6. 50nm，D (v，0· 5) = 23. 70nm，D (v，0· 9)= 37. 50nm
[0072] 图表15代表件的样品粒度（NPs w/TR2, SPL207)
[0074] Z(均）=32.27nm;D(v，0.1 ) = 16.30nm，D(v，0.5) = 23.80nm，D(v，0.9)= 37. 50nm
[0075] 实施例6 :用一个表面活性剂系统A的不同油相
[0076] 在容器中加入辛酸癸酸甘油酯（1克）和豆油（1克，或茶油），聚氧乙烯蓖麻油 (3克）搅拌并在室温下充分混合。加入含有诸如透明质酸（0.5% )等活性成分的水溶液 (0.25克），并充分混合。将所得澄清溶液用马尔文粒度分析仪测定粒度和zeta电位。其 按强度粒径（z均）是19. 90nm，按体积分布粒径从5. 92nm到22. 30nm (图表16)。把该澄 清溶液加入到含有诸如透明质酸（0.5% )等活性成分的水溶液（45克）中，搅拌并充分混 合。所得到的物质是透明至淡蓝色溶液，按强度粒径（z均）33. 82nm，按体积分布粒径从 15. 50nm到37. IOnm (图表17)。通过含有乳化剂Pemulen TR2的乳膏（2克）进一步稳定 所形成的纳米颗粒，并充分混合以得到最终的纳米乳剂。所形成的纳米乳剂是透明的浅蓝 色液体，具有35. IOnm的按强度（z均）粒径和15. 80nm到38. 20nm由按体积分布粒径（图 表 18) 〇
[0077] 图表16代表件的样品粒度（W/0, SPL197)
[0079] Z (均）=19. 90nm ;D (V，0· I) = 5. 92nm，D (V，0· 5) = 8. 94nm，D (V，0· 9) = 22. 30nm
[0080] 图表17代表件的样品粒度（0/W, SPL135)
[0082] Z(均）=33. 82nm ;D(v, 0· I) = 15. 50nm，D(v, 0· 5) = 22. 90nm，D(v, 0· 9)= 37. IOnm
[0083] 图表18代表件的样品粒度（NPs w/TR2, SPL136)
[0085] Z (均）=35. IOnm ;D (V，0· I) = 15. 80nm，D (V，0· 5) = 23. 20nm，D (V，0· 9)= 38. 20nm
[0086] 乳膏I的制备
[0087] 这批制备的乳膏总共200克。第I阶段：把纯净水（135克）、对羟基苯甲酸甲酯 (〇. 4克）、甘油（3克）和苯氧乙醇(6. Og)在一个烧杯中在70°C充分混合。第2阶段：在 一个单独的容器中，矿物油（5克）、鳄梨油（5克）、肉豆蔻酸异丙酯（5克）、白色凡士林（4 克）、维生素 E(4.6克）、乳化蜡（18克）、蜂蜡（7克）、鲸蜡硬脂醇（3克）、乙基己基甘油 (2克）和对羟基苯甲酸丙酯加热至70°C，熔融并充分混合。把第2阶段的物质在70°C转 移到第1阶段的物质中并在70°C充分混合，搅拌冷却至室温。上述方法成功制备了粒度小 于150纳米、小于100纳米、小于80纳米、小于50nm、小于30nm、小于20和10纳米的纳米 颗粒和纳米乳剂。这些纳米颗粒和纳米乳剂物质在室温下、在升高的温度下和在诸如冰冻 等较低的温度下是稳定的（<〇°C，见表1-3)。
[0088] 乳膏1的稳宙件测试:
[0089] A.冻融循环稳定性试验：将上述方法制备的纳米乳剂在室温放置24小时后，测定 粒径（29. 57nm)，然后在-20°C放置24小时，测定粒度（31. 38纳米）。该过程重复进行3 次，粒径为31. 38nm。
[0090] 表1 :冻融循环稳定性（SPL92)
[0092] 注：每个循环包括在室温（25°C )下存储24小时，接下来在-20°C存储24小时。
[0093] B :在室温（RT)和冷藏条件下存储稳定性
[0094] 按照上述方法制备纳米乳剂，通过其在室温（25°C )下和冷藏条件（2-8°C )下粒 径分布来测定存储稳定性。结果在下面表2中列出在，并且如所示，多层纳米乳剂和纳米颗 粒存储数月是相当稳定的。
[0095] 表2 :不同温度下存储稳定性（SPL107)
[0097] C :在升高的温度下的稳定性
[0098] 按照上面提到的方法制备纳米乳剂。加速条件下测定稳定性。在升高的温度下， 自22天及以后纳米乳剂和纳米颗粒是非常稳定的（参见下面表3)。
[0099] 表 3 :40°C 下的稳定性（SPL104)
[0101] 结论：如上所述的本发明方法制备的多层纳米颗粒和纳米乳剂在各种温度条件下 存储和使用是非常稳定的。粒度保持不变，这是长期稳定性的指标。物理观测，包括色彩、 透明度、液体的均匀性和粘度的目视检查也证实了这些纳米物质的物理-化学稳定性。
[0102] 工业实用件
[0103] 组成物和用法:
[0104] 通过本发明方法包裹在多层纳米颗粒和纳米乳剂中的内容物包括广泛的具有亲 脂性或亲水性特征的生物分子和有机化合物。诸如棕榈酰五肽KTTKS和棕榈酰寡肽等亲脂 性（或疏水性）的成分在油和表面活性剂相是可溶的，诸如透明质酸和水溶性的肽等亲水 的（或水溶性的）成分在水相是可溶的。在上述制备方法中，水不溶性成分和水溶性成分 都可以制备在粒径小于150纳米、100纳米、80纳米、50纳米、30纳米、20纳米和10纳米的 纳米颗粒和纳米乳剂中。它们在诸如较低温度（<〇°C )，室温，和高温（>40°C )等不同存储 条件下是稳定的。因此，出于不同的用途和应用，更多成份可以包裹在纳米颗粒和纳米乳剂 中。
[0105] 包含在多层纳米颗粒和纳米乳剂的活性成分选自：棕榈酰五肽KTTKS，棕榈酰四 肽GQPR，棕榈酰GHK，其他棕榈酰-寡肽，六肽阿基瑞林，Snap-8八肽，其他寡肽，透明质酸， 尿囊素，烟酰胺，芦荟，铜-GHK三肽，和二肽。另外，纳米颗粒和纳米乳剂包含选自下列群组 的活性成分：芦荟，尿囊素，烟酰胺，Q10,白藜芦醇，维生素 C，维生素 D，维生素 E，六肽阿基 瑞林，八肽Snap-8,寡肽，铜-GHK，棕榈酰-GHK，棕榈酰-KTTKS，棕榈酰-GQPR，棕榈酰寡肽， 干细胞，干细胞基质，干细胞生长因子，植物干细胞生长因子，人干细胞生长因子，胰岛素， 细胞生长因子，表皮细胞生长因子（EGFs)，成纤维细胞生长因子（FGFs)，角化细胞生长因 子（KGFs)，5-氟-尿嘧啶，达卡巴嗪，塞来昔布，罗非考昔，诸如硝酸银等银离子（Ag+)，布洛 芬，米诺环素，四环素，强力霉素，土霉素，雌三醇，雌二醇，孕酮。
[0106] 一个用法是，用下列三种组合物1，2和3通过上述方法制备的包裹的多层纳米粒 子和纳米乳剂涂在皮肤上。取决于加入到油表面活性剂相和水相的活性成分，对人类受试 者的皮肤伤口区域每天两次用药，几个星期的时间内观察到了去皱和紧致效果（组合物 1)，皮肤美白，和皮肤紧致效果（组合物2)，皮肤出血伤口快速愈合（在13天内）后不留疤 痕效果（组合物3)。一些结果如下：
[0107] 组合物1
[0108] 油+表面活性剂相：棕榈酰五肽KTTKS，棕榈酰四肽GQPR，棕榈酰GHK和其他棕榈 酰-寡肽。
[0109] 水相：六胜肽阿基瑞林，Snap-8八肽和其他寡肽，透明质酸，尿囊素和烟酰胺，芦 荟。
[0110] 用法：面部皮肤局部应用这些组合物1的纳米颗粒和纳米乳剂，每天两次，每次约 Imlo
[0111] 局部施用组合物1多层纳米乳剂8个星期后，与使用前相比，观察到去皱和皮肤紧 致。
[0112] 组合物2
[0113] 油+表面活性剂相：棕榈酰GHK和其他寡肽
[0114] 水相：铜-GHK三肽，二肽和其它寡肽，透明质酸，尿囊素和烟酰胺，芦荟。
[0115] 用法：面部皮肤局部应用这些组合物2纳米颗粒和纳米乳剂，每天两次，每次约 Iml 〇
[0116] 局部施用组合物2多层纳米乳剂3个星期后，与使用前比较，观察到去皱和下垂皮 肤紧致。
[0117] 组合物3
[0118] 油+表面活性剂相：棕榈酰GHK
[0119] 水相：铜-GHK三肽和二肽，透明质酸，尿囊素和烟酰胺，芦荟。
[0120] 用法：伤口区域局部外用这些组合物3纳米颗粒和纳米乳剂，每天两次，每次约 lml。如果更大的皮肤伤口区域，应用更多。
[0121] 面部和手的出血和疤痕局部施用组合物3多层纳米乳剂13天之后，与使用前比 较，观察到皮肤出血及伤口愈合没有留下疤痕。
[0122] 临床效果:
[0123] 通过局部外用上面描述的方法制备的纳米颗粒和纳米乳剂，由于活性成分快速和 有效穿过皮肤，上述三种组合物的多层纳米颗粒和纳米乳剂（但不限于上述的这三种组合 物）有着优异的临床皮肤状况改善效果。这些研究的典型临床结果显示了快速和显著的效 果。
[0124] 结论:
[0125] 用上文描述的新制备方法制备了新的多层纳米颗粒和纳米乳剂。这些药妆和药物 活性成分包裹的多层纳米粒子和纳米乳剂可以深入到皮肤层，组织和细胞，并且在人类受 试者中观察到了优异的临床效果。纳米材料，制备方法，组合物和乳膏是独特技术和方法， 并可广泛地用于医药，化妆品，膳食补充剂，营养制剂，和运动医学领域。
[0126] 虽然说明书已经相当详尽地描述了本发明的多层纳米颗粒和纳米乳剂，以及使用 他们的方法，但是应当理解的是，可以在不超出本发明的所附权利要求的范围对本发明作 出修改，以及由本发明所属领域的其他技术人员对本发明做出的改变，在落入本发明要求 的保护范围内的那些，将被认为是侵害了本发明。
[0127] 以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的 限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
[0128] 参考文献：
[0129] I.