在辐照后28d和60d时明显增加(P < 0.05)。
[0035](2)生精小管直径的测量和凋亡的检测
[0036]取下小鼠睾丸一侧-80 °C冻存待用，另一侧于Bouin’ s液中固定24小时后，梯度酒精脱水、透明、石蜡包埋，按冠状面切片4 μ m。
[0037]HE常规染色，显微镜下观察，以十字交叉法测量生精小管直径，每个时间点5只小鼠，每只小鼠计量50个生精小管。20倍物镜视野下睾丸组织HE染色结果如图2、图3所示，“十字交叉法”测量生精小管的直径结果表明:与假辐照组相比，辐照组小鼠的生精小管直径在照后ld、7d、14d、28d和60d时均明显缩短；与单纯辐照组相比，S.C.处理组小鼠的生精小管直径在照后28d和60d时明显增加(P < 0.05)。
[0038]生精细胞凋亡的检测采用TUNEL荧光染色，严格按照凋亡原位检测试剂盒的说明操作，常规脱蜡脱水、抗原修复等，最后拍照，Leica分析软件计算单位面积上阳性细胞的个数百分比。
[0039]睾丸组织TUNEL染色结果如图4_1?图4_3、图5所示，绿色荧光即是TUNEL染色阳性的凋亡细胞，可见凋亡细胞主要分布在生精小管；图像分析结果表明，与假辐照组相比，辐照组小鼠生精细胞凋亡的百分率在照后Id和60d时明显升高，在照后7d和14d时则降低；S.C.处理组的凋亡率在照后不同时间则减少且有统计学意义；与辐照组相比，S.C.处理组的凋亡率在照后降低，且在照后第14d、28d和60d时具有统计学差异(P < 0.05)。
[0040](3)小鼠精子数量及畸形率分析
[0041]在辐照结束后各时间点，脱颈处死小鼠，取双侧附睾，放入Iml 37°C预热的生理盐水中剪碎，37 °C静置游离20min，吸取上清液，400目筛网过滤。取滤液20 μ I加入到380 μ I精子稀释液(5g碳酸氢钠，Iml甲醛溶液加蒸馏水至100ml)中，用血细胞计数板进行精子计数，每个样本重复4次；取滤液推片，自然干燥，甲醇固定30min，2%伊红染色2h，在高倍镜(40X10)下每只小鼠计数200个完整精子的头部畸形数，每组共计数5只小鼠。
[0042]精子数量和畸形率的检测结果如图6所示，与假辐照组相比，辐照组小鼠精子数量在照后7d、14d、28d和60d时均有明显减少，S.C.处理组精子数量仅在照后7d、14d时明显减少，具有统计学差异(P < 0.05);与辐照组相比，S.C.处理组精子数量在照后不同时间点均有所回升，但是仅在照后28d和60d时无明显差异。
[0043]与假辐照组相比，辐照组组小鼠精子畸形率，在照后ld、7d、14d和28d时明显升高，具有统计学差异(P < 0.05)，在照后60天时则无明显差异；与辐照组相比，S.C.处理组精子畸形率在照后不同时间点虽然有所降低，但均无明显差异。
[0044](4)抗氧化酶类和脂质过氧化物含量检测
[0045]准确称取睾丸组织重量，按重量(g):体积(ml) = 1:9的比例加入9倍体积的生理盐水，剪碎组织，冰水浴制备匀浆，4000rpmX4°C离心lOmin，取上清液待测。采用B1-rad方法进行蛋白定量，T-AOC, SOD、MDA和GSH的活性或含量均采用南京建成生物工程有限公司的试剂盒进行检测，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。
[0046]机体抗氧化能力的强弱与健康程度有着密切的联系。总抗氧化能力T-A0C、超氧化物歧化酶SOD和谷胱甘肽GSH的活性或含量表示机体抗氧化能力的强弱，能清除机体所产生的过量的自由基，保护机体免收氧化应激损伤。自由基代谢产物丙二醛MDA的含量代表机体内过氧化损伤程度。
[0047]T-AOC, SOD、MDA和GSH的活力检测结果如图7所示，结果表明:
[0048]与假辐照组相比，辐照组小鼠睾丸T-AOC的活性在辐照后不同时间时均明显降低；与辐照组相比，S.C.处理组小鼠睾丸T-AOC的活性在照后不同时间则明显升高(P <0.05)。
[0049]与假辐照组相比，辐照组小鼠SOD活力在照后ld、7d和14d时下降，其余时间点未显示出统计学差异；与辐照组相比，S.C.处理组小鼠睾丸SOD的活性在照后不同时间则明显升高(P < 0.05)。
[0050]与假辐照组相比，辐照组小鼠睾丸组织中GSH的活性在辐照后呈明显降低趋势，福照组在照后Id和60d时低于假福照组(P < 0.05)，在照后7d、14d和30d时明显低于对照组(P < 0.01);与辐照组相比，S.C.处理组小鼠睾丸GSH的活性在照后不同时间则明显升尚O
[0051]与假辐照组相比，辐照组小鼠睾丸MDA含量在照后不同时间点均显著升高，S.C.处理组小鼠睾丸组织MDA含量无明显差异；与辐照组相比，S.C.处理组小鼠睾丸组织MDA含量在照后不同时间明显降低(P < 0.01)。
[0052]以上检测结果表明:富砸北虫草具有防护电磁辐射损伤生殖系统的作用，可应用于制备防护电磁辐射损伤生殖系统的药物中的应用。
[0053]因此，本发明还提供一种防护电磁辐射损伤生殖系统的药物，该药物的制备原料中包含有富砸北虫草，或者该药物的有效成分中包含有富砸北虫草提取物。
[0054]以上给出的实施例是实现本发明较优的例子，本发明不限于上述实施例。本领域的技术人员根据本发明技术方案的技术特征所做出的任何非本质的添加、替换，均属于本发明的保护范围。
【主权项】
1.富砸北虫草在制备防护电磁辐射损伤生殖系统的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物是抑制电磁辐射损伤导致睾丸指数下降的药物。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物是抑制电磁辐射损伤导致生精小管凋亡的药物。4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物是抑制电磁辐射损伤导致精子数量减少、精子畸形率升高的药物。5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物是抑制电磁辐射损伤导致抗氧化酶类和脂质过氧化物含量降低的药物。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的抗氧化酶类和脂质过氧化物分别为T-AOC、SOD、MDA 和 GSH。7.—种防护电磁辐射损伤生殖系统的药物，其特征在于，该药物的制备原料中包含有富砸北虫草。8.一种防护电磁福射损伤生殖系统的药物，其特征在于，该药物的有效成分中包含有富砸北虫草提取物。
【专利摘要】本发明公开了富硒北虫草防护电磁辐射损伤生殖系统的应用，与辐照组相比，富硒北虫草能够降低电磁辐射辐照对小鼠睾丸指数的影响，睾丸指数在辐照后28d和60d时明显增加；富硒北虫草能够降低电磁辐射辐照对小鼠的生精小管直径及其细胞凋亡的影响，生精小管直径在照后28d和60d时明显增加，凋亡率在照后降低；富硒北虫草能够降低电磁辐射辐照对小鼠的精子数量及畸形率的影响，精子数量在照后不同时间点均有所回升，精子畸形率在照后不同时间点有所降低；富硒北虫草能够降低电磁辐射辐照对小鼠的抗氧化酶类和脂质过氧化物含量影响，包括T-AOC、SOD、MDA和GSH的活力在照后不同时间则明显升高。
【IPC分类】A61P15/00, A61K33/04, A61K36/068, A61P39/06, A61P39/00
【公开号】CN104887719
【申请号】CN201510256255
【发明人】曾丽华, 王亚峰, 苗霞, 郎海洋, 郭国祯, 陈永斌, 刘军叶, 张 杰, 刘亚宁, 谢礼
【申请人】中国人民解放军第四军医大学
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月19日