一种高纯度银杏内酯组合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物提取领域，具体涉及一种高纯度银杏内酯组合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 银杏（Ginkgo biloba L.)是一种重要的药用植物，银杏叶是银杏科植物银杏的叶 子，其味苦涩、性平，其所含的银杏总黄酮和萜内酯具有重要的药用价值。
[0003] 银杏内酯化合物属于萜类化合物，由倍半萜内酯和二萜内酯组成，即白果内酯和 银杏内酯A、B、C、J、M，是银杏叶中一类重要的活性成分。白果内酯（hilobalide ;BB)属 倍半猫内醋，银杏内醋A(ginkgolide A ;GA)、银杏内醋B(ginkgolide B ;GB)、银杏内醋 C(ginkgolide C;GC)、银杏内脂M(ginkgolide M;GM)、银杏内脂J(ginkgolide J;GJ)为二 萜类化合物，其差别在于含有的羟基数目和羟基连接的位置不同。
[0004] 银杏内酯分子具有独特的十二碳骨架结构，嵌有一个叔丁基和六个五元环，包括 一个螺壬烷，一个四氢呋喃环和三个内酯环。银杏内酯作为当今医学界公认的一种最有应 用前景的高效血小板活化因子（platelet activating factor，PAF)受体诘抗剂，其专一*性 高，对于缺血损伤和中枢神经系统具有优良的保护作用，此外还有防止过敏、休克、器官移 植排斥反应等作用。在银杏内酯中抗PAF活性最高的是银杏内酯B，是迄今发现的最强的血 小板活化因子拮抗剂，其对损伤神经元也有保护作用。
[0005] 银杏内酯组合物可降低急性不完全性脑缺血大鼠的脑水肿及脑毛细血管通透性， 降低全脑缺血大鼠的血液黏度，改善血液流变学指标；改善脑组织神经细胞缺血后病理改 变，具有明显的脑保护作用（银杏叶化学成分及其应用研宄进展，陈西娟等，生物质化学工 程，第42卷第4期，2008年）。
[0006] 中国随着老龄社会的到来，对于抗衰老、提高认知能力的药物需求日益增加。利用 银杏叶资源，开发出质优价廉的药品或保健品，将是一件有益于国计民生的大事。
[0007] 目前对银杏内酯的分离纯化方面的研宄，主要集中在单一品种内酯的分离，而在 针对银杏叶中天然比例的内酯组合物提取分离的研宄较少。仅分离单一内酯将无法保持银 杏叶固有的天然属性，且将各种内酯逐一分离，步骤繁杂，生产成本高。
[0008] 此外，现有技术还公开了以下技术方案：
[0009] 中国专利申请CN102293790公开了一种高纯度银杏内酯组物。以银杏叶为原料， 用质量分数为20-80%乙醇溶液加热回流浸提提取，提取液浓缩回收乙醇，过大孔树脂柱分 离，乙醇解吸，产物加水稀释后，再通过凝胶型氢键吸附树脂吸附和解吸，收集流出液和解 吸液，浓缩、干燥，乙醇溶解、活性碳脱色、浓缩干燥，即得。
[0010] 中国专利申请CN103393671公开了一种银杏内酯的提取和精制方法。包括下列步 骤：（1)提取；⑵制备银杏内酯富集物；（3)制备银杏内酯粗品；(4)结晶：银杏内酯粗品用 含水乙醇分步结晶后得到高纯度的银杏内酯精制品。本发明方法所得银杏内酯含有银杏内 酯A、B、C和白果内酯，总含量达95% -98%。
[0011] 中国专利申请CN1931199公开了一种双树脂法制备高质量的银杏叶活性成分提 取物方法。包括下列步骤：（1)提取；（2)制备银杏内酯、银杏总黄酮富集物；（3)干燥，即 得。
[0012] 现有技术虽然提供了一些提取银杏内酯的方法，但是，存在单纯追求单体成分纯 度，而提取率相对很低，而不具有工业化生产意义的缺陷，甚至采用具有残留作用的有机试 剂进行溶剂萃取，不能经济、环保地分离出高纯度的银杏内醋。本发明所要解决的技术问题 在于克服上述不足之处，本发明用的洗脱剂为乙醇水溶液，并且树脂填料可以再生利用，比 其它硅胶、氧化铝等柱层析所用的有机溶剂毒性低、成本低。本方法设计合理，所用溶剂可 以回收再利用，降低了成本。本方法应用大孔树脂洗脱除杂，可以有效增加富集物中银杏内 酯的含量，富集物经过结晶和重结晶，可以得到高纯度的银杏内酯组合物。本方法步骤简 单、操作方便、成本低、污染少，适于工业化生产。
[0013] 有鉴于此，特提出本发明。
【发明内容】
[0014] 本发明旨在针对目前银杏内酯的分离提纯，主要集中在各单一内酯的单独提取， 而针对银杏叶中天然比例银杏内酯整体分离提纯的研宄较少。为了保持银杏叶固有的天然 属性，本发明提出了一种操作简单，成本低廉，纯化率高的提取方法，有效避免将各种内酯 逐一分离所带来的步骤繁杂，成本高的问题。
[0015] 为实现上述目的，本发明采用了一种新的高纯度银杏内酯组合物的提取方法，具 体包含以下步骤：
[0016] (1)取银杏叶粉碎，加入乙醇回流提取，减压浓缩至无醇味，得到提取液；
[0017] (2)向所述提取液中加入水，采用ADS-17树脂柱进行吸附，然后用乙醇洗脱树脂 柱，将所得洗脱液减压浓缩至无醇味，得到银杏内酯富集物；
[0018] (3)将所述银杏内酯富集物，采用ADS-F8树脂柱进行吸附，收集流出液；然后用水 冲洗树脂柱，得水洗液，将所述流出液与水洗液合并，减压浓缩、干燥，制粉，即得银杏内酯 粗品；
[0019] (4)向所述银杏内酯粗品中加入乙醇，减压浓缩、干燥，即得高纯度银杏内酯组合 物。
[0020] 本发明用的洗脱剂为乙醇水溶液，并且树脂填料可以再生利用，比其它硅胶、氧化 铝等柱层析所用的有机溶剂毒性低、成本低。本方法设计合理，所用溶剂可以回收再利用， 降低了成本。本方法应用大孔树脂洗脱除杂，可以有效增加富集物中银杏内酯的含量，富集 物经过结晶，银杏内酯的纯度可达55%以上。本方法步骤简单、操作方便、成本低。
[0021] 本发明所述水优选为纯化水，纯化水为通过蒸馏法、离子交换法、反渗透法等方法 制备的水，离子杂质含量低，从而避免在操作过程中，引入新的杂质。
[0022] 具体而言，本发明所述提取方法，优选步骤（1)中，取银杏叶，粉碎至10~100目， 加入6~12质量倍量/体积倍量的质量浓度为50 %~90%乙醇回流提取，每次回流提取 1~2小时，过滤，减压浓缩至无醇味；优选采用8~10质量倍量/体积倍量的质量浓度为 70 %~90%乙醇回流提取两次。
[0023] 在银杏叶中加入乙醇，可以使有机成分从浸出溶解在乙醇中。采用回流提取法，可 以重复利用乙醇，降低了乙醇的消耗量。质量浓度为50%~90%的含水乙醇可以提高银杏 叶中的有效成分的提取率，提高银杏叶的利用率。
[0024] 本发明所述的方法，优选在步骤（1)中，减压浓缩至无醇味后，加入1-6质量倍量 /体积倍量的水，混合均匀后，在〇~15°C条件下放置12~24小时，得到提取液。醇提取 液经回收乙醇后，再加水处理，并冷藏一定时间，可使杂质沉淀而除去。
[0025] 本发明所述的方法，优选在所述步骤（2)中，将所述提取液进行过滤，直至澄清， 向所得滤液加水并搅拌均匀，以I. 〇~I. 5BV/h的流速采用ADS-17树脂柱进行吸附，然后 用质量浓度40 %~70%乙醇以I. 0~I. 5BV/h的流速对上述吸附后的树脂柱进行洗脱，收 集洗脱液，减压回收洗脱液至无醇味，加水，搅拌均匀，〇~15°C冷藏放置20~28h，得到银 杏内酯富集物；优选采用质量浓度50%~60%乙醇以I. 0~I. 5BV/h的流速对上述吸附后 的树脂柱进行洗脱；更优选的在采用40%~70%乙醇洗脱前，使用水以I. 0~I. 5BV/h的 流速对吸附后的树脂柱进行冲洗。
[0026] ADS-17树脂价格低廉，使用该树脂吸附分离，可以有效增加富集物中银杏内酯的 含量。使用后的ADS-17树脂，可以通过酸碱性溶剂洗涤处理，使树脂再生、反复使用，适于 工业化规模生产。
[0027] 进一步地，在采用40%~70%乙醇洗脱前，使用水以I. 0~I. 5BV/h的流速对吸 附后的树脂柱进行冲洗，可以将银杏酸、色素等杂质去除，从而进一步有效提高富集物中银 杏内酯的含量。
[0028] 本发明所述步骤（3)中，优选将所述银杏内酯富集物进行过滤，直至澄清，向所得