r>[0034] 收获依靠自然沉降使藻体沉积，放掉上清液，浓缩藻液；如此反复，逐步获得更浓 的藻液；最后采用离心获得藻泥，并用净洁的自然水反复清洗藻泥。将鲜藻喷雾干燥成干藻 粉，而后利用超高速碰进行细胞破壁加工处理，以增加其生物利用度。上述藻粉可作直接原 料，直接用于研制增加雄性生物生殖细胞数量与活力的产品并应用；也可进一步利用物理 和化学技术，提取获得其类胡萝卜素及其氧化产物虾青素等脂溶物，再用于研制增加雄性 生物生殖细胞数量和活力的产品并应用。
[0035] 脂溶性产物经分析，其主要成分如表2,其中主要有效成分为类胡萝卜素及其氧化 产物，含量受培养和提取参数影响而存在一定的变化，一般在占脂溶物的2. 0%-8. 0%，其中 最低和最高含量分别为〇. 5%和15. 0%。但无论如何，在类胡萝卜素及其氧化产物中，主要成 分以虾青素为主，占其含量的75%-95%。
[0036] 进一步利用高压液相分析，得到红球藻天然虾青素高压液相色谱图与人工合成对 比图谱(如图1)，对比文献资料可确定所生产的红球藻天然虾青素以左旋结构为主，即：红 球藻虾青素以左旋型（3S，3' S)为主，而不同于人工合成品虾青素中的构象，后者的光学异 构左旋（3S，3' S)型、消旋（3R，3' S)型和右旋（3R，3' R)型的比例为1:2:1。
[0037] 表1.几种用于红球藻培养的常见培养基组成及其配方
[0038]
[0040] 表2.富含生物活性成分--类胡萝卜素及其氧化衍生物的红球藻脂溶性物质组 成及含量（％)
[0042] 实施例2
[0043] 雄性动物饲喂及某些生殖细胞数量及活力测定方法
[0044] 选择30只4-5周龄的雄性健康Wistar大鼠(体重150_160g)，先健康观察1周，然 后随机分成3组，每组10只，每5只放入1笼内。在23. 0±3. (TC温度，40-70%相对湿度， 12/12h光照(光强150-300Lux)，换气10-15次/h条件下单独标记并饲养。其中2组按大 鼠公斤体重分别灌胃给予低含量和中等含量的上述实施例获得的红球藻脂溶性混合物，其 中有效成分为以含虾青素为主的类胡萝卜素及其衍生物，而中等剂量组的有效成分给予量 为0. 9mg/kg体重,高剂量组的奸青素为主的类胡萝卜素的有效成分给予量为2. 7mg/kg体 重，对照组仅以同等体积的植物油进行同样的灌胃处理。每只动物的正式编号以化学染料 在动物身体不同部位涂染做标记。连续灌胃10周，期间观察动物的生活状况；并详细记录 雄性大鼠的体重和摄食量，并根据雄性大鼠的实际重量，调整每天灌胃用量(富含红球藻虾 青素的类胡萝卜素脂溶性提取物)。
[0045] 雄性大鼠灌胃饲喂以虾青素为主的类胡萝卜素脂溶物10周后，其生殖细胞数量 与活力和活力分别发生显著变化。结果表明：1).就单位重量附睾生殖细胞密度而言，在对 照组雄性大鼠组中每克含精子数49. 5亿个，中等剂量组大鼠每克含精子数为67. 3亿个，而 高剂量组大鼠每克含精子数为84. 6亿个。因此与对照组相比，中等剂量组和高剂量组雄性 大鼠附睾中的生殖细胞密度分别增加了 36.0%和71.0%，差异极显著。2).对照组雄性大鼠 单侧附睾尾的总精子数为17. 5亿个，而饲喂中等剂量组和高剂量组的雄性大鼠附睾尾的 总精子数分别为22. 6和28. 1亿个。即：与对照组相比，中等剂量组雄性大鼠单侧(右）附 睾尾的总生殖细胞数增加了 29.0%，呈显著性差异；而高剂量组的雄性大鼠精子总数增加 了 60.0%，呈极显著性差异。
[0046] 其次，将具有活性的附睾尾的精子活度进行分析表明：对照组精子总的活动率为 44. 2%，而中、高剂量组的精子总的活动率分别为31. 5%和34. 5%，即中、高剂量组的精子总 的活动率显著性低于对照组（P〈〇. 05或P〈0. 01)。由于不活动的精子尚不能简单地归于死 亡精子，也可能存在尚未活化的可能性，目前难以区分属于死亡还是未活化，为此需分析活 跃精子的情况。对照组大鼠附睾中每克含精子数49. 5亿个，而在中等剂量组每克含精子 67. 3亿个，在高剂量组每克精子数84. 6亿个。因此，单位重量附睾中有活力的精子密度，在 对照组、中等剂量组和高剂量组中分别为每克21. 9亿、21. 2亿和29. 2亿。也就是说，在中 等剂量和对照组无明显差异，在高剂量组较对照有明显提高。
[0047] 同样，经计算就单侧附睾尾中有活性的总生殖细胞数，在对照组和中等剂量组无 区别，而在高剂量组附睾尾中有活性的总生殖细胞数却增加了 25. 3%，即在高剂量组比对照 组有显著性增加。
[0048] 另外，将具有活性的附睾尾的精子活度进一步分级，发现在高剂量组中活跃程度 较低的III级精子数比对照组明显减少，而具有活跃程度高的II级精子数具有大幅度增 加。
[0049] 综上所述，以红球藻虾青素实施案例证实，高剂量微藻类胡萝卜素及其氧化衍生 物明显增加雄性动物生殖细胞精子数量、具有活力的精子密度以及高活跃程度的II级精 子比率。因此，利用单细胞微藻天然类胡萝卜素及其氧化衍生物等脂溶性物质，或富含上述 成分的微藻藻粉(其给予量有效成分>1. 35mg/kg，一般范围在L 35mg/Kg-9. Omg/Kg)，加工 生产食品、饮料、医药保健品和生物制剂，可用于增加雄性生物生殖细胞数量及活力。
[0050] 参考文献；
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【主权项】
1. 一种天然脂溶物的应用，其特征在于：天然脂溶物作为增加雄性生物生殖细胞(精 子）数量及活力的物质。2. 按权利要求1所述的天然脂溶物的应用，其特征在于：所述天然脂溶物作为增加雄 性生物生殖细胞(精子）数量及活力的食品、饮料、医药保健品或生物制剂。3. 按权利要求1或2所述的天然脂溶物的应用，其特征在于：脂溶性物质为天然类胡 萝卜素及其氧化衍生物，或经以单细胞藻类为原料胁迫诱导累积获得到的富含类胡萝卜素 及其氧化衍生物。4. 按权利要求3所述的天然脂溶物的应用，其特征在于：所述天然类胡萝卜素及其氧 化衍生物，其中主要成分包括胡萝卜素、虾青素、玉米黄素、叶黄素等类胡萝卜素及其 氧化衍生物，并含有某些脂肪酸的其它脂溶性混合物质。5. 按权利要求1或2所述的天然脂溶物的应用，其特征在于： 以单细胞藻类为原料经胁迫诱导累积获得到类胡萝卜素及其氧化衍生物，具体为： 首先，选择单细胞藻类，以二步串联培养技术，在第一步规模化细胞工程培养获得生物 量；然后，改变培养条件，在第二步利用胁迫诱导其大量累积类胡萝卜素及其氧化衍生物； 然后，将细胞工程培养微藻细胞收获，并加工即得到富含类胡萝卜素及其氧化衍生物 藻粉，或利用物理化学方法提取获得以类胡萝卜素及其氧化衍生物为主要活性成分的脂溶 性物质。6. 按权利要求5所述的天然脂溶物的应用，其特征在于：所述单细胞藻类为盐 藻（Dunaliella salina 或 bardawil)或雨生红球藻（Haematococcus pluvialis 或 IacustrisX7. 按权利要求1或2所述的天然脂溶物的应用，其特征在于：按照60kg体重的男性计 算，所述天然类胡萝卜素及其氧化衍生物日摄食量一般>5.Omg。
【专利摘要】本发明隶属生物医学与健康领域，具体讲一种天然脂溶物的应用。天然脂溶物作为增加雄性生物生殖细胞（精子）数量及活力的物质。所述天然脂溶物作为增加雄性生物生殖细胞（精子）数量及活力的食品、饮料、医药保健品或生物制剂。本发明利用细胞工程规模化培养的单细胞藻类，提取富含类胡萝卜素物质及其氧化衍生物天然脂溶物，在此基础上，通过实验动物饲喂验证实验，开发出一种医药保健品或生物制剂，应用于增加男性和雄性动物生殖细胞——精子的数量和活性，强化生育能力。
【IPC分类】A61P15/08, A61K31/122, A61K31/015, A61K36/05, A61K31/047, A23L1/29, A23L2/38, A61K36/02
【公开号】CN104922098
【申请号】CN201410102560
【发明人】刘建国, 张勇, 李倩倩, 刘倩, 龙元薷
【申请人】中国科学院海洋研究所
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2014年3月19日