[0024] 经检测，成品中麦角酱巧的含量为2. 04mg/片。 阳0巧]实施例4 :蜜桶花片抑制人乳腺髓样癌细胞Bcap-37细胞增殖的实验研究资料 1.实验材料 1. 1实验用细胞株 人乳腺髓样癌细胞Bcap-37细胞，山东大学实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。 阳0%] 1. 2实验药物 研究药物：本发明蜜桶花片：按实施例1方法制备。
[0027] 药液储液：称取lOOmg蜜桶花化溶于5ml无水乙醇中，0. 2化滤器过滤， 50〇μ1(1ο??·管分装，-20°C存储，同时0. 2化滤器过滤无水乙醇W备对照组之用。 阳0測 1. 3实验试剂 DMEM(GIBC0公司Cat.No. 12100-061Lot.No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技 有限公司Lot.No. 100419);胞肥〇3(上海久亿化学试剂有限公司Cat.No. 11810-033Lot. No. 1088387) ;Τ巧psin(AMRESC0 公司）;邸TA(AMRESC0 公司）;化nicillinGSodiumSalt (AMRESCO公司l);St;r巧tomycinSulfate(AMRESCO);无水乙醇（溜博亚杜兰经贸有限公 司）；MTT度iosha巧批号：0793):PBS(实验室自配）； 1. 4实验器材 莱卡倒置显微镜(德国Leica型号：DMIL);可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD公司型 号：S阳CTRAMAX190);C02培养箱（FORMA型号：3111);超净台（苏净集团安泰公司制造型号： SW-CJ-Z抑）；纯水仪(美国Spring公司型号：S/N020579);精密移液器(法国吉尔森公司型 号：P2);电子天平(德国赛多利斯有限公司型号：BT323S);全自动高压灭菌锅（日本SANYO 公司型号：MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱（上海精密实验设备公司型号：DHG9123A);冰 箱（西口子公司型号：KG18V21TI);液氮罐（CBS型号：2001);低速离屯、机(上海安亭科学仪 器厂型号：KA-1000) ;0.2化滤器（MILLIP0RE型号：SLGP033RB) ;lcm培养皿（肥ST公司）、 96孔培养板（肥ST公司）；细胞计数板；离屯、管、移液管、Tips若干。
[0029] 2,实验方法 1)Bcap-37细胞用DMEM+10%FBS于37 °C、5%C02进行常规培养（10cm培养皿)，当 细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0. 25%膜蛋白 酶-0. 04%邸TA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转 入离屯、管中，100化pm离屯、5min，调整细胞悬液浓度3X104个/ml。
[0030] 。将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液18〇μ1，培养板放入细胞培养箱 中（37°C，5%C02)常规培养。
[0031] 3)根据细胞生长情况，一般长至50%-70%，加入蜜桶花片溶液，继续培养2地。
[0032] 4) 2地后加入2〇μ1MTT溶液（5mg/ml，即0. 5%MTT)，继续培养地。
[0033] 5)地后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入20〇μ1二甲基亚讽，置摇床 上低速振荡lOmin，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
[0034] 6)同时设置本底(不加细胞，只加培养液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介 质、培养液、MTT、二甲基亚讽)，每组设定6个复孔。
[0035] 7)结果W药物对细胞的抑制率表示：细胞增值抑制率饼)=(对照孔0D值-给药 孔0D值)、对照孔0D值X100%。实验重复3次。
[0036] 3.统计处理 义用MicrosoftExcel2007软件中的相关分析和Studentt检验，数据Wmean+S.D. 表不。
[0037] 4.实验结果 MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对Bcap-37细胞 增殖抑制有差异（P<〇. 05)，剂量在lOmg/ml时该差异具有显著性（P<0. 01)，当剂量达到 15-20mg/ml时有极显著性差异（P<0. 001)。 阳03引表1蜜桶花片对Bcap-37细胞增殖抑制影响研究狂+SD)
注：与对照组比较，冲<0. 01 ;*冲<0. 001。
[0039] 5.实验结论 本发明的蜜桶花片可W抑制Bcap-37细胞增殖，减少Bcap-37细胞的细胞生长数目，该 作用呈剂量依赖性。
【主权项】
1. 蜜桶花片在制备抑制乳腺髓样癌细胞Bcap-37细胞增殖药物中的应用，所述蜜桶花 片由蜜桶花1700g作为原料药制成，其特征在于，所述蜜桶花片的制备方法由下列步骤组 成：取蜜桶花，加入到〇) 2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积 百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50°C，C(V流量l-3ml/g生药·min，萃取时间 800-900min，得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成 400片，每片重0· 50g。2. 根据权利要求1所述的蜜桶花片在制备抑制乳腺髓样癌细胞Bcap-37细胞增殖 药物中的应用，其特征在于，所述蜜桶花片的制备方法由下列步骤组成：取蜜桶花，加入到 〇) 2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力 25MPa，温度40°C，C(V流量2ml/g生药·min，萃取时间850min，得超临界萃取物，将超临界 萃取物加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成400片，每片重0. 50g。
【专利摘要】本发明属于中药技术领域，具体涉及一种蜜桶花片在制备抑制乳腺髓样癌细胞Bcap-37细胞增殖药物中的应用及蜜桶花片的制备方法。所述蜜桶花片由蜜桶花1700g作为原料药制成，采用超临界萃取制备而成，使得麦角甾苷含量有很大提高。
【IPC分类】A61K36/80, A61K47/36, A61K9/20, A61P35/00
【公开号】CN105412330
【申请号】CN201510986109
【发明人】王静
【申请人】济南新时代医药科技有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月25日