调节il－23活性的方法；相关试剂的制作方法

专利名称：调节il－23活性的方法；相关试剂的制作方法
技术领域：
本发明主要涉及哺乳动物细胞因子的用途。更具体的说，本发明公开细胞因子在治疗流感病毒中的功能。
背景技术：
免疫系统保护个体抵抗感染因子例如病毒、细菌、多细胞生物和癌症。这个系统包括几种类型的淋巴样细胞和髓样细胞如单核细胞、巨噬细胞、树突细胞(DC)、嗜酸性粒细胞、T细胞、B细胞和嗜中性粒细胞。这些淋巴样细胞和髓样细胞往往产生称为细胞因子的信号蛋白。免疫反应包括炎症，即免疫细胞在全身或身体的特定位置聚集。响应感染因子或外来物质，免疫细胞分泌出细胞因子，后者反过来又调节免疫细胞增殖、发育、分化或迁移。细胞因子已牵涉到对许多病毒感染的免疫反应中(参见例如Abbas等(编辑)(2000)Cellular andMolecular Immunology，W.B.Saunders Co.，Philadelphia，PA；Oppenheim和Feldmann(编辑)(2001)Cytokine Reference，Academic Press，SanDiego，CA；Kaufmann等(2001)Immunobiol.204603-613；Saurez和Schultz-Cheey(2000)Dev.Comp.Immunol.24269-283；van Reeth和Nauwynck(2000)Vet.Res.31187-213；Garcia-Sastre(2001)Virology279375-384；Katze等(2002)Nat.Rev.Immunol.2675-687；van Reeth(2000)Vet.Microbiol.74109-116；Tripp(2003)Curr.Pharm.Des.951-59)。流感病毒是主要的病毒性致死原因，造成美国每年有20,000人死亡。病毒破坏呼吸道上皮，且可传播到肺外组织。高风险个体包括年龄在65岁以上和患有慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、慢性心脏病、糖尿病、慢性肾病或肝病、癌症或慢性结缔组织病等疾病的人。流感病毒分为A、B和C三种类型，其中A型在临床上最为重要。A型流感病毒的基因组编码十种蛋白质。由于表面蛋白质例如血凝素和神经氨酸酶上的抗原可变性，不可能生产出能提供对A型流感病毒(IV)株的长时间保护的疫苗(参见例如Treanor(2004)New Engl.J.Med.350218-220；Steinhauer和Skehel(2002)Annu.Rev.Genet.36305-332；Mozdzanowska等(2000)J.Immunol.1642635-2643；Nicholson等(2003)The Lancet 3621733-1745)。发生流感感染时，病毒特异性CD8+T细胞会以高浓度出现在呼吸道中，并在暴露于病毒抗原时快速表达出效应物功能。虽然流感病毒复制基本上局限于呼吸道，但感染不仅导致呼吸道中的免疫细胞被激活，而且还导致身体其它地方如肝脏中的免疫细胞被激活。CD8+T细胞通过直接裂解受感染细胞，或者通过分泌抗病毒细胞因子如γ干扰素(IFNγ)和肿瘤坏死因子α(TNFα)来对抗病毒感染。IFNγ可诱导能例如通过削弱病毒mRNA和双链RNA的代谢来抑制病毒复制的蛋白质。此外，IFNγ可例如通过上调抗原呈递细胞(APC)上的主要组织相容性复合体(MHC)来激活APC。对原发和继发流感感染的免疫反应其特性并不相同，因为IFNγ似乎不为对原发感染的反应所需，但为从继发感染中恢复却要使用它。另一个差别是，CD8+T对急性感染如急性病毒感染早期阶段的反应相对不依赖于CD4+T细胞，而继发感染中记忆CD8+T细胞作出的反应却由CD4+T细胞来增强。原发感染流感后，在次级淋巴器官及非淋巴组织如肺和肝中持久存留大量的记忆CD8+T细胞(参见例如Kaech和Ahmed(2003)Science 300263-265；Sun和Bevan(2003)Science300339-342；Turner等(2003)Immunity 18549-559；Ely等(2003)JImmunol.1701423-1429；Topham等(2001)J.Immunol.1676983-6990)。对原发和继发病毒感染的反应，它们之间的更多差别如下所述。结合MHC I类分子的病毒肽刺激CD8+T细胞，其中取决于所呈递的肽特性和病毒感染是原发还是继发，CD8+T细胞反应(例如细胞因子生产)的特征可有所不同。例如，原发感染可涉及对流感核蛋白和流感酸性聚合酶有特异性的T细胞免疫反应，但在继发感染中，大多数T细胞只识别核蛋白而不识别酸性聚合酶。在原发暴露后，从肺中采集的CD8+T细胞约有12％对NP366-374表位有特异性，而在继发暴露后，这个数字上升至例如60-70％。原发或继发感染过程中免疫反应的变化可反映出呈递抗原的APC特性的变化，例如是树突细胞(DC)还是巨噬细胞，以及反映出DC和巨噬细胞之间在继发感染中激活记忆T细胞的能力上的差别(参见例如Yewell和Garcia-Sastre(2002)Curr.Opin.Microbiol.5414-418；Canadian Medical Assoc.J.16849-57；Nguyen等(2000)J.Virol.745495-5501；Graham等(1993)J.Exp.Med.1781725-1732；Wong和Pamer(2003)Annu.Rev.Immunol.2129-70；Crowe等(2003)J.Exp.Med.198399-410；Julkunen等(2001)Vaccine19S32-S37；Webby等(2003)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1007235-7240；Turner等(2001)J.Immunol.1672753-2758；Wiley等(2001)J.Immunol.1673293-3299；Belz等(2000)J.Virol.743486-3493；Belz等(1998)Proc.Natl.Acad. Sci.USA 9513812-13817)。对流感的长期和广泛的免疫性可取决于产生CD8+T细胞反应的能力，但用当前的疫苗往往不能有效产生这种反应。提供针对例如流感病毒的原发和继发免疫反应过程中的病毒保护的需求一直没有得到满足。本发明通过提供使用IL-23和IL-23受体的激动剂和拮抗剂的方法，满足了这个需求。
发明概述本发明在部分基于以下发现，即IL-23激动剂或拮抗剂能调节对流感病毒的免疫反应。本发明提供调节CD8+T细胞对病毒、病毒抗原或病毒感染的反应的方法，所述方法包括给予有效量的p19、IL-23或IL-23R激动剂或者p19、IL-23或IL-23R拮抗剂。本发明还提供上述方法，其中所述拮抗剂包括a)衍生自能特异性结合p19、IL-23或IL-23R的抗体的结合成分(binding composition)；b)衍生自能特异性结合IL-23的IL-23R的可溶性受体；c)小分子或者d)能与编码p19或IL-23R的核酸特异性杂交的核酸。此外，本发明还提供上述方法，其中衍生自抗体的结合成分包括多克隆抗体；单克隆抗体；人源化抗体或其片断；Fab、Fv或F(ab’)2片断；抗体的肽模拟物；或者可检测标记，本发明还提供上述方法，其中所述核酸包括反义核酸或小干扰RNA(siRNA)。在另一个方面，本发明提供调节CD8+T细胞对病毒、病毒抗原或病毒感染的反应的方法，所述方法包括给予有效量的p19、IL-23或IL-23R激动剂或者p19、IL-23或IL-23R拮抗剂，进一步包括共给予有效量的a)p35、IL-12、p40、IL-12Rβ1或IL-12Rβ2的激动剂或b)p35、IL-12、p40、IL-12Rβ1或IL-12Rβ2的拮抗剂，以及提供上述方法，其中所述p19、IL-23或IL-23R激动剂降低a)为病毒抗原特异性CD8+T细胞的CD8+T细胞的百分比；b)为产生IFNγ的病毒抗原特异性CD8+T细胞的CD8+T细胞的百分比；或c)病毒抗原特异性CD8+T细胞的细胞毒性。本发明还设想上述方法，其中所述增加包括对继发病毒感染的免疫反应，所述方法包括给予有效量的p35、IL-12、p40、IL-12R31或IL-12Rβ2拮抗剂；以及提供上述方法，其中p19、IL-23或IL-23R拮抗剂增加对继发病毒感染的免疫反应过程中的CD8+T细胞总数。在另一个实施方案中，本发明提供上述方法，其中CD8+T细胞总数为肺、支气管肺泡灌洗液(BAL)、脾或淋巴结的CD8+T细胞总数，以及提供上述方法，所述方法进一步包括给予有效量的p35、IL-12、IL-12Rβ2或p40拮抗剂。本发明的又一个方面是调节CD8+T细胞对病毒、病毒抗原或病毒感染的反应的方法，所述方法包括给予有效量的p19、IL-23或IL-23R激动剂或者p19、IL-23或IL-23R拮抗剂；其中所述病毒是呼吸道病毒、黏膜病毒或流感病毒；或者其中所述流感病毒是A型流感、B型流感或C型流感病毒；或者上述方法，其中所述病毒抗原包括流感病毒抗原；以及上述方法，其中所述流感病毒抗原来自A型流感病毒核蛋白或A型流感病毒酸性聚合酶；或者其中所述病毒感染包括呼吸综合征或肺炎。在又一个实施方案中，本发明提供上述方法，所述方法进一步包括给予疫苗或佐剂，以及提供诊断病毒感染的方法，所述方法包括使结合成分与生物样品接触，其中所述结合成分能特异性结合p19、IL-23或IL-23R或者编码p19或IL-23R的核酸；并测量或测定结合成分与生物样品的特异性结合。结合成分可为例如抗体、核酸探针、PCR引物或分子信标。本发明还提供治疗A型流感病毒感染的方法，所述方法包括用有效量的p19、IL-23或IL-23R激动剂或拮抗剂进行治疗。本发明的还一个实施方案提供用以诊断病毒感染的试剂盒，所述试剂盒包含间格(compartment)和能特异性结合a)p19、IL-23或IL-23R；或b)编码p19或IL-23R的核酸的结合成分。
优选实施方案详述本文(包括后附的权利要求书)中所用词语的单数形式包括其相应的复数含义，除非上下文清楚地进行另外的规定。本文引用的所有参考文献通过引用结合到本文中，引用程度如同每个单独的出版物或专利申请被特地和单独指出通过引用结合到本文中。
I.定义“激活”、“刺激”和“处理”当应用于细胞或受体时，可具有相同的含义，例如用配体激活、刺激或处理细胞或受体，除非通过上下文或明确地另有规定。“配体”涵括天然和合成的配体，例如细胞因子、细胞因子变体、类似物、突变蛋白和衍生自抗体的结合成分。“配体”还涵括小分子，例如细胞因子的肽模拟物和抗体的肽模拟物。“激活”可指由内部机制或者由外部或环境因素调节的细胞激活。例如细胞、组织、器官或有机体的“反应”涵括生化或生理行为例如浓度、密度、生物区室当中的黏着或迁移、基因表达速率或分化状态的变化，其中所述变化与激活、刺激或处理相关，或者与内部机制如遗传编程(genetic programming)相关。分子的“活性”可描述或意指分子与配体或受体的结合；指催化活性；指刺激基因表达或细胞信号传导、分化或成熟的能力；指抗原活性；指对其它分子的活性的调节等。分子的“活性”还可指调节或维持细胞间相互作用如黏着的活性，或者指维持细胞结构如细胞膜或细胞骨架的活性。“活性”还可指比活性如[催化活性]/[mg蛋白质]或[免疫活性]/[mg蛋白质]、生物区室当中的浓度等。“增殖活性”涵括以下活性，其促进例如正常细胞分裂以及癌症、肿瘤、发育异常、细胞转化、转移和血管生成，或者为以上各项所必需，或者与以上各项明确相关。“佐剂”是增强疫苗的免疫反应的分子、化合物或组合物。本发明提供将IL-23或p19的激动剂或拮抗剂与佐剂如干扰素或弗氏佐剂一起给予的方法。佐剂已有描述(参见例如Proietti等(2002)J.Immunol.169375-383；Billiau和Matthys(2001)J.Leukoc.Biol.70849-860；Klinman(2003)Expert Rev.Vaccines(2003)2305-315；Hamilton(2003)J.Leukocyte Biol.73702-712；Holmgren等(2003)Vaccine 21(增刊2)S89-S95；Lemieux(2002)Expert Rev.Vaccines 185-93；Villinger(2003)Expert Rev.Vaccines 2317-326)。“给予”和“处理”当应用于动物、人、实验对象、细胞、组织、器官或生物流体时，指外源药物、治疗剂、诊断剂、化合物或组合物与所述动物、人、对象、细胞、组织、器官或生物流体接触。“给予”和“处理”可指例如治疗性、安慰性、药物动力学、诊断性、研究性和实验性方法。“细胞的处理”涵括试剂与细胞的接触以及试剂与流体的接触，其中所述流体与所述细胞接触。“给予”和“处理”还指例如用试剂、诊断剂、结合成分或另一种细胞试管内(in vitro)或体外(ex vivo)处理细胞。“处理”当应用于人、兽医或研究对象时，指治疗性处理、预防性或防护性措施，以研究性和诊断性应用。“处理”当应用于人、兽医或研究对象或者细胞、组织或器官时，涵括IL-23激动剂或IL-23拮抗剂与人或动物对象、细胞、组织、生理区室或生理流体的接触。“细胞的处理”还涵括IL-23激动剂或IL-23拮抗剂接触例如流体相或胶体相中的IL-23受体(IL-23R和IL-12Rβ1异二聚体)的情况，以及所述激动剂或拮抗剂接触流体的情况，例如所述流体与细胞或受体接触，但未证明所述激动剂或拮抗剂与所述细胞或受体接触的情况。“结合成分”指能够结合靶标的分子、小分子、大分子、抗体及其片断或类似物或者可溶性受体。“结合成分”还可指能够结合靶标的分子复合物如非共价复合物、电离分子和经共价或非共价修饰，例如通过磷酸化、酰化、交联、环化或有限切割修饰的分子。“结合成分”还可指与稳定剂、赋形剂、盐、缓冲液、溶剂或添加剂组合的能够结合靶标的分子。“结合”可定义为结合成分与靶标的缔合，其中所述缔合在所述结合成分可溶于或悬浮于溶液中的情况下，导致结合成分的正常布朗运动减低。“保守修饰变体”同时适用于氨基酸序列和核酸序列。对于特定的核酸序列，保守修饰变体指编码完全相同或基本完全相同的氨基酸序列的核酸，或者在所述核酸不编码氨基酸序列的情况下，指基本完全相同的核酸序列。由于遗传密码的简并性，有许多功能上完全相同的核酸可编码任何给定的蛋白质。至于氨基酸序列，技术人员将认识到，对核酸、肽、多肽或蛋白质序列的个体置换是“保守修饰变体”，所述置换只在被编码序列中用保守氨基酸置换一个氨基酸或少部分氨基酸。提供功能上相似氨基酸的保守置换表是本领域公知的。保守置换的实例是以下各组之一中的一个氨基酸与同一组中的另一个氨基酸交换(授予Lee等的美国专利第5,767,063号；Kyte和Doolittle(1982)J.Mol.Biol.157105-132)(1)疏水性正亮氨酸、Ile、Val、Leu、Phe、Cys，或Met；(2)中性亲水性Cys、Ser、Thr；(3)酸性Asp、Glu；(4)碱性Asn、Gln、His、Lys、Arg；(5)影响链方向的残基Gly、Pro；(6)芳族Trp、Tyr、Phe；(7)小氨基酸Gly、Ala、Ser。“衍生的”可用来描述例如从母体肽、寡肽或多肽衍生出的肽、寡肽或多肽结构，例如抗体。在此意义上，“衍生的”涵括例如其中肽的序列与母体中序列相同的肽结构，例如其中肽与母体完全相同，但在母体的N端、C端或同时在N端和C端有截短，或者有截短和融合，或者只有融合。“衍生的”还涵括具有见于母体中的相同序列，但有保守氨基酸变化或者有缺失或插入的肽，其中所述缺失或插入保持母体所固有的肽生物特性。“衍生的”涵括其中用母体作为原始化合物来合成肽或多肽的情况，和用母体的结构为指导从头合成肽或多肽的情况。“衍生的”多肽的一个实例是包含整合膜结合受体的大部分或全部胞外氨基酸，但不包含所述膜结合受体的跨膜区段和胞质区段的可溶性受体。“有效量”或“治疗有效量”指足以改善疾病或生理状况的症状或征候的量，或者足以允许或促进所述疾病或生理状况的诊断的量。对特定患者或兽医对象的有效量可有所不同，这取决于所治疗的病况、患者的总体健康情况、给药方法途径和剂量以及副作用的严重程度等因素(参见例如授予Netti等的美国专利第5,888,530号)。有效量可为最大剂量或者能避免显著副作用或毒性作用的给药方案。所述作用将导致诊断量度、参数或可检测信号改进至少5％、通常至少10％、更通常至少20％、最通常至少30％、优选至少40％、更优选至少50％、最优选至少60％、理想地至少70％、更理想地至少80％、最理想地至少90％，其中100％定义为正常对象所显示的诊断参数(参见例如Maynard等(1996)A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice，Interpharm Press，Boca Raton，FL；Dent(2001)Good Laboratory andGood Clinical Practice，Urch Publ.，London，UK)。“外源”指在有机体、细胞或人体外部产生的物质(根据上下文)。“内源”指在细胞、有机体或人体内部产生的物质(根据上下文)。“疾病”指病理状态或者与病理状态相关或易发生病理状态的状况。“传染性疾病”指例如由微生物、细菌、寄生虫、病毒等引起的疾病，还指对所述疾病的不恰当、无效或病理性的免疫反应。“致癌疾病”涵括癌症、转化细胞、肿瘤、发育异常、血管生成、转移等，还指对所述疾病的不恰当、无效或病理性的免疫反应。“有效量”指例如足以改善疾病、病况或病理状态的症状或征候的IL-23激动剂、IL-23拮抗剂、结合化合物或结合组合物的量。“有效量”还涉及足以允许或促进对疾病、病况或病理状态的症状或征候的诊断的IL-23激动剂、拮抗剂或者结合化合物或组合物的量。“抑制剂”和“拮抗剂”或者“激活剂”和“激动剂”分别指抑制性或激活性分子，如为了激活例如配体、受体、辅因子、基因、细胞、组织或器官。例如基因、受体、配体或细胞的调节剂是能改变所述基因、受体、配体或细胞的的活性的分子，其中所述活性可在其调节特性方面被激活、抑制或改变。调节剂可单独起作用，或者可使用辅因子，例如蛋白质、金属离子或小分子。抑制剂是能降低、阻断、防止、延迟激活、失活、脱敏或下调例如基因、蛋白质、配体、受体或细胞的化合物。激活剂是能提高、激活、促进、增强激活、致敏或上调例如基因、蛋白质、配体、受体或细胞的化合物。抑制剂还可定义为能减少、阻断或失活组成型活性的组合物。“激动剂”是能与靶标发生相互作用以造成或促进靶标活化增加的化合物。“拮抗剂”是能对抗激动剂的作用的化合物。拮抗剂能防止、减少、抑制或中和激动剂的活性。拮抗剂还可防止、抑制或减少靶标例如靶受体的组成型活性，甚至在没有鉴别出的激动剂的情况下。为检测抑制程度，例如用潜在的激活剂或抑制剂处理包含例如给定的蛋白质、基因、细胞或有机体的样品或试验物，并与无抑制剂的对照样品进行比较。对照样品(即不用拮抗剂处理)的相对活性值指定为100％。当相对于对照的活性值为约90％或更低、典型地85％或更低、更典型地80％或更低、最典型地75％或更低、一般地70％或更低、更一般地65％或更低、最一般地60％或更低、典型地55％或更低、通常50％或更低、更通常45％或更低、最通常40％或更低、优选35％或更低、更优选30％或更低、还更优选25％或更低、最优选低于25％时，即实现了抑制。当相对于对照的活性值为约110％、一般地至少120％、更一般地至少140％、更一般地至少160％、常常至少180％、更常常至少2倍、最常常至少2.5倍、通常至少5倍、更通常至少10倍、优选至少20倍、更优选至少40倍、最优选超过40倍或更高时，即实现了激活。激活或抑制的终点可如下监测。例如细胞、生理流体、组织、器官和动物或人对象的激活、抑制或对治疗的反应可通过终点来监测。终点可包括例如预定量或百分比的炎症、致癌性或者细胞脱粒或分泌(如释放细胞因子、毒性氧或蛋白酶)的标记。终点可包括例如预定量的离子流动或运输；细胞迁移；细胞黏着；细胞增殖；转移潜力；细胞分化；以及表型变化，如涉及炎症、凋亡、转化、细胞周期或转移的基因的表达变化(参见例如Knight(2000)Ann.Clin.Lab.Sci.30145-158；Hood和Cheresh(2002)Nature Rev.Cancer 291-100；Timme等(2003)Curr.Drug Trgets 4251-261；Robbins和Itzkowitz(2002)Med.Clin.North Am.861467-1495；Grady和Markowitz(2002)Annu.Rev.Genomics Hum.Genet.3101-128；Bauer等(2001)Glia 36235-243；Stanimirovic和Satoh(2000)Brain Pathol.10113-126)。抑制的终点通常为对照的75％或更低，优选为对照的50％或更低，更优选为对照的25％或更低，最优选为对照的10％或更低。通常，激活的终点至少为对照的150％，优选至少为对照的2倍，更优选至少为对照的4倍，最优选至少为对照的10倍。“表达”指特定基因编码的mRNA或多肽的量度。表达单位可为例如mRNA或多肽分子数/mg蛋白质、mRNA或多肽分子数/细胞的量度，为细胞、组织、细胞提取物或组织提取物的表达的测量值。表达单位可以是相对的，例如是对照和实验哺乳动物的信号的比较，或者是对mRNA或多肽有特异性的试剂的信号与非特异性试剂的信号的比较。在至少约30个核苷酸的一段序列至少有约55％的同源性，优选约25个核苷酸的一段序列至少有约75％的同源性，最优选约20个核苷酸的一段序列至少有约90％的同源性时，通常会出现特异性或选择性“杂交”，参见例如Kanehisa(1984)Nucleic Acids Res.12203-213。例如第一核酸与第二核酸在严格条件下的杂交是如下进行的杂交(1)采用低离子强度和高温进行洗涤，例如在50℃下0.015M氯化钠/0.0015M柠檬酸钠/0.1％十二烷基硫酸钠；(2)在杂交过程中采用变性剂如甲酰胺，例如42℃下的50％(vol/vol)甲酰胺及0.1％牛血清白蛋白/0.1％Ficoll(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)/0.1％聚乙烯吡咯烷酮/50mM磷酸钠缓冲液(pH 6.5)及750mM氯化钠、75mM柠檬酸钠；(3)在42℃下采用50％甲酰胺、5X SSC(0.75M NaCl，0.075M柠檬酸钠)、50mM磷酸钠(pH 6.8)、0.1％焦磷酸钠、5X Denhardt溶液、超声处理的鲑精DNA(50ng/ml)、0.1％SDS和10％硫酸葡聚糖，并在42℃下在0.2X SSC和0.1％SDS中洗涤；或者(4)在55℃下采用10％硫酸葡聚糖、2X SSC(氯化钠/柠檬酸钠)和50％甲酰胺的缓冲液，然后用55℃含EDTA的0.1X SSC进行高严格性洗涤(授予Botstein等的美国专利第6,387,657号)。核酸杂交的严格条件是盐、温度、有机溶剂和离液剂的函数。严格温度条件包括通常超过约30℃、更通常超过约37℃、典型地超过约45℃、更典型地超过约50℃、优选超过约65℃、更优选超过约70℃的温度。严格盐条件一般地低于约1M、更一般地低于约500mM、通常低于约400mM、更通常低于约300mM、典型地低于约200mM、优选低于约100mM、更优选低于约80mM、甚至低至低于约20mM。但是，参数的组合比任何单一参数的量度更为重要(Wetmur和Davidson(1968)J.Mol.Biol.31349-370)。“免疫病症”或“免疫疾病”涵括例如病理性炎症、炎性疾病、自身免疫失调或疾病。“免疫病症”还指感染、持续感染和增殖性病症，如癌症、肿瘤和血管生成，包括能抵抗免疫系统对其根除的感染、肿瘤和癌症。“癌性病症”包括例如癌症、癌细胞、肿瘤、血管生成和癌前病症如发育异常。“炎性疾病”指其病理全部或部分由例如免疫系统细胞的数量变化、迁移速率变化或激活变化引起的疾病或病理状况。免疫系统细胞包括例如T细胞、B细胞、单核细胞或巨噬细胞、抗原呈递细胞(APC)、树突细胞、小胶质细胞、NK细胞、NKT细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞或其它任何与免疫学明确相关的细胞，例如产生细胞因子的内皮细胞或表皮细胞。“炎性疾病”指其病理全部或部分由例如免疫系统细胞的数量增加和/或激活增加引起的疾病或病理状况，所述免疫系统细胞例如T细胞、B细胞、单核细胞或巨噬细胞、肺泡巨噬细胞、树突细胞、NK细胞、NKT细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞或肥大细胞。“敲除”(KO)指基因编码的多肽(例如IL-23的p19亚单位)的至少一部分的表达部分或完全减少，其中所述基因是哺乳动物的单个细胞、选定细胞或所有细胞的内源基因。KO还涵括生物功能被降低、但表达未必被降低的实施方案，例如包含表达的p19多肽的p19KO多肽，所述p19多肽含有插入的失活性肽、寡肽或多肽。敲除技术涵括编码序列或调节序列的破坏。细胞或哺乳动物可为“杂合敲除”，其中内源基因的一个等位基因已被破坏。或者，细胞或哺乳动物可为“纯合敲除”，其中内源基因的两个等位基因均已被破坏。“纯合敲除”并不意在将两个等位基因的破坏限制于完全相同的技术或在基因组中产生完全相同的结果。其中一个或两个p19等位基因已被敲除的哺乳动物包括在本发明的范围内。“配体”指例如可充当受体的激动剂或拮抗剂的小分子、肽、多肽和膜缔合或膜结合分子或者它们的复合物。“配体”还涵括不是激动剂或拮抗剂、但可结合受体而不显著影响其生物特性(如信号传导和黏着)的物质。此外，“配体”包括已被例如通过化学或重组方法改变成膜结合配体的可溶性形式的膜结合配体。按常规，在配体膜结合于第一细胞上的情况下，受体通常出现在第二细胞上。所述第二细胞的特性可与第一细胞相同或不同。配体或受体可以完全是胞内的，也就是说，它可位于胞质、细胞核或其它某些胞内区室中。配体或受体可改变其位置，例如从胞内区室到质膜的外表面。配体与受体的复合物称为“配体受体复合物”。当配体和受体参与信号传导途径时，配体出现在信号传导途径的上游位置，受体出现在下游位置。“记忆反应”涵括调节免疫系统的致敏(priming)的方法。致敏可通过给予来自病原体或癌细胞的抗原来实现，而致敏的调节可用IL-23激动剂或IL-23拮抗剂来实现。致敏的增强可通过给予例如L-23激动剂来实现。提高的记忆反应即提高的致敏涵括有或没有第二次给予抗原而建立的反应。可测量提高的记忆反应即提高的致敏而需要或不需要第二次给予抗原。“选择性”，例如受体对配体的选择性，指配体与受体的结合导致受体或者与受体明确相关的事件或分子发生可检测的变化，例如构象变化、磷酸化、与受体相关的蛋白质的性质或数量的变化、或者受体介导的或与受体相关的遗传表达的变化。提供“小分子”来治疗生理机能及肿瘤和癌症疾病。“小分子”定义为分子量低于10kD、典型地低于2kD、优选低于1kD的分子。小分子包括但不限于无机分子、有机分子、含有无机成分的有机分子、包含放射性原子的分子、合成分子、肽模拟物和抗体模拟物。比起大分子，小分子作为治疗物可能对细胞更具渗透性，对降解的易感性更低，且更不易于引发免疫反应。小分子如抗体和细胞因子的肽模拟物以及小分子毒素已被描述(参见例如Casset等(2003)Biochem.Biophys.Res.Commun.307198-205；Muyldermans(2001)J.Biotechnol.74277-302；Li(2000)Nat.Biotechnol.181251-1256；Apostolopoulos等(2002)Curr.Med.Chem.9411-420；Monfardini等(2002)Curr.Pharm.Des.82185-2l99；Domingues等(1999)Nat.Struct.Biol.6652-656；Sato和Sone(2003)Biochem.J.37l603-608；授予Stewart等的美国专利第6,326,482号)。“可溶性受体”指水溶性且出现在例如胞外流体、胞内流体中或与膜弱缔合的受体。可溶性受体还指经工程改造成为水溶性的受体。“结合特异性”、“结合选择性”等指预定的配体和预定的受体之间发生的结合相互作用，其能够让人将预定的配体与其它配体区别开来或将预定的受体与其它受体区别开来。“特异性”或“选择性”结合当指配体/受体、抗体/抗原或其它结合对时，表示能确定蛋白质在蛋白质异源群体和其它生物制品中的存在的结合反应。因此，在指定的条件下，指定的配体结合特定的受体，而不与样品中存在的其它蛋白质发生相当数量的结合。抗体或自抗体的抗原结合位点衍生的结合成分结合其抗原的亲和力，为结合其它任何抗原的亲和力的至少2倍、优选至少10倍、更优选至少20倍、最优选至少100倍。在优选的实施方案中，抗体的亲和力为大于约109升/mol(参见例如Munsen等(1980)Analyt.Biochem.107220-239)。
II.概述本发明提供用IL-23异二聚体、IL-23的p19亚单位、IL-23和IL-12的p40亚单位、IL-23受体异二聚体、IL-23R亚单位或IL-12Rβ1亚单位的多肽、核酸、变体、突变蛋白和模拟物，来调节对病毒或病毒感染的免疫反应的方法。本发明还提供使用hyperkine(即包含例如与p40亚单位连接的p19亚单位的融合蛋白)以及编码hyperkine的核酸的方法。(Oppmann等，出处同上；Fischer等(1997)Nature Biotechnol.15142-145；Rakemann等(1999)J.Biol.Chem.2741257-1266；和Peters等(1998)J.Immunol.16l3575-3581)。白介素-23(IL-23；又名IL-B30)是由新型p19亚单位和IL-12的p40亚单位组成的异二聚细胞因子(Oppmann等，出处同上)。和p35一样，p19的生物活性需要p40的共表达(Wiekowski等，出处同上)。IL-23受体包含结合p19的新型受体亚单位(IL-23R)和结合p40的IL-12Rβ1。这两个受体亚单位形成功能性信号传导复合物，表达于CD4+CD45Rblo记忆T细胞以及IFNγ活化骨髓巨噬细胞上(参见例如Parham等(2002)J.Immunol.1685699-5708)。可产生针对各种细胞因子蛋白质的抗体，所述蛋白质包括个别的、多态的、等位的、株的或种的变体及其片断，既可为天然(全长)形式，也可为重组形式。另外，也可产生针对受体蛋白质的抗体，所述蛋白质为天然(或活性)形式或为失活(例如变性)形式。也可使用抗特应抗体。给予IL-23激动剂即IL-23或IL-23 hyperkine可诱导例如记忆T细胞、PHA胚细胞、CD45RO T细胞、CD45RO T细胞的增殖，或者使PHA胚细胞或CD45RO T细胞生产γ干扰素(IFNγ)得以增强。与IL-12相反，IL-23在人和小鼠中优先刺激记忆T细胞群体而不是幼稚T细胞群体。IL-23能激活许多胞内信号传导分子，例如Jak2、Tyk2、Stat1、Stat2、Stat3和Stat4。IL-12能激活这同一组分子，不过Stat4对IL-23的反应相对较弱，而Stat4对IL-12的反应则较强(Oppmann等，出处同上；Parham等，出处同上)。IL-12和IL-23使用类似的信号转导机制。IL-23如同IL-12一样，通过使用其受体复合物来激活Jak2、Tyk2及Stat-1、-3、-4和-5。但是，Stat-4响应IL-23而被激活的程度比响应IL-12明显弱得多。而且，与IL-12相反，IL-23最突出诱导的Stat是Stat-3(参见例如Parham等，出处同上)。给予IL-23的p19亚单位可导致例如动物出现矮化生长、不育和死亡，还导致例如在胃肠道、肺、皮肤和肝脏中出现炎性浸润，及发生表皮细胞超常增生、小红细胞性贫血、嗜中性粒细胞计数增加、血清TNFα增加；以及导致肝脏中急性期基因表达增加。增强的IL-23表达出现在无限增殖化的而不是转化的表皮细胞系中(Wiekowski等，出处同上)。其它研究已证明，IL-23能调节对感染的免疫反应(参见例如Pirhonen等(2002)J.Immunol.1695673-5678；Broberg等(2002)J.Interferon Cytokine Res.22641-651；Elkins等(2002)Infection Immunity701936-1948；Cooper等(2002)J.Immunol.1681322-1327)。本发明提供调节对病毒的免疫反应的方法，包括调节CD4+T细胞、CD8+细胞、抗原呈递细胞(APC)如巨噬细胞和树突细胞(DC)、B细胞的反应和抗体反应。本发明还提供调节对原发和继发感染的反应的方法。CD4+T细胞和CD8+T细胞在响应流感病毒感染中均发挥作用。CD4+T细胞可通过裂解表达II类MHC的受感染细胞来作出响应，而CD8+T细胞可通过裂解表达I类MIC的受感染细胞来作出响应(参见例如Epstein等(1998)J.Immunol.160322-327；Jameson等(1999)J.Immunol.1627578-7583)。在原发和继发感染过程中发生不同病毒亚型侵入的情况下，免疫反应可更依赖于CD8+T细胞(参见例如Walzl等(2000)J.Exp.Med.1921317-1326；Epstein等(1998)J.Immunol.160322-327；Murali-Kishna等(1998)Immunity 8177-187)。此外，本发明设想抵抗针对病毒的病理性免疫反应的方法。可随针对病毒感染的免疫反应而发生的病理状况包括例如肺的嗜酸性细胞增多、哮喘和变态反应(参见例如Walzl等(2000)J.Exp.Med.1921317-1326；van Benten等(2001)Allergy 56949-956；Wohlleben等(2003)J.Immunol.1704601-4611)。而且，本发明设想在感染呼吸道病毒过程中将免疫细胞募集到肺中的方法。注意，对呼吸道病毒感染的原发反应可包括病毒特异性CD8+T细胞和非特异性CD8+T细胞。尽管流感病毒往往单独感染肺，但免疫反应包括非肺组织例如脾和引流(draining)纵隔淋巴结(MLN)中的T细胞的激活，以及这些免疫细胞向肺的募集(参见例如Topham等(2001)J.Immunol.1676983-6990；Roman等(2002)J.Exp.Med.196957-968；Doherty等(1997)Immunol.Rev.159105-117；Woodland等(2001)Immunol.Res.2453-67)。本发明提供使用IL-23激动剂或拮抗剂来调节对病毒抗原有特异性和没有特异性的免疫反应的方法。如对IL-12的许多研究所证明，对病毒例如流感病毒的免疫反应包括特异性和非特异性反应。IL-12已被鉴定为能促进对例如细菌和病毒的抗原特异性反应，同时相应地，抗IL-12抗体已被鉴定为抗原特异性反应的抑制剂(参见例如Cooper等(2002)J.Immunol.1681322-1327；Miller等(1995)J.Immunol.1554817-4828；Jong等(1997)J.Immunol.159786-793；Knutson和Disis(2004)Clin Exp.Immunol.135322-329；Clerici等(1993)Science2621721-1724；Lohr等(2002)Clin.Exp.Immunol.130107-114；Foss等(2002)Viral Immunol.15557-566；Seaman等(2004)J.Virol.78206-215；van der Meide等(2002)Vaccine 202296-2302)。探究对病毒的抗原特异性反应可包括测量例如IFNγ生产以及CD8+T细胞增殖方面的反应。例如，在淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒的情况下，虽然IL-12不导致抗原特异性CD8+T细胞增殖并不为其所需，但IL-12支持抗原特异性反应，这由IFNγ生产的抗原特异性增加所证实(Cousens等(1999)J.Exp.Med.1891315-1327)。本发明还设想提高B细胞反应的方法。例如，CD4+T细胞和CD8+T细胞可通过多种机制推动对流感的B细胞反应。包括B细胞和抗体的免疫反应可出现在原发和继发病毒感染中(参见例如Sangster等(2003)J.Exp.Med.1981011-1021；Graham和Braciale(1997)J.Exp.Med.1862063-2068)。本发明设想调节抗原呈递细胞(APC)对病毒如流感病毒的反应的方法。APC包括树突细胞(DC)、巨噬细胞和朗格汉斯细胞。DC与巨噬细胞在对原发和继发感染的免疫反应中的相对重要性可不同(参见例如Bender等(1995)J.Exp.Med.1821663-1671；Crowe等(2003)J.Exp.Med.198399-410)。细胞因子反应已被证明是对流感的免疫反应的一部分。流感感染会导致产生许多细胞因子，例如IL-12、IFNγ、IL-4、IL-5、IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-10、TNF、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和巨噬细胞集落刺激因子。有关IL-12的许多细节见下。IL-12作为IFNγ的强诱导物，能诱导活化CD8+T细胞的细胞毒性。例如通过IL-12诱导的IFNγ能引起受感染的靶细胞表达I类MHC抗原，从而使CD8+T细胞能够识别受感染的细胞并杀死它们。不同的抗原可在不同种类的MHC上表达。例如，H-2DbI类MHC用来呈递流感病毒的核蛋白和酸性聚合酶肽，而H-2KbI类MHC用来呈递流感病毒的许多其它的肽。对IL-12的依赖性可在流感感染过程中发生变化。对原发感染的早期阶段和晚期阶段的研究揭示，在早期原发感染中，对IL-12有依赖性，但以后却明显地对IL-12没有依赖性(参见例如Tsurita等(2001)J.Pharmacol.Exp.Therapeutics 298362-368；Pirhonen等(2002)J Immunol.1695673-5678；Monteiro等(1998)J.Virol.724825-4831；Julkunen等(2001)Vaccine 19S32-S37；Julkunen等(2001)Cytokine Growth FactorRevs.12171-180；Mbawuike等(1999)J.Infect.Dis.1801477-1486；Turner等(2001)J.Immunol.1672753-2758)；Arulandandam等(1999)J.Infect.Dis.180940-949；Monteiro等(1998)J Virol.724825-4831)。不同的病毒可在IL-23表达方面引起不同的反应。例如，如(IL-23的)p19亚单位的表达所测出，IL-23参与对I型眼单纯疱疹病毒(HSV-1)和仙台病毒感染的免疫反应，而相反，对A型流感病毒的反应不诱导p19(Broberg等(2002)J.Interferon Cytokine Res.22641-651；Pirhonen等(2002)J.Immunol.1695673-5678)。虽然已将IL-12和IL-23各自与对病毒感染的免疫反应进行关联，但由于IL-23对IFNγ的诱导较少和较低的IFNγ诱导毒性，用IL-23激动剂进行治疗比用IL-12进行治疗更有利(参见例如Lo等(2003)J.Immunol.171600-607；Leonard等(1997)Blood 902541-2548；Trinchieri(2003)Nature Revs.Immunol.3133-146；Cousens等(1999)J.Exp.Med.1891315-1328；Naylor和Hadden(2003)Int.Immunopharmacol.701205-1215；Fernandez等(1999)J.Immunol.162609-617；Orange等(1995)J.Exp.Med.18901-914)。在本发明的研究中，用C57BL/6J小鼠中的A型流感病毒感染作为人流感模型，来表征抗原特异性CD8+T细胞反应。用A型流感病毒X31重组株鼻内(i.n.)进行原发感染。对于继发感染，小鼠通过腹膜内(i.p.)注射A型流感病毒PR8株致敏，然后在第30天用X31株鼻内进行再攻击。从受感染小鼠收获肺、脾和淋巴结并加以分析。使用全肺消化物而不是支气管肺泡灌洗液(BAL)，以便分离和检测流感感染小鼠肺中所有的细胞类型。研究了IL-23激动剂和拮抗剂对针对原发和继发A型流感感染的免疫反应的影响。IL-23激动剂和拮抗剂对记忆反应的影响也作了表征，在这里记忆反应定义为例如在致敏过程中给予的IL-23激动剂或拮抗剂所引起的免疫反应的变化。IL-23激动剂采取IL-23多肽的形式给予。IL-23拮抗剂采取p35KO(其导致IL-12缺乏)和p40KO(其导致IL-23和IL-12同时缺乏)的形式。在敲除研究中，对IL-23而不是对IL-12有特异性的生理反应可通过将对p35KO和p40KO的生理反应进行比较来确定。对免疫显性A型流感病毒核蛋白(NP)肽NP366-374有特异性的CD8+T细胞用四聚体技术来定量和表型分析。四聚体复合物由负载流感肽NP366-374的I类MHC(H-2Db)单体组成。动力学研究同时在原发和继发A型流感病毒感染中进行III.激动剂、拮抗剂和结合成分本发明提供使用IL-23激动剂和拮抗剂的方法。IL-23激动剂涵括例如IL-23、IL-23变体、突变蛋白、hyperkine或其肽模拟物、IL-23R的竞争性抗体和编码这些激动剂的核酸。IL-23拮抗剂包括例如IL-23的抗体、IL-23R的封闭性抗体、基于IL-23R亚单位的胞外区域的可溶性受体、其肽模拟物和编码这些拮抗剂的核酸。本发明提供使用p19、p19和p40的复合物、IL-23R以及IL-23R和IL-12Rβ1的复合物的激动剂和拮抗剂的方法，包括能特异性结合p19、p19和p40的复合物、IL-23R以及IL-23R和IL-12Rβ1的复合物的蛋白质和蛋白质复合物的结合成分。IL-23 hyperkine涵括例如包含p19和p40的多肽序列的融合蛋白，其中p19和p40出现在一条连续的多肽链中。在所述连续的多肽链中p19和p40的序列可为任一顺序。所述融合蛋白在一条连续的多肽链中可含有位于p19和p40序列之间的连接序列。抗原性增加的区域可用于抗体产生。人p19的抗原性增加的区域出现在例如GenBank AAQ89442(gi37183284)的氨基酸16-28；57-87；110-114；136-154和182-186。人IL-23R的抗原性增加的区域出现在例如GenBank AAM44229(gi21239252)的氨基酸22-33；57-63；68-74；101-112；117-133；164-177；244-264；294-302；315-326；347-354；444-473；510-530和554-558。用Vector NTI Suite(Informax，Inc，Bethesda，MD)通过Parker plot进行分析。已制备了针对IL-23、IL-12的亚单位和针对IL-23受体、IL-12受体的亚单位的抗体。本发明提供针对p19、p40、p35、IL-23R、IL-12Rβ1和IL-12Rβ2的抗体及其片断(参见例如Lee等(2004)J.Exp.Med.199125-130；Parham等(2002)J.Immunol.1685699-5708；Rogge等(1999)J.Immunol.1623926-3932；Hoeve等(2003)Eur.J.Immunol.333393-3397；Oppmann等(2000)Immunity 13715-725；Presky等(1998)J.Immunol.1602174-2179)。本发明还设想结合p19和p40两者的表位、p35和p40两者的表位、IL-23R和IL-12Rβ1两者的表位以及IL-12Rβ1和IL-12Rβ2两者的表位的抗体。本发明还提供对应于IL-23R、IL-12Rβ1或IL-12Rβ2的胞外域的可溶性受体。本发明还提供包含人IL-23R的胞外区如GenBankAAM44229的氨基酸1-353或其片断的IL-23拮抗剂，其中所述胞外区或其片断特异性结合IL-23。小鼠IL-23R(GenBank NP_653131(gi21362353))也可用于制备可溶性受体。可获得IL-12Rβ1和IL-12Rβ2的序列。这些受体亚单位的胞外区包含IL-12Rβ1(GenBank P42701；GI1170462)的氨基酸24-545和IL-12Rβ2(GenBank Q99665；GI12229836)的氨基酸22-624。基于这些胞外区的可溶性受体不受这些确切的N端和C端氨基酸的限制，而是可以更长或更短，达例如一个、两个、三个或更多个氨基酸，只要基本保持配体结合特性。本发明还设想了基于可溶性受体的融合蛋白，例如以有助于纯化或稳定性。还制备了单克隆抗体、多克隆立体和人源化抗体(参见例如Sheperd和Dean(编辑)(2000)Monoclonal Antibodies，Oxford Univ.Press，New York，NY；Kontermann和Dubel(编辑)(2001)Antibody Engineering，Springer-Verlag，New York；Harlow和Lane(1988)Antibody ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHatbor，NY，第139-243页；Carpenter等(2000)J.Immunol.1656205；He等(1998)J.Immunol.1601029；Tang等(1999)J.Biol.Chem.27427371-27378；Baca等(1997)J.Biol.Chem.27210678-10684；Chothia等(1989)Nature 342877-883；Foote和Winter(1992)J.Mol.Biol.224487-499；授予Vasquez等的美国专利第6,329,511号)。设想了抗体和可溶性受体的突变蛋白和变体，例如通过聚乙二醇化或诱变以除去或置换脱酰胺Asn残基。抗原的纯化并不是抗体的产生所必需的。免疫可通过DNA载体免疫来进行，参见例如Wang等(1997)Virology 228278-284。或者，可用带有目的抗原的细胞来免疫动物。然后可从被免疫动物中分离出脾细胞，而脾细胞可与骨髓瘤细胞系融合产生杂交瘤(Meyaard等(1997)Immunity 7283-290；Wright等(2000)Immunity 13233-242；Preston等(1997)Eur.J.Immunol.271911-1918)。所得杂交瘤可通过功能试验或生物试验(即不依赖于拥有纯化抗原的试验)筛选所需抗体的产生。对于抗体产生，可证明用细胞进行免疫比用纯化抗原进行免疫更有优势(Kaithamana等(1999)J.Immunol.1635157-5164)。抗体通常以至少约10-3M、更通常至少10-6M、典型地至少10-7M、更典型地至少10-8M、优选至少约10-9M、更优选至少10-10M、最优选至少10-11M的KD发生结合(参见例如Presta等(2001)Thromb.Haemost.85379-389；Yang等(2001)Crit.Rev.Oncol.Hematol.3817-23；Camahan等(2003)Clin.Cancer Res.(增刊)93982s-3990s)。本发明提供了包含IL-23R或IL-12Rβ1受体多肽的胞外域的可溶性受体。可溶性受体可按标准方法制备和使用(参见例如Jones等(2002)Biochim.Biophys.Acta 1592251-263；Prudhomme等(2001)ExpertOpinion Biol.Ther.1359-373；Fernandez-Botran(1999)Crit.Rev.Clin.Lab Sci.36165-224)。本发明还提供用于siRNA干扰的组合物(参见例如Arenz和Schepers(2003)Naturwissenschaften 90345-359；Sazani和Kole(2003)J.Clin.Invest.112481-486；Pirollo等(2003)Pharmacol.Therapeutics 9955-77；Wang等(2003)Antisense Nucl.Acid Drug Devel.13169-189)。
IV.治疗组合物、方法本发明提供治疗或预防病毒感染的方法。这些方法可与疫苗(例如灭活流感疫苗、活减毒流感疫苗和黏膜疫苗)或小分子(例如离子通道阻断剂如金刚烷胺和金刚乙胺以及神经氨酸酶抑制剂如扎那米韦和奥塞米韦)一起使用。本发明提供用以治疗和诊断呼吸道病毒(包括流感病毒)的方法，以用于农业中，如用于驯养的猪、家畜或家禽(参见例如van Ginkel等(2000)Emerging Infectious Diseases 6123-132；Sidwell和Smee(2000)Antiviral Res.481-16；Couch(2000)New Engl.J.Med. 3431178-1787；Yewdell和Garcia-Sastre (2002)Curr.OpinionMicrobiol.5414-418；Prober(2002)Semin.Pediatr.Infect.Dis.1331-39；Ellis和Zambon(2002)Rev.Med.Virol.12375-389；Zambon(2001)Rev.Med.Virol.11227-241；Ulmer(2002)Vaccine 20(增刊2)S74-S76；Tollis和Di Trani(2002)The Veterinary J.164202-215)。为制备包含p19或IL-23激动剂或拮抗剂的药物或无菌组合物，将试剂与药物可接受的载体或赋形剂混合。治疗剂和诊断剂的制剂可通过与生理可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合成例如冻干粉末、浆、水溶液、洗液或混悬液的形式来制备(参见例如Hardman等(2001)Goodman and Gilman′s The Pharmacological Basis of Therapeutics，McGraw-Hill，New York，NY；Gennaro(2000)RemingtonThe Scienceand Practice of Pharmacy，Lippincott，Williams，and Wilkins，New York，NY；Avis等(编辑)(1993)Pharmaceutical Dosage FormsParenteralMedications，Marcel Dekker，NY；Lieberman等(编辑)(1990)Pharmaceutical Dosage FormsTablets，Marcel Dekker，NY；Lieberman等(编辑)(1990) Pharmaceutical Dosage FormsDisperse Systems，Marcel Dekker，NY；Weiner和Kotkoskie(2000)Excipient Toxicity andSafety，Marcel Dekker，Inc.，New York，NY)。为治疗物选择给药方案要取决于几个因素，包括实体(entity)的血清或组织周转率、症状水平、实体的免疫原性和生物基质中的靶细胞的可接近性。优选给药方案能使递送到患者的治疗物量最大，同时符合可接受的副作用水平。因此，所递送的生物制品的量部分取决于具体的实体和待治疗病症的严重程度。可获得有关选择抗体、细胞因子和小分子的适当剂量的指导(参见例如Wawrzynczak(1996)AntibodyTherapy，Bios Scientific Pub.Ltd，Oxfordshire，UK；Kresina(编辑)(1991)Monoclonal Antibodies，Cytokines and Arthritis，Marcel Dekker，NewYork，NY；Bach(编辑)(1993)Monoclonal Antibodies and PeptideTherapy in Autoimmune Diseases，Marcel Dekker，New York，NY；Baert等(2003)New Engl.J.Med.348601-608；Milgrom等(1999)New Engl.J.Med.3411966-1973；Slamon等(2001)New Engl.J.Med.344783-792；Beniaminovitz等(2000)New Engl.J.Med.342613-619；Ghosh等(2003)New Engl.J.Med.34824-32；Lipsky等(2000)New Engl.J.Med.3431594-1602)。抗体、抗体片断和细胞因子可通过连续灌注或者通过例如一天、一周或每周1-7次的间隔剂量来提供。剂量可通过静脉内、皮下、局部、口腔、鼻腔、直肠、肌内、脑内或吸入提供。优选的剂量方案其最大剂量或剂量频率避免产生显著的不良副作用。每周总剂量为一般地至少0.05μg/kg体重、更一般地至少0.2μg/kg、最一般地至少0.5μg/kg、典型地至少1μg/kg，更典型地至少10μg/kg、最典型地至少100μg/kg、优选至少0.2mg/kg、更优选至少1.0mg/kg、最优选至少2.0mg/kg、最佳地至少10mg/kg、更最佳地至少25mg/kg、最最佳地至少50mg/kg(参见例如Yang等(2003)New Engl.J.Med.349427-434；Herold等(2002)New Engl.J.Med.3461692-1698；Liu等(1999)J.Neurol.Neurosurg.Psych.67451-456；Portielji 等(20003)Cancer Immunol.Immunother.52133-144)。小分子治疗物例如肽模拟物、天然产物或有机化学品的所需剂量，与抗体或多肽大约相同(以mole/kg体重计)。小分子治疗物的所需血浆浓度与抗体大约相同(以mole/kg体重计)。对于具体的患者，有效量可能取决于某些因素而有所变化，所述因素例如待治疗的病症、患者的总体健康状况、给药的方法途径和剂量以及副作用的严重程度(参见例如Maynard等(1996)A Handbook ofSOPs for Good Clinical Practice，Interpharm Press，Boca Raton，FL；Dent(2001)Good Laboratory and Good Clinical Practice，Urch Publ.，London，UK)。典型的兽医对象、实验对象或研究对象包括猴、狗、猫、大鼠、小鼠、兔、豚鼠、马和人。可由临床医生例如使用本领域公知或怀疑会影响治疗的、或者预测会影响治疗的参数或因素，来确定适当的剂量。通常，剂量从稍低于最佳剂量的量开始，然后以小增量增加，直到相对于任何消极副作用获得所需的或最佳的效果。重要的诊断量度包括例如炎症的症状或所产生炎性细胞因子的水平。优选将要使用的生物制品衍生自与被靶向治疗的动物相同的物种，从而使对试剂的体液反应减至最低。用第二治疗剂例如细胞因子、类固醇、化疗剂、抗生素或放射进行共给药或治疗的方法是本领域公知的(参见例如Hardman等(编辑)(2001)Goodman and Gilman′s The Pharmacological Basis ofTherapeutics，第10版，McGraw-Hill，New York，NY；Poole和Peterson(编辑)(2001)Pharmacotherapeutics for Advanced PracticeA PracticalApproach，Lippincott，Williams & Wilkins，Phila.，PA；Chabner和Longo(编辑)(2001)Cancer Chemotherapy and Biotherapy，Lippincott，Williams& Wilkins，Phila.，PA)。治疗物的有效量将症状典型地减少至少10％；通常至少20％；优选至少约30％；更优选至少40％；最优选至少50％。给药途径是通过例如局部或皮肤施用，通过静脉内、腹膜内、脑内、肌内、眼内、动脉内、脑脊髓内、伤口内(intralesional)或肺部途径注射或灌注，或者通过缓释系统或植入物施用(参见例如Sidman等(1983)Biopolymers 22547-556；Langer等(1981)J.Biomed.Mater.Res.15167-277；Langer(1982)Chem.Tech.1298-105；Epstein等(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 823688-3692；Hwang等(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 774030-4034；美国专利第6,350466号和第6,316,024号)。
V.试剂盒和诊断试剂基于抗体、核酸杂交和PCR方法的流感诊断方法已得到描述。涉及病毒(包括呼吸道病毒和黏膜病毒如流感病毒)的试验和诊断方法包括基于酶的试验(如流感病毒神经氨酸酶抑制剂)、基于细胞的试验(例如使用Madin Darby犬肾细胞)和动物模型(例如流感感染的雪貂、小鼠和鸡动物模型)。本发明提供IL-23的多肽及其片断、IL-23的核酸及其片断于诊断试剂盒中，例如用以诊断病毒性疾病，包括A型流感以及呼吸道和黏膜组织的病毒性疾病。本发明还提供结合成分，包括抗体或抗体片断，用以检测IL-23及其代谢物和降解产物。通常，所述试剂盒具有间格，其中含有IL-23多肽或其抗原片断、其结合成分，或者核酸如核酸探针、引物或分子信标(参见例如Rajendran等(2003)Nucleic AcidsRes.315700-5713；Cockerill(2003)Arch.Pathol.Lab.Med.1271112-1120；Zammatteo等(2002)Biotech.Annu.Rev.885-101；Klein(2002)Trends Mol.Med.8257-260)。诊断方法可包括使来自对象(例如试验对象)的样品与特异性结合IL-23或IL-23受体多肽或核酸的结合成分接触。所述方法可进一步包括使来自对照对象、正常对象或者试验对象正常组织或流体的样品与所述结合成分接触。此外，所述方法还可另外包括将所述成分与所述试验对象的特异性结合与所述成分与正常对象、对照对象或者来自试验对象的正常组织或流体的特异性结合进行比较。可将试验样品或试验对象的表达或活性与对照样品或对照对象的表达或活性进行比较。对照样品可包括例如患有免疫疾病的患者中的未受影响或未发炎组织。对照对象或对照样品的表达或活性可以以预定值提供，例如从对照对象的统计学适当组获得。试剂盒可包含例如试剂和间格、试剂和使用说明书或者试剂及间格和使用说明书。试剂可包括IL-23激动剂或拮抗剂或其抗原性片断、结合成分，或者反义和/或有义方向的核酸。用以测定试验化合物(例如从生物样品或者从化学文库获得)的结合的试剂盒，可包含对照化合物、标记化合物以及使游离标记化合物与结合标记化合物分离的方法。对照化合物可包括p19、p40、IL-23R、IL-12Rβ1的多肽或者编码p19、p40、IL-23R、IL-12Rβ1的核酸的区段。所述区段可包含零、一、二或更多个抗原性片断。“标记的”成分可通过光谱学、光化学、生物化学、免疫化学、同位素或化学方法直接或间接进行检测。例如，有用的标记包括32P、33P、35S、14C、3H、125I、稳定同位素、荧光染料、密电子试剂、底物、附加表位或酶(例如酶联免疫测定中所用的酶)或fluorette(Rozinov和Nolan(1998)Chem.Biol.5713-728)。诊断试验可应用于生物基质，如活细胞、细胞提取物、细胞裂解物、固定细胞、细胞培养物、体液或法医样品。可用于诊断或试剂盒用途的缀合抗体包括与染料、同位素、酶和金属偶联的抗体，参见例如Le Doussal等(1991)New Engl.J.Med.146169-175；Gibellini等(1998)J.Immunol.1603891-3898；Hsing和Bishop(1999)New Engl.J.Med.1622804-2811；Everts等(2002)New Engl.J.Med.168883-889。存在各种不同的试验形式，如放射免疫测定(RIA)、ELISA和芯片实验室(lab on a chip)(美国专利第6,176,962号和第6,517,234号)。
VI.应用本发明提供使用IL-23和IL-23受体的激动剂和拮抗剂来检测、预防和治疗黏膜病毒、呼吸道病毒、正粘病毒科家族病毒、流感病毒、麻疹病毒、鼻病毒、冠状病毒、肠道病毒、腺病毒、副流感病毒(PIV)、呼吸道合胞病毒(RSV)和疱疹病毒的方法(参见例如Mackie(2003)Paediatr.Respir.Rev.484-90；Wilson和yon Itzstein(2003)Curr.DrugTargets 4389-408；Cox等(2004)Scand.J.Immunol. 591-15；Wiley等(2001)J.Immunol 1673293-3299；Ninomiya等(2002)Vaccine 203123-3129；Crowe和Williams(2003)Paediatric Respiratory Revs. 4112-119；O’Hagan(1998)J.Pharm.Pharmacol 501-10)。身体的黏膜区域包括例如肺黏膜、鼻黏膜、胃肠黏膜和泌尿生殖器黏膜。导致黏膜感染的病毒包括例如流感病毒、疱疹病毒和免疫缺陷病毒。本发明提供提高对病毒的非抗原特异性免疫和抗原特异性免疫的方法，以及增强对原发感染、继发感染的免疫反应和增强对病毒如流感病毒的记忆反应的方法。本发明还提供调节CD8+T细胞反应应答病毒或病毒抗原的方法，所述细胞反应包括CD8+T细胞介导的细胞毒性和CD8+T细胞激活或增殖。可参考以下实施例更好地理解本发明的广泛范围，所述实施例并不意在使本发明局限于具体的实施方案。
实施例I.一般方法可获得用以表征病毒、通过遗传工程修饰病毒以及治疗和诊断病毒感染的标准技术(参见例如Mahy和Kango(1996)Virology MethodsManual，Academic Press，San Diego，CA；Flint等(2003)Principles ofVirologyMolecular Biology，Pathogenesis，and Control of Animal Viruses，Am.Soc.Microbiol.，Wasn.D.C.；Fields等(编辑)(2001) Virology，Lippincott，Williams，and Wilkins，NY，NY；Cann(2001)Principles ofMolecular Virology，Academic Press，San Diego，CA；White和Fenner(1994)Medical Virology，第4版，Academic Press，San Diego，CA；Murphy等(1999) Veterinary Virology，第3版，Academic Press，SanDiego，CA；Richman等(编辑)(2002)Clinical Virology，第2版，Am.Soc.Microbiol.，Wash.D.C.)。可获得进行流式细胞术，包括荧光激活细胞分选术(FACS)的方法(参见例如Owens等(1994)Flow Cytometry Principles for ClinicalLaboratory Practice，John Wiley and Sons，Hoboken，NJ；Givan(2001)Flow Cytometry，第2版；Wiley-Liss，Hoboken，NJ；Shapiro(2003)Practical Flow Cytometry，John Wiley and Sons，Hoboken，NJ)。可获得适合用于修饰核酸的荧光试剂，包括核酸引物和探针、多肽及抗体，例如用作诊断试剂(参见例如Molecular Probes(2003)Catalogue，Molecular Probes，Inc.，Eugene，OR；Sigma-Aldrich(2003)Catalogue，St.Louis，MO)。免疫系统的组织学标准方法已有描述(参见例如Muller-Harmelink(编辑)(1986)Human ThymusHistopathology and Pathology，Springer Verlag，New York，NY；Hiatt等(2000)Color Atlas of Histology，Lippincott，Williams，and Wilkins，Phila，PA；Louis等(2002)BasicHistologyText and Atlas，McGraw-Hill，New York，NY)。可获得使用动物模型(例如敲除小鼠)的方法以及试验、评估和筛选诊断剂、治疗剂和药物的方法(参见例如Car和Eng(2001)Vet.Pathol.3820-30；Kenyon等(2003)Toxicol.Appl.Pharmacol.18690-100；Deurloo等(2001)Am.J Respir.Cell Mol.Biol.25751-760；Zuberi等(2000)J.Immunol.1642667-2673；Temelkovski等(1998)Thorax 53849-856；Horrocks等(2003)Curr.Opin.Drug Discov.Devel.6570-575；Johnston等(2002)Drug Discov.Today 7353-363)。分子生物学的标准方法已有描述(参见例如Maniatis等(1982)Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor，NY；Sambrook和Russell(2001)MolecularCloning，第3版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHarbor，NY；Wu(1993)Recombinant DNA，第217卷，Academic Press，San Diego，CA)。标准方法还发表于Ausbel等(2001)Current Protocols inMolecular Biology，第l-4卷，John Wiley and Sons，Inc.New York，NY，其描述了在细菌细胞中的克隆和DNA诱变(第1卷)、在哺乳动物细胞和酵母中的克隆(第2卷)、复合糖和蛋白质表达(第3卷)和生物信息学方法(第4卷)。蛋白质纯化的方法，包括免疫沉淀法、色谱法、电泳法、离心法和结晶法已有描述(Coligan等(2000)Current Protocols in ProteinScience，第1卷，John Wiley and Sons，Inc.，New York)。蛋白质的化学分析、化学修饰、翻译后修饰、融合蛋白生产、糖基化已有描述(参见例如Coligan等(2000)Current Protocols in Protein Science，第2卷，JohnWiley and Sons，Inc.，New York；Ausubel等(2001)Current Protocols inMolecular Biology，第3卷，John Wiley and Sons，Inc.，NY，NY，第16.0.5-16.22.17页；Sigma-Aldrich，Co.(2001)Products for Life ScienceResearch，St.Louis，MO；第45-89页；Amersham Pharmacia Biotech(2001)BioDirectory，Piscataway，N.J.，第384-391页)。生产、纯化和裂解多克隆和单克隆抗体的方法已有描述(Coligan等(2001)CurrentProtcols in Immunology，第1卷，John Wiley and Sons，Inc.，New York；Harlow和Lane(1999)Using Antibodies，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor，NY；Harlow和Lane，出处同上)。可获得表征配体/受体相互作用的标准技术(参见例如Coligan等(2001)CurrentProtcols in Immunology，第4卷，John Wiley，Inc.，New York)。可获得用以确定例如抗原片断、前导序列、蛋白质折叠、功能域、糖基化位点和序列对比的软件包和数据库(参见例如GenBank，Vector NTISuite(Informax，Inc，Bethesda，MD)；GCG WisconsinPackage(Accelrys，Inc.，San Diego，CA)；DeCypher(TimeLogic Corp.，Crystal Bay，Nevada)；Menne等(2000)Bioinformatics 16741-742；Menne等(2000)Bioinformatics Applications Note 16741-742；Wren等(2002)Comput.Methods Programs Biomed.68177-181；von Heijne(1983)Eur.J.Biochem.13317-21；von Heijne(1986)Nucleic Acids Res.144683-4690)。
II.野生型小鼠、p35KO小鼠和p40KO小鼠的原发感染
提供进行细胞毒性试验、胞内IFNγ试验的方案，用以鉴定抗原特异性CD8+T细胞和感染小鼠的四聚体方法(参见例如Leander等(2002)Mechanisms Ageing Dev el.1231167-1181；Halstead等(2002)Nature Immunol.3536-541)。CD8+T细胞通过穿孔蛋白/粒酶机制或通过Fas-介导的细胞毒性介导被病毒感染细胞的死亡。51Cr释放试验(5h)只对穿孔蛋白/粒酶机制敏感(Belz等(2000)J.Virol.743486-3493)。用流感病毒感染小鼠的研究包括使用相对较温和的HKx31株(又名H3N2)和较为烈性的PR8株(Flynn等(1998)Immunity8683-691；Belz等(2000)J.Virol.743486-3493)。原发感染通过鼻内给予X31重组A型流感病毒进行诱导。在野生型小鼠、p35KO小鼠(又名p35-/-小鼠，明确缺乏IL-12)和p40KO小鼠(又名p40-/-小鼠，缺乏IL-12和IL-23)中诱导感染。在接种后t＝10天收获肺。原发感染过程中从肺中收获的总CD8+T细胞在p35KO中增加。p40KO小鼠中没有出现增加(表1)。虽然由于缺乏IL-12而预期在p40KO小鼠中有增加，但这一增加被p40KO防止了，表明另外缺乏IL-23会防止预期的CD8+T细胞增加。本发明提供IL-12拮抗剂来刺激总CD8+T细胞的增加(表1)。本发明还提供IL-23激动剂来刺激总CD8+T细胞(表1)。除调节CD8+T细胞的总数外，p35KO和p40KO还影响对病毒抗原有特异性的CD8+T细胞的百分比或比例。抗原特异性CD8+T细胞的百分比或比例从野生型的约7.0％提高到p35KO的约11.5％。本发明提供IL-12拮抗剂来刺激抗原特异性CD8+T细胞反应的增加(表1)。p40KO中没有出现抗原特异性CD8+T细胞反应的增加，表明IL-23的缺乏防止抗原特异性CD8+T细胞的增加，即防止p35KO中出现的相同类别的测出增加(表1)。因此，本发明提供IL-23激动剂来增加抗原特异性CD8+T细胞反应(表1)。IFNγ表达研究提供了以下结果。产生IFNγ的抗原特异性CD8+T细胞的比例从野生型中的约9.0％增加到p35KO中的约13.0％。因此，本发明提供IL-12拮抗剂来增加为抗原特异性CD8+T细胞的CD8+T细胞的百分比。p40KO没有出现这一增加(表1)。因此，本发明提供IL-23激动剂来增加产生IFNγ的抗原特异性CD8+T细胞反应(表1)。
表1.从原发感染的肺中收获的细胞中，CD8+T细胞的数量和病毒抗原特异性CD8+T细胞的比例。IFNγ生产通过胞内染色来测量。细胞毒性试验(铬释放)以50∶1、25∶1、12.5∶1和6.25∶1的效应物∶靶标比例进行。
表1公开了50∶1比例下的细胞毒性结果。
50∶1、25∶1、12.5∶1和6.25∶1的效应物∶靶标比例下的体外细胞毒性试验均证明，使用野生型细胞时细胞毒性最低，使用p35KO小鼠细胞时细胞毒性中等，使用p40KO细胞时细胞毒性最高。表1显示的是50∶1比例下的试验结果。本发明提供L-12拮抗剂、IL-23拮抗剂来提高抗原特异性细胞毒性，或者提供L-12拮抗剂和IL-23拮抗剂的组合来提高抗原特异性CD8+T细胞细胞毒性(表1)。
III.野生型小鼠、p35KO小鼠和p40KO小鼠的继发感染
在野生型小鼠、p35KO小鼠和p40KO小鼠中研究了A型流感病毒引起的继发感染。继发感染的方案涉及在t＝0天腹膜内给予流感病毒PR8株致敏，在t＝30天鼻内给予流感病毒X31株再攻击。在t＝35天，即在暴露于X31病毒后五天收获组织(表2)。相对于野生型小鼠，p35KO小鼠的肺中CD8+T细胞总数增加，但这一相对增加在p40KO小鼠中似乎不出现。在p35KO小鼠和p40KO小鼠的肺中都发现抗原特异性CD8+T细胞有一定的富集(表2)。
表2.野生型小鼠、p35KO小鼠和p40KO小鼠的继发感染
IV.在原发感染和继发感染过程中给予IL-23
如下所述，每隔一段时间腹膜内(i.p.)给予小鼠IL-23或IL-12。在原发感染的试验中，在鼻内接种时开始给予细胞因子(表3)。在继发感染的试验中，在再攻击时开始给予细胞因子(表4)。在记忆反应的试验中，在初次致敏时开始给予细胞因子，但这里没有在再攻击时给予细胞因子(表5)。更多的方法细节如下。对于原发感染，小鼠鼻内(i.n.)感染A型流感病毒X31株，然后每隔一天用20nmole的IL-23或IL-12腹膜内(i.p.)处理。细胞因子处理在第0、2、4、6和8天进行。在第10天收获肺，用于免疫反应分析，例如测试CD8+T细胞的数量和细胞毒性(表3)。对于继发感染，小鼠用A型流感病毒PR8株腹膜内(i.p.)致敏(第0天)。在第30天小鼠用流感病毒X31株鼻内(i.n.)再攻击，并每隔一天用20nmole的IL-23或IL-12腹膜内(i.p.)处理。细胞因子处理在第30、32和34天进行。在第35天收获肺，以作免疫反应分析(表4)。对于记忆反应试验，小鼠用流感病毒PR8株腹膜内(i.p.)致敏，并每隔一天用20nmole的IL-23或IL-12腹膜内(i.p.)处理，直到第8天。细胞因子处理在第0、2、4、6和8天进行。然后在第30天用流感病毒X31株鼻内(i.n.)再攻击小鼠。在第35天收获肺，以作免疫反应分析(表5)。在对流感感染的原发反应过程中给予细胞因子得出以下结果。在总CD8+T细胞数的试验中，CD8+T细胞的总数对未处理和IL-23处理的小鼠大约相同，然而在IL-12处理的小鼠中CD8+T细胞的总数增加(表3)。在IL-23处理的小鼠中病毒抗原特异性CD8+T细胞的比例下降(表3)。在对抗原特异性的产生IFNγ的CD8+T细胞的试验中，结果同样证明给予IL-23会降低抗原特异性CD8+T细胞的比例(表3)。本发明提供IL-23激动剂来降低抗原特异性CD8+T细胞的比例，提供IL-23拮抗剂来提高抗原特异性CD8+T细胞的比例，例如在原发感染过程中(表3)。细胞毒性试验结果如下。在原发感染的研究中，给予IL-23降低CD8+T细胞介导的病毒抗原特异性细胞毒性。本发明提供IL-23激动剂来降低CD8+T细胞介导的病毒抗原特异性细胞毒性。本发明还提供IL-23拮抗剂来刺激或提高CD8+T细胞介导的病毒抗原特异性细胞毒性(表3)。还测量了血清IFNγ水平。如ELISA试验所测出，在原发感染的进程中给予IL-12但不给予IL-23提高受感染小鼠的血清IFNγ。在感染后第1、3和5天，IL-1 2处理的小鼠中血清IFNγ分别为约100、570和130pg/ml。非细胞因子处理的和IL-23处理的小鼠的血清IFNγ水平在进行研究的时间范围内低于50pg/ml。测试对继发感染的反应同样是总CD8+T细胞、病毒抗原特异性的CD8+T细胞的比例和细胞毒性试验(表4)。相对于没有用细胞因子处理的小鼠，用IL-23处理造成CD8+T细胞的总数下降，用IL-12处理时CD8+T细胞的总数下降得更多。本发明提供使用IL-23激动剂、IL-12的激动剂或IL-23和IL-12两者的激动剂来降低继发感染过程中CD8+T细胞总数的方法。本发明还提供使用IL-23拮抗剂、IL-12的拮抗剂或IL-23和IL-12两者的拮抗剂来提高继发感染过程中CD8+T细胞总数的方法(表4)。给予IL-23或IL-12极少影响对病毒抗原有特异性的CD8+T细胞的总数比例，而给予IL-23或IL-12倾向于降低为病毒抗原特异性的产生IFNγ的CD8+T细胞的CD8+T细胞比例(表4)。在继发感染过程中细胞因子处理引起细胞毒性的变化。相对于没有接受任何细胞因子的小鼠，给予IL-23导致细胞毒性下降，而给予IL-12则导致细胞毒性下降更多(表4)。本发明提供给予IL-23激动剂或IL-23激动剂与IL-12激动剂来降低抗原特异性CD8+T细胞的细胞毒性的方法。本发明还提供给予IL-23拮抗剂或IL-23拮抗剂与IL-12拮抗剂来提高抗原特异性CD8+T细胞的细胞毒性的方法。如在继发感染过程中如IL-12处理小鼠的收获日所测出，其血清IFNγ约为1000pg/ml血清。在继发感染过程中非细胞因子处理的或IL-23处理的小鼠中没有检出血清IFNγ。记忆反应研究涉及在初次致敏后用细胞因子处理数天，但在再攻击时没有进行细胞因子处理(表5)。IL-23引起CD8+T细胞的总数增加，这一增加包括抗原特异性CD8+T细胞总数的增加和产生IFNγ的抗原特异性CD8+T细胞总数的增加，而IL-12处理引起CD8+T细胞的总数增加得更多。如由抗原特异性的产生IFNγ的CD8+T细胞的百分数所测出，IL-23处理时该百分数稍有增加，IL-12处理时该百分数的增加更多(表5)。本发明设想例如通过给予IL-23激动剂或拮抗剂来调节对病毒感染的记忆反应的方法。本发明提供使用IL-23激动剂或IL-23激动剂和IL-12激动剂的组合来增加记忆反应的方法，所述记忆反应由抗原特异性CD8+T细胞的比例或IFNγ阳性的抗原特异性CD8+T细胞的比例测定。
表3.无处理、IL-23处理或IL-12处理时的原发反应。数据反映肺T细胞的测量值。IFNγ测定通过胞内染色来进行。细胞毒性试验(铬释放)以50∶1、25∶1、12.5∶1和6.25∶1的效应物∶靶标比例进行。表1表示50∶1比例下的细胞毒性结果。
表4.无处理、IL-23处理或IL-12处理时的继发反应(回忆反应(recallresponse))。数据反映肺T细胞的测量值。IFNγ测定通过胞内染色来进行。细胞毒性试验(铬释放)以50∶1、25∶1、12.5∶1和6.25∶1的效应物∶靶标比例进行。表1表示50∶1比例下的细胞毒性结果。
表5.无处理、IL-23处理或IL-12处理时的记忆反应。数据反映肺T细胞的测量值。IFNγ测定通过胞内染色来进行。ND指没有进行测定。细胞毒性试验(铬释放)以50∶1、25∶1、12.5∶1和6.25∶1的效应物∶靶标比例进行。表1表示50∶1比例下的细胞毒性结果。 本文的所有引文通过引用结合到本文中，引用程度如同各单独的出版物或专利申请或专利(包括所有的图)被明确和单独地指出通过引用结合到本文中。本领域普通技术人员将明白，本发明可作出许多修改和变动，以便适应具体的情况、材料、物质组成、方法、方法步骤或多个步骤，从而保持本发明的目标、精神和范围。所有这些修改意在落入本发明后附权利要求书的范围内，而不偏离本发明的精神和范围。本文描述的具体实施方案只通过举例方式提供，本发明只受后附权利要求书的各条连同这种权利要求享有权利的等同条款全部范围的限制；本发明不受通过举例方式在本文中给出的具体实施方案的限制。
权利要求
1.一种调节CD8+T细胞对病毒、病毒抗原或病毒感染的反应的方法，所述方法包括给予有效量的a)p19、IL-23或IL-23R的激动剂；或b)p19、IL-23或IL-23R的拮抗剂。
2.权利要求1的方法，其中所述拮抗剂包括a)来自特异性结合p19、IL-23或IL-23R的抗体的结合成分；b)衍生自特异性结合IL-23的IL-23R的可溶性受体；c)与编码p19或IL-23R的多核苷酸特异性杂交的核酸；或d)小分子。
3.权利要求2的方法，其中所述结合成分衍生自抗体，所述抗体包括a)多克隆抗体；b)单克隆抗体；c)人源化抗体或其片断；d)Fab、Fv或F(ab’)2片断；e)抗体的肽模拟物；或f)可检测标记。
4.权利要求2的方法，其中所述核酸包括a)反义核酸；或b)小干扰RNA(siRNA)。
5.权利要求1的方法，所述方法进一步包括共给予有效量的a)p35、IL-12、p40、IL-12Rβ1或IL-12Rβ2的激动剂；或b)p35、IL-12、p40、IL-12Rβ1或IL-12Rβ2的拮抗剂。
6.权利要求1的方法，其中所述p19、IL-23或IL-23R的激动剂降低a)为病毒抗原特异性CD8+T细胞的CD8+T细胞百分比；b)为产生IFNγ的病毒抗原特异性CD8+T细胞的CD8+T细胞百分比；或c)病毒抗原特异性CD8+T细胞的细胞毒性。
7.权利要求1的方法，其中所述p19、IL-23或IL-23R的拮抗剂提高a)为病毒抗原特异性CD8+T细胞的CD8+T细胞百分比；b)为产生IFNγ的病毒抗原特异性CD8+T细胞的CD8+T细胞百分比；或c)病毒抗原特异性CD8+T细胞的细胞毒性。
8.权利要求1的方法，其中所述p19、IL-23或IL-23R的拮抗剂在对继发病毒感染的免疫反应过程中增加CD8+T细胞的总数。
9.权利要求8的方法，其中所述CD8+T细胞的总数来自a)肺；b)支气管肺泡灌洗液(BAL)；c)脾；或d)淋巴结。
10.权利要求8的方法，所述方法进一步包括共给予有效量的p35、IL-12、IL-12Rβ2或p40的拮抗剂。
11.权利要求1的方法，其中所述病毒是a)呼吸道病毒；b)黏膜病毒；或c)流感病毒。
12.权利要求11的方法，其中所述流感病毒是a)A型流感病毒b)B型流感病毒；或c)C型流感病毒。
13.权利要求1的方法，其中所述病毒抗原包括流感病毒抗原。
14.权利要求13的方法，其中所述流感病毒抗原来自a)病毒核蛋白；b)病毒酸性聚合酶。
15.权利要求1的方法，其中所述病毒感染包括a)呼吸综合征；或b)肺炎。
16.权利要求1的方法，所述方法进一步包括给予a)疫苗；或b)佐剂。
17.一种治疗A型流感病毒感染的方法，所述方法包括给予有效量的权利要求1的激动剂或拮抗剂。
18.一种诊断病毒感染的方法，所述方法包括使结合成分与生物样品接触，其中所述结合成分特异性结合a)p19、IL-23或IL-23R；或b)编码p19或IL-23R的核酸；并测量或测定结合成分与生物样品的特异性结合。
19.一种用于诊断病毒感染的试剂盒，所述试剂盒包含间格和结合成分，所述结合成分特异性结合a)p19、IL-23或IL-23R；或b)编码p19或IL-23R的核酸。
全文摘要
本发明提供调节细胞因子即IL－23活性的方法，例如目的是治疗病毒感染。本发明还提供基于检测p19、IL－23或IL－23R或编码p19或IL－23R的核酸来诊断病毒感染的方法，以及用于进行所述诊断方法的试剂盒。
文档编号A61K48/00GK1942201SQ200580011455
公开日2007年4月4日 申请日期2005年2月15日 优先权日2004年2月17日
发明者P·D·卡特西基斯, I·迪米特里欧, D·J·夸 申请人:先灵公司