含有芹糖甘草苷的具有皮肤抗皱、抗炎及皮肤美白活性的组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及含有芹糖甘草苷的具有皮肤抗皱、抗炎及皮肤美白活性的组合物。
【背景技术】
[0002] 甘草属于豆科多年生草本，具有木质的根和根状茎。地上部分的lm左右的茎上长 了 9-17个长圆的叶，具有很多叶脉。药用部位是3年生的根和根状茎，性平味甘为特点。满 洲甘草分布于中国的东北、华北、西北及蒙古、西伯利亚，西班牙甘草分布于南欧、中亚及中 国，变种有俄罗斯甘草（G.glabravar.typica)、波斯甘草（G.glabravar.glanduliferr) 等。俄罗斯甘草野生于西班牙、意大利，在西班牙、德国、英国、叙利亚有种植，波斯甘草分布 于俄罗斯、小亚细亚、叙利亚及中国南部。在中国种植的甘草种类包括满洲甘草、西班牙甘 草、胀果甘草等共有8种，主要种植的有满洲甘草、欧洲甘草、胀果甘草。
[0003] 甘草作为药品、烟草及食品得到广泛的种植。具有祛痰、通便、镇定痉挛、抗过敏、 抗菌、抗病毒、促进胆汁分泌、解热、镇咳、肌肉放松、护肝及抗癌作用等活性，并对普通感 冒、咳嗽、支气管炎、胃溃疡及十二指肠溃疡、关节炎、斑疹、肝炎、肝脏及肾脏硬变症、生理 痛、爱迪生氏病（肾上腺皮质分泌不足症）、湿疹及单纯疱疹、胆固醇、毛滴虫感染、药物和 食物中毒、疲劳、解热、心动过速等各种疾病具有效果，且在制备其他药品时为了调味而经 常使用，因此是最为常用的药草之一。
[0004]目前为止以知的甘草成分可分为三廠衍生物（triterpenoidderivatives)、 黄酮类（flavones)及异黄酮类（isoflavones)三种，三廠类已鉴定有甘草素 (glycyrrhizin)、8-i3-甘草次酸（8-i3-glycyrrhetinicacid)、甘草环氧酸（liquoric acid)、甘草廠醇（glycyrrhetol)、光甘草酸（glabricacid)等；黄酮类报道有异甘草素 (isoliquiritigenin)、新甘草黄ft(neoliquiritin)、新异甘草ft(neoisoliquiritin)、 反式_异甘草素4/-0_〇-批喃葡萄糖苷（1:抑118-18〇11911；[1'；[1^8611；[114 /-0-0-区111 copyranoside)、阜草黄素（saponaretin)、鼠李糖甘草ft(rhamnoliquiritin)、甘草 ft(liquiritin)、序糖甘草苷（liquiritinapioside)、甘草素（liquiritigenin)、异 甘草式（isoliquiritin)、异甘草素（isoliquiritigenin)等，异黄酮类除了甘草利酮 (licoricone)、甘草查尔酮A和B(licochalconeA&B)、甘油雌酮（glycestrone)、甘草酉分 (glycyrol)、5-0_ 甲酉分（5-0-methylglycyrol)、异甘草酉分（isoglycyrol)之外，还阐明了桦 木酸（betulicacid)、甘草西定（(licoricidin)、7_ 乙醜氧-2-甲基-异黄酮（(7-acetox y-2-methyl-isoflavone)、7-甲醜氧-2-甲基异黄酮（7-methoxy-2-methylisoflavone)、 羟基_2_甲基异黄酮（7-hydroxy-2_methylisoflavone)等的结构。
[0005]韩国公开专利第10-2005-0026807号中公开了利用上述甘草制备皮肤刺激缓和 用化妆品助剂的方法，但对甘草成分之一的序糖甘草苷（liquiritinapioside)的活性没 有阐明。
【发明内容】
[0006] 发明目的
[0007] 从而，本发明的目的在于，阐明序糖甘草苷（liquiritinapioside)的活性，并提 供一种以其为主成分含有的组合物。
[0008] 技术方案
[0009]为了达到上述目的，本发明提供一种含有芹糖甘草苷作为主成分的具有皮肤抗 皱、抗炎及皮肤美白活性的药物组合物及化妆品组合物。
[0010] 如上所述的根据本发明的组合物，所述芹糖甘草苷优选从甘草提取，在药物组合 物的情况下可以是皮肤外用剂。
[0011] 发明效果
[0012] 本发明明确阐明了芹糖甘草苷的用途，含有其为主成分的组合物具有优异的皮肤 抗皱、抗炎及皮肤美白活性。
【附图说明】
[0013] 图1是角质形成细胞中的细胞毒性评价示意图。
[0014] 图2是UVB刺激的角质形成细胞中细胞保护效果示意图。
[0015] 图3是成纤维细胞中的细胞毒性评价示意图。
[0016] 图4是弹性水解酶（Elastase)的阻碍活性评价示意图。
[0017] 图5是在HDF细胞中的弹性水解酶（Elastase)的阻碍活性评价示意图。
[0018] 图6是胶原蛋白合成量测定结果示意图。
[0019] 图7是N0生成抑制活性评价示意图。
[0020] 图8是PGE2表达抑制活性评价示意图。
[0021] 图9是TNF- α表达抑制活性评价示意图。
[0022] 图10是IL-6表达抑制活性评价示意图。
[0023] 图11是B16F10细胞中的细胞毒性评价示意图。
[0024] 图12是B16F10细胞中的酪氨酸酶（tyrosinase)阻碍活性的评价示意图。
[0025] 图13是黑色素生物合成量的测定结果示意图。
【具体实施方式】
[0026] 下面详细说明实施本发明的具体内容。以下实施例中虽然从甘草中制备了芹糖甘 草苷，但本发明不必解释为芹糖甘草苷限定为从甘草中制备。
[0027] 实施例1:从甘草精制序糖甘草苷（liquiritinapioside)
[0028] 甘草粉碎并通过60-200目网筛而得的粉末500g中添加2L乙醇，在室温下提取 一夜后，用No. 2滤纸过滤得到滤液。将该滤液浓缩后混悬于纯化水中，与20单位/ml的 β-(1，4)_葡糖苷酶（西格玛公司，美国，EC3. 2. 1.21)在37°C下反应30分钟。
[0029] 通过离心分离（5000rpm，30分钟）去除此时将生成的沉淀，浓缩上清液后，添加 乙醇使β-(1，4)_葡糖苷酶沉淀。沉淀的β-(1，4)_葡糖苷酶通过离心分离（5000rpm，30 分钟）去除，浓缩干燥上清液。取该浓缩干燥物lg上样至用C18(100g,45-60mm)填充的 柱（2X25cm)后，使用水/甲醇的混合溶剂作为流动相，依次提高甲醇的比例（0-100%，60 min;100%，40min)进行柱层析，得到流分（Fr. 1-5)。将含有有效成分的流分用recycle LC(ODS柱）反复进行柱层析，从而精制得到序糖甘草苷（liquiritinapioside)10mg。
[0030] 实施例2 :芹糖甘草苷的抗皱活性评价
[0031] 1、角质形成细胞中的细胞毒性评价
[0032] 实验方法
[0033] 将人角质形成细胞株HaCaT细胞使用含有1%的抗生素和10%的胎牛血清的达尔 伯克改良伊格尔培养基（Dulbecco'smodifiedEagle'smedium)，在 37°〇、5%032培养 箱中进行培养，每4天进行一次传代培养。
[0034] 细胞存活率测定（MTT分析）
[0035] 为了测定试料对细胞生长产生的影响，进行了MTT分析。代谢旺盛的存活细胞由 于其细胞内的线粒体（mitochondria)的脱氢酶的作用而使水溶性的黄色3-(4,5-二甲基 喔唑-2-基）_2, 5_ 二苯基四唑氧漠酸盐（3_ (4, 5_dimethylthiax〇-2-yl) _2, 5-diphenyl tetrazoliumbromide)还原形成呈紫色的非水溶性甲職（formazan)。
[0036] 利用添加10%FBS的DMEM培养基，将HaCaT细胞以3.OX105细胞/ml的浓度接 种到96孔板，培养18小时之后，处理了不同浓度的试料继续培养24小时。然后添加50μ1 MTT溶液反应4小时。完全去除培养基之后，添加200μ1二甲亚砜完全溶解沉淀物，使用全 自动定量绘图酶标仪（microplatereader)测定540nm的吸光度。求出各个试料组的平均 吸光度值，与对照组的吸光度值进行比较，从而评价细胞生长率。
[0037] 实验结果
[0038] 将人角质形成细胞HaCaT细胞用400μg/ml以下浓度芹糖甘草苷处理，培养24小 时后，利用MTT分析确认细胞存活率，并将其结果示于图1和表1中，由此可以知道400μg/ml以下浓度范围显示出90-100%的存活率,没有显示细胞毒性。
[0039]【表1】
[0042] 2.用UVB刺激的角质形成细胞中的细胞保护效果
[0043] 实验方法
[0044] 向人角质形成细胞HaCaT细