N-（4-烷基-5-苄基噻唑-2-基）卤代烷酰胺作为抗癌药的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化合物的新用途，具体是，（4-烷基-5-苄基噻唑-2-基）卤代烷酰 胺作为制备抗癌药的应用。
【背景技术】
[0002] 达沙替尼（Dasatinib)是百时美施贵宝公司研发的一种口服的多靶点酪氨酸激酶 抑制剂，商品名为施达赛（Sprycel)。2006年6月，美国FDA批准达沙替尼用于对既往治疗 失败或不耐受的成人慢性粒细胞白血病（CML)的所有病期(慢性期、加速器、淋巴系细胞急 变期和髓细胞急变期）患者，同时还用于治疗对其他疗法耐药或不耐受的费城染色体阳性 的急性淋巴性白血病成人患者（Ph+All)。它是目前市场上分子靶向治疗药物中的代表。 2012年5月5日，达沙替尼被批准在中国上市。
[0003] Holla等[EuropeanMedicalChemistry，2003,38 :313_318]描述了 2_ 芳氨 基-4- (2,4_二氯-5-氟苯基）噻唑的制备与生物活性；中国发明专利（CN1018445026， CN101781269)描述了 5- (4-氯苯甲基）-4_叔丁基噻唑衍生物和4-叔丁基-2-(硝基 苄亚氨基）噻唑的制备及其作为制备抗肿瘤药物的应用。中国发明专利（CN101277692A， 2008. 10.01公开）描述了 5-苄基-4-甲基/三氟甲基-2-芳氨基噻唑的制备。中国发 明专利（CN102070556A，2011. 5. 25 公开；CN102067845A，2011. 5. 25 公开）描述了 5-苄 基-4-烷基-2-芳氨基噻唑氢溴酸盐的制备。中国发明专利（CN102964312A，2013. 3. 13公 开；CN102924400A，2013. 2. 13 公开；CN102936229A;2013. 2. 20 公开）描述了妒（4-叔丁 基-5-苄基噻唑-2-基）酰胺的制备及其生物活性。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供，（4-烷基-5-苄基噻唑-2-基）卤代烷酰胺（I)或其盐 在制备抗慢性粒细胞性白血病细胞株K562药物中的应用：
式中R选自烷基、C3~C4直链烷基或C3~C4支链烷基；Y选自：羟基、甲氧基、乙氧 基、氟、氯、溴或碘；n选自：1、2、3或4 ;X选自氟、氯、溴或碘；盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫 酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐。
[0005] 本发明的目的在于提供，（4-烷基-5-苄基噻唑-2-基）卤代烷酰胺选自 (4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基）噻唑-2-基）氯乙酰胺或，（4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄 基）噻唑-2-基）-4-氯丁酰胺。
[0006] 本发明与现有技术相比具有如下优点： 本发明首次制备4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)卤代烷酰胺及其盐，并发现4-烷 基-5-苄基噻唑-2-基）卤代烷酰胺或其盐具有抗慢性粒细胞性白血病细胞株K562活性。
[0007]
【具体实施方式】
[0008] 以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。
[0009] 实施例1 A(4-叔丁基-5- (4-氯苄基）噻唑-2-基）-4-氯丁酰胺的制备
(1)氯丁酰氯的制备 1.5g无水氯化锌溶于20mL二氯亚砜，搅拌，滴加19mL丁内酯，60 °C反应5.0h，旋 蒸过量的二氯亚砜，得到橙黄色液体4-氯丁酰氯，放入冰箱保存备用。
[0010] (2)A(4-叔丁基-5-(4-氯苄基）噻唑-2-基）-4-氯丁酰胺的制备 1mmol4_叔丁基_5-(4_氣苄基）噻唑_2_胺和20mL二氣甲烧，冰浴，揽摔，加 入0.5mL三乙胺，滴加溶于2mL二氯甲烷的1.2mmol4-氯丁酰氯，TLC监测反应，反 应1.0h。旋蒸溶剂，干法上样，柱层析分离得黄色固体，(4-叔丁基-5-(4-氯苄基）噻 唑-2-基）-4_ 氯丁酰胺，收率 72.5%，m.p. 90~92°C。虫NMR(400MHz，CDC13)A8.93 (s，lH，C0NH)，7.26 (d，/ = 8.0Hz，1H，C6H4)，7.11 (d，/ = 8.0Hz，1H，C6H4)，4.26 (s，2H， CH2)，3. 63 (t，2H，ClCH2)，2. 61 (t，2H，C0CH2)，2. 21~2. 15 (m，2H，CH2)，1. 35 (s，9H，3XCH3)。
[0011] 实施例2 A(4-叔丁基-5- (4-氯苄基）噻唑-2-基）-5-氯戊酰胺的制备
1mmol4_叔丁基_5_ (4_氣苄基）噻唑_2_胺和20mL二氣甲烧，冰浴，揽摔，加入0.5mL三乙胺，滴加溶于2mL二氯甲烷的1.2mmol酰氯，TLC监测反应，反应2.0h。旋蒸溶 剂，干法上样，柱层析分离得黄色固体，(4-叔丁基-5- (4-氯苄基）噻唑-2-基）-5-氯戊 酰胺，收率 90.4%，m.p. 143~144。(：。4NMR(400MHz，CDC13)A8.90 (s，lH，C0NH)，7.26 (d，2H，/ = 8. 0Hz，C6H4)，7. 11 (d，2H，/ = 8. 0Hz，C6H4)，4. 19 (s，2H，CH2)，3. 55 (t，2H， C1CH2)，2.44 (t，2H，C0CH2)，1.90~1.80 (m，4H，CH2CH2)，1.34 (s，9H，3XCH3)。
[0012] 实施例3 A(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基）噻唑-2-基）-4-氯丁酰胺的制备 1mmol4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基）噻唑-2-胺和20mL二氯甲烷，冰浴，搅拌， 加入0.5mL三乙胺，滴加溶于2mL二氯甲烷的1.2mmol酰氯，TLC监测反应，反应1.5 h。旋蒸溶剂，干法上样，柱层析分离得黄色固体，(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基）噻 唑-2-基）-4_ 氯丁酰胺，收率 67.6%，m.p. 79~80 °C。1HNMR(400MHz，CDC13)A7.10 (d，2H，/ = 8.4Hz，C6H4)，6.83 (d，2H，/ = 8.0Hz，C6H4)，4.16 (s，2H，CH2)，3.78 (s，3H， CH3)，3.60 (t，2H，ClCH2)，2.60 (t，2H，C0CH2)，2.16 (m，2H，CH2)，1.37 (s，9H，3XCH3)。
[0013] 实施例4 A(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基）噻唑-2-基）-5-氯戊酰胺的制备
按照实施例6的制备方法，反应2.0h，得黄色固体，(4-叔丁基-5- (4-甲氧基苄基） 噻唑-2-基）-5_ 氯戊酰胺，收率86. 5%，m.p. 77~78 °C。4NMR(400MHz，CDC13)A 10.01 (s，lH，C0NH)，7.07 (s，2H，C6H4)，6.83 (s，2H，C6H4)，4.13 (s，2H，CH2)，3.77 (s，3H， 0CH3)，3.50 (s，2H，CH2C1 )，2.53 (s，2H，C0CH2)，1.82 (s，4H，CH2CH2)，1.34 (s，9H，3XCH3)。
[0014] 实施例5 A(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基）噻唑-2-基）氯乙酰胺的制备
1mmol4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基）噻唑-2-胺和20mL二氯甲烷，冰浴，搅拌，加入0.5mL三乙胺，滴加溶于2mL二氯甲烷的1.2mmol氯乙酰氯，TLC监测反应，反应1.0 h。旋蒸溶剂，干法上样，得黄色固体A(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基）噻唑-2-基）氯乙 酰胺，收率94.1%，m.p. 88~89°C。虫NMR(400MHz，CDC13)A9.41 (s，lH，C0NH)，7.10 (d，2H，/ = 8.4Hz，C6H4)，6.83 (d，2H，/ = 8.4Hz，C6H4)，4.21 (s，2H，CH2)，4.18 (s，2H， CH2C1)，3.79 (s，3H，0CH3)，1.37 (s，9H，3XCH3)。
[0015] 实施例6 A(4-叔丁基-5-(4-氯苄基）噻唑-2-基）氯乙酰胺的制备
1.5mmol4-叔丁基_5_(4-氯苄基)噻唑-2-胺、20mL四氢呋喃，搅拌溶解，加入0.4mL吡啶，冰浴下滴加0.4mL溶于10mL四氢呋喃的氯乙酰氯，30min滴完，室温反应，TLC 监测。反应毕，旋蒸溶剂，加入30mL水，二氯甲烷萃取，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，无水硫酸 钠干燥，过柱，得N-[4-叔丁基-5- (4-氯苄基)噻唑-2-基]氯乙酰胺；收率52. 8 %，m.p. 156~157°C。虫NMR(CDC13,400MHz)，5:1.35 (s，9H，3XCH3)，4.21 (s，2H，CH2)，4.22 (s， 2H，C1CH2)，7.11 (d，/= 8.4Hz，2H，C6H4 2,6-H)，7.26 (d，/= 8.4Hz，2H，C6H4 3,5-H)， 9.43 (br，lH，NHC0)。
[0016] 实施例7 A(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基）卤代烷酰胺及其盐的抗肿瘤活性 1.抗肿瘤活性原理 MTT法生物活性测试又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT分析 法以活细胞代谢物还原剂噻唑蓝[3- (4,5_二甲基-2-噻唑）-2,5_二苯基溴化四氮唑； 3_(4, 5-dimethylthiazol_2-yl)-2, 5-diphenyltetrazoliumbromide，MTT]为基础。MTT是 一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲馈（formazon)，而死细胞则无此功能。用DMSO溶解formazon 后，在一定波长下用酶标仪测定光密度值，既可定量测出细胞的存活率。根据光密度值的变 化观察样品对肿瘤细胞的抑制作用。
[0017] 2?抗肿瘤活性实验 试样（4-烷基-5-苄基噻唑-2-基）卤代烷酰胺（I)及其盐。
[0018]
式中R选自烷基、C3~C4直链烷基或C3~C4支链烷基；Y选自：羟基、甲氧基、乙氧 基、氟、氯、溴或碘；n选自：1、2、3或4 ;X选自氟、氯、溴或碘；盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫 酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐。
[0019] 细胞系：慢性粒细胞性白血病细胞株K562。
[0020] 试剂：噻唑蓝（MTT)、RPMI1640培养液(美国Hyclone公司）、新生牛血清(浙江天 杭生物科技股份有限公司）、抗生素(美国英杰生命技术公司）；96孔培养板(美国美国康宁 公司）；二甲基亚砜(美国Sigma公司）。
[0021] 仪器：HFsafe-1500型超净工作台、Forma3111C02培养箱（美国Thermo公司）； 1X70荧光倒置显微镜（日本OLYMPUS有限公司）;SynergyHTX多功能微孔板检测仪(美国伯 腾仪器有限公司）；PureMaximaLS纯水仪(英国ELGA公司）。
[0022] 实验操作：试样对K562细胞的体外抑制活性测试。实验过程中，每种试样设置五 个浓度梯度（浓度梯度设置范围为500ymol/L~5. 5ymol/L)，每个浓度六个平行试样， 每组实验平行3次，并通过空白组对照得出结论。酶标仪检测各孔0D值，检测波长490nm。
[0023] 3?抗肿瘤活性评价 1) 细胞抑制率计算：
2) 1(：5。值计算 试样浓度对数值与细胞抑制率线性回归，利用软件SPSS13. 0计算试样对细胞的半数 抑制浓度IC5。值。优选化合物对慢性粒细胞性白血病细胞株K562的1C5。见表1。
[0024] 表1A(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基）卤代烷酰胺对K562细胞的IC5。
活性测试结果显示，乂(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)卤代烷酰胺或其盐具有良好的抑 制慢性粒细胞性白血病细胞株K562活性，可用于制备抗慢性粒细胞性白血病细胞株K562 药物。
【主权项】
1. 化学结构式I所示化合物或其盐在制备抗慢性粒细胞性白血病细胞株K562药物中 的应用：式中R选自=C1-C2烷基、C 3~C4直链烷基或C 3~C4支链烷基；Y选自：羟基、甲氧基、乙氧 基、氟、氯、溴或碘；η选自：1、2、3或4 ;X选自氟、氯、溴或碘；盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫 酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐。2. 权利要求1所述的应用，其中式I所示的化合物是，(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄 基）噻唑-2-基）氯乙酰胺。3. 权利要求1所述的应用，其中式I所示的化合物是，(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄 基）噻唑-2-基）-4-氯丁酰胺。
【专利摘要】本发明涉及化学结构式<b>Ⅰ</b>所示<i>N</i>-（4-烷基-5-苄基噻唑-2-基）卤代烷酰胺或其盐在制备抗慢性粒细胞性白血病细胞株K562药物中的应用：？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？<b>I</b>式中R选自：C1~C2烷基、C3~C4直链或C3~C4支链烷基；Y选自：羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴或碘；n选自：1、2、3或4；X选自氟、氯、溴或碘；盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐。
【IPC分类】A61P35/02, A61K31/426
【公开号】CN105055405
【申请号】CN201510541537
【发明人】彭俊梅, 刘映, 申坤, 胡艾希
【申请人】南华大学
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年8月31日