复合生物活性因子的提纯浓缩方法及浓缩液的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种复合生物活性因子的提纯浓缩方法及浓 缩液。
【背景技术】
[0002] 对于人体组织损伤导致的功能障碍，传统的修复方法是自体组织移植术，自体组 织移植术会牺牲自体健康组织，并且会导致很多并发症及附加损伤。
[0003] 组织工程指在体外构建人工组织器官，例如，通过对人源或者动物源的细胞在组 织工程培养液中进行原代培养、传代培养并大量扩增，构建人工组织器官。对于人体组织损 伤，通过人工组织器官作为修复材料，可以达到较好的修复效果，并且避免了自体组织移植 术的各种缺点。
[0004] 体外构建人工组织器官过程中，细胞可以自分泌和旁分泌氨基酸、多肽或蛋白质 等多种生物活性因子到培养液中，形成组织工程皮肤条件培养液。常见的细胞分泌的生 物活性因子有hEGF(中文：人表皮生长因子，英文：humanepidermalgrowthfactor), FGF(中文：成纤维细胞生长因子，英文：fibroblastgrowthfactor),VEGF(中文：血管内皮 生长因子，英文：vascularendothelialgrowthfactor)等。
[0005] 包含多种生物活性因子的组合体可以称为复合生物活性因子。复合生物活性因子 除了具备各种生物活性因子自身的功能外，各种生物因子之间还可以相互促进，所以，复合 生物活性因子在医疗和化妆品等行业具有重要作用。
[0006] 组织工程皮肤条件培养液中除了包含有用的复合生物活性因子之外，还包含多种 杂质，而且，复合生物活性因子的含量相对于杂质的含量比较低，所以，为了有效利用复合 生物活性因子，对于复合生物活性因子的提纯和浓缩就变得非常重要。
[0007] 但是，现有技术提供的提纯和浓缩技术一般仅适用于单种生物活性因子，例如，阳 离子交换层析方法，对种类繁多的复合生物活性因子进行提纯浓缩的效率和产率较低。
【发明内容】
[0008] 本发明的主要目的在于，提供一种复合生物活性因子的提纯浓缩方法及浓缩液， 提高对复合生物活性因子提纯浓缩的效率和产率，且工艺简单，方便实现。
[0009] 为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0010] -方面，提供一种复合生物活性因子的提纯浓缩方法，包括：
[0011] 提供包含所述复合生物活性因子的组织工程皮肤条件培养液；
[0012] 对所述组织工程皮肤条件培养液进行除杂处理，以除去所述组织工程皮肤条件培 养液中分子量大于30kD的物质，获得包含所述复合生物活性因子的中间液体；
[0013] 用切向流超滤浓缩组件浓缩所述中间液体，截留所述中间液体中分子量大于3kD 的物质，获得包含所述复合生物活性因子的浓缩液。
[0014] 进一步的，所述复合生物活性因子包括：hEGF、VEGF、FGF、TGF-β1、TGF-β2、 IGF-1、IGF-2、KGF和PDGF。
[0015] 可选的，所述提供包含所述复合生物活性因子的组织工程皮肤条件培养液，具体 包括：
[0016] 收集组织工程皮肤条件培养液；
[0017] 将收集的组织工程皮肤培养液密封后冻存；
[0018] 取需要量的组织工程皮肤条件培养液进行化冻，获得包含所述复合生物活性因子 的组织工程皮肤条件培养液。
[0019] 可选的，对所述组织工程皮肤条件培养液进行除杂处理，具体包括：
[0020] 将所述组织工程皮肤条件培养液在〇· 9-1. 8bar的压力下，通过第一切向流超滤 浓缩组件，收集透过液，获得所述中间液体。
[0021] 优选的，在对组织工程皮肤条件培养液进行除杂处理之前，还包括：
[0022] 将所述组织工程皮肤条件培养液在4000rpm-8000rpm转速下离心。
[0023] 优选的，所述第一切向流超滤浓缩组件的规格为30kD或者50kD。
[0024] 进一步的，所述对所述组织工程皮肤条件培养液进行除杂处理的步骤，在将所述 组织工程皮肤条件培养液在〇. 9-1. 8bar的压力下，通过第一切向流超滤浓缩组件的过程 中，还包括：对未透过所述第一切向流超滤浓缩组件的组织工程皮肤条件培养液进行洗滤， 其中，未透过第一切向流超滤浓缩组件的组织工程皮肤条件培养液包括：被第一切向流超 滤浓缩组件截留的组织工程皮肤条件培养液，以及尚未处理的组织工程皮肤条件培养液。
[0025] 可选的，所述用切向流超滤浓缩组件浓缩所述中间液体，具体包括：
[0026] 将所述中间液体在0. 9-1. 8bar的压力下，通过第二切向流超滤浓缩组件进行浓 缩，收集滞留液，在滞留液的体积为所述中间液体的1/10-1/20时，停止操作；所述滞留液 是指未透过超滤浓缩组件的液体。
[0027] 将所述收集的滞留液在0. 9-1. 8bar的压力下，再次通过所述第二切向流超滤浓 缩组件，在滞留液的体积为所述中间液体的1/50-1/100时，停止操作，收集滞留液，得到包 含所述复合生物活性因子的浓缩液。
[0028] 优选的，所述第二切向流超滤浓缩组件包含3-5块串联分布的超滤膜包，所述超 滤膜包的规格为3kD。
[0029] 另一方面，本发明实施例提供一种浓缩液，包括：hEGF、VEGF、FGF、TGF-β1、 TGF-β2、IGF-1、IGF-2、KGF和PDGF。
[0030] 本发明实施例提供的一种复合生物活性因子的提纯浓缩方法，工艺简单，实现方 便，能够对成分复杂的组织工程皮肤条件培养液中的多种生物活性因子同时提纯和浓缩， 提高对种类繁多的复合生物活性因子提纯浓缩的效率，且获得的复合生物活性因子纯度 高，包含的生物活性因子种类多。
[0031] 本发明实施例提供的浓缩液，包含9种生物活性因子，可以有效的与皮肤细胞发 生作用，促进上皮细胞的营养代谢，预防皮肤受到紫外线、自由基等侵害，还可以促使真皮 层胶原细胞的增生。因此对皮肤术后可以加速修复，并具有抚平细纹，延缓皮肤老化等功 能。
【附图说明】
[0032] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本 发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可 以根据这些附图获得其他的附图。
[0033] 图1为本发明实施例提供的一种超滤浓缩装置的结构图；
[0034] 其中，1为原液桶，2为进口端，3为蠕动泵，4为调压阀，5为进口端压力表，6为切 向流超滤浓缩组件，7为回流端压力表，8为透过端，9为滤液桶，10为回流端。
【具体实施方式】
[0035] 现将详细地提供本发明实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每 一实例作为解释而非限制本发明。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对 本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部 分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。因此，基于 本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他 实施例，都属于本发明保护的范围。
[0036] 本发明实施例所涉及的材料均可以通过商业途径或通过申请人获取。
[0037] 本发明实施例提供了一种复合生物活性因子的提纯浓缩方法，包括步骤：
[0038] 步骤1、提供包含复合生物活性因子的组织工程皮肤条件培养液；
[0039] 步骤2、对该组织工程皮肤条件培养液进行除杂处理，以除去所述组织工程皮肤条 件培养液中分子量大于30kD的物质，获得包含复合生物活性因子的中间液体；
[0040] 步骤3、用切向流超滤浓缩组件浓缩所述中间液体，截留所述中间液体中分子量大 于3kD的物质，获得包含复合生物活性因子的浓缩液。
[0041] 通过步骤1至步骤3,能够对成分复杂的组织工程皮肤条件培养液中的多种生物 活性因子同时提纯和浓缩，提高对种类繁多的复合生物活性因子提纯浓缩的效率，且获得 的复合生物活性因子纯度高，包含的生物活性因子种类多。
[0042] 下面对本发明实施例的具体实现方式和优选实现方式进行说明。
[0043] 组织工程皮肤为一种组织化工程组织。组织工程皮肤条件培养液是指在基本培养 基中添加其他辅助成分（例如，血清等），采用组织工程方法在体外构建组织工程皮肤后， 包含除组织工