嵌段共聚物载多烯紫杉醇纳米胶束制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物制剂领域，涉及包载难溶性抗肿瘤药物多烯紫杉醇的甲基聚乙二 醇聚D, L-乳酸I父束制剂及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 多烯紫杉醇（docetaxel，商品名Taxotere?、多帕菲?等）是新一代紫杉烷类抗肿 瘤药物，最初从欧洲浆果紫杉（Taxus baccata)针叶中提取的无活性化合物再经半合成得 到。它通过与小管蛋白结合，使肿瘤细胞停止在有丝分裂期而死亡，有效抑制肿瘤细胞的复 制。临床研究表明，多烯紫杉醇可单独或与其它抗肿瘤药物合用治疗非小细胞性肺癌、乳腺 癌、卵巢癌、胃癌等癌症。由于多烯紫杉醇水溶性差，现有注射剂多采用Tween-80作溶剂， 同时配有含13%乙醇的溶媒，临用前稀释，并且肿瘤靶向性不高。
[0003] Tween-80具有溶血性，且粘性大，因此市售制剂注射后容易引起较严重的过敏反 应，刺激性反应大，中重度过敏发生率高达25. 9%，75mg/m2和lOOmg/m2剂量使用时，中度以 上过敏发生率分别为31%和41. 3%，注射部位反应率也高达13. 3%。故临床使用多烯紫杉醇 时需要作防过敏反应处理。另外，临床使用多烯紫杉醇也颇为繁琐，输液过程中需严密观察 输液部位有无渗漏，如有渗漏必须立即更换注射部位，并行局部封闭。同时，用药期间需常 规心电监护，密切观察呼吸、心率、血压变化，高度警惕过敏反应的发生，做好严重过敏反应 的医护抢救准备。目前，降低多烯紫杉醇制剂毒副作用、提高治疗效果，是人们广泛关注的 技术难点，也是一个世界性技术难点。
[0004] 聚合物胶束研究是药剂学纳米体系研究的重要领域之一，近年来发展迅速。由于 聚合物胶束具有临界胶束浓度较低、增溶空间较大、热力学稳定性较好的优点，加之利用聚 合物疏水嵌段的不同性质，可采用化学、物理以及静电作用等多种方法包裹药物，使聚合物 胶束在药物载体领域具有广泛的应用前景。聚乳酸（PLA)是可生物降解材料，其最终代谢 产物为二氧化碳和水，中间代谢产物乳酸也是体内正常代谢产物，不会在体内蓄积。聚乙二 醇（PEG)为常用的亲水性嵌段，作为一种聚醚类高分子物质，PEG具有良好的亲水性和生物 相容性。然而，现有技术中没有任何文献教导将疏水性的PLA和PEG两者键合在一起所合 成的、既有亲水性链段又有疏水性链段的高分子嵌段聚合物可作为用于多烯紫杉醇的胶束 的载体。
[0005] 评价聚合物胶束系统的参数有粒径、载药量和稳定性等参数。世界上已报道包载 多烯紫杉醇的胶束，其载药量一般为5%左右，几乎没有超过10%者，且对于冻干制剂稳定性 研究也较少论述，大大限制了多烯紫杉醇胶束在临床方面的真正应用。
【发明内容】
[0006] 本发明的一个目的是克服现有技术的缺陷，提供一种包载难溶性抗肿瘤药物多烯 紫杉醇的甲基聚乙二醇 2_-b-聚D，L-乳酸_(mPEG-a-b-PDLUU。~·)胶束制剂。所 述胶束制剂包含抗肿瘤药物多烯紫杉醇、两亲性嵌段共聚物甲基聚乙二醇2_-b-聚D，L-乳 酸~ 15〇。、以及任选的药学上可接受的冻干保护剂。
[0007] 本发明中，胶束载体材料选用HiPEG2cicicTb-PDLLAicicic^ 15cici作为载体材料。本发明同时 提供了 mPEG2_-b-PDLLA1QQ卜15QQ的优选合成方法，所述方法为：将mPEG_减压除水后，加入 0. 5% (w/w)辛酸亚锡，在IKTC下搅拌0. 5小时，然后加入D，L-丙交酯，在N2保护和130°C 加热条件下，反应5小时，静置室温后，用二氯甲烷溶解，然后滴入在-20°C下冰冻2小时以 上的乙醚中，将析出的产物过滤，室温减压干燥，后处理工作（以二氯甲烷溶解后滴入冰冻 乙醚中）重复2次即可得产物。PDLLA嵌段分子量通过 1H-NMR测定为1000~1500。载体 材料优选mPEG2(IQ(l-b-PDLLA 13(l(l嵌段聚合物。
[0008] 本发明中，当加入冻干保护剂时，所述冻干保护剂为PEG2000、泊洛沙姆 188 (Poloxamerl88)、乳糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、mPEG2(l(IQ-b-PDLLA13(l(l、人血白蛋白 (HAS)、PVP K30中的任意一种或多种的混合物，优选葡萄糖、mPEG2_-b-PDLLA13QQ、HAS中的 一种或多种的混合物。冻干保护剂的添加量为基于冻干制剂总量的质量计的1~10%，优选 5%质量。
[0009] 本发明中，多烯紫杉醇与πιΡΕ6_-?3-Ρ0?Λ_~15(ι(ι的质量比为1:3~1:9,优选 1:5。
[0010] 本发明的纳米胶束制剂的载药量在10%~25%之间，优选15%~18% ;复溶后的纳 米粒径在15nm~25nm之间，粒子的分散系数Ρ. I.在0. 09~0. 15之间；多烯紫杉醇在所 述胶束中包封率至少达到85%。本发明的纳米胶束制剂可以为冻干形式，即冻干纳米胶束制 剂，可供静脉注射。
[0011] 本发明的进一步目的是提供该所述多烯紫杉醇胶束制剂的制备方法。
[0012] 本发明的包载多烯紫杉醇的mPEG2_-b-PDLLA_~ 15QQ胶束冻干制剂的制备方法， 其包括步骤：
[0013] (1)采用薄膜水化法制备载多烯紫杉醇胶束水溶液；
[0014] 将多烯紫杉醇与HiPEG2cicicTb-PDLLAicicic^ 15Μ溶于有机溶剂中，去除有机溶剂，得到凝 胶状含药脂膜，随后加入水溶液溶解分散含药脂膜，制得胶束溶液；
[0015] (2)所述胶束溶液(任选地加入冻干赋形剂)，经过除菌过滤、冷冻干燥，制得载药 聚合物胶束的冻干制剂。
[0016] 在一个具体方案中，本发明的多烯紫杉醇纳米胶束制剂的制备方法包括如下步 骤：
[0017] (1)将多烯紫杉醇和甲基聚乙二醇2_-b-聚D，L-乳酸1(ι(ι(ι~15(ι(ι溶于有机溶剂中；
[0018] ⑵除去有机溶剂，得到含多烯紫杉醇的聚合物脂膜；
[0019] (3)加入注射用水，在25°C~60°C下水化；
[0020] (4)涡旋振荡或超声，得到纳米胶束溶液；
[0021] (5)任选地加入冻干保护剂，0. 22μπι无菌微孔滤膜过滤除菌，放入-50°C~_70°C 冰箱冷冻12小时之后冷冻干燥，即可得包载多烯紫杉醇的甲基聚乙二醇2_-b-聚D，L-乳 酸ICICICI ~ 1KICI纳米胶束制剂。
[0022] 在更具体的实施方案中，在步骤（2)中通过减压除去有机溶剂和/或在真空条件 下除去有机溶剂；在步骤（3)中在25°C~60°C、优选35°C~45°C下水化1~2小时；在步 骤（4)中涡旋振荡或超声1~5分钟。
[0023] 本发明中，所述的有机溶剂，是指可以完全溶解HiPEG2cicicTb-PDLLA icicic^ 15TO和多烯 紫杉醇的有机溶剂，包括乙腈、甲醇、乙醇和三氯甲烷等，上述溶剂可单独或者混合使用；所 述有机溶剂优选乙腈；所述有机溶剂的加入量体积（ml)与药物和辅料总量(mg)的比例为 1:5 ~1:60,优选 1:60。
[0024] 本发明中，所述溶解药膜（即，含药脂膜）的分散溶液选自注射用水。
[0025] 本发明中，所述的胶束溶液可直接冻干，或者在加入冻干保护剂后冻干。
[0026] 所述的冻干制剂可以采用注射用水、5%葡萄糖注射液或0.9%氯化钠注射液作为 临床用药的分散介质。
[0027] 本发明中，冻干前和复溶后胶束粒径范围为15~25nm，分散系数P. I介于0. 09~ 0· 15。
[0028] 本发明所用试剂和原料均市售可得，或者采用本说明书中记载的制备方法获得 (如果说明书中描述了制备方法）；对于本发明中没有具体描述的装置、条件（温度、时间 等）、物质、用量、方法等，均可采用本领域已知的或本领域技术人员按照常规技术可确定 的。
[0029] 本发明的再一个目的是提供所述冻干制剂在制备用于治疗转移性乳腺癌或胰腺 癌的药物中的应用。本发明以小鼠转移性乳腺癌4T1和Capan-2胰腺癌为肿瘤研究模型， 显示了多烯紫杉醇胶束比现有多烯紫杉醇市售制剂更有效的抑制了癌细胞的转移，提高了 治疗效果，同时降低了系统毒性。
[0030] 由于胰腺癌解剖位置深、症状隐匿、导致其不易早期发现；即使影像学能够发现的 小胰癌，相当一部分已有淋巴转移和神经浸润，术后易于复发和转移，而且对常规的化疗、 放疗均不敏感。传统的一线化疗药物只有吉西他滨；而紫杉烷类药物，尤其是多烯紫杉醇， 是在肿瘤继发转移灶治疗和顽固性肿瘤治疗中使用最为广泛的化疗药物。本发明人发现， 将本发明的多烯紫杉醇纳米胶束制剂用于治疗胰腺癌或转移性胰腺癌，可取得意想不到的 治疗效果，这为为紫杉烷类药物在胰腺癌治疗中的应用提供了重要的借鉴意义。
[0031] 本发明的包