载多烯紫杉醇的πιΡΕ62(ι(ι(ι-?3-Ρ0?Λ_~ 15QQ胶束冻干制剂具有以下优 占·
[0032] 1，选用的mPEG2_-b-PDLLA_~ 15QQ嵌段聚合物材料，无毒、无免疫原性，在体内可 生物降解，具有良好的生物相容性；对于多烯紫杉醇的包载增溶是利用其在水溶液中自组 装形成胶束的特点实现，无需使用Tween-80等增溶剂，消除了由传统溶媒带来的用药安全 隐患，极大提高了多烯紫杉醇的安全性；
[0033] 2,制得的载有多烯紫杉醇的mPEG_-b-PDLLA_~ 15QQ胶束冻干制剂可明显提高多 烯紫杉醇的水溶性，具有包封率高（>90%)、载药量高（10%~25%)、粒径小（15~25nm)、分 散系数窄（〇.〇9〈P. I.〈0. 15)、分布范围集中的特点，且提高了生物利用度；冻干过程明显 提高了载多烯紫杉醇胶束的稳定性，便于制剂的保存和运输；
[0034] 3,临床用药方便，所述冻干制剂加入注射用水、生理盐水或5%葡萄糖注射液等之 后，可迅速溶解分散成透明的胶束溶液，粘度低，流动性好，并且在室温条件下6小时内粒 径变化小于1%，极大提高了用药安全性，完全满足了临床的用药需求；
[0035] 4,本发明的制备方法简单易行、条件温和可控、重复性好；通过控制投药量和分散 溶液体积，可得到一系列不同浓度的载药胶束，易于生产过程的控制，易于工业化生产的实 施；
[0036] 5,通过体外细胞毒实验和动物体内实验证实，本发明的多烯紫杉醇胶束制剂，可 显著提高抗胰腺癌和转移性乳腺癌的治疗效果，降低多烯紫杉醇的系统毒性，具有良好的 临床应用价值。
【附图说明】
[0037] 图1为本发明制备例2的mPEG2_-b-PDLLA13(l(l嵌段共聚物嵌段结构的 1H-NMR谱 图。
[0038] 图2为本发明制备例2的mPEG2_-b-PDLLA13(l(l嵌段共聚物的渗透凝胶色谱（GPC) 谱图。
[0039] 图3显示了激光粒度仪测定本发明的多烯紫杉醇胶束的动态光散射（DLS)粒径分 布图。
[0040] 图4为本发明的包载多烯紫杉醇胶束的透射电镜图（TEM)。
[0041] 图5为本发明的添加各种冻干保护剂后载药胶束复溶后溶液在6小时内的粒径变 化图。
[0042] 图6为本发明的载药胶束在PBS溶液中的体外释放曲线图。
[0043] 图7为市售多烯紫杉醇、多烯紫杉醇胶束和空白胶束的MTT实验结果图。
[0044] 图8为本发明的多烯紫杉醇胶束对荷4T1肿瘤的Balb/c小鼠体重变化影响图。
[0045] 图9为市售多烯紫杉醇和本发明的多烯紫杉醇胶束以荷4T1肿瘤的Balb/c小鼠 肺HE染色对比图。
[0046] 图10为市售多烯紫杉醇和本发明的多烯紫杉醇胶束对胰腺癌的治疗效果对比图 (a)和体重变化曲线（b)。
【具体实施方式】
[0047] 下面通过实施例方式进一步说明本发明，但并不意味着将本发明限制在所述的实 施例范围之内。
[0048] 制备例 lmPEG^c-b-PDLLAi。。。合成
[0049] 将2克mPEG2(l(l(l减压除水后，加入0. 5%(w/w)辛酸亚锡，在IKTC下搅拌0. 5小时， 然后加入I. 1克D，L-丙交酯，在N2保护和130°C加热条件下，反应5小时，静置室温后，用 二氯甲烷溶解，然后滴入在_20°C下冰冻2小时的乙醚中，将析出的产物过滤，室温减压干 燥，后处理工作（以二氯甲烷溶解后滴入冰冻乙醚中）重复2次即可得2克产物。PDLLA嵌 段分子量通过 1H-NMR测定为1000。
[0050] 制备例 2mPEG2_-b-PDLLA13QQ 合成
[0051] 将2克mPEG_减压除水后，加入0. 5%(w/w)辛酸亚锡，在IKTC下搅拌0. 5小时， 然后加入1. 4克D，L-丙交酯，在N2保护和130°C加热条件下，反应5小时，静置室温后，用二 氯甲烷溶解，然后滴入在_20°C下冰冻2小时的乙醚中，将析出的产物过滤，室温减压干燥， 后处理工作（以二氯甲烷溶解后滴入冰冻乙醚中）重复2次即可得2. 1克产物。PDLLA嵌段 分子量通过1H-NMR测定为1300 (图1)，通过GPC分析其多分散系数为1.20 (图2)。
[0052] 制备例 SmPEG^-b-PDLLAi合成
[0053] 将2克mPEG_减压除水后，加入0. 5%(w/w)辛酸亚锡，在IKTC下搅拌0. 5小时， 然后加入1. 7克D，L-丙交酯，在N2保护和130°C加热条件下，反应5小时，静置室温后，用二 氯甲烷溶解，然后滴入在_20°C下冰冻2小时的乙醚中，将析出的产物过滤，室温减压干燥， 后处理工作（以二氯甲烷溶解后滴入冰冻乙醚中）重复2次即可得2. 1克产物。PDLLA嵌段 分子量通过1H-NMR测定为1500。
[0054] 实施例载多烯紫杉醇聚合物胶束制剂的制备
【主权项】
1. 一种多烯紫杉醇纳米胶束制剂，其包含抗肿瘤药物多烯紫杉醇、两亲性嵌段共聚物 甲基聚乙二醇 2_-b-聚D，L-乳酸、以及任选的药学上可接受的冻干保护剂。
2. 根据权利要求1所述的纳米胶束制剂，其中所述两亲性嵌段共聚物甲基聚乙二醇 2000_b_聚D,L-乳酸优选地为甲基聚乙二醇2_-b-聚D,L-乳酸;所述冻干保 护剂为PEG2_、泊洛沙姆188、乳糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、mPEG_-b-PDLLA13(l(l、人血白蛋 白、PVPK30中的任意一种或多种的混合物，优选葡萄糖、mPEG_-b-PDLLA13QQ、人血白蛋白。
3. 根据权利要求1-2中任一项所述的纳米胶束制剂，其中多烯紫杉醇和两亲性嵌段共 聚物甲基聚乙二醇2_-13-聚D，L-乳酸Hicic^15tici的质量比为1:3~1:9,优选1:5 ;冻干保护 剂的添加量为基于冻干制剂总量的质量百分比计的1~10%，优选5%质量。
4. 根据权利要求1-3中任一项所述的纳米胶束制剂，其中所述胶束制剂是冻干形式， 采用注射用水、5%葡萄糖注射液或0. 9%氯化钠注射液作为临床用药的分散介质。
5. 根据权利要求1所述的纳米胶束制剂，其特征为：所述纳米胶束制剂的载药量在 10%~25%之间，优选15%~18% ;复溶后的纳米粒径在15nm~25nm之间，粒子的分散系数 P.I.在0. 09~0. 15之间；多烯紫杉醇在所述胶束中包封率至少达到85%。
6. -种制备根据权利要求1-5中任一项的多烯紫杉醇纳米胶束制剂的方法，包括以下 步骤： (1) 将多烯紫杉醇和甲基聚乙二醇__13-聚D，L-乳酸溶于有机溶剂中； (2) 除去有机溶剂，得到含多烯紫杉醇的聚合物脂膜； (3) 加入注射用水，在25°C~60°C下水化； (4) 涡旋振荡或超声，得到纳米胶束溶液； (5) 任选地加入冻干保护剂，0. 22iim无菌微孔滤膜过滤除菌，放入-50°C~_70°C冰箱 冷冻12小时之后冷冻干燥，即可得到包载多烯紫杉醇的甲基聚乙二醇2_-b-聚D，L-乳酸 KK1C^15CK1纳米胶束制剂。
7. 根据权利要求6的方法，其中在步骤（1)中所述的有机溶剂为乙腈、甲醇、乙醇和三 氯甲烷，可单独或者混合使用，优选乙腈。
8. 根据权利要求6或7的方法，其中在步骤（2)中通过减压除去有机溶剂和/或在真 空条件下除去有机溶剂；其中在步骤（3)中在25°C~60°C、优选35°C~45°C下水化1~2 小时。
9. 根据权利要求6-8中任一项的方法，其中在步骤（4)中涡旋振荡或超声1~5分钟。
10. 根据权利要求1-5中任一项所述的纳米胶束制剂在制备用于治疗转移性乳腺癌或 胰腺癌的药物中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种包载难溶性抗肿瘤药物多烯紫杉醇的聚合物纳米胶束制剂及其制备方法和用途。本发明的胶束制剂为甲基聚乙二醇2000-b-聚D,L-乳酸1000-1500嵌段共聚物载多烯紫杉醇胶束，其粒径范围为15nm～25nm，粒子的分散系数P.I.在0.09～0.15之间。本发明的胶束制剂具有如下优点：胶束的粒径小、分布范围集中、包封率高、载药量高、冻干后稳定，且复溶稳定性良好，可明显提高多烯紫杉醇的水溶性，显著提高多烯紫杉醇的对于转移性乳腺癌和胰腺癌的治疗效果，毒副作用低。本发明的胶束制剂可特别地制备成冻干制剂，用于静脉注射。
【IPC分类】A61P35-00, A61K9-19, A61K31-337, A61K47-34
【公开号】CN104840968
【申请号】CN201410053888
【发明人】高钟镐, 李云飞, 陈卫, 杨飞飞, 黄伟, 金明姬
【申请人】中国医学科学院药物研究所
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2014年2月17日