7]图12是TUNEL法和PADI法检测虎奶菇多糖功能化纳米硒诱导人乳腺癌细胞MCF-7 株系细胞凋亡时DNA断裂和染色质固缩图；
[0038] 图13是流式法检测虎奶菇多糖功能化纳米硒诱导人乳腺癌细胞MCF-7株系细胞凋 亡图；
[0039] 图14是Annexin- V法检测虎奶燕多糖功能化纳米硒诱导人乳腺癌细胞MCF-7株系 凋亡细胞磷脂酰丝氨酸外翻图。
【具体实施方式】
[0040] 虎奶燕(Pleurotus tuber-regium)是热带地区一种名贵食药用真菌，其菌核可有 效治疗胃病、哮喘、高血压、乳腺炎、糖尿病、冠心病、肿瘤等多种疾病，也能促进胎儿发育， 提尚早广儿成活率，还有提尚人体免疫功能、抗肿瘤、抑制病毒等生理功能。多糖是虎奶燕 主要的活性成分。目前的研究发现其多糖可增强机体免疫功能，并对肿瘤、病毒有较强的抑 制作用。
[0041 ]因此，本发明利用虎奶菇多糖的将纳米硒功能化，即把具有抗氧化、抗肿瘤、抗病 毒、抗;S老和提尚免疫力等活性的虎奶燕多糖引入液相纳米砸体系，提尚其生物利用度和 生物活性，降低细胞毒性，获得具抗肿瘤活性显著的纳米硒，协同作用提高其抗肿瘤活性， 提供一种具有抗肿瘤活性的虎奶菇多糖功能化纳米硒水溶胶。
[0042] 本发明提供的具有抗肿瘤活性的虎奶菇多糖功能化纳米硒水溶胶含有以下浓度 的物质：浓度范围为IOmg · L-1~1000 mg · L-1的虎奶菇多糖；浓度范围为0.02mmol · L-1~ 2Ommol · L-1的维生素 C;浓度范围为0.005mmol · L-1~??πιπιο? · L-1的纳米硒。
[0043] 本发明制备的具有抗肿瘤活性的虎奶菇多糖功能化纳米硒水溶胶是通过以下方 法制备的：
[0044] 首先，在常温常压下，往虎奶菇多糖水溶液中加入维生素 C溶液，混合均匀。该维生 素 C优选为还原型维生素 C。
[0045] 随后，在上述得到的溶液中滴加二氧化硒溶液或亚硒酸盐溶液，边滴加边混匀;该 亚硒酸盐可以为亚硒酸钠。
[0046] 最后，对上述得到的溶液加水定容，待产物中所出现的红色不再加深，即可得到由 虎奶燕多糖功能化的纳米硒水溶胶。
[0047]在上述制备过程中，采用的虎奶菇多糖水溶液浓度为30mg · IZ1~3000mg · I/1，维 生素 C溶液的浓度为0.2mmol · I/1~200mmol · I/1，二氧化硒或亚硒酸钠溶液的浓度为 0.05mmol · I/1~50mmol · L'可以根据不同浓度需要的虎奶燕多糖功能化纳米硒水溶胶， 计算出采用上述浓度的原料所需采用的体积。以下实施例中将对各种浓度的产品的原料的 具体浓度和体积进行说明。
[0048] 本发明制备的所述的具有抗肿瘤活性的虎奶菇多糖功能化纳米硒水溶胶，可以用 于制备抗肿瘤药物。该虎奶菇多糖功能化纳米硒水溶胶可以在2~10°C下以溶胶形态保存。
[0049] 在本文中，虎奶菇可以选自人工栽培虎奶菇和野生虎奶菇品种中一种或两种；也 可以选自不同地域的，系统发育上有一定差异的虎奶菇品种中的一种或数种，例如来自我 国的云南、福建虎等地的奶菇品种，来自国外的尼日利亚、马来西亚、巴布亚岛、新几内亚、 新喀里多尼亚等产地的虎奶菇品种。
[0050] 在实施方式中，虎奶菇多糖选用水溶性虎奶菇多糖和化学修饰的热碱溶性虎奶菇 多糖中的一种，或者其组合。
[0051 ]水溶性虎奶菇多糖是指水溶性虎奶菇菌丝体多糖和水溶性虎奶菇菌核多糖，例如 分子量 Mw 为 17.03kDa,主链结构为[e-GlcdD-FruL-Ea-GladD-e-RhadD-e-Mand-Ol· 的 mp-1、分子量为 13.79kDa， 结构主链为 [0-Glc(l-6)-Fru]n-[a-Rha(l-6)]J9mp-2、分 子量为 16.96kDa，主链结构为[0-61(：(1-6)+^1]11-[€[-610(1-6)]"的8?-1、分子量为 131.96kDa，主链结构为包含β-Gla的β-连接的sp-2、分子量为174.40kDa主链结构为β-Glc (1-6)-FruiUa sp-3 等。
[0052]热碱溶性虎奶菇多糖是指热碱溶性虎奶菇菌丝体多糖和热碱溶性虎奶菇菌核多 糖，为同多糖，主链为β-(1-3)-D-葡聚糖，每三个葡萄糖残基上有一个β-(1-6)连接的分枝 葡萄糖残基，化学修饰后的得到不同的产物，例如是硫酸酯化虎奶菇多糖和羧甲基化虎奶 菇多糖。
[0053]下面结合实施例及附图对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限 于此。
[0054] 实施例1:
[0055]常温常压下（15~35°C，1标准大气压），取质量浓度为2.5g · IZ1的水溶性虎奶菇多 糖溶液0、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.01111分别加入装有101111双蒸水的9个251111的容 量瓶中，然后再分别加入浓度为O. Imol · I/1的维生素 C溶液各1.0 ml，轻轻摇匀使之混合充 分后，分别滴加浓度为〇.〇25mol · IZ1的亚硒酸钠溶液1.0ml，边滴加边轻轻摇匀，滴加完毕， 加水定容至25ml，待红色不再加深，即得到纳米硒浓度均为I.Ommol · I/1，维生素 C浓度均为 4.0_〇1.1/1，水溶性虎奶菇多糖浓度分别为0、25、50、100、200、300、400、500、60011^·!/ 1 的产物。产物可在2~10°C下在水溶液中以溶胶形态保存。Nano-ZS(Malvern Insruments Limi ted)测定产物中的纳米粒子粒径和多分散指数情况，粒径计数用Number，激光散射代 表性数据见图1、图2(图1是水溶性虎奶菇多糖浓度为100.Omg · IZ1水溶胶中多糖功能化纳 米硒的激光散射图；图2是水溶性虎奶菇多糖浓度为300.Omg · IZ1水溶胶中多糖功能化纳米 硒的激光散射图），结果显示在虎奶菇多糖调控下，功能化纳米硒粒径远远小于对照组，说 明虎奶菇多糖对纳米硒粒径具有很好的调控作用，制备产物粒径约为IOOnm;用TECNAI-10 型透射电子显微镜(Philips)表征的多糖功能化纳米硒形貌图见图3,结果显示由虎奶菇多 糖调控的功能化纳米硒分散性好，产物为球形纳米硒；用能量分散型X射线分析装置(EX-250, Horiba)表征的 多糖功能化纳米硒扫描形貌图见图4, 结果同样证实功能化纳米硒是球 形，而且粒径较小，约为lOOnm;元素分析图见图5,结果显示功能化纳米硒主要元素成分是 硒元素，此为还有来自多糖的C和O元素，；用MSAL-XD2型X射线衍射仪表征水溶性虎奶菇多 糖功能化纳米硒的晶形见图6,结果显示功能化纳米硒为无定形硒；用傅立叶变换红外光谱 仪表征水溶性虎奶菇多糖与单质硒作用见图7,结果显示纳米硒与虎奶菇多糖之间是通过 物理吸附相互作用；用Nano_ZS(Malvern Insruments Limited)表征水溶性虎奶燕多糖功 能化纳米硒水溶胶的电位见图8，电位绝对值8~9，表明功能化纳米硒溶胶体系比较稳定； 用Nano_ZS(Malvern Insruments Limited)表征水溶性虎奶燕多糖功能化纳米硒水溶胶随 时间变化的稳定性见图9、图10，结果显示，在3周内，粒径范围还保持在200nm之内，说明功 能化纳米硒的稳定性较好，在一定时间内粒径变化不大。产物中的纳米粒子的平均粒径和 PDI见附表1结果显示功能化纳米硒粒径较小，随着多糖浓度增大，粒度呈浓度效应减小。 PDI值均小于0.200，表示功能化纳米硒分散的很好，粒径分布很窄。综上所述试验结果，水 溶性多糖对纳米硒的粒径具有很好的调控作用，是理想的纳米硒粒径调控剂。
[0056] 附表1:实施例1的纳米硒粒子的平均粒径和TOI
[0058](注解:PTRP为水溶性虎奶菇多糖的缩写）
[0059] 实施例2:
[0060]常温常压下（15~35°C，1标准大气压），取质量浓度为2.5g · IZ1的水溶性虎奶菇多 糖溶液3.Oml分别加入7个装有IOml双蒸水的25ml容量瓶中，然后分别加入浓度为0.1mol · L一1的维生素 C溶液各O、0.125、0.25、0.5、1.0 、1.5、2. Oml，轻轻摇匀使之混合充分，然后再分 别向相对应的容量瓶滴加浓度为O.〇25mo 1 · L-1的亚硒酸钠溶液O、0.125、、0.25、0.5、1.0、 1.5、2. Oml，边滴加边轻轻摇匀，滴加完毕，加水定容至25ml，待红色不再加深，即得到水溶 性