一种利用蔗糖酯辅助提取沙棘叶黄酮的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物天然产物领域，本发明涉及一种利用蔗糖酯辅助提取沙棘叶黄酮的方法。
【背景技术】
[0002]沙棘叶中黄酮类主要成分为槲皮素、异鼠李素、山奈酚及其苷类、杨梅酮、氯原酸、猪草苷、儿茶酸、黄芪苷等。沙棘黄酮具有抗肿瘤，保护心血管系统，提高机体免疫，抗氧化，镇痛等作用。目前对于黄酮类物质的提取方法主要有传统的溶剂提取法、超临界萃取、酶法提取、微波萃取以及超声波提取法。其中溶剂提取法是最常用的提取方法。沙棘黄酮提取方法都要使用大量有机溶剂，对环境压力大，不符合绿色、环保的发展理念，亟需开发新的沙棘叶黄酮提取方法。
[0003]鹿糖脂肪酸醋简称鹿糖醋(Sucrose Esters，简称SE)，是一种新型的多元醇型非离子型表面活性剂。蔗糖酯的蔗糖部分为亲水基，长链脂肪酸部分为亲油基。蔗糖酯具有良好的乳化、分散、增溶、润滑、渗透、起泡、粘度调节、防老化、抗菌等性能。同时，它还具有无毒、易生物降解等特性。现已被批准作为食品添加剂。蔗糖酯还广泛应用于医药、化工、石油开采、化肥、化妆品、制糖和果蔬保鲜等工业中。借助蔗糖酯的增溶作用，达到提高沙棘黄酮提取率的目的，为开发和利用沙棘叶中沙棘黄酮资源提新的更为绿色更加环保的方法。
[0004]
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种利用蔗糖酯辅助提取沙棘叶黄酮的方法。在提高沙棘叶黄酮提取率的同时，建立一种绿色环保、高效、快速的沙棘叶黄酮提取方法
本发明为实现上述目的，首先通过将生物表面活性剂与同类化学表面活性剂进行系统研宄，选取效果最好的生物表面活性剂。随后进行温度、乙醇浓度、料液比、提取时间以及表面活性剂种类等做单因素实验，并且通过进一步进行正交实验得出在较低浓度乙醇辅助提取的条件下蔗糖酯提取沙棘黄酮的最优条件。
[0006]本发明提供了一种利用蔗糖酯辅助提取沙棘叶黄酮的方法。本发明所具有的优点是(I)利用表面活性剂蔗糖酯通过在其表面或界面的吸附作用或在溶液中形成的分子聚合体而改变黄酮类物质在水溶液中的溶解性，提高活性成分的提取效率、降低提取成本；(2)该方法缩短了沙棘叶黄酮提取时间；(3)该方法降低了有机溶剂的使用量和提取温度，在节约能源的同时降低了对环境的污染。
【附图说明】
[0007]图1为表面活性剂对沙棘黄酮提取率的影响结果示意图；
图2为乙醇浓度对沙棘黄酮提取率的影响结果示意图；
图3为温度对沙棘黄酮提取率的影响结果示意图； 图4为提取时间对沙棘黄酮提取率的影响结果示意图。
[0008]【具体实施方式】:
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
[0009]若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0010]本发明所用沙棘叶为烘干沙棘叶，购自于青海康普生物科技有限公司，粉碎后经过筛分去除了尺寸较大的颗粒。
[0011]沙棘提取过程首先将沙棘叶干燥粉碎后按比例加入一定量表面活性剂和低浓度的乙醇提取液摇匀，在控温水浴中以160r/min的速度震荡提取一定的时间。再经对表面活性剂种类、乙醇浓度、提取时间、提取温度进行优化，具体过程如下:
I)沙棘黄酮检测方法的确立
黄酮的标准品为芦丁，精密配制芦丁对照品溶液浓度为0.2010mg/mL，各取0、1.0、
2.0,3.0,4.0,5.0,6.0mL各加5%乙醇稀释至6mL，各取ImL严格依照1.3.1的测量方法进行操作，并于波长510nm处测定吸光度，以吸光度对溶液浓度进行回归分析，所得回归方程为:Y=0.087X+0.000053，R~2=0.998。式中，Y 为黄酮浓度(mg/mL)，X 为吸光度。
[0012]2)表面活性剂种类对沙棘叶黄酮提取的影响
水浴温度为60°C，料液比1:50，分别使用5%乙醇辅助浸提，分别使用八种化学表面活性剂:十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、双-(2-乙己基)磺基丁二酸、聚氧乙烯月桂醚、十六烷基三甲基溴化铵、十二烷基三甲基氯化铵、吐温20和两种生物表面活性剂:鼠李糖酯、蔗糖酯浸提60min，考察和筛选最优表面活性剂。
[0013]3)乙醇浓度沙棘叶黄酮提取的影响
水浴温度为60°C，料液比1:50，蔗糖酯浓度为0.02g/mL，分别使用含有5%、10%、20%、40%、60%的乙醇溶液分别浸提lh。
[0014]4)水浴温度沙棘叶黄酮提取的影响
料液比1:50，蔗糖酯浓度为0.02g/mL，用5%乙醇辅助蔗糖酯在40°C、50°C、60°C、70°C、80°C的水浴温度下分别浸提lh。
[0015]5)提取时间沙棘叶黄酮提取的影响
料液比为1:50，蔗糖酯浓度为0.02g/mL，用5%乙醇辅助蔗糖酯在60°C的水浴温度下分别浸提 30min、lh、l.5h、2h、2.5h。
[0016]最终确定采用蔗糖酯作为表面活性剂对沙棘叶黄酮进行提取；添加乙醇浓度为5%，大大降低了提取过程中乙醇的使用量；提取温度为50-70摄氏度；提取时间为1.5小时。
[0017]进一步地，比较八种化学表面活性剂和两种生物表面活性剂对沙棘黄酮提取率的影响，包括十二烷基硫酸钠(AS)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、双(2-乙基己基)磺基丁二酸钠(AOT)、十二烷基三甲基氯化铵(DTAC)、十二烷基磺酸钠(SDS)、聚氧乙烯月桂醚(Brij-35)、吐温-20(Tween-20)、曲拉通X-1OO(X-1OO)、鼠李糖脂和蔗糖酯由图1可以看到提取率由 Brij-35>AS> 蔗糖酯 >SDS>A0T> 鼠李糖酯 >5% 乙醇 >X-100>Tween-20>CTAB>DTAC逐渐降低，同时X-100、Tween-20、CTAB和DTAC提取率低于5%乙醇提取率，即其除了不能促进沙棘黄酮的提取，反而对其有抑制作用。因此选择蔗糖酯进行后续试验。
[0018]进一步地，乙醇浓度对沙棘黄酮提取的影响
乙醇浓度对蔗糖酯提取沙棘黄酮的提取率影响的单因素实验结果如图2所示:用5%的乙醇提取时蔗糖酯的提取效率是最高的(此时蔗糖酯浓度为0.02g/mL)，此后随着乙醇浓度的提高其提取率反而降低，只有当乙醇浓度达到60%等高浓度的情况下，提取率才有所回升，但回升幅度较低。这与预期计划用5%的乙醇来提取而达到减小有机溶剂对环境的污染的目的恰好相契合，因此，选择5%的乙醇为本实验的最优条件。
[0019]进一步地，温度对沙棘黄酮提取的影响
温度对蔗糖酯提取沙棘黄酮单因素实验结果如图3所示，通过反复实验得出，控制其他因素不变，温度介于50~70摄氏度是最好的，当温度达到70摄氏度的时候提取率达到峰值，在温度小于40度时提取率与其他水平下温度相比，提取率明显较低，同样当温度高于80度时，提取率呈降低趋势，故蔗糖酯发挥表面活性剂功效的最优温度应介于50~70度之间。
[0020]进一步地，提取时间对沙棘黄酮提取的影响
提取时间对蔗糖酯提取率的影响单因素实验如图4所示，从30分钟到2.5h的提取时间内，提取率在1.5h的时候达到峰值，2小时的时候提取率有明显回落，但将提取时间延长至2.5h时，提取率又发生了突变性的增长且高于其他水平。其中在提取时间为lh、1.5h、
2.5h提取效率相对比较高。
[0021]实施例1。
[0022]比较八种化学表面活性剂和两种生物表面活性剂对沙棘黄酮提取率的影响，包括十二烷基硫酸钠(AS)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、双(2-乙基己基)磺基丁二酸钠(AOT)、十二烷基三甲基氯化铵(DTAC)、十二烷基磺酸钠(SDS)、聚氧乙烯月桂醚(Brij-35)、吐温-20(Tween-20)、曲拉通X-1OO(X-1OO)、鼠李糖脂和蔗糖酯由图1可以看到提取率由 Brij-35>AS> 蔗糖酯 >SDS>A0T> 鼠李糖酯 >5% 乙醇 >X-100>Tween-20>CTAB>DTAC逐渐降低，同时X-100、Tween-20、CTAB和DTAC提取率低于5%乙醇提取率，即其除了不能促进沙棘黄酮的提取，反而对其有抑制作用。因此选择蔗糖酯进行后续试验。
[0023]乙醇浓度对蔗糖酯提取沙棘黄酮的提取率影响的单因素实验结果如图2所示:用5%的乙醇提取时蔗糖酯的提取效率是最高的(此时蔗糖酯浓度为0.02g/mL)，此后随着乙醇浓度的提高其提取率反而降低，只有当乙醇浓度达到60%等高浓度的情况下，提取率才有所回升，但回升幅度较低。这与预期计划用5%的