持续释放递送的组合物以及在制造过程中稳定蛋白质的方法
【专利说明】持续释放递送的组合物W及在制造过程中稳定蛋白质的方 法
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请根据35U.S.C. § 119(e)要求2013年3月14日提交的美国临时申请号 61/786,035的权益，该申请的全部内容W引用的方式并入本文。
[000引 背景
[0004] 领域
[0005] 本公开一般设及用于持续递送活性剂（例如蛋白质）的制剂。
【背景技术】
[0006] 将药物递送至人类动物的身体，尤其是递送至人类或动物的眼睛（包括视网膜、 玻璃体和葡萄膜）通常是通过高剂量全身给予眼内注射包含活性剂（如蛋白质）的组合物 来实现的。
[0007] 在合适载体（如微球）中稳定活性剂（如蛋白质）可能出现挑战。然而，通过一 些不同的应力（如浓度、剪切和界面应力）包封蛋白质至微球制剂中的过程通常使蛋白质 不稳定。运些过程应力的影响可能造成蛋白质变性和聚集，导致生物利用度降低和潜在不 利的免疫反应。
[0008] 除了过程应力之外，包封在聚合物基质中的蛋白质通常经受来自生理环境的不利 条件W及来自聚合物基质内的微环境。在生理环境水平下，蛋白质经受高溫（如37°c及W 上）。在微环境水平下，蛋白质还经受初始水合阶段的浓度效应、抑改变化及基质中所使用 聚合物的疏水效应。通过此类事件（如聚集、化学修饰和断裂），运些环境条件可能对于蛋 白质长期稳定性是不利的并且最终限制其效力和可用性。
[0009] 概述
[0010] 本文公开了制剂、制备制剂的方法和使用制剂的方法，该制剂包含包封在聚合物 网络内具有高效率和高质量的蛋白质W确保持续递送很长一段时间。
[0011] 在一个实施方案中，物质组合物包含颗粒，颗粒包含蛋白质、生物可降解的聚合物 和一种或多种赋形剂。颗粒可被配置用于递送蛋白质持续不少于2个月的时间段。在一些 实施方案中，生物可降解的聚合物包含特性粘度在0.1化/g至1.0化/g的范围内的特性粘 度聚化^丙交醋-共-乙交醋）、聚化^丙交醋）和/或聚乙二醇共聚物。根据一些实 施方案，蛋白质的分子量在IOkDa至ISOkDa范围内。在一个实施方案中，一种或多种赋形 剂包括环糊精、海藻糖、精氨酸或其组合。根据一个实施方案，环糊精是横下基酸-0-环糊 精。
[0012] 在另一个实施方案中，水性制剂包含蛋白质、缓冲液和选自由环糊精、海藻糖和精 氨酸组成的组的一种或多种赋形剂。该一种或多种赋形剂可W相对于蛋白质摩尔浓度而言 在10/1至200/1范围内的摩尔比存在于水性制剂中。
[0013] 附图简述
[0014] 现在将参照下面概述的附图对运些和其它特征进行描述。提供运些附图和相关描 述是用来说明本发明的一个或多个实施方案而不是限制本发明的范围。
[0015] 图1示出了比较示例性实施方案的可溶性蛋白质回收率的柱形图。
[0016] 图2描述了比较其它示例性实施方案的可溶性蛋白质回收率的柱形图。
[0017] 图3示出了比较另外其它示例性实施方案的可溶性蛋白质回收率的柱形图。
[001引图4显示示出微球的示例性实施方案的释放曲线的图。
[0019]图5描述示出微球的示例性实施方案的释放曲线的图。
[0020] 图6显示示出微球的示例性实施方案的释放曲线的图。
[0021] 图7描述示出微球的示例性实施方案的释放曲线的图。
[0022] 图8显示示出微球的示例性实施方案的结合活性的图。
[0023]图9描述示出微球的示例性实施方案的释放曲线的图。
[0024] 详述
[0025]如本文所述的，通过施用一种或多种微粒控制和持续施用治疗剂（如蛋白质）可 改善病状（如不希望的前段或后段眼部病状）的治疗。微粒包含药学上可接受的聚合物组 合物，并且被配制成在长时间段内释放一种或多种药物活性剂（如蛋白质），或其它降低眼 内压的或神经保护性药剂。对微球可进行配制W提供蛋白质的持续释放，同时减少蛋白质 聚集体的数量、获得理想的释放曲线W及增加微球制剂内蛋白质的稳定性。
[0026]W下术语定义如下，除非词语的上下文示出不同的意思。
[0027]如本文所用，"微球"或"微粒"，可互换地用于指代颗粒、微球、微粒、超细粉末等， 其包括包封或渗入治疗组分的生物相容性基质。根据一些实施方案，微球不包括纳米颗粒 或纳米球。微球通常可与人器官（如眼睛）的生理条件生物相容，并且不造成不良副作用。 在不破坏眼睛视力情况下，可W安全地使用结膜下施用的微球。在一些实施方案中，微球具 有的最大尺寸（如直径或长度）小于1mm。例如，微球的最大尺寸可能小于约500ym。微 粒的最大尺寸还可不大于约200ym，或最大尺寸为约30ym至约50ymW及其它尺寸。
[0028]如本文所用，"治疗组分"是指除了聚合物基质之外包含一种或多种治疗剂或用W治疗眼部医学病状的物质的微球部分。治疗组分可W是微球的离散区域，或它可均匀分布 于整个微球。治疗组分的治疗剂可包含至少一种蛋白质，通常是眼睛可接受的，并且W当把 微球放在眼内时不造成显著不良反应的形式来提供。
[0029]如本文所用，"蛋白质"应该具有如本领域中已知的通用含义，并且可指由一条或 多条氨基酸链组成的大的生物分子。蛋白质可W在活性生物体内执行大量功能，该功能包 括催化代谢反应、复制DNA、对刺激作出响应W及将分子从一个位置运输至另一位置。蛋白 质可W是直链、支链或环状，并且可W是化学合成或天然或重组产生的。在一些实施方案 中，蛋白质还可包括修饰的蛋白质（如聚乙二醇化的蛋白质或翻译后修饰的蛋白质）。
[0030]如本文所用，"药物持续释放组分"是指有效提供治疗剂从微球中持续释放的微球 部分。药物持续释放组分可为生物可降解的聚合物基质，或它可为覆盖包含治疗组分的微 球核屯、区域的包衣。
[0031]如本文所用，"与……缔合"是指与……混合、分散于……中、与……偶联、覆盖或 包围。
[0032]术语"生物可降解的聚合物"是指体内降解的一种或多种聚合物，并且其中一种或 多种聚合物随时间的侵蚀与治疗剂的释放同时发生或在其之后发生。术语"生物可降解的" 与"生物可侵蚀的"为等效的且在本文可互换使用。生物可降解的聚合物可为均聚物、共聚 物或包含两种W上不同聚合单元的聚合物。
[0033] 如本文所用的术语"治疗有效量"是指治疗病状（如眼睛病状）或减少或预防眼睛 损伤或损害而对眼或眼区域没有造成显著的消极或不良副作用所需的药剂的水平或数量。 鉴于上文，治疗剂（如蛋白质）的治疗有效量为有效减轻眼睛病状的至少一种症状的数量。
[0034] 本领域技术人员将会理解本文使用的程度的各个术语的含义。例如，如本文在提 及数量（例如"约6%")的上下文中使用的，术语"约"表示接近并包括仍执行所需功能或 获得所需结果的所述量的量，例如"约6 % "可包括6%W及仍执行所需功能或获得所需结 果的接近6%的量。例如，术语"约"可指小于所述量的10%W内、小于所述量的5%W内、 小于所述量的0. 1%W内或小于所述量的0. 01%W内的量。
[00巧]巧白质
[0036] 根据一些实施方案，制剂或微球制剂含有蛋白质，本文中也称之为蛋白质组分。蛋 白质可W是直链、支链或环状的。蛋白质可W是融合蛋白。在一些实施方案中，相对于蛋白 质天然存在的形式，可W将其截短。蛋白质可包括不超过单条氨基酸链或两条或更多条氨 基酸链。如果蛋白质含有两条W上氨基酸链，则两条或更多条链可W共价地或非共价地相 互缔合。例如，氨基酸链可W通过二硫键缔合，或两条或更多条链可W仅通过非共价力相互 缔合。根据一些实施方案，蛋白质不含有合成的或翻译后修饰的氨基酸。蛋白质可W重组 (例如通过哺乳动物或原核细胞培养物）、合成（例如通过固相合成）、或可W从天然来源 (例如哺乳动物或细菌细胞培养物、血浆、血清、植物、真菌等）分离而产生。
[0037] 可被包括在制剂和微球制剂中并且因此被递送的蛋白质的非限制性实例包括单 克隆或多克隆抗体、双特异性抗体、双特异性抗体、抗体片段、抗巧素（anticalin)、DARPin 和酶。其它实例包括糖蛋白和血清白蛋白。如果使用的话，单克隆或多克隆抗体可WW其天 然形式（如例如通过细胞产生的）使用，并且可含有或可不含有翻译后修饰，或可WW化学 或酶促修饰的形式使用，该形式是在将其从细胞培养物或其它生物样品中分离出来之后产 生的。如果使用的话，抗体可W是嵌合的。在一些实施方案中，抗体可W是IgA、I曲、I姐、 IgG或IgM。抗体片段包括通过抗体的木瓜蛋白酶（例如F油片段）或胃蛋白酶裂解产生 的那些。更通常的是，有用的抗体片段包含F油'、F(油)2、F油C和Fv片段。在一些实施方 案中，可W使用补体抗体片段。抗体片段可W通过修饰全抗体或用重组DNA方法重新合成 而产生，并且还包括通过现在的常规技术制成的"人源化"抗体。"抗体片段"包括全长抗体 的一部分，通常是其抗原结合结构域或可变结构域。
[0038] 一些实施方案提供包含抗VEGF抗体或蛋白质（即，特异性结合血管内皮细胞生长 因子蛋白质或VEGF-A的抗体或蛋白质）的制剂和微球制剂。有用的抗VEGF抗体包括但不 限于雷珠单抗(LUCENTIS?)和贝伐单抗(AVASTIN?)。有用的抗VEGF蛋白质包括阿 柏西普（AfIiberc巧t)(Eylea膨H也称为VEGF捕获剂）、VEGF结合DARPin和VEGF结合 抗巧素。VEGF捕获剂GtegeneronPharmaceuticals,化￥Yor