量为7. 1重量％。根据第S比较制剂，在不含赋形剂的PBS 中制备lOmg/mL抗巧素溶液。将该溶液在保持于50°C的烘箱中胆存5天，然后分析W确定 溶液中可回收的可溶性蛋白质的百分率。结果在图3中示出。
[0104] 图3显示在50°C烘箱中解育5天后，在PBS中配制含有W及不含赋形剂的lOmg/mL 抗巧素溶液的可溶性蛋白质的回收率。在此，结果显示当与不含额外赋形剂的蛋白质溶液 相比时，不是所有的赋形剂提高可溶性蛋白质的回收率。例如，包括分别添加氨基酸甘氨酸 和脯氨酸的第十和第十一制剂增加抗巧素的可溶性回收率。在第八和第九制剂中添加PEG 400和葡聚糖分别将可溶性抗巧素回收率减小了 7% -11%。
[0105] 实施例3
[0106] 基于PLGA的抗巧素微球的制造和测试
[0107] 根据一个示例性实施方案，使用双重乳液溶剂蒸发方法生产基于PLGA的抗巧素 微球。制备运些微球的方法被称为水包油包水（W/0/W)过程，并且将其公开例如在PCT公开 号2011/041642中，制备本文所公开的微球的方法W引用的方式明确地并入。根据运个实 施例，在约4°C至10°C的溫度下执行该过程W提高批次间重现性并增加抗巧素的稳定性。 [010引为了确定在PLGA聚合物网络内蛋白质的实验负载量和蛋白质的质量，使用两步 萃取法将包封的蛋白质及其可溶性降解物从干燥的微球中萃取出来，随后进行SEC分析。 将抗巧素的降解产物分成两类：高分子量（"HMW")种类和低分子量（"LMW")种类。HM 种类是分子量高于抗巧素单体的分子量的抗巧素聚集体，然而LMW种类是分子量低于抗巧 素单体的分子量的抗巧素片段。
[0109] 在抑=7. 4, 37C溫度下且不揽拌，在体外使用包含IOOmM憐酸盐的释放培养基评 估制备的微球的释放曲线。所有样品都制备双份。在每个预设的时间点，对90%溶液进行 取样用于解析分析，并且用相同体积的新制释放培养基来替代取样体积。
[0110] 实施例4
[0111] 在基于PLGA的微球中包封抗巧素
[0112] 下面表B示出含抗巧素的基于PLGA的微球中的几种示例性制剂。如表B所示，不 含任何赋形剂的基于PLGA的微球制剂的包封效率为约78. 6%，该微球制剂包含11. 4%的 可溶性聚集体。如表所示，有利的是，添加精选的赋形剂将可溶性聚集体组合物从11. 4%减 少低至3. 9%。
[0"引表B
[0114] 在含有6%抗巧素的PLGA微球制剂中赋形剂的影响
[0117] 如表B所示，包含SBE-CD的制剂的可溶性聚集体的最低量的范围为3. 9 %至 4.7% [聚集体减少3倍]。虽然不希望受任何理论的束缚，但是运个结果可证明SBE-CD保 护蛋白质不受微球加工条件和释放条件的影响的能力。有趣的是，尽管单独添加精氨酸具 有很少减少可溶性聚集体的作用，但是当单独使用或与SBE-CD组合时，它提高蛋白质的包 封效率。海藻糖还证明了在微球制剂中聚集体的减少。令人吃惊的是，在制备PLGA微球的 过程中，SBE-CD和精氨酸的组合在减少聚集体W及最大化包封效率方面是协同的。
[0118] 表C示出了运个组合在最小化聚集体中的更加广泛的应用，其中在其它PLGA聚合 物组合中渗入运些赋形剂产生聚集体浓度约5%的微球。
[0119] 表C
[0120] 含有6%抗巧素的负载SBE-CD/精氨酸的微球的低聚集制剂
[0121]
[0123] 实施例5
[0124] 抗巧素从基于PLGA的微球中的持续释放
[0125] 如实施例3所述制造并测试基于PLGA的微球。图4和图5示出抗巧素的不同释 放曲线，并且证明了通过微球组合物和制造工艺的修改来调节抗巧素至不同突释化urst) 祀的释放、释放速率和持续时间的能力。
[0126] 图4和图5证明由于向基于PLGA的微球中渗入某些赋形剂得到的一些有益特性， 例如制剂实现持续释放两至=个月的能力。含有赋形剂的微球制剂显示稳定连续的释放， 然而不含赋形剂的微球制剂7天后的释放速率迅速减慢，如图4所示。含有赋形剂的基于 PLGA的微球显示几乎完全回收，累积释放为约77%，然而不含赋形剂的基于PLGA的微球显 示累积释放为约47%。图5示出使用不同赋形剂和相同的过程参数调节突释和释放速率的 能力。
[0127] 实施例6
[0128] 聚合物对抗巧素从基于PLGA的微球中释放的影响
[0129] 聚合物特性（如特性粘度（"IV")、玻璃化转变溫度和分子量）可促进蛋白质包 封和释放的程度。在微球制剂中评价具有不同IV(Resomer饭RG755S、RG753S和RG 752巧的=种聚合物。表D示出聚合物特性粘度对包封和突释的影响。尽管此表显示虽然 使用相同过程和相同的赋形剂组合物，但是显示含有RG755S的微球制剂具有最高的包封 效率、最高的蛋白质质量（例如，最低百分率的可溶性聚集体）和最低的突释。
[0130] 表D
[0131] 聚合物特性粘度对包封和突释的影响
[0133] 图6示出从由具有不同IV的聚合物制造的微球中释放抗巧素。由RG755S制造的 微球具有最高的IV，其显示连续释放，然而由RG753S和RG752S产生的微球7天后显示扁平 的释放曲线。
[0134] 聚合物共混可影响抗巧素自基于PLGA的微球的突释和释放速率。如图7所示， RG755S可与更具亲水性的聚合物共混W降低抗巧素自微球的突释和释放速率。与主要具有 RG755S的微球制剂相比，RG755S和RG502H的比率为13比1的聚合物共混物使得微球制剂 具有比主要具有RG755S的微球制剂更低的突释和更快的释放速率。然而，释放持续时间减 少至1个月。
[0135] 实施例7
[0136] 从基于PLGA的微球中释放的抗巧素的结合活性
[0137] 通过酶联免疫吸附测定（"化ISA")测量从所选的基于PLGA的微球中释放的抗巧 素的结合活性。活性定义为通过化ISA浓度与沈C浓度之比测定的浓度百分率。图8示出 持续两个月从基于PLGA的微球中释放的抗巧素的结合活性。在整个释放期间释放蛋白是 有活性的，对于含有赋形剂的微球制剂其结合活性高于70%，对于不含赋形剂的微球制剂 其结合活性高于50%。
[013引实施例8
[0139] 含有抗体的基于PLGA的微球的制造、测试W及释放
[0140] 根据另一个实施例，如实施例3所述使用抗体、贝伐单抗代替抗VEGF蛋白、抗巧素 制造并测试基于PLGA的微球。图9比较了含有抗巧素的基于PLGA的微球与含有贝伐单 抗的基于PLGA的微球制剂的释放曲线。该数据表明用来开发用于递送抗巧素的持续释放 制剂的过程和制剂可应用于分子量为149kDa的全长单克隆抗体W持续时间递送活性蛋白 质。
[0141] 虽然已经在某些优选实施方案和实施例的上下文中公开了本发明，但是本领域技 术人员将理解，本发明将专口公开的实施方案扩展到本发明的其它替代实施方案和/或用 途W及其明显修改和等价物。另外尽管已详细显示并描述了本发明的许多变型，但是根据 本公开，在本发明的范围内的其它修改对于本领域的技术人员是显而易见的。还考虑的是 可进行实施方案的具体特征和方面的各种组合或子组合，并且各种组合或子组合仍然落入 本发明的范围之内。因此，应理解公开的实施方案的各种特征和方面可W互相组合或互相 取代，W便执行所公开发明的不同模式。因此，意图是本文公开的本发明的范围不应限于上 面描述的具体公开的实施方案，而是应该仅通过清楚地阅读权利要求书来确定。
【主权项】
1. 一种物质组合物，其包含： 颗粒，所述颗粒包含蛋白质、生物可降解的聚合物和一种或多种赋形剂； 其中所述颗粒被配置用于递送所述蛋白质，持续不少于2个月的时间段。2. 如权利要求1所述的组合物，其中所述生物可降解的聚合物包含聚（d，1-丙交 酯-共-乙交酯）、聚（d，1-丙交酯）和/或聚乙二醇共聚物，其特性粘度在0.IdL/g至 1.0dL/g的范围内。3. 如权利要求1所述的组合物，其中所述蛋白质的分子量在IOkDa至150kDa的范围 内。4. 如权利要求1所述的组合物，其中所述一种或多种赋形剂包含环糊精、海藻糖、精氨 酸或其组合。5. 如权利要求4所述的组合物，其中所述一种或多种赋形剂包含环糊精，并且所述环 糊精为磺丁基醚-0 -环糊精。6. -种水性制剂，其包含： 蛋白质； 缓冲剂；以及 一种或多种赋形剂，其选自由环糊精、海藻糖和精氨酸组成的组； 其中所述一种或多种赋形剂以相对于所述蛋白质的摩尔浓度而言在10/1至200/1范 围内的摩尔比存在于所述水性制剂中。
【专利摘要】如本文所述的，通过施用一种或多种微粒进行的治疗剂(如蛋白质)的控制和持续施用可改善病状(如不希望的眼部病状)的治疗。可配制微球以提供蛋白质的持续释放，同时减少蛋白质聚集体的数量、获得理想的释放曲线以及增加微球制剂内蛋白质的稳定性。
【IPC分类】A61K47/26, A61K47/40, A61K47/48, A61K38/00, A61K9/50, A61K47/18
【公开号】CN105188759
【申请号】CN201480015377
【发明人】S·H·特兰, C·吴
【申请人】阿勒根公司
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2014年3月13日
【公告号】CA2902547A1, EP2968574A1, US20140274873, WO2014151725A1