流速 8mL/min，收集相关梯度的洗脱成分； (6) 将洗脱成分溶解在正丁醇-乙酸乙酯-水(体积比1. 25:3. 75:5)溶剂体系中，用超 声驻波液相制备色谱（200920274485. 8)分离纯化，超声波功率2. 0KW，频率lOOOKHz，流速 300mL/min，紫外检测器波长280nm ; (7) 纯化后的壁虎蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机在温度-30~50°C、时间18h干燥制备 成冻干蛋白粉。
[0032] 实施例5: 脂质体注射剂制备： (I)Imol磷脂酰丝氨酸用玻璃平面成型法制成薄膜后，加入1000~3000L生理盐水水合 处理，再用超声波在频率500~2000KHz、功率0. 01~5KW处理l~5min。
[0033] (2)取上述溶液l~100mL加入到含量0? 001~0. 01mol/L的 0?l~1000mLCaCl2溶液 中，在转速30~75r/min条件下搅拌10~30min，然后在25~50°C条件下静置30~120min。
[0034] (3)将生成物放置离心机中，在转速1500~3000r/min离心分离5~30min，将离 心物从离心机中取出后加入2~50g壁虎蛆虫蛋白质混合均匀，在10~25 °C条件下静置 10~120min。
[0035] (4)上述物体加入含有0. 01~10mol/L的乙二胺四乙酸的生理盐水溶液0. 1~10L 中，混合均匀静置30~180min，得到单层脂质体。
[0036] (5)取l~10mg单层脂质体与10~200mL生理盐水溶液混合，制备成为注射剂。
[0037] 实施例6: 脂质体注射剂制备： (I)Imol磷脂酰丝氨酸用玻璃平面成型法制成薄膜后，加入2000L生理盐水水合处理， 再用超声波在频率1000 KHz、功率2KW处理5min。
[0038] (2)取上述溶液50mL加入到含量0? 005mol/L的1000 mLCaCl2溶液中，在转速45r/ min条件下搅拌30min，然后在30°C条件下静置60min。
[0039] (3)将生成物放置离心机中，在转速2000r/min离心分离20min，将离心物从离心 机中取出后加入20g壁虎蛆虫蛋白质混合均匀，在15°C条件下静置60min。
[0040] (4)上述物体加入含有lmol/L的乙二胺四乙酸的生理盐水溶液5L中，混合均匀静 置80min，得到单层脂质体。
[0041] (5)取5mg单层脂质体与IOOmL生理盐水溶液混合，制备成为注射剂。
[0042] 实施例7: 肠溶胶囊的制备： 取10~100g壁虎蛆虫蛋白质、500~2000g预凝胶淀粉及5~50g乳糖充分混合，填充入羟 丙基甲基纤维素肠溶胶囊中制备成为壁虎蛆虫蛋白质肠溶胶囊。
[0043] 实施例8: 肠溶胶囊的制备： 取50g壁虎蛆虫蛋白质、1000 g预凝胶淀粉及30g乳糖充分混合，填充入羟丙基甲基纤 维素肠溶胶囊中制备成为壁虎蛆虫蛋白质肠溶胶囊。
[0044] 实施例9: 壁虎蛆虫蛋白质喷雾剂的制备： 取100~160g壁虎蛆虫蛋白质加入50~100g藻酸丙二醇酯混匀，加入5~10g丙三醇中研 磨均匀；将5~20g葡萄糖溶于2000~5000L注射用水，再将前述研磨物放入配制好的葡萄糖 溶液中混合均匀即成为药液。先将药液在室温下灌入喷雾容器内，再将阀门装上并扎紧，然 后压装机压入1000~2000L二氧化碳作抛射剂并加压0. 01~0. 05MPa，分装20000~50000个 喷雾剂瓶中。
[0045] 实施例10: 壁虎蛆虫蛋白质喷雾剂的制备： 取130g壁虎蛆虫蛋白质加入80g藻酸丙二醇酯混匀，加入6g丙三醇中研磨均匀；将 IOg葡萄糖溶于3000L注射用水，再将前述研磨物放入配制好的葡萄糖溶液中混合均匀 即成为药液。先将药液在室温下灌入喷雾容器内，再将阀门装上并扎紧，然后压装机压入 1500L二氧化碳作抛射剂并加压0. 03MPa，分装30000个喷雾剂瓶中。
[0046] 实施例11: 壁虎蛆虫蛋白质鼻粘膜给药系统的制备： 取0. 2~0. 5mg壁虎蛆虫蛋白质粉加入0. 01~0. 03mg氯化钠，溶于10~20mL注射用水中 摇匀，用时注射鼻腔即可，也可以滴鼻腔使用。
[0047] 实施例12: 壁虎蛆虫蛋白质鼻粘膜给药系统的制备： 取0. 4mg壁虎蛆虫蛋白质粉加入0. 02mg氯化钠，溶于15mL注射用水中摇匀，用时注射 鼻腔即可，也可以滴鼻腔使用。
[0048] 实施例13: 淋巴癌疾病分期： O期：癌灶局限于粘膜层，无淋巴结转移； I期：肿瘤局限于固有肌层以内，无淋巴结转移； n期：肿瘤浸润超过固有肌层，但无淋巴结转移； in期：淋巴结转移； IV期：远处转移(脑、肝、肺等）或腹膜转移。
[0049]治疗方法： 患者需严格限制用酒，按体重70Kg计，每天注射脂质体药剂1次，每次300~500呢，或 每天喷气雾剂3次，每次2~3mL，或每天用滴鼻剂4次，每次l~2mL，20天1个疗程；或口服 肠溶胶囊，每天2次，每次3粒。
[0050] 治疗结果分级标准： I、近期疗效（40天末与治疗前比较） (1) 完全缓解：病灶完全消失，无新的病灶出现； (2) 部分缓解：病灶缩小到治疗前的50%或更小，无新的病灶出现，多灶性病变时没有 一个病灶增大； (3) 稳定期轻度缓解：病灶缩小面积30%或增大面积25%，自觉症状改善，体力基本 状况上升；(g.基本稳定：病灶缩小不到25%或增大面积不超过25%以上，自觉症状改善，体 力基本状况上升。
[0051] (4)扩展：单个面积或多个病灶总面积比治疗前增大25%以上或出现新的病变，临 床症状加重，体力基本状况下降。
[0052] 11、中期疗效（7周~1年） (1) 完全缓解：无瘤生存； (2) 部分缓解：(6:癌体回变到治疗前的面积50%以上，或出现新的病灶；癌体无增大 或缩小，病症改善或消失；1+体力基本状况上升。
[0053](3)转移或扩展：病原灶扩大发展，出现新的转移灶，临床症状加重，体力状况下 降。
[0054]III、远期疗效（1~5年) (1) 无瘤生存； (2) 带瘤生存； (3) 死亡。
[0055]治疗结果：
【主权项】
1. 一种壁虎蛆虫蛋白质在制备抗淋巴癌药品中的应用。
2. 根据权利要求1所述的壁虎蛆虫蛋白质在制备抗淋巴癌药品中的应用，其特征在于 所述壁虎蛆虫蛋白质的制备方法步骤如下： (1) 将1000 g壁虎蛆虫在常温膨化装置中常温条件下膨化粉碎； (2) 膨化粉碎后的物料加入到膨胀溶剂体系提取装置中，加入由l~10Kg液态二氧化 碳、100~500mL甲醇及100~300gNH 3 ? H2O组成或由l~10Kg液态二氧化碳、100~500mL乙醇 及100~300g氯化铵组成的膨胀溶剂并加压至2~10MPa，形成膨胀溶剂体系，提取出壁虎蛆 虫蛋白质粗品； (3) 收集含有壁虎蛆虫蛋白质粗品的溶液并且用微孔过滤器过滤去掉杂质； (4) 用超滤机超滤处理，收集壁虎蛆虫蛋白质超滤溶液； (5) 超滤液溶解在乙腈中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分； (6) 将洗脱成分溶解在由正丁醇-乙酸乙酯-水按体积比1. 25:3. 75:5组成或由聚乙 二醇-葡聚糖T500按重量比4. 5:7组成的溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱分离纯 化； (7) 纯化后的壁虎蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉。
3. 根据权利要求1所述的壁虎蛆虫蛋白质在制备抗淋巴癌药品中的应用，其特征在于 所述抗淋巴癌药品的剂型为脂质体注射剂，制备方法如下： (1) Imol磷脂酰丝氨酸用玻璃平面成型法制成薄膜后，加入1000~3000L生理盐水水合 处理，再用超声波在频率500~2000KHz、功率0. 01~5KW处理l~5min ; (2) 取上述溶液l~100mL加入到含量0. 001~0. 01mol/L的0. l~1000mLCaCl2溶液中，在 转速30~75r/min条件下搅拌10~30min，然后在25~50°C条件下静置30~120min ; (3) 将生成物放置离心机中，在转速1500~3000r/min离心分离5~30min，将离心物从离 心机中取出后加入2~50g壁虎蛆虫蛋白质混合均匀，在10~25°C条件下静置10~120min ; (4) 上述物体加入含有0. 01~10mol/L的乙二胺四乙酸的生理盐水溶液0. 1~10L中，混 合均匀静置30~180min，得到单层脂质体； (5) 取l~10mg单层脂质体与10~200mL生理盐水溶液混合，制备成为注射剂。
4. 根据权利要求1所述的壁虎蛆虫蛋白质在制备抗淋巴癌药品中的应用，其特征在于 所述抗淋巴癌药品的剂型为肠溶胶囊，制备方法如下： 取10~100g壁虎蛆虫蛋白质、500~2000g预凝胶淀粉及5-50g乳糖充分混合，填充入羟 丙基甲基纤维素肠溶胶囊中，制备成为壁虎蛆虫蛋白质肠溶胶囊。
5. 根据权利要求1所述的壁虎蛆虫蛋白质在制备抗淋巴癌药品中的应用，其特征在于 所述抗淋巴癌药品的剂型为喷雾剂，制备方法如下： 取100~160g壁虎蛆虫蛋白质加入50~100g藻酸丙二醇酯混匀，加入5~10g丙三醇中研 磨均匀；将5~20g葡萄糖溶于2000~5000L注射用水，再将前述研磨物放入配制好的葡萄糖 溶液中混合均匀即成为药液；先将药液在室温下灌入喷雾容器内，再将阀门装上并扎紧，然 后压装机压入1000~2000L二氧化碳作抛射剂并加压0. 01~0. 05MPa，分装20000~50000个 喷雾剂瓶中。
6. 根据权利要求1所述的壁虎蛆虫蛋白质在制备抗淋巴癌药品中的应用，其特征在于 所述抗淋巴癌药品的剂型为壁虎蛆虫蛋白质鼻粘膜给药系统，制备方法如下： 取0. 2~0. 5mg壁虎蛆虫蛋白质粉加入0. 01~0. 03mg氯化钠，溶于10~20mL注射用水中 摇匀。
【专利摘要】本发明公开了一种壁虎蛆虫蛋白质在制备抗淋巴癌药品中的应用，所述壁虎蛆虫蛋白质制备方法如下：将壁虎蛆虫在常温膨化装置中膨化粉碎；然后加入到膨胀溶剂体系提取装置中提取出壁虎蛆虫蛋白质粗品；收集含有壁虎蛆虫蛋白质粗品的溶液并用微孔过滤器过滤去掉杂质；用超滤机超滤处理，收集壁虎蛆虫蛋白质超滤溶液；超滤液溶解在乙腈中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分；将洗脱成分溶解在溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱分离纯化；用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉，可用于制备抗淋巴癌药品。本发明分离的纯化壁虎蛆虫蛋白质为非均一蛋白质，相对分子量为10.9~12.6KPa，等电点为pH8.8~10.2，不含糖基，纯化的壁虎蛆虫蛋白质含量为96.7%。
【IPC分类】C07K1-34, A61K38-00, C07K1-16, C07K1-36, A61K35-583, A61P35-00
【公开号】CN104740594
【申请号】CN201510092290
【发明人】徐华民, 赵荣华
【申请人】哈尔滨工业大学
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2015年3月2日