水性液体组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于癌症免疫疗法领域，并涉及包含具有细胞毒性T细胞诱导活性的来源 于WTl蛋白的癌抗原肽的水性液体组合物，并涉及药物被该组合物稳定。
【背景技术】
[0002] -般而言，来源于WTl蛋白的癌抗原肽是来源于由449个氨基酸组成的人WTl蛋 白（SEQ ID NO: 2)的部分肽，具体地讲是由8-12氨基酸组成的肽或其二聚体。它被呈递为 主要组织相容性复合体（MHC) I类抗原，包括由细胞毒性T细胞（细胞毒性T-淋巴细胞， 下文称为CTL)进行抗原识别的肽。人中的MHC称为人白细胞抗原（HLA)。
[0003] 在来源于WTl蛋白的部分肽中，由9个氨基酸组成并以WTl126 134肽Arg-Met-Phe -Pro-Asn-Ala-Pro-Tyr-Leu (SEQ ID NO: 1)的序列显示的部分肽和其中部分氨基酸被修 饰的修饰肽（修饰肽）被报导为可用作与HLA结合诱导CTL的肽（参见专利文件1-3,非专 利文件1)。
[0004] -般用于癌症疫苗的癌抗原蛋白质和癌抗原肽，在许多情况下与佐剂（免疫强化 剂）一起给予以更有效地诱导CTL。
[0005] 然而，常常难以维持包含这些蛋白质和肽的制剂的稳定性，特别是水中的稳定性。 因此，一般选择通过冷冻干燥除去水的制剂。然而，从生产和成本的方面来看，冷冻干燥的 制剂是不利的，且在用时还需要例如加入水等的操作。
[0006] 由此看来，根据使用目的，开发能够容易地将癌抗原蛋白质或癌抗原肽与各种佐 剂组合的稳定的水性液体组合物是重要的。
[0007] 至于液体的稳定，公开了含有柠檬酸或甲硫氨酸作为促性腺激素的稳定剂的冷冻 干燥的制剂（参见专利文件4)、含有甲硫氨酸作为G-CSF的稳定剂的制剂（参见专利文件 5)和pH 4或更低且含有琥珀酸或酒石酸作为G-CSF的稳定剂的制剂（参见专利文件6)。
[0008] 此外，公开了在溶液中含有以下作为修饰因子VIII多肽的稳定剂的制剂：（1) pH 调节剂以落入约4. 0-约8. 0的范围内，（2)抗氧化剂，和（3)钙盐、镁盐（参见专利文件7)。 另外，公开了含有生理活性药物、甲硫氨酸和新的红细胞发生刺激蛋白、且具有改进的稳定 性的制剂（参见专利文件8)。
[0009] 然而，本发明所涉及的含有具有SEQ ID NO: 1所示序列的部分肽或其修饰肽的稳 定的水性液体组合物是未知的。
[0010] 文献列表 专利文献 专利文件I :W000/06602 专利文件2 :W000/18795 专利文件 3 :W02009/072610 专利文件 4 :JP-A-H10-203997 专利文件 5 :JP-A-2000-247903 专利文件 6 :W02005/39620 专利文件7 :W003/55511 专利文件8 :W003/20299 非专利文献 非专利文件I =EP-B-1127068的审查中的书面意见。
[0011] 发明概述 发明要解决的问题 本发明的问题是提供提高具有SEQ ID NO: 1所示序列的部分肽或所述肽的修饰肽的 稳定性的水性液体组合物，其可用于制备包含上述肽的癌症疫苗制剂。
[0012] 解决问题的方法 本发明人进行了大量研究以试图解决上述问题，并且发现，包含具有SEQ ID NO: 1所 示序列的部分肽或所述肽的修饰肽（下文有时简称为本发明的肽）的水性液体组合物的主 要降解产物起因于肽中所含的甲硫氨酸残基的氧化。此外，他们发现，所述肽的甲硫氨酸残 基的氧化通过加入特定的赋形剂作为稳定剂而被抑制，并且通过调节组合物以具有特定的 PH获得在制剂稳定性方面优异的水性液体组合物，这导致了本发明的完成。
[0013] 因此，本发明涉及以下方面。
[0014] 第1项.一种水性液体组合物，其包含肽和赋形剂，并具有3-6的pH : 其中 所述肽选自下列（A)和（B)， (A) 由 Arg-Met-Phe-Pro-Asn-Ala-Pro-Tyr-Leu (SEQ ID NO: 1)所不氨基酸序列组 成的肽，和 (B) 由缺失、取代和/或添加1-3个氨基酸的SEQ IDN0: 1所示氨基酸序列组成并具 有细胞毒性T细胞诱导能力的肽；和 赋形剂包含选自下列（C)、（D)和（E)的一种或多种， (C) 选自乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸及其药理学上可接受的盐的一种或多 种的α羟酸， (D) 选自丙二酸、琥珀酸、戊二酸、马来酸及其药理学上可接受的盐的一种或多种的二 羧酸，和 (E) 甲硫氨酸。
[0015] 第2项.第1项的水性液体组合物，其中所述赋形剂包含选自下列（C)、⑶和（E) 的一种或多种： (C) 选自乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸及其药理学上可接受的盐的一种或多种的α 羟酸， (D) 选自琥珀酸、马来酸及其药理学上可接受的盐的一种或多种的二羧酸，和 (E) 甲硫氨酸。
[0016] 第3项.第1或2项的水性液体组合物，其中（B)为Phe-Met-Phe-Pro-Asn-A la-Pro-Tyr-Leu (FMFPNAPYL) (SEQ ID NO: 3)、 Arg-Met-Met-Pro-Asn-Ala-Pro-Tyr-L eu (RMMPNAPYL) (SEQ ID NO: 4)、Arg-Met-Phe-Pro-Asn-Ala-Pro-Tyr-Val (RMFPNAPYV) (SEQ ID NO: 5) ^ Tyr-Met-Phe-Pro-Asn-Ala-Pro-Tyr-Leu (YMFPNAPYL) (SEQ ID NO: 6) 或 Ala-Arg-Met-Phe-Pro-Asn-Ala-Pro-Tyr-Leu (ARMFPNAPYL) (SEQ ID NO: 7)〇
[0017] 第4项·第I或2项的水性液体组合物，其中所述肽由（A) Arg-Met-Phe-Pro-As n-Ala-Pro-Tyr-Leu (SEQ ID NO: 1)所示氨基酸序列组成。
[0018] 第5项.第1-4项中任一项的水性液体组合物，其中所述赋形剂包含（C)和（E) 两者。
[0019] 第6项.第1-5项中任一项的水性液体组合物，其中所述赋形剂包含（C)和（E) 两者，且（C)是选自乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸及其药理学上可接受的盐的一种或多种 的α羟酸。
[0020] 第7项.第1-6项中任一项的水性液体组合物，其中所述赋形剂包含（C)和（E) 两者，且（C)是选自乙醇酸及其药理学上可接受的盐的一种或多种的α羟酸。
[0021] 第8项.第1-6项中任一项的水性液体组合物，其中所述赋形剂包含（C)和（E) 两者，且（C)是选自乳酸及其药理学上可接受的盐的一种或多种的α羟酸。
[0022] 第9项.第1-6项中任一项的水性液体组合物，其中所述赋形剂包含（C)和（E) 两者，且（C)是选自苹果酸及其药理学上可接受的盐的一种或多种的α羟酸。
[0023] 第10项.第1-6项中任一项的水性液体组合物，其中所述赋形剂包含（C)和（E) 两者，且（C)是选自酒石酸及其药理学上可接受的盐的一种或多种的α羟酸。
[0024] 第11项.第1-4项中任一项的水性液体组合物，其中所述赋形剂包含⑶和（E) 两者。
[0025] 第12项.第1、2、3、4或11项的水性液体组合物，其中所述赋形剂包含⑶和（E) 两者，且（D)是选自琥珀酸及其药理学上可接受的盐的一种或多种的二羧酸。
[0026] 第13项.第1、2、3、4或11项的水性液体组合物，其中所述赋形剂包含⑶和（E) 两者，且（D)是选自马来酸及其药理学上可接受的盐的一种或多种的二羧酸。
[0027] 第14项.第1-4项中任一项的水性液体组合物，其中所述赋形剂包含（C)、⑶和 (E)的全部。
[0028] 第15项.第1、2、3、4或14项的水性液体组合物，其中所述赋形剂包含（C)、（D) 和（E)的全部，（C)是选自乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸及其药理学上可接受的盐的一种或 多种的α羟酸，且（D)是选自琥珀酸、马来酸及其药理学上可接受的盐的一种或多种的二 羧酸。
[0029] 第16项.第1-15项中任一项的水性液体组合物，其中每体积α羟酸的含量为 1-100 mM或每体积二羧酸的含量为10-100 mM。
[0030] 第17项.第1-16项中任一项的水性液体组合物，其中每体积甲硫氨酸的含量为 1-300 HiM0
[0031] 第18项.第1-17项中任一项的水性液体组合物，其具有4-5的pH。
[0032] 第19项.一种通过加入赋形剂提高水性液体组合物中肽的稳定性的方法： 其中 所述肽选自下列（A)和（B)， (A) 由 Arg-Met-Phe-Pro-Asn-Ala-Pro-Tyr-Leu (SEQ ID NO: 1)所不氨基酸序列组 成的肽，和 (B) 由缺失、取代和/或添加1-3个氨基酸的SEQ IDN0: 1所示氨基酸序列组成并具 有细胞毒性T细胞诱导能力的肽；和 所述赋形剂包含选自下列（C)、（D)和（E)的一种或多种， (C) 选自乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸及其药理学上可接受的盐的一种或多 种的α羟酸， (D) 选自丙二酸、琥珀酸、戊二酸、马来酸及其药理学上可接受的盐的一种或多种的二 羧酸，和 (E) 甲硫氨酸。
[0033] 第20项.第19项的方法，其中所述赋形剂包含选自下列（C)、⑶和（E)的一种 或多种： (C) 选自乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸及其