燥得提高ALP活性的蒲 公英提取物；其中乙醇用量为蒲公英质量的10倍。
[0026] 实施例2
[0027] 将蒲公英全草用体积浓度为60 %的乙醇超声波提取2次、每次超声波时间为 0. 5h，超声波频率为40KHz，然后过滤合并滤液，滤液再减压浓缩、干燥得提高ALP活性的蒲 公英提取物；其中乙醇用量为蒲公英质量的8倍。
[0028] 实施例3
[0029] 将蒲公英全草用水煎煮3次、每次煎煮时间为1. 2h，煎煮温度为100°C，然后过滤 合并滤液，滤液再减压浓缩、干燥得提高ALP活性的蒲公英提取物；其中水的用量为蒲公英 质量的10倍。
[0030]实验1:
[0031] 取对数生长期SD大鼠成骨细胞，调整细胞悬液密度为2X105个/mL，接种于6孔 板，每孔3mL，培养基均为F12培养基，细胞在标准环境下孵育24h后，弃去培养液及未贴壁 的细胞，随机分为空白对照组（胎牛血清10mL/L)组和9个蒲公英提取物组（实施例1、2 和3蒲公英提取物在3种不同浓度情况下）继续在标准环境下孵育5天；终止药物作用，用 IFCC推荐法测定碱性磷酸酶活性。实验结果如表1所示。
[0032]表1
[0034] 与空白组相比，本发明蒲公英提取物均能够提高成骨细胞的ALP活性，特别是在 高浓度条件下成骨细胞的ALP活显著升高。本发明蒲公英提取物可作为提高ALP活性产品 的主要活性成分使用。
[0035]实验2
[0036] 取对数生长期SD大鼠成骨细胞，调整细胞悬液密度为2X104个/mL，接种于96孔 板每孔l〇〇uL，培养基均为F12培养基，随机分为空白对照组（胎牛血清10mL/L)组、地塞米 松组（1XKT8g/mL)和9个蒲公英提取物组（实施例1、2和3蒲公英提取物在3种不同浓 度情况下）细胞在标准环境下孵育24h、48h和72h;孵育结束后，每孔加入20ulMTT，37°C 孵育4h，弃去上清后，每孔加150ulDMS0,在摇床上低速振荡lOmin，酶标仪570nm波长测定 吸光度（A)值；实验结果如表2所不。
[0037]表 2
[0039] 实验结果表明培养48h本发明蒲公英提取物均有明显的成骨细胞增殖作用，特别 是高浓度组增殖效果更为显著。成骨细胞在培养48h时进入大量有丝分裂，处于对数生长 期，随后进入平顶期，72h开始退化衰老。
[0040]实验 3
[0041] 取对数生长期SD大鼠成骨细胞，调整细胞悬液密度为2X105个/mL，接种于6孔 板每孔3mL，培养基均为F12培养基，细胞在标准环境下孵育24h后，弃去培养液及未贴壁 的细胞，随机分为空白对照组（胎牛血清10mL/L)组和9个蒲公英提取物组（实施例1、2 和3蒲公英提取物在3种不同浓度情况下）继续在标准环境下孵育5天；终止药物作用，用 IFCC推荐法测定骨钙素水平。实验结果如表3所示。
[0042]表 3
[0045] 实验结果表明本发明蒲公英提取物在中浓度组（0? 5mg/L)和高浓度组（5mg/L)可 显著升高成骨细胞骨钙素活性，能够促进SD大鼠成骨细胞骨钙素水平。
[0046]实验 4
[0047] 110只大鼠随机平均分为11组，每组10只，正常组给予蒸馏水；其余10组造模，给 予维甲酸80mg.kg'cf1，连续灌胃15d，结束后11组各处死2只，观测骨密度（BMD)判断是否 造模成功。正常组剩余8只仍给蒸馏水继续观察，余10组份为1个模型对照组和9个蒲公 英提取物组（实施例1、2和3蒲公英提取物在3种不同浓度情况下高剂量组：每天16. 2g/ kg，灌服；中剂量组：每天5. 4g/kg，灌服；低剂量组：每天1. 8g/kg，灌服），疗程均1个月。 末次给药24h后，以戊巴比妥钠（30mg/kg)麻醉，腹主动脉取血处死。剥离右侧胫骨、股骨 和腰椎骨。应用骨密度仪测定各组大鼠的BMD含量。实验结果如表4所示。
[0048] 表 4
[0050] 实验数据表明造模成功，并且本发明蒲公英提取物可提高患有骨质疏松小鼠的骨 密度。
【主权项】
1. 提高ALP活性的蒲公英提取物，其特征在于提高ALP活性的蒲公英提取物是由蒲公 英经乙醇回流提取获得；将蒲公英全草用体积浓度为30 %~95%的乙醇加热回流提取2~ 3次、每次加热回流时间为1~2h，加热回流温度为60~90°C，然后过滤合并滤液，滤液再 减压浓缩、干燥得提高ALP活性的蒲公英提取物；其中乙醇用量为蒲公英质量的6~12倍。2. 权利要求1所述蒲公英提取物作为提高ALP活性产品的主要活性成分的应用。3. 提高ALP活性的蒲公英提取物，其特征在于提高ALP活性的蒲公英提取物是由蒲公 英经乙醇超声波提取获得；将蒲公英全草用体积浓度为30 %~95 %的乙醇超声波提取2~ 3次、每次超声波时间为0. 5~lh，超声波频率为30~50KHz，然后过滤合并滤液，滤液再减 压浓缩、干燥得提高ALP活性的蒲公英提取物；其中乙醇用量为蒲公英质量的6~12倍。4. 权利要求3所述蒲公英提取物作为提高ALP活性产品的主要活性成分的应用。5. 提高ALP活性的蒲公英提取物，其特征在于提高ALP活性的蒲公英提取物是由蒲公 英经水煎煮提取获得；将蒲公英全草用水煎煮2~3次、每次煎煮时间为1~I. 5h，煎煮温 度为l〇〇°C，然后过滤合并滤液，滤液再减压浓缩、干燥得提高ALP活性的蒲公英提取物；其 中水的用量为蒲公英质量的6~12倍。6. 权利要求5所述蒲公英提取物作为提高ALP活性产品的主要活性成分的应用。
【专利摘要】提高ALP活性的蒲公英提取物及其应用，它涉及多种提高ALP活性的植物提取物及其应用。提高ALP活性的蒲公英提取物是由蒲公英经乙醇回流、乙醇超声波或水煎煮方法提取获得；作为提高ALP活性产品的主要活性成分的应用。本发明蒲公英提取物能够提高骨中ALP活性，而且高浓度条件下ALP活性提升幅度更为显著。
【IPC分类】A61P39/02, A61K36/288, A61P19/10, A61P7/10, A61P29/00, A61P1/02
【公开号】CN104940265
【申请号】CN201510390969
【发明人】王伟明
【申请人】王伟明
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2015年7月6日