和0.36ml(0.36mmol)LiOTMS(1M二氯甲烷溶液)的冷混合液(0℃)中加入0.04ml(0.4mmol)二氯磷酸甲酯。当用HPLC(洗脱剂是80％乙腈；2ml/min.；280nm；)监测反应基本完成时，向混合物中加入几份氢氧化锂。用HPLC(洗脱剂是含有0.1％三氟乙酸的60％乙腈；90ml/min.；280nm；)分离所需化合物。合并含有所需化合物的级分并真空浓缩得到129.8mg小标题化合物。产率30％HPLC(洗脱剂是含有0.1％三氟乙酸的65％乙腈；2ml/min.；280nm)RT＝4.28min.C.去保护向3ml二氯甲烷中的118mg(0.09mmol)实施例13A小标题化合物的冷混合物(0℃)中加入35μl(0.28mmol)三氟化硼乙醚化物。反应混合物反应大约10分钟后用几滴水终止，生成白色沉淀。反应混合物真空浓缩得到一残余物，该残余物在乙醚中呈浆状物，然后过滤得到固体。真空干燥。所得产物用HPLC(洗脱剂是含有1％三氟乙酸的50％乙腈；2ml/min.；280nm；RT＝3.92min)测定是92％的纯度。产量88mg(80％)。MS(FAB)1216.4(M-H2O)。
1256.3(M+Na)。
实施例14制备化合物，其中R′，R″和R_各自是甲基，Rx1和Rx2各自是羟基，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4各自是羟基，R0是磷酸乙酯，R2是表3II指定的酰基基团A.生成磷酸乙酯衍生物氮气下向5ml四氢呋喃中的400mg(0.32mmol)实施例5A小标题化合物和0.36ml(0.36mmol)LiOTMS(1M二氯甲烷溶液)的冷混合液(0℃)中加入0.47ml(0.4mmol)二氯磷酸乙酯。当用HPLC(洗脱剂是80％乙腈；2ml/min.；280nm；)监测反应基本完成时，向混合物中滴加大约0.5ml水。用HPLC(洗脱剂是含有0.1％三氟乙酸的60％乙腈；90ml/min.；280nm；)分离所需化合物。合并含有所需化合物的级分并真空浓缩得到残余物，该残余物在乙醚中呈浆状物，然后过滤得到67.8mg固体。所得产物用HPLC(洗脱剂是含有0.1％三氟乙酸的65％乙腈；2ml/min.；280nm；RT＝5.99min.)测定是71％的纯度。C.去保护基本上根据实施例13B详细说明的方法制备所需标题化合物，使用二氯甲烷中的67.8mg实施例14A小标题化合物和0.1ml(0.81mmol)三氟化硼乙醚化物。所得产物用HPLC(洗脱剂是含有0.1％三氟乙酸的50％乙腈；2ml/min.；280nm；RT＝5.85min.)测定是89％的纯度。产量51mg。MS(FAB)1230.3(M-H2O)。
式I化合物具有比先前已知的N-酰基环肽杀真菌化合物改进的性质。例如，本发明化合物具有提高的口服生物利用度，这是全身杀真菌化合物的一个重要的性质。另外，本发明化合物具有相对于先前已知的化合物之提高的杀真菌活性和提高的水溶性。
式I化合物具有杀真菌和杀寄生物活性。例如，式I化合物抑制多种感染真菌的生长，这些真菌包括假丝酵母属(Candida spp.)，如白色假丝酵母(C.albicans)，近平滑假丝酵母(C.parapsilosis)，克鲁斯氏假丝酵母(C.krusei)，光滑假丝酵母(C.glabrata)，或热带假丝酵母(C.tropicalis)，葡萄牙假丝酵母(C.lusitaniae)；球拟酵母属(Torulopusspp.)，如光滑球拟酵母(T.glabrata)；曲霉属(Aspergillus)，如烟曲霉(A.fumigatus)；组织胞浆菌属(Histoplasma spp.)，如荚膜组织胞浆菌(H.capsulatum)；隐球酵母属(Cryptococcus spp.)，如新型隐球酵母(C.neoformans)；芽生菌属(Blastomyces spp.)，如皮炎芽生菌(B.dermatitidis)；镰孢属(Fusarium spp.)；发鲜菌属(Trichophytonspp.)；Pseudallescheria boydii；粗球孢菌(Coccidioides immitis)，Sporothrix schenchii等。
试验化合物的杀真菌活性通过使用标准琼脂稀释试验或圆盘-扩散试验获得化合物的最小抑制浓度(MIC)而体外测定。然后在体内(小鼠)试验化合物，测定试验化合物控制全身真菌感染的有效剂量。
因此，试验下面化合物抗白色假丝酵母的杀真菌活性。
表5抗白色假丝酵母的最小抑制活性实施例序号MIC(μg/ml)5C 0.3126B 1.257B 2.58B ＞809B ＞8010 0.312
11 1.2512 0.03913B 0.62514B 0.625另外体内(小鼠)试验下面化合物控制全身真菌感染(白色假丝酵母)的有效剂量。
表5ED50(小鼠)实施例序号MIC(μg/ml)5C 1.256B 1.587B ＞2.58B 1.029B 0.3910 0.4711 0.31212 0.7913B 1.8614B 1.38本发明化合物也抑制某些生物体的生长，这些生物体是造成免疫抑制个体内的机会感染的主要原因。例如，本发明化合物抑制卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii)的生长，该囊虫是艾滋病和其它免疫缺陷患者间质性浆细胞肺炎(PCP)的成因生物体。被式I化合物抑制的其它原虫包括疟原虫属(Plasmodium spp.)，利什曼原虫属(Leishmania spp.)，锥体虫属(Trypanosoma spp.)，Cryptosporidium spp.，等孢虫属(Isospora spp.)，圆孢藻属(Cyclospora spp.)，毛滴虫属(Trichomonasspp.)，微孢子虫属(Microsporidiosis spp.)，等等。
式I化合物在体内和体外是有活性的，并且对抗全身真菌感染或真菌皮肤感染是有用的。因此，本发明提供了一种抑制真菌活性的方法，包括使式I化合物或其可药用的盐与真菌接触。优选的方法包括抑制白色假丝酵母或烟曲霉活性。本发明进一步提供了一种治疗真菌感染的方法，包括对需要治疗的宿主给予有效量的式I化合物或其可药用的盐。优选的方法包括治疗白色假丝酵母或烟曲霉感染。
有关杀真菌活性，术语“有效量”指能够抑制真菌活性的本发明化合物的量。给药剂量根据一些因素而变化，例如感染的性质和严重程度，宿主的年龄和一般健康条件，以及宿主对杀真菌剂的耐受力。具体剂量服法可以根据这些因素而变化，并且可以在一天内以单一日剂量或多剂量给药。给药可以持续大约2-3天至大约2-3周或更长时间。典型的日剂量(单一剂量或分开剂量给药)的剂量水平是大约0.01mg/kg-大约100mg/kg(本发明活性化合物重量/体重)。优选的日剂量一般是大约0.1mg/kg-大约60mg/kg，理想剂量是大约2.5mg/kg-大约40mg/kg。
本发明也提供了用于给药本发明杀真菌化合物的药物制剂。因此本发明也提供含有一种或几种可药用载体，稀释剂或赋形剂和权利要求1化合物的药物制剂。这些制剂中活性成分占制剂重量的0.1％-99.9％，一般为大约10％-大约30％重量。 可药用”指载体，稀释剂或赋形剂与制剂的其它成分相容，而且对其受药者无害。
式I化合物可以肠胃外给药例如肌内，皮下，或腹膜内注射，或经鼻给药，或口服方式给药。除这些给药方法外，式I化合物可以局部给药治疗皮肤感染。
对于肠胃外给药，制剂含有式I化合物和生理可接受稀释剂例如去离子水，生理盐水，5％葡萄糖和其它常规使用的稀释剂。制剂可以含有增溶剂，例如聚乙二醇或聚丙二醇或其它已知的增溶剂。这些制剂可以制成含有干粉或冻干粉末形式的杀真菌和赋形剂的无菌管形瓶。使用前，加入生理可接受稀释剂，通过针管将溶液注射给患者。
本发明药物制剂通过已知方法用已知的和容易获得的成分制备。在制备本发明组合物时，活性成分一般与一种载体混合，或者用一种载体稀释，或者包封在一种载体内生成胶囊，囊剂，纸剂或其它包含剂形式。当载体作为稀释剂时，其可以是作为赋形剂，载体或活性成分的基质而起作用的一种固体，半固体或液体材料。因此，本发明组合物可以是片剂，丸剂，粉剂，锭剂，囊剂，扁囊剂，酏剂，悬浮剂，乳剂，溶液，糖浆，气雾剂(作为固体或在液体基质中)，软膏剂，例如至多10％重量的活性成分，软或硬明胶胶囊，栓剂，无菌注射溶液，无菌包装粉剂等形式。
对于口服给药，杀真菌化合物装入明胶胶囊或制成片剂。这些片剂可以含有一种粘合剂，分散剂或其它适合制备合适大小剂量和式I特定杀真菌化合物的片剂的赋形剂。对于儿科或老年人使用，杀真菌化合物可以制成甜味的液体悬浮剂，溶液或乳剂。一种优选的口服制剂是亚麻仁油酸，克列莫佛RH-60和水，并且优选的量(体积比)是8％亚麻仁油酸，5％克列莫佛RH-60，87％无菌水和大约2.5-大约40mg/ml式I化合物。
对于局部使用，杀真菌化合物与一种干粉配制，用于皮肤表面，或者其可以配制成含有溶解的含水液体或不含水液体例如一种醇或二醇的液体制剂。
下面的制剂的例子只是为了详细说明而无论如何不是要限制本发明的范围。术语“活性成分”指式I化合物或其可药用盐。
制剂1使用下面成分制备硬明胶胶囊量(mg/胶囊)活性成分 250干淀粉 200硬脂酸镁 10总计 460mg制剂2使用下面成分制备片剂量(mg/片)活性成分 250微晶纤维素 400锻制的二氧化硅 10硬脂酸 5总计 665mg这些成分混合并压制成片，每片665mg。
制剂3制备含有下面成分的气雾剂溶液重量活性成分 0.25甲醇 25.75推进剂22(氯代二氟甲烷) 74.00总计 100.0活性化合物与乙醇混合，将混合物加到一部分推进剂22中，冷却至-30℃并转移到装填装置中。然后向不锈钢容器中送入需要的量，并用剩余的推进剂稀释。然后将阀门装到容器上。
制剂4如下制备每片含有60mg活性成分的片剂活性成分 60mg淀粉 45mg微晶纤维素 35mg聚乙烯吡咯烷酮(是10％水溶液) 4mg羧甲基淀粉钠 4.5mg硬脂酸镁 0.5mg滑石粉 1mg总计 150mg活性成分，淀粉和纤维素通过No.45目U.S.筛并充分混合。含有聚乙烯吡咯烷酮的水溶液与所得的粉末混合，然后将混合物通过No.14目U.S.筛。这样制得的颗粒在50℃干燥并通过No.18目U.S.筛。然后预先通过No.60目U.S.筛的羧甲基淀粉钠，淀粉，硬脂酸镁和滑石粉加入到颗粒中，混合后在压片机上压片，得到每片重150mg的片剂。
制剂5如下制备每一胶囊含有80mg活性成分的胶囊活性成分 80mg淀粉 59mg微晶纤维素59mg硬脂酸镁 2mg总计 200mg混合活性成分，纤维素，淀粉和硬脂酸镁，通过No.45目U.S.筛，以200mg的量装填到硬明胶胶囊中。
制剂6如下制备每粒含有225mg活性成分的栓剂活性成分 225mg饱和的脂肪酸甘油酯2000mg总计 2225mg活性成分通过No.60目U.S.筛，并悬浮于预先用必需的最少的热融化的饱和的脂肪酸甘油酯中，然后将混合物灌入规定2g容积的栓剂模中并使冷却。
制剂7如下制备每5ml剂量中含有50mg活性成分的悬浮剂活性成分 50mg羧甲基纤维素钠50mg糖浆 1.25ml苯甲酸溶液0.10ml调味剂适量颜料 适量纯化的水至总量5ml活性成分通过No.45目U.S.筛，并与羧甲基纤维素钠和糖浆混合生成光滑的粉末。用一部分水稀释苯甲酸溶液，调味剂和颜料，用一部分水稀释，搅拌下加入。然后加入足量的水达所需体积。
制剂8如下制备静脉内注射液活性成分 100mg等渗盐水 1000ml上述成分的溶液一般以1ml/min.的速度静脉内给药。
本发明进一步提供一种治疗或防止易患间质性浆细胞性肺炎宿主发生间质性浆细胞性肺炎的方法，包括给需要治疗的宿主施用有效量的式I化合物或其可药用盐。式I化合物可以预防性防止生物体卡氏肺囊虫引起的感染的发生或者其可以用来治疗已经被卡氏肺囊虫感染了的宿主。式I化合物可以肠胃外给药，例如，肌内，静脉内或腹膜内注射，口服或通过直接吸入肺呼吸道。一种优选的给药方式是吸入式I化合物的气雾喷雾制剂。
关于抗寄生物活性，术语“有效量”指能够抑制寄生物活性的本发明化合物的量。式I化合物的有效量是大约3mg/kg患者体重至100mg/kg患者体重。给药量可以是单一日剂量或多剂量，例如，不考虑治疗用法，每天2，3或4次给药。各剂量的量，运送途径，剂量频率，治疗方案根据一些因素变化，例如感染的强度和程度，患者的年龄和一般身体状况，患者对治疗的反应，患者对药物耐受力的好坏。已知艾滋病患者的间质性浆细胞肺炎由于感染的性质而非常难治。例如，严重的恶化的感染中，气道腔表面被感染物质堵塞，并且在肺组织中发生大量寄生物生长。恶化感染的患者因此需要大剂量长期给药。相反，不严重感染且易患间质性浆细胞肺炎的免疫缺陷患者可以用低剂量少次数预防性剂量治疗。
权利要求
1.式I化合物或其可药用盐
其中R′是氢，甲基或NH2C(O)CH2-；R″和R_独立地是甲基或氢；Rx1，Rx2，Ry1，Ry2，Ry3和Ry4独立地是羟基或氢；R0是下式基团
R1是C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，苯基，对-卤代苯基，对-硝基苯基，苯氧基，苄基，对-卤代苯甲基，或对硝基苯甲基；I)R2是下式基团
其中A)R3是C1-C12烷基，C1-C6烷氧基，或喹啉基；B)R3是-O-(CH2)m-[O-(CH2)n]p-O-(C1-C12烷基)；m和n独立地是2，3或4；p是0或1；或C)R3是-Y-(C1-C12烷基)；Y是-C≡C-或-CH＝CH-；或D)R3是-O-(CH2)q-G；q是2，3或4；G是C7-C10双环烷基或C7-C14三环烷基；或II)R2是下式基团
其中Z是-O-，-C≡C-，-CH＝CH-，-CH2-CH2-，-CH2-，或键；A)R4是氢，C1-C12烷基，C1-C12取代的烷基，C2-C12链烯基，C2-C12取代的链烯基，C2-C12链炔基，C2-C12取代的链炔基，C1-C12烷氧基，C3-C12环烷基，C7-C10双环烷基，C7-C14三环烷基，C3-C12环烷基氧基，萘基，吡啶基，噻吩基，苯并噻吩基，喹啉基或苯基；或B)R4是下列基团取代的苯基氨基，C1-C12烷硫基，卤素，C1-C12烷基，C2-C12链烯基，C2-C12链炔基，C1-C12取代的烷基，C2-C12取代的链烯基，C2-C12取代的链炔基，C1-C12烷氧基，三氟甲基，苯基，取代的苯基，或被下式基团取代的苯基-O-(CH2)m-[O-(CH2)n]p-O-(C1-C12烷基)，其中m，n和p如上定义；或者C)R4是下列基团取代的C1-C12烷氧基卤素，C3-C12环烷基，C7-C10双环烷基，C7-C14三环烷基，C1-C6烷氧基，C2-C12链炔基，氨基，C1-C4烷基氨基，二(C1-C4烷基)氨基，甲酰氨基，C2-C12烷酰氨基，或者被下式基团取代的苯基-O-(CH2)m-[O-(CH2)n]-O-(C1-C12烷基)，其中m，n和p如上定义；或者D)R4是-O-(CH2)r-W-R5；r是2，3，或4；W是吡咯烷子基，哌啶子基，哌嗪子基；R5是氢，C1-C12烷基，C3-C12环烷基，苄基或C3-C12环烷基甲基；或E)R4是-Y1-R6；Y1是-C≡C-或-CH＝CH-；R6是C3-C12环烷基，C7-C10双环烷基，C7-C14三环烷基，C3-C12环链烯基，萘基，苯并噻唑基，噻吩基，2，3-二氢化茚基，芴基，或者被C1-C12烷硫基，C2-C12链烯基，C2-C12链炔基，卤代(C1-C6烷氧基)或式-O-(CH2)r-W-R5基团取代的苯基，其中r，W和R5如上定义；或者R6是被式-O-(CH2)m-[O-(CH2)n]p-O-(C1-C12烷基)基团取代的苯基，其中m，n和p如上定义；或者F)R4是被式-NHC(O)R7基团取代的C1-C12烷氧基；R7是C1-C6烷氧基，或苯基(C1-C6烷氧基)；或者III)R2是下式基团
其中R8是C1-C12烷氧基，或式-O-(CH2)m-[O-(CH2)n]p-O-(C1-C12烷基)基团，其中m，n和p如上定义；或者IV)R2是下式基团
其中Y和R6如上定义；R9是苯基，C1-C12烷基，或C1-C12烷氧基；或者V)R2是被R4取代的萘甲酰基，其中R4如上定义。
2.权利要求1的化合物或者其可药用盐，其中R′，R″，R_各自是甲基；Ry1，Ry2，Ry3，Ry4各自是羟基；Rx1和Rx2是氢。
3.权利要求2的化合物或其可药用盐，其中R2是下式基团
其中Z是-C≡C-或键；A)R4是氢，C2-C12链炔基，C2-C12取代的链炔基，C1-C12烷氧基，C3-C12环烷氧基，或苯基；或B)R4是被下述基团取代的苯基C1-C12烷氧基，或式-O-(CH2)2-O-(C1-C6烷基)基团，或者C)R4是被下述基团取代的C1-C12烷氧基C3-C12环烷基，C7-C14三环烷基，C1-C6烷氧基，氨基，二(C1-C4烷基)氨基，甲酰氨基或被式-O-(CH2)2-O-(C1-C6烷基)基团取代的苯基，或者D)R4是-O-(CH2)r-W-R5；r是2或3；W是哌啶子基；R5是氢，C1-C12烷基，C3-C12环烷基，苄基或C3-C12环烷基甲基；或E)R4是-Y1-R6；Y1是-C≡C-；R6是被C1-C12烷硫基，C2-C12链烯基，C2-C12链炔基，卤代(C1-C6烷氧基)取代的苯基；或者R6是被式-O-(CH2)r-W-R5基团取代的苯基，其中r，W和R5如上定义；或者R6是被式-O-(CH2)2-O-(C1-C6烷基)基团取代的苯基；F)R4是被式-NHC(O)R7基团取代的C1-C12烷氧基；R7是C1-C6烷氧基，或苯基(C1-C6烷氧基)。
4.权利要求3的化合物或其可药用盐，其中R1是C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，苯基，对-氯-苯基，对-溴-苯基，或对-硝基-苯基，苄基，对-氯-苄基，对-溴-苄基，或对-硝基-苄基。
5.权利要求4的化合物或其可药用盐，其中R1是甲基，乙基，甲氧基，乙氧基，苯基，苄基。
6.权利要求5的化合物或其可药用盐，其中Z是键；R4是被正戊氧基取代的苯基；和R1是甲基。
7.一种药物制剂，含有权利要求1-6中任一项的式I化合物或其可药用盐以及其一种或几种可药用载体，稀释剂或赋形剂。
8.权利要求1-6中任一项的式I化合物或其可药用盐，其用作药物。
9.一种治疗哺乳动物真菌感染的方法，包括给予哺乳动物权利要求1-6中任一项的式I化合物或其可药用盐。
10.一种制备权利要求1-6中任一项的式I化合物或其可药用盐的方法，包括使式IC化合物
其中R′，R″，R_，Rx1，Rx2，Ry1，Ry2，Ry3，Ry4和R2如权利要求1中定义；与取代的C1-C6烷基磷酸，苯基磷酸，取代的C1-C6烷基磷酸酯或苯基磷酸酯反应；如果需要，接着生成可药用盐。
全文摘要
本发明提供式Ⅰ化合物的药物组合物,用式Ⅰ化合物抑制真菌和寄生物活性的方法,其中:R′是氢,甲基或式NH
文档编号A61K38/00GK1185739SQ96194199
公开日1998年6月24日 申请日期1996年4月3日 优先权日1995年4月7日
发明者P·S·博罗梅奥, J·A·贾米森, M·J·罗德里格茨, 小·W·W·特纳, V·瓦苏德万 申请人:伊莱利利公司