k)是融合蛋白质，其含有与人 抗体的Fc区域（C端）连接的两种不同的VEGF受体的胞外结构域的部分。在一些实施方 案中，制剂或微球制剂可包含选自由W下组成的组的抗体：抗VEGF抗体、抗VEGF受体抗体、 抗PDGF(血小板衍生的生长因子）抗体、抗整合蛋白抗体、其治疗上有效的片段及其组合。
[0039] 在另一个实施方案中，制剂或微球制剂可包括包含抗TNF(肿瘤坏死因子）抗体或 蛋白质的蛋白质。抗TNF抗体的实例包括但不限于阿达木单抗(HUMIRA饭)..英夫利昔 单抗(REMICADE⑥)、赛妥珠单抗(CIMZIA?巧日戈利木单抗(SIMPONI?)。有用的抗 TNF蛋白质包括融合蛋白质依那西普(ENBREL.?)。包括抗TNF蛋白质的制剂和微球制剂 可对治疗葡萄膜炎和贝切特氏病度sheet'sdisease)特别有用。
[0040] 根据一些实施方案，蛋白质可包括生长因子（如神经生长因子、酸性成纤维细胞 生长因子和碱性成纤维细胞生长因子）；神经营养因子（如睫状神经营养因子、脑衍生的 神经营养因子和神经胶质细胞系衍生的神经营养因子）；细胞因子（如干扰素-丫和白介 素-10);抗增殖化合物（如利妥昔单抗）；和溶纤维蛋白酵素（Hbrinolysing)蛋白质（如 组织纤溶酶原活化物）。此类蛋白质的治疗用途通常可W是本领域中已知的。
[0041] 因此，根据一些实施方案，制剂或微球制剂可包含选自由W下组成的组的抗体：抗 VEGF抗体（特异性结合VEGF的抗体）、抗PDGF抗体、抗VEGF受体抗体、抗整合蛋白抗体、 其治疗上有效的片段及其组合。
[0042] 血管内皮生长因子A(VEGF-A，也称作VEGF)是一种分泌的对血管内皮细胞特异性 的促分裂原，其可W刺激体外内皮细胞生长和体内血管生成。VEGF-A可能出现不同的同 种型。除了VEGF-Ai2i，VEGF-A的所有同种型结合肝素。人类中最丰富的VEGF-A同种型是 165-氨基酸多肤、VEGF-Ai化。参见，例如Houck等，Mol.Endocrin. 5:1806 (1991)和Leung 等，Science246:1306(1989)。
[0043] 因此，一些实施方案提供包含生物可降解的聚合物基质和蛋白质的微球制剂，该 蛋白质包括抗体、DARPin或结合VEGF-Aiee的抗巧素，基本上由它们组成，或由它们组成。相 同的抗体、DARPin或抗巧素可W识别和结合所有VEGF-A的同种型，运是由于抗体、DARPin 或抗巧素可W识别存在于所有VEGF-A的同种型的表位。例如，抗体、DARPin或抗巧素可W 识别和特异性结合在存在于所有VEGF-A同种型（包括VEGFi2i)的VEGF-A受体结合结构域 的区域中的表位。因此，在制剂或微球制剂中，单个抗VEGF抗体（或DARPin或抗巧素）可W 识别和特异性结合VEGF-A的所有同种型。描述了与VEGF-A或VEGF受体结合的抗体，包括 单克隆抗体和人源化抗VEGF抗体。参见，例如美国专利5, 955, 311和美国专利6, 884, 879。 贝伐单抗是一个特异性结合并抑制人VEGF-A的单克隆抗体的实例。还描述了针对PDGF的 抑制抗体。参见，例如WO2003/025019。因此，微粒可包含蛋白质，该蛋白质包括抗巧素，基 本上由其组成，或由其组成。
[0044] 包含VEGF(血管内皮生长因子）或血小板衍生的生长因子仰G巧抑制剂或两者 都有（如在体内特异性结合VEGF和/或PDGF的抗体或抗体组合）的制剂或微球制剂，对 治疗有需要患者中黄斑变性（包括湿性年龄相关性黄斑变性）、视网膜病、糖尿病性视网膜 病、增殖性糖尿病性视网膜病、镶状细胞视网膜病、早生儿视网膜病、局部缺血性视网膜病、 眼部新生血管形成（在眼中新血管的异常生长）、脉络膜新生血管形成、由于视网膜静脉阻 塞引起的新生血管形成、角膜新生血管形成、糖尿病性视网膜局部缺血和黄斑水肿具有特 殊的用途。
[0045] 在一个实施方案中，制剂或微球制剂包含生物可降解的聚合物基质和第一抗体W 及第二抗体或分别特异性结合VEGF和PDGF的双特异性抗体，其中在哺乳动物的眼睛中放 入制剂或微球制剂之后，该制剂或微球制剂提供生物活性形式的第一抗体和第二抗体或双 特异性抗体的连续释放，持续至少30天、60天或90天。在一种形式中，抗体或双特异性抗 体对血管内皮生长因子-A(VEGF-A)和血小板衍生的生长因子-B(PDGF-B)具有特异性。运 些制剂或微球制剂可对治疗眼部肿瘤、眼部新生血管形成、脉络膜新生血管形成和黄斑变 性特别有用。"PDGF-B"意指PDGF的B链多肤。
[0046] 本发明的制剂和微球制剂被设计用于保持抗体的生物活性，使得当从系统中释放 抗体时，抗体将与其指定的祀蛋白特异性结合。抗体与祀蛋白结合可在蛋白质与其配体或 受体之间提供干扰，由此抗体抑制或减少通过蛋白质/受体相互作用介导的功能。在本领 域中测定是否抗体特异性结合祀蛋白（多肤）或与祀蛋白（多肤）"免疫反应"的几种方 法是已知的。免疫化学发光度量测定（ICMA)、酶联免疫吸附测定巧LISA)和放射免疫测定 (RIA)是一些实例。
[0047] 在一些实施方案中，制剂和微球制剂可包含生物可降解的聚合物基质和蛋白质 (如一种或多种单克隆抗体、双特异性抗体、DARPin、抗巧素、抗体片段、衍生自抗体可变区 的重组多肤、或其混合物），该蛋白质与VEGF或血小板衍生的生长因子（PDFG)或VEGF和 PDFG两者相互作用（例如结合并减少或抑制其活性）。例如，根据一个实施方案，制剂或微 球制剂包含生物可降解的聚合物基质和特异性结合VEGF和PDFG的双特异性抗体，其中在 哺乳动物眼中放入制剂或微球制剂后，制剂或微球制剂提供生物活性形式的抗体的连续释 放，持续至少90天。在另一个实施方案中，制剂和微球制剂可包含生物可降解的聚合物基 质和对VEGF受体特异性的抗体。
[0048] 在制剂和微球制剂中有用的单克隆抗体可使用本领域中普通技术人员已知的常 规方法而获得。简单地说，对动物（如老鼠）注射期望的祀蛋白或其部分（抗原）（如VEGF 或VEGFR)。祀蛋白可W与载体蛋白偶联。用一种或多种祀蛋白注射给动物加强免疫，并且 在融合之前3天通过静脉内（IV)加强对动物进行超免疫。从小鼠分离脾细胞并通过标准方 法与骨髓瘤细胞融合。根据标准方法，可W在标准的次黄嚷岭/氨基蝶岭/胸腺喀晚（HAT) 培养基中选择杂交瘤。使用标准免疫学技术W及抗体提纯法（例如，通过亲和色谱法），将 识别祀蛋白的杂交瘤分泌的抗体进行鉴别、培养和亚克隆。在本发明递送系统的某些实施 方案中，抗VEGF或抗VEGFR单克隆抗体从ImCloneSystems,Inc.(化NY)获得。例如，本 发明制剂可包括从ImCloneSystems公司购买的商品名为IMC-18F1的抗体，或商品名为 IMC-1121F油的抗体。可用于本发明药物制剂的另一个抗VEGF抗体片段是雷珠单抗，即结 合VEGF-A的F油片段。在本发明药物递送系统中有用的另一个抗VEGF抗体是贝伐单抗， 即结合VEGF-A的单克隆抗体。
[0049] 蛋白质组分可W呈液体、衍化、微粒化或粉末形式，并且可通过生物可降解的聚合 物基质来包埋。通常，在喷雾干燥颗粒中或在粉末形式中的蛋白质颗粒的有效平均粒度将 小于约1微米。在一些实施方案中，颗粒的平均粒度约小于1000纳米的数量级。例如，该 颗粒的有效平均粒度可小于约500纳米。在一些微球制剂中，颗粒的有效平均粒度可小于 约250纳米，而在另一些实施方案中，尺寸小于约200纳米。
[0050] 根据一些实施方案，蛋白质组分可具有合适的分子量。蛋白质的分子量可在约10 千道尔顿（"kDa")至约ISOkDa的范围内。根据一些实施方案，蛋白质组分的分子量可大 于约5kDa、大于lOkDa、大于20kDa、大于SOkDa或大于lOOkDa。根据一些实施方案，蛋白质 组分的分子量可在约IOkDa至30kDa、14kDa至16kDa、14kDa至21kDa或20kDa至50kDa的 范围内。
[0051] 在一些实施方案中，根据制剂或微球制剂的蛋白质的长度可为至少20、至少30、 至少50、至少100、至少200或至少300个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质组分包括S 个或更多个氨基酸。在一些实施方案中，蛋白质的长度可为30至50个氨基酸或100至500 个氨基酸。
[0052] 根据一些实施方案，制剂或微球制剂可包括基于制剂或微球制剂的总重量，用量 为制剂重量的1. 0%至约50%的蛋白质。根据一些实施方案，基于制剂或微球制剂的总重 量，蛋白质可存在于制剂或微球制剂中的量为约5重量％至约30重量％、约5重量％至约 40重量％、约10重量％至约25重量％、或约重量5%、约10重量％、约20重量％或约30 重量％的蛋白质。根据一些实施方案，制剂或微球制剂包含基于微球制剂的总重量，约5重 量％、约6重量％、约7重量％的蛋白质、约8重量％的蛋白质、约10重量％的蛋白质、约15 重量％的蛋白质、约20重量％的蛋白质、约25重量％的蛋白质、约30重量％的蛋白质或约 35重量％的蛋白质。
[0053] 廠形剂
[0054] 根据一些实施方案，制剂或微球制剂可包括一种或多种一般类别的赋形剂。一般 的赋形剂类别可包括白蛋白、缓冲剂、氨基酸、碳水化合物、馨合剂、环糊精、聚乙二醇、表面 活性剂等。根据一些实施方案，包括微球组合物的组合物包括不超过=种类别的赋形剂。根 据一些实施方案，组合物仅包括两种类别的赋形剂。
[00巧]缓冲剂可包括憐酸盐缓冲剂（如憐酸氨二钢屯水合物、憐酸二氨钢一水合物）；和 /或棚酸盐缓冲剂（如棚酸钢、棚酸、氯化钢）（根据Eu.化armaco