基于上转换的新型光控活细胞染色方法及应用_2

文档序号:9497073阅读:来源:国知局
实施例4制备光稀土 上转换光控染料释放纳米载体颗粒(B)投射电子显微镜照片(形貌分析)。
[0042]图5 :稀土上转换光控染料释放纳米载体荧光发射光谱分析。
[0043] 图6 :稀土上转换光控染料释放纳米载体的宏观照片(A)和近红外照射条件下的 荧光照片(B)。
[0044]图7 :稀土上转换光控染料释放纳米载体的细胞毒性分析。
[0045] 图8 :装载有DAPI细胞核染料的纳米载体对人宫颈癌细胞(Hela细胞)进行着色, 当给予近红外光照射后细胞的着色效果。
【具体实施方式】
[0046] 下面的实施例中将对本发明作进一步的阐述,但本发明不限于此。
[0047] 实施例1:
[0048] 溶剂热法制备稀土上转换纳米颗粒(UCN):
[0049] (1)称取24mgYC13·6H20, 100mgYbC13·6H20和12mgTmC13·6H20,将上述三 种物质加入到4ml水中,在磁力搅拌条件,加热至沸腾直至稀土盐溶液变成白色固体。
[0050] (2)水蒸干后,冷却80 °C,用移液管加入10ml油酸配体溶液及5ml十八烯配体溶 液使白色固体完全溶解;
[0051] (3)接着加入20mgNaOH和60mg氟化铵,用5ml甲醇溶解;调节温度升温到130°C, 采用油栗抽真空40min,通氩气;迅速升温到280°C,维持反应lh;结束后加入30ml丙酮离 心纯化,最终产物真空干燥处理后保存。制备的稀土上转换纳米颗粒粒径为20~30nm。图 4 :按照实施例1合成的稀土上转换纳米颗粒。
[0052] 实施例2 :
[0053] 溶剂热法制备稀土上转换纳米颗粒(UCN):
[0054] (1)称取 12mgYC13 · 6H20, 100mgYbC13 · 6H20 和 12mgTmC13 · 6H20,将上述三 种物质加入到5ml水中,在磁力搅拌条件,加热至沸腾直至稀土盐溶液变成白色固体。
[0055] (2)水蒸干后,冷却70°C,用移液管加入15ml油酸配体溶液及5ml十八烯配体溶 液使白色固体完全溶解;
[0056] (3)接着加入10mgNaOH和60mg氟化铵,用10ml甲醇溶解;调节温度升温到 120°C,采用油栗抽真空50min,通氩气;迅速升温到260°C,维持反应2h;结束后加入20ml 丙酮离心纯化,最终产物真空干燥处理后保存。
[0057] 实施例3 :
[0058] 溶剂热法制备稀土上转换纳米颗粒(UCN):
[0059] (1)称取24mgYC13·6H20, 50mgYbC13·6H20和6mgTmC13·6H20,将上述三种 物质加入到6ml水中,在磁力搅拌条件,加热至沸腾直至稀土盐溶液变成白色固体。
[0060](2)水蒸干后,冷却80°C,用移液管加入10ml油酸配体溶液及5ml十八烯配体溶 液使白色固体完全溶解;
[0061] (3)接着加入60mgNaOH和30mg氟化铵,用5ml甲醇溶解;调节温度升温到150°C, 采用油栗抽真空30min,通氩气;迅速升温到300°C,维持反应3h;结束后加入40ml丙酮离 心纯化,最终产物真空干燥处理后保存。
[0062] 实施例4:
[0063] 介孔硅壳层包覆的上转换纳米颗粒及表面光敏分子和靶向分子的修饰以及罗丹 明染料的装填:
[0064] a)稀土上转换纳米颗粒包覆介孔娃壳层(UCN@mSi02):
[0065] (1)按照物质的质量,分别称取l〇mg稀土上转换纳米颗粒,2000mg十六烷基三甲 基溴化铵(CTAB)和10mg氢氧化钠加入到反应器中,然后向反应器中加入溶剂水30ml使上 述物质完全溶解,磁力搅拌条件下加热到70°C,搅拌lh。
[0066] (2)最后加入200ul正硅酸乙酯(TE0S),反应2h后,离心纯化。
[0067] (3)将制备好的颗粒重新分散到40ml乙醇中,接着加入0.6g氯化钠除模板剂,磁 力搅拌条件下加热到60°C,搅拌6h。反应完全后离心纯化,最终产物真空干燥处理后保存。
[0068] b)表面光敏分子和革E向分子的修饰:
[0069] (1)分别称取50mg4-苯偶氮苯甲酰氯,50mg叶酸和20ul3-氨丙基三乙氧基娃 烷将原料加入到反应器中,然后向反应器中加入5ml二甲基亚砜溶剂将上述物质完全溶 解,避光条件下搅拌8h。
[0070] (2)接着分别加入20mg碳二亚胺(EDC)和30mgN-羟基琥珀酰亚胺(NHS)。继续 搅拌6h后。
[0071] (3)加入500mg制备好的介孔娃壳层包覆的上转换纳米颗粒,反应10h后离心纯 化,得到表面功能化修饰的稀土上转换纳米颗粒包覆介孔娃壳层的纳米颗粒,产物真空干 燥处理后保存。
[0072] c)DAPI染料的装填:
[0073](1)称取50mg表面功能化修饰的稀土上转换纳米颗粒包覆介孔娃壳层纳米颗粒 和lmgDAPI染料,将上述两种原料加入5ml乙醇溶液中。
[0074] (2)磁力搅拌条件下,搅拌9h,然后离心纯化,最终得到稀土上转换光控染料释放 的纳米载体,产物真空干燥处理后保存。
[0075] 实施例5 :
[0076] 介孔硅壳层包覆的上转换纳米颗粒及表面光敏分子和靶向分子的修饰以及细胞 核染料的装填:
[0077] a)稀土上转换纳米颗粒包覆介孔娃壳层(UCN@mSi02):
[0078] ⑴按照物质的质量,分别称取l〇mg稀土上转换纳米颗粒,lOOOmg十六烷基三甲 基溴化铵(CTAB)和10mg氢氧化钠加入到反应器中,然后向反应器中加入溶剂水25ml使上 述物质完全溶解,磁力搅拌条件下加热到80°C,搅拌lh。
[0079] (2)最后加入100ul正硅酸乙酯(TE0S),反应2h后,离心纯化。
[0080] (3)将制备好的颗粒重新分散到50ml乙醇中,接着加入0. 9g氯化钠除模板剂,磁 力搅拌条件下加热到50°C,搅拌9h。反应完全后离心纯化,最终产物真空干燥处理后保存。
[0081] b)表面光敏分子和革E1向分子的修饰:
[0082] (1)分别称取60mg4-苯偶氮苯甲酰氯,30mg叶酸和10ul3-氨丙基三乙氧基娃 烷将原料加入到反应器中,然后向反应器中加入3ml二甲基亚砜溶剂将上述物质完全溶 解,避光条件下搅拌6h。
[0083] (2)接着分别加入20mg碳二亚胺(EDC)和40mgN-羟基琥珀酰亚胺(NHS)。继续 搅拌8h后。
[0084] (3)加入300mg制备好的介孔娃壳层包覆的上转换纳米颗粒,反应12h后离心纯 化,得到表面功能化修饰的稀土上转换纳米颗粒包覆介孔娃壳层的纳米颗粒,产物真空干 燥处理后保存。
[0085] c)细胞核染料的装填:
[0086] (1)称取3mg4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染料,将上述两种原料加入6ml 乙醇溶液中。
[0087] (2)磁力搅拌条件下,搅拌9h,然后离心纯化,最终得到稀土上转换光控染料释放 的纳米载体,产物真空干燥处理后保存。
[0088] 实施例6 :
[0089] 介孔硅壳层包覆的上转换纳米颗粒及表面光敏分子和靶向分子的修饰以及细胞 核染料的装填:
[0090] a)稀土上转换纳米颗粒包覆介孔娃壳层(UCN@mSi02):
[0091] ⑴按照物质的质量,分别称取5mg稀土上转换纳米颗粒,2000mg十六烷基三甲基 溴化铵(CTAB)和20mg氢氧化钠加入到反应器中,然后向反应器中加入溶剂水35ml使上述 物质完全溶解,磁力搅拌条件下加热到50°C,搅拌2h。
[0092] (2)最后加入150ul正硅酸乙酯(TE0S),反应lh后,离心纯化。
[0093] (3)将制备好的颗粒重新分散到30ml乙醇中,接着加入1. 2g氯化钠除模板剂,磁 力搅拌条件下加热到80°C,搅拌3h。反应完全后离心纯化,最终产物真空干燥处理后保存。
[0094] b)表面光敏分子和革E向分子的修饰:
[0095] (1)分别称取30mg4-苯偶氮苯甲酰氯,50mg叶酸和20ul3-氨丙基三乙氧基娃 烷将原料加入到反应器中,然后向反应器中加入6ml二甲基亚砜溶剂将上述物质完全溶 解,避光条件下搅拌9h。
[0096] (2)接着分别加入30mg碳二亚胺(EDC)和30mgN-羟基琥珀酰亚胺(NHS)。继续 搅拌6h后。
[0097] (3)加
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